Digestion par enzymes de restriction

Les enzymes de restriction ou endonucléases reconnaissent et coupent l'ADN en une séquence spécifique. Ces enzymes sont produits naturellement chez les bactéries comme défense contre les bactériophages – virus qui infectent les bactéries. Les enzymes de restriction bactérielles coupent l'ADN du bactériophage invasif tout en laissant l'ADN génomique bactérien sain et sauf grâce à l'addition de groupes méthyles.

Cette vidéo explique les principes de base des enzymes de restriction incluant: comment les enzymes de restriction sont appelés et les types de sites de reconnaissance et surplombs. Une procédure pas à pas généralisée est fournie pour montrer comment mettre en place une digestion de restriction, ce qui inclus les composants nécessaires, l'ordre dans lequel le mélange doit être fait, et les températures et temps typiques d'incubation. L'importance des enzymes de restriction inactivés pour prévenir l'activité star est également mentionnée. Des conseils pour réaliser des digestions avec de multiples enzymes et l'utilisation de contrôles dans les réactions de digestion sont aussi fournis.