Name: in vitro assay to evaluate the impact of immunoregulatory pathways on hiv-specific cd4 t cell effector function
Uploaded: 2013-10-15T17:45:00
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Wir danken Gordon Freeman für die Bereitstellung des anti-PD-L1 blockierenden Antikörpers. Wir danken der klinischen und Laborpersonal am Massachusetts General Hospital und allen Studienteilnehmern für ihre unschätzbare Rolle in diesem Projekt. , National Heart Lung and Blood Institute der National Institutes of Health (RO1 HL-092565; DEK) Diese Studie wurde durch das Nationale Institut für Allergie und Infektionskrankheiten der National Institutes of Health (DEK PA1 AI-080192) gefördert. DEK ist von einem Research Scholar Career Award der Quebec Health Research Fund (FRQS) unterstützt. FP wird durch ein Stipendium Erteilung des Massachusetts General Hospital Vorstand für Forschung und der Harvard Global Health Institute (HGHI) unterstützt.

1. Entleerung und Isolierung von PBMCs durch Ficoll-Trennung <ol><li> Abbau CD8 + T-Zellen durch Zugabe von Menschen CD8 +-Depletion Cocktail bei 50 ul / ml Vollblut. </li><li> Gut mischen und Inkubation für 20 min bei Raumtemperatur (18-25 ° C). </li><li> Nach der Inkubation mischen Vollblut mit HBSS (Hanks Balanced Salt Solution ohne Ca 2 + oder Mg 2 +) und Schicht über Histopaque. Spin bei 340 rcf für 30 min (keine Bremse, langsame Beschleunigung). </li><li> Sammeln PBMCs und Transfer zu e...

<ol>
	<li>Zajac, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+immune+evasion+due+to+persistence+of+activated+T+cells+without+effector+function.">Viral immune evasion due to persistence of activated T cells without effector function.</a> J. Exp. Med. 188, 2205-2213 (1998).</li><li>Wherry, E. J., Blattman, J. N., Murali-Krishna, K., vander Most, R., Ahmed, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+persistence+alters+CD8+T-cell+immunodominance+and+tissue+distribution+and+results+in+distinct+stages+of+functional+impairment.">Viral persistence alters CD8 T-cell immunodominance and tissue distribution and results in distinct stages of functional impairment.</a> J. Virol. 77, 4911-4927 (2003).</li><li>Kwon, D. S., Kaufmann, D. 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L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-1+expression+on+HIV-specific+T+cells+is+associated+with+T-cell+exhaustion+and+disease+progression.">PD-1 expression on HIV-specific T cells is associated with T-cell exhaustion and disease progression.</a> Nature. 443, 350-354 (2006).</li><li>Brockman, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-10+is+up-regulated+in+multiple+cell+types+during+viremic+HIV+infection+and+reversibly+inhibits+virus-specific+T+cells.">IL-10 is up-regulated in multiple cell types during viremic HIV infection and reversibly inhibits virus-specific T cells.</a> Blood. 114, 346-356 (2009).</li><li>Barber, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoring+function+in+exhausted+CD8+T+cells+during+chronic+viral+infection.">Restoring function in exhausted CD8 T cells during chronic viral infection.</a> Nature. 439, 682-687 (2006).</li><li>Zhang, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-1+up-regulation+is+correlated+with+HIV-specific+memory+CD8++T-cell+exhaustion+in+typical+progressors+but+not+in+long-term+nonprogressors.">PD-1 up-regulation is correlated with HIV-specific memory CD8+ T-cell exhaustion in typical progressors but not in long-term nonprogressors.</a> Blood. 109, 4671-4678 (2007).</li><li>Ndhlovu, Z. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-dimensional+immunomonitoring+models+of+HIV-1-specific+CD8+T-cell+responses+accurately+identify+subjects+achieving+spontaneous+viral+control.">High-dimensional immunomonitoring models of HIV-1-specific CD8 T-cell responses accurately identify subjects achieving spontaneous viral control.</a> Blood. 121, 801-811 (2013).</li><li>Porichis, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responsiveness+of+HIV-specific+CD4+T+cells+to+PD-1+blockade.">Responsiveness of HIV-specific CD4 T cells to PD-1 blockade.</a> Blood. 118, 965-974 (2011).</li><li>Kwon, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD4++CD25++regulatory+T+cells+impair+HIV-1-specific+CD4+T+cell+responses+by+upregulating+interleukin-10+production+in+monocytes.">CD4+ CD25+ regulatory T cells impair HIV-1-specific CD4 T cell responses by upregulating interleukin-10 production in monocytes.</a> 86, 6586-6594 (2012).</li></ol>

Der Überstand Sammlung ist ein Imperativ Teil dieser experimentellen Design. Bei der Ernte der Überstände zur Luminex-Assay wurden Aliquote hergestellt und bei -80 ° C gehalten, um den Proteinabbau durch Zyklen Einfrieren-Auftauen zu verhindern. Einfrieren und Auftauen kann hart Verfahren für Proteine ​​und durch Gefrier taut minimiert sein, werden in Tests Signal maximiert werden. Daher ist es einfacher, wiederholbare und genaue Daten beim Arbeiten von Aliquots, die gefriertaut die gleiche Anzahl von Zeiten zu...

Während der anhaltenden viralen Infektionen, Virus-spezifischen T-Zellen-erwerben Funktionsstörungen in einem Prozess als T-Zell-Erschöpfung bekannt. Früh in-vivo-Studien im murinen Modell der LCMV chronische Virusinfektion angegeben, dass erschöpft Virus-spezifische T-Zellen gegen zytolytische Funktion viral infizierte Zellen reduziert, verlieren ihre Fähigkeit zu vermehren und haben Fähigkeit, Zytokine wie IL-2, TNF-produzieren reduziert α und IFN-γ 1,2. Ein komplexes Netzwerk von immunWege, wie PD-1 und IL-10, während chronische Infektionen hochreguliert und zur T-Zell-Funktionsstörung (in 3,4 bewertet). In vivo-Verabreichung von blockierenden Antikörpern gegen diese hemmenden Bahnen in der LCMV-Maus Modell restauriert Funktion erschöpft virusspezifischen T-Zellen und eine verbesserte Virenfreiheit, die anzeigt, dass T-Zell-Erschöpfung ist ein Phänomen teilweise reversibel (in 5 Bewertung). Erkenntnisse über thE LCMV-Modell wurden schnell die menschliche chronische Virusinfektionen wie HBV, HCV und HIV 5 verlängert. Bei der chronischen HIV-1-Infektion, sind PD-1 und IL-10 Wege in infizierten Patienten hochreguliert und korrelieren mit den Parametern der Krankheitsprogression, direkt mit der Viruslast und umgekehrt mit der CD4-Zellzahl 6-8. Antikörper Blockade der PD-1 oder IL-10 in vitro Wege wiederhergestellt Proliferation von HIV-spezifischen CD4-und CD8-T-Zellen, was anzeigt, dass, ähnlich der LCMV-Maus-Modell, ist T-Zell-Erschöpfung bei Menschen eine teilweise reversible Phänomen. Aufgrund der empfindlichen Natur von Experimenten an menschlichen Proben sowie Einschränkungen in der Empfindlichkeit der in-vitro-Assays, gründliche Untersuchung der funktionellen Wiederherstellung von Profilen dieser Interventionen erreicht wird, ist jedoch auffallend abwesend. Proliferationsassays wurden, so weit, die einzige zuverlässige in-vitro-Test in den meisten Studien getestet, aber es ist ein bemerkenswerter Mangel an Beweisen über die Auswirkungen dieser interInterventionen auf: 1) die Tötung Kapazität von zytotoxischen T-Zellen, 2) die antivirale Wirkung von T-Zellen auf die virale Replikation, 3) die Zytokinsekretion Profil und 4) die Wirkung auf CD4-T-Zell-Hilfe für andere Zell-Untergruppen. Intrazelluläre Cytokin-Färbung (ICS) ist eine sehr nützliche und weit verbreitet Durchflusszytometrie basierenden Assay, der verwendet wird, um die Produktion von Zytokinen in verschiedenen Zelltypen sowohl in Mäusen und Menschen zu erkennen. Es wurde auch verwendet, um die Wirkung der Antikörperblockade hemmenden Bahnen zu untersuchen. In ICS Assays wird Zytokinsekretion durch Zugabe von Brefeldin und / oder Monensin blockiert. Zytokine in den Zellen eingeschlossen werden dann mit fluoreszierenden Antikörpern mit polychromatischen Durchflusszytometrie detektiert. Die Dauer des Tests wird in der Regel 6 oder 12 Stunden nach der Antigen-Stimulation beschränkt, da sowohl Brefeldin und Monensin, die typischerweise innerhalb von 2 h von Antigen Zugabe zugegeben werden, sind für die Zellen toxisch. Das ICS-Assay ist eine leistungsfähige Technik, die sich als nützlich erwiesen hat in die Untersuchung der Wirkung der in vivo-Verabreichung von blockierenden Antikörper Eingriff mit Mäusen, wurden die Zellen nach einer gewissen Zeit nach der Antikörper-Belichtungs 9 extrahiert. Es gibt jedoch mehrere Einschränkungen bei der Anwendung dieser experimentellen Ansatz, die Auswirkungen der Blockade der inhibitorischen Rezeptoren im menschlichen Proben auszuwerten. Bei der Durchführung von Antikörper Eingriffe hemmenden Bahnen in einer 6 oder 12 h in-vitro-Stimulation (typischerweise der Fall bei humanen Proben), wird die Blockade der hemmenden Rezeptoren in den meisten Fällen die Frequenz reagiert Antigen-spezifischen T-Zellen nicht zu ändern, wie durch Standardassays gemessen ICS 6, 7. Messungen pro Zelle Zytokinproduktion durch Mittelwert oder Median der Fluoreszenzintensität gemessen, haben widersprüchliche Ergebnisse 6, 7, 10 angegeben. Andererseits, wenn ICS zu einem späten Zeitpunkt nach der Stimulierung durchgeführt (dh 6 Tage), Veränderungen in der Anzahl der Cytokin-sezer cEllen beobachtet werden. Die Unterschiede sind ein kombinierter Effekt der veränderten Proliferation, das Überleben und Veränderungen in Effektor-Funktion, die über den angegebenen Zeitraum 6 ansammeln. Eine Möglichkeit, diese Beschränkungen teilweise zu überwinden, ist für längere Zeiträume (z. B. 36 h, 60 h, etc.) Mit dem Antigen vor der Zugabe der Zytokinsekretion Blocker, ohne auf die Proliferation auftritt inkubieren. Wir haben erfolgreich diese Methode verwendet, um die Kinetik der Zytokinsekretion von HIV-spezifischen CD4-und CD8-T-Zellen zu bestimmen, 11,12, jedoch ist dieser Ansatz nicht in der Lage, kleine Antworten detektieren und ein integriertes Ergebnis die Gesamt Zytokinsekretion vorkommenden nicht geben seit Stimulation. Daher ist ICS nicht ausreichend empfindliches Verfahren, um die Auswirkungen der Blockade der hemmenden Bahnen auf der Anzahl von Zytokinen durch aktivierte T-Zellen produziert, verglichen mit Zytokin-mRNA-Quantifizierung oder Messungen der Cytokin-Sekretion im supernatan erkennent in den gleichen Zeitpunkten. Zusätzlich wirken die meisten der von aktivierten T-Zellen produzierten Zytokine in autokriner Weise durch einen Beitrag zur positiven oder negativen Rückkopplungsschleifen durch die Interaktion mit Antigen-präsentierenden Zellen. Daher Zugabe von Monensin oder Brefeldin im ICS Assay verhindert Zytokinsekretion und somit Stimulation von T-Zellen nicht optimal ist. Schließlich wird die Detektion von mehreren Cytokinen mit ICS durch die Verfügbarkeit und die Empfindlichkeit der Antikörper zum Nachweis von Zytokinen mit Durchflusszytometrie als auch durch Beschränkungen in der Anzahl von Fluorochromen, die gleichzeitig in einem gegebenen Panel verwendet werden können, begrenzt. Wir entwickelten ein hochempfindliches in vitro-Versuchsansatz, um die Auswirkungen von immun Wege der Regulierung der Zytokinsekretion von HIV-spezifischen CD4 + T-Zellen und CD4 Hilfe anschließend auf Antigen-präsentierenden Zellen (APCs) und natürliche Killerzellen (NK-Zellen) zu bewerten. Dieses Verfahren kann auch verwendet werden, um die impa evaluierenct Blockade von inhibitorischen Moleküle auf CD8-T-Zellfunktion durch abbau die CD4-T-Zellen aus PBMCs oder durch Stimulation mit optimalen Peptide, die nur von CD8-T-Zellen erkannt werden. Im Gegensatz zu intrazellulären Zytokinfärbung Assays haben wir beschlossen, nicht mit der Cytokin-Sekretion von HIV-spezifischen CD4 + T-Zellen, um in der Lage zu sein, beeinträchtigt: 1) führen eine genauere Quantifizierung der produzierten Zytokinspiegel, 2) Untersuchung eine breitere Platte von Cytokinen oder Effektormoleküle, und 3) die Auswirkungen von von HIV-spezifischen CD4 + T-Zellen auf andere Zellen-Untergruppen produzierten Zytokine. Wir stimulieren CD8 abgereicherten PBMC mit einem HIV-1-Gag-Peptid-Pool in Gegenwart von blockierenden Antikörpern für die immun Weg von Interesse. Nach der gewünschten Inkubationszeit, in der Regel 48 Stunden, sammeln wir die Überstände Zytokinsekretion mit Perlenanordnungen messen und sammeln die Zellpellets entweder für phänotypische Analyse der verschiedenen Zelluntergruppen oder für die Transkriptionsanalyse. Von beachten Sie, dass bei tseine 48 h Zeitpunkt haben wir nicht eine bedeutende Population von proliferierenden T-Zellen 12 zu erfassen. Dies ist ein flexibler Ansatz und mehrere Anpassungen dieser Konstruktion kann angewendet werden, um verschiedene Hypothesen zu adressieren. Zum Beispiel können die einzelnen Zelluntergruppen (z. B. HIV-spezifischen CD4 + T-Zellen oder PD-1 Hoch CD4-T-Zellen, etc..) Nach 12 h Inkubation vor der weiteren Inkubation für 36 Stunden, gefolgt vom Sammeln der Überstände und Zellpellets sortiert um genauer zu untersuchen die Auswirkungen der Blockade auf Interventionen Zytokinsekretion durch definierte Subpopulationen von PBMCs.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Hanks Balanced Salt Solution without Ca2+ or Mg2+</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H9394</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R0883</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Histopaque-1077</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>10771</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Human Serum AB</td>
			<td>Gemini BioProducts</td>
			<td>100-512</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Mediatech</td>
			<td>30 001 CI</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Mediatech</td>
			<td>25 005 CI</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HEPES buffer</td>
			<td>Mediatech</td>
			<td>25060CI</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>FcR blocking reagent, human</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-059-901</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>RosetteSep Human CD8+ Depletion Cocktail </td>
			<td>Stem Cell </td>
			<td>15663</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Dead Cell Stain Kit, for UV excitation</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L23105</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Rneasy Mini Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Improm-II Reverse Transcription System</td>
			<td>Promega</td>
			<td>A3800</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Brilliant II SYBR qPCR Low Rox Master Mix</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>600830</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>BD Cytofix/Cytoperm Fixation/Permeabilization Solution Kit</td>
			<td>BD</td>
			<td>554714</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP337100</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>IFN-&gamma; primer</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td></td>
			<td>FOR: CGAGATGACTTCGAAAAGCTGA REV: TCTTCGACCTCGAAACAGCA</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>GAPDH primer</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td></td>
			<td>FOR: TCATCATCTCTGCCCCCTCT REV: AGTGATGGCATGGACTGTGG</td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

in vitro assay to evaluate the impact of immunoregulatory pathways on hiv-specific cd4 t cell effector function

T-Zell-Erschöpfung ist ein wichtiger Faktor in gescheiterten Erreger Freiheit während der chronischen Virusinfektionen. Immunwege, wie PD-1 und IL-10 sind bei dieser laufenden Antigenexposition hochreguliert und tragen zum Verlust von Proliferation, cytolytische Funktion reduziert und durch CD4-und CD8-T-Zellen-Cytokinproduktion beeinträchtigt. Im Mausmodell der LCMV-Infektion, die Verwaltung der blockierenden Antikörper gegen diese beiden Wege erweitert T-Zellantworten. Allerdings gibt es noch keine in vitro Assay, um die Auswirkungen dieser Blockade Zytokinsekretion in Zellen aus menschlichen Proben zu messen. Unser Protokoll und experimentellen Ansatz ermöglichen es uns, genau und effizient zu quantifizieren, die Wiederherstellung der Zytokin-Produktion von HIV-spezifischen CD4-T-Zellen von HIV-infizierten Patienten. Hier wird ein in vitro-Versuchsanordnung, die Messungen der Cytokin-Sekretion kann durch HIV-spezifische CD4 + T-Zellen und deren Auswirkungen auf andere cel zeigen wirl Teilmengen. CD8-T-Zellen wurden aus Vollblut erschöpft und Rest PBMCs wurden über Ficoll-Trennverfahren isoliert. CD8-abgereicherten PBMC wurden dann mit blockierenden Antikörpern gegen PD-L1 und / oder IL-10Rα und nach Stimulation mit einem HIV-1-Gag-Peptid-Pool wurden die Zellen bei 37 ° C, 5% CO 2 inkubiert. Nach 48 Stunden Überstand wurde für die Zytokin-Analyse durch Perlen-Arrays und Zellpellets gesammelt wurden, entweder für phänotypische Analyse mittels Durchflusszytometrie oder Transkriptionsanalyse mittels qRT-PCR gesammelt. Für weitere detaillierte Analyse wurden verschiedene Zellpopulationen durch selektive Depletion Teilmenge aus PBMCs oder durch Sortieren mit Durchflusszytometrie, bevor sie in den gleichen Tests untersucht erhalten. Diese Verfahren stellen eine sehr empfindliche und spezifische Ansatz zur Modulation der Cytokin-Produktion durch Antigen-spezifische T-Helferzellen zu bestimmen und funktionellen Wechselwirkungen zwischen den verschiedenen Populationen von Immunzellen zu bestimmen.

Bei der Durchführung von Messungen unter Verwendung dieses Zytokin in vitro-System, ist es wichtig, in der Lage, das Antigen-spezifische Reaktionen gegenüber der Kontrolle ohne Stimulation zu unterscheiden. Im allgemeinen betrachtet man positive Reaktionen wie alle Werte der antigenen Stimulation, die mindestens dreifache Zunahme in Zytokinspiegel Vergleich zu der Kontrolle ohne Stimulierung und davon waren innerhalb des linearen Bereichs des Assays zu ergeben. Wir sind mit hoher Empfindlichkeit Bead-Assays, ...

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In Vitro Assay to Evaluate the Impact of Immunoregulatory Pathways on HIV-specific CD4 T Cell Effector Function

Wir entwickelten ein in vitro Assay, um die Rolle von immunWege in der Regulation der Zytokin-Sekretion von HIV-spezifischen CD4 + T-Zellen zu untersuchen.

In vitro-Test, um die Auswirkungen von immun Pathways auf die HIV-spezifischen CD4 T-Zell-Effektor-Funktion auswerten

T cell exhaustion is a major factor in failed pathogen clearance during chronic viral infections. Immunoregulatory pathways, such as PD-1 and IL-10, are ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In Vitro Assay to Evaluate the Impact of Immunoregulatory Pathways on HIV-specific CD4 T Cell Effector Function

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Retrovirale Transduktion von T-Zell-Rezeptoren in Maus-T-Zellen

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Isolation and Th17 Differentiation of Na&iuml;ve CD4 T Lymphocytes

Isolation and Th17 Differentiation of Na&#239;ve CD4 T Lymphocytes

Isolierung und Differenzierung von Th17 Naive CD4-T-Lymphozyten

Th17 cells are a distinct subset of T cells that have been found to produce interleukin 17 (IL-17), and differ in function from the other T cell subsets ...

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

Untersuchung der Effekte von Probiotika auf Pneumokokken-Kolonisation Mit ein<em&gt; In-vitro-</em&gt; Einhaltung Assay

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Transplantation von Haut-Schwanz zu allogene CD4-T-Zellantworten in Mäusen untersucht

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Image-based Flow Cytometry Technique to Evaluate Changes in Granulocyte Function In Vitro

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Bildbasierte Durchflusszytometrie Technik zur Veränderung der Granulozyten-Funktion auswerten<em&gt; In-vitro-</em

Granulocytes play a key role in the body&#8217;s innate immune response to bacterial and viral infections. While methods exist to measure granulocyte ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Die Induktion von Murine Darmentzündungen durch adoptiven Transfer von Effektor CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Hoch</sup&gt; T-Zellen in immundefizienten Mäusen

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Maus Naive CD4<sup&gt; +</sup&gt; T-Zell-Isolierung und<em&gt; In-vitro-</em&gt; Differenzierung in T-Zell-Populationen

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

Application of Long-term cultured Interferon-&#947; Enzyme-linked Immunospot Assay for Assessing Effector and Memory T Cell Responses in Cattle

Anwendung von Langzeit kultiviert Interferon-γ Enzyme-linked Immunospot Assay zur Beurteilung Effektor und Gedächtnis-T-Zell-Antworten in Cattle

Effector and memory T cells are generated through developmental programing of na&#239;ve cells following antigen recognition. If the infection is ...

Imaging CD4 T Cell Interstitial Migration in the Inflamed Dermis

Imaging CD4 T-Zell-Interstitial Migration in den entzündeten Dermis

The ability of CD4 T cells to carry out effector functions is dependent upon the rapid and efficient migration of these cells in inflamed peripheral ...

An In Vitro Model of the Blood-brain Barrier Using Impedance Spectroscopy: A Focus on T Cell-endothelial Cell Interaction

An In Vitro Model of the Blood-brain Barrier Using Impedance Spectroscopy: A Focus on T Cell-endothelial Cell Interaction

Ein<em&gt; In Vitro</em&gt; Modell der Blut-Hirn-Schranke Mit Impedanzspektroskopie: Ein Fokus auf T-Zell-Endothelzellinteraktion

Breakdown of the blood-brain barrier (BBB) is a critical step in the development of autoimmune diseases such as multiple sclerosis (MS) and its animal ...