Name: the slice culture method for following development of tooth germs in explant culture
Uploaded: 2013-11-13T20:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture at JoVE.com

ويتم تمويل سارة A. Alfaqeeh حسب نوع سعود كلية طب الأسنان، وزارة التعليم العالي، المملكة العربية السعودية.

1. نصب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شحذ أدوات تشريح (باستخدام الحجر شحذ مشحم مع الزيوت المعدنية) وتعقيم قبل استخدامها للثقافة الجهاز باستخدام رذاذ الايثانول 70٪ والتعقيم الجاف للحرارة. شحذ الإبر تشريح باستخدام التحليل الكهربائي في 2 M هيدروكسيد ال?...

<ol>
	<li>Rothova, M., Peterkova, R., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+map+of+the+dental+mesenchyme:+dynamic+development+of+the+dental+papilla+and+follicle.">Fate map of the dental mesenchyme: dynamic development of the dental papilla and follicle.</a> Developmental biology. 366, 244-254 (2012).</li><li>Ferguson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activin+is+an+essential+early+mesenchymal+signal+in+tooth+development+that+is+required+for+patterning+of+the+murine+dentition.">Activin is an essential early mesenchymal signal in tooth development that is required for patterning of the murine dentition.</a> Genes &amp; development. 12, 2636-2649 (1998).</li><li>Trowell, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+culture+of+mature+organs+in+a+synthetic+medium.">The culture of mature organs in a synthetic medium.</a> Experimental cell research. 16, 118-147 (1959).</li><li>Matalova, E., Antonarakis, G. S., Sharpe, P. T., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+lineage+of+primary+and+secondary+enamel+knots.">Cell lineage of primary and secondary enamel knots.</a> Developmental dynamics : an official publication of the American Association of Anatomists. 233, 754-759 (2005).</li><li>Mitsiadis, T. A., Tucker, A. S., De Bari, C., Cobourne, M. T., Rice, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+regulatory+relationship+between+Tbx1+and+FGF+signaling+during+tooth+morphogenesis+and+ameloblast+lineage+determination.">A regulatory relationship between Tbx1 and FGF signaling during tooth morphogenesis and ameloblast lineage determination.</a> Developmental biology. 320, 39-48 (2008).</li><li>Diep, L., Matalova, E., Mitsiadis, T. A., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+the+tooth+bud+mesenchyme+to+alveolar+bone.">Contribution of the tooth bud mesenchyme to alveolar bone.</a> Journal of experimental zoology. Part B, Molecular. 312B, 510-517 (2009).</li><li>Rothova, M., Feng, J., Sharpe, P. T., Peterkova, R., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+mesoderm+to+the+developing+dental+papilla.">Contribution of mesoderm to the developing dental papilla.</a> The International journal of developmental biology. 55, 59-64 (2011).</li><li>Buchtova, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation+and+patterning+of+the+snake+dentition+are+dependent+on+Sonic+hedgehog+signaling.">Initiation and patterning of the snake dentition are dependent on Sonic hedgehog signaling.</a> Developmental biology. 319, 132-145 (2008).</li><li>Buchtova, M., Stembirek, J., Glocova, K., Matalova, E., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+regression+of+the+dental+lamina+underlies+the+development+of+diphyodont+dentitions.">Early regression of the dental lamina underlies the development of diphyodont dentitions.</a> Journal of dental research. 91, 491-498 (2012).</li><li>Cho, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+primary+enamel+knot+determines+the+position+of+the+first+buccal+cusp+in+developing+mice+molars.">The primary enamel knot determines the position of the first buccal cusp in developing mice molars.</a> Differentiation; research in biological diversity. 75, 441-451 (2007).</li><li>Sakano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+dynamics+in+cervical+loop+epithelium+during+transition+from+crown+to+root:+implications+for+Hertwig's+epithelial+root+sheath+formation.">Cell dynamics in cervical loop epithelium during transition from crown to root: implications for Hertwig's epithelial root sheath formation.</a> Journal of periodontal research. , (2012).</li><li>Fisher, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+development+in+vitro+of+the+whole+and+halved+lower+molar+tooth+germ+of+the+mouse.">Morphological development in vitro of the whole and halved lower molar tooth germ of the mouse.</a> Archives of oral biology. 16, 1481-1496 (1971).</li><li>Coin, R., Schmitt, R., Lesot, H., Vonesch, J. L., Ruch, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+halved+embryonic+lower+first+mouse+molars:+correlation+with+the+distribution+pattern+of+non+dividing+IDE+cells,+the+putative+organizers+of+morphogenetic+units,+the+cusps.">Regeneration of halved embryonic lower first mouse molars: correlation with the distribution pattern of non dividing IDE cells, the putative organizers of morphogenetic units, the cusps.</a> The International journal of developmental biology. 44, 289-295 (2000).</li><li>Kavanagh, K. D., Evans, A. R., Jernvall, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predicting+evolutionary+patterns+of+mammalian+teeth+from+development.">Predicting evolutionary patterns of mammalian teeth from development.</a> Nature. 449, 427-432 (2007).</li><li>Munne, P. M., Tummers, M., Jarvinen, E., Thesleff, I., Jernvall, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tinkering+with+the+inductive+mesenchyme:+Sostdc1+uncovers+the+role+of+dental+mesenchyme+in+limiting+tooth+induction.">Tinkering with the inductive mesenchyme: Sostdc1 uncovers the role of dental mesenchyme in limiting tooth induction.</a> Development. 136, 393-402 (2009).</li></ol>

هذا الأسلوب من الثقافة الأسنان لديه ميزة أن الوصول إلى الجرثومية الأسنان ممتازة، مما يتيح تتبع النسب دقيقة والتنسيب من الخرز داخل ظهارة أو اللحمة المتوسطة. وبالتالي، يمكن تعريف المناطق من الأسنان النامية الجرثومية أن تستهدف على وجه التحديد. خلال الثقافة التشكل الم?...

لعدد من التجارب من المهم أن تكون قادرة على زراعة الأنسجة فيفو السابقين لمتابعة التنمية. ثقافة تطوير الأنسجة يوفر الوصول في فترات محددة من التنمية ويتيح التلاعب في الجينات من خلال إضافة عوامل في مستنبت، أو على حبات تحميلها، واستخدام ترنسفكأيشن و electroporation 1. بالنسبة للعديد من التجارب من المهم أن تكون قادرا على تصور الأنسجة لأنها تنمو، على سبيل المثال، لمتابعة مصير الخلايا النسب وصفت بأنها الأنسجة يخضع التشكل. هذا يمكن أن يكون مشكلة خاصة بالنسبة للأنسجة التي تنمي في أعماق الجنين، والتي ليست واضحة عندما كتلة من الأنسجة من الجنين هو مثقف. الأسنان هي أمثلة جيدة على ذلك، لأنها تضع ضمن عملية الأنف الفك السفلي، الفك العلوي والأمامي. عندما يتم زرعها في الفك السفلي كله الهياكل السطحية من الأسنان يمكن أن ينظر إليها ولكن التغييرات في مورفولوجية لا يمكن تحليلها بعد باجتزاء الأنسجة الثابتة <sتصل&gt; 2. تكيفنا حية شريحة التقنية الثقافة مما يسمح لنا لمتابعة تطوير جرثومة الأسنان وتوفير سبل الوصول إلى أجزاء مختلفة من الأسنان خلال التنمية. ثقافات تقنية شرائح الجرثومية الأسنان في واجهة الغاز السائل، وذلك باستخدام طريقة تراويل تعديل 3. وكانت هذه الثقافات شريحة مفيدة جدا في التشكل التالية مباشرة من الأسنان، والسماح تتبع نسب مكونات متميزة، مثل عقدة المينا والحليمة السنية وبصيلات 1،4-7. تقنية لا يقتصر على أجنة الفئران وتمت بنجاح استخدمت لثقافة شرائح حية من الخنزير والثعبان الأسنان 8،9 الأنسجة. بالإضافة إلى الاستفادة من القدرة على تصور نمو الأسنان، لديه طريقة شريحة أيضا ميزة أن شرائح رقيقة من الأنسجة وزيادة فرص الحصول على المواد الغذائية من المتوسط ​​والهواء من الحاضنة. هذه النتائج في تحسين نمو جراثيم الأسنان، والتي تتطابق التنمية في الجسم الحي، وتظهر invasأيون الخلايا البطانية في الحليمة 7. في المقابل، جراثيم الأسنان في الفك السفلي كله الثقافات تطوير أبطأ من تلك الموجودة في الجسم الحي ومركز للثقافة في كثير من الأحيان نخرية في الثقافات على المدى الطويل. في ثقافة شريحة والأسنان يتطور داخل شريحة من الفك، وتفاعله مع وضع العظام والأنسجة الأخرى المحيطة يمكن رصدها. في المنهج في آن والمفروم الأنسجة مباشرة بعد تشريح مع عدم وجود الحاجة إلى تضمين في المتوسط ​​10،11 الدعم، وهناك حاجة لأي نظام لإرفاق الأنسجة لتقطيع كتلة. هذه الطريقة بالتالي موسع وسريع، مما يتيح العديد من الفك السفلي إلى أن مقطوع في جلسة واحدة.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>101077Y</td>
			<td>100% ethanol was diluted in distilled H2O to 70%.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12634-010</td>
			<td>Advanced Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium F12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P0781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DiI (Molecular probes)</td>
			<td>Vybrant</td>
			<td>V-22885</td>
			<td>Cell-labeling solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td></td>
			<td>Cell tracker CM-DiI, C-7000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DiO (Molecular probes)</td>
			<td>Vybrant</td>
			<td>V22886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geminator 500</td>
			<td>Thomas</td>
			<td>Thomas No. 3885A20</td>
			<td>Dry-heat sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>McIlwain tissue chopper</td>
			<td>Ted Pella, Inc.</td>
			<td>10180</td>
			<td>Standard table</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Organ culture dish (Center-Well Organ Culture Dish)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Membranes (Cell Culture Inserts, 0.4 &#956;m pore size)</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>353090</td>
			<td>PET track-etched membrane, 6-well format</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal grids (Stainless Steel - AISI 304 - Mesh)</td>
			<td>Goodfellow</td>
			<td>FE228710</td>
			<td>(Fe/Cr18/Ni10)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoFlow Direct Heat CO2 Incubator</td>
			<td>Nuaire</td>
			<td>NU-5500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picospritzer III</td>
			<td>Intracel Ltd</td>
			<td>051-0500-900 0-100 psi</td>
			<td>Single channel picospritzer III</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass capillary with filament 1 mm</td>
			<td>WPI</td>
			<td>TW100F-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire 0.1 mm</td>
			<td>Goodfellow</td>
			<td>W005138</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire 0.38 mm</td>
			<td>Goodfellow</td>
			<td>W005155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirator tubes</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5177</td>
			<td>Used for mouth aspiration lineage tracers</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the slice culture method for following development of tooth germs in explant culture

الثقافة ازدراع يسمح بالتالي التلاعب في تطوير الأجهزة في نقاط زمنية محددة وغير وسيلة هامة للعالم الأحياء التنموية. بالنسبة للعديد من الأجهزة فإنه من الصعب الوصول إلى الأنسجة النامية للسماح برصد خلال فيفو السابقين الثقافة. يسمح أسلوب ثقافة شريحة الوصول إلى الأنسجة بحيث الحركات التخلق يمكن اتباعها ويمكن أن تستهدف السكان خلية معينة للتلاعب أو تتبع النسب. في هذه الورقة نحن تصف طريقة للثقافة شريحة التي كانت ناجحة جدا للثقافة الجراثيم الأسنان في مجموعة من الأنواع. يوفر أسلوب الوصول ممتازة لجراثيم الأسنان، والتي تنمي بمعدل مماثلة لتلك التي لوحظت في الجسم الحي، وتحيط بها الأنسجة الفك الأخرى. وهذا يسمح التفاعلات الأنسجة بين الأسنان والأنسجة المحيطة بها ليتم رصدها. على الرغم من أن هذه الورقة تركز على الجراثيم الأسنان، نفس البروتوكول يمكن تطبيقها لمتابعة تطوير عددمن الأجهزة الأخرى، مثل الغدد اللعابية، والغضروف ميكل والغدد الأنفية، واللسان، والأذن.

من أجل متابعة حركة أول جريب الأسنان المولي، تم اتخاذ 250 ميكرون شرائح الجبهي من خلال الفك السفلي باستخدام الطريقة الموصوفة أعلاه. الجراب السنى هو طبقة من اللحمة المتوسطة الذي يحيط ظهارة المينا الخارجي (OEE) من الأسنان النامية، وسبق أن أظهرت أن يشارك في تشكيل أنسجة دواعم...

Watch this Scientific Journal Video about The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture at JoVE.com

The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture (Video) | JoVE

نحن هنا بالتفصيل طريقة للجراثيم الأسنان الثقافة في شرائح الفك السفلي باستخدام المروحية الأنسجة. هذا الأسلوب يسمح بالوصول فريدة من نوعها في الأسنان خلال التنمية، وتوفير فرصة ممتازة للتلاعب والنسب تتبع، لا تتوفر باستخدام أساليب الثقافة التقليدية.

أسلوب الثقافة شريحة لوبعد تطور الجراثيم الأسنان في يزدرع الثقافة

Explant culture allows manipulation of developing organs at specific time points&#160;and is therefore an important method for the developmental ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture

Organotypic Slice Culture of E18 Rat Brains

Organotypic Slice Culture of E18 Rat Brains (Video) | JoVE

عضوي النمط من الثقافة شريحة أدمغة الفئران E18

Organotypic slice cultures from embryonic rodent brains are widely used to study brain development. While there are often advantages to an in-vivo system, ...

Preparation of Gene Gun Bullets and Biolistic Transfection of Neurons in Slice Culture

Preparation of Gene Gun Bullets and Biolistic Transfection of Neurons in Slice Culture (Video) | JoVE

إعداد نقطي غون جين وترنسفكأيشن Biolistic من الخلايا العصبية في الثقافة شريحة

Biolistic transfection is a physical means of transfecting cells by bombarding tissue with high velocity DNA coated particles. We provide a detailed ...

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture (Video) | JoVE

طريقة لثقافة الفرخ المبكر فيفو السابقين الأجنة (الثقافة الجديدة)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity (Video) | JoVE

والخلايا العصبية ونجمية المشارك الثقافة الفحص لتحليل محتوى عال من العصبية

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Culture and Maintenance of Human Embryonic Stem Cells  

Culture and Maintenance of Human Embryonic Stem Cells (Video) | JoVE

الثقافة والمحافظة على الخلايا الجذعية الجنينية البشرية

Human embryonic stem (hES) cells must be monitored and cared for in order to maintain healthy, undifferentiated cultures. At minimum, the cultures must be ...

The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System

The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System (Video) | JoVE

الطريقة الثقافة القوارض باستخدام الأجنة الجامع للثقافة الدوار زجاجة من نوع النظام

Whole embryo culture (WEC) technique has been developed in 1950's by New and his colleagues, and applied for developmental biology 1. Although development ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart (Video) | JoVE

رواية<em&gt; خارج الحي</em&gt; الطريقة الثقافة لالجنينية القلب

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System (Video) | JoVE

الفأر الجنينية التنمية في الجامعة نظام الثقافة الأجنة الخالية من المصل

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

Dissection of Xenopus laevis Neural Crest for in vitro Explant Culture or in vivo Transplantation

Dissection of Xenopus laevis Neural Crest for in vitro Explant Culture or in vivo Transplantation (Video) | JoVE

تشريح<em&gt; القيطم المورق</em&gt; العصبية كريست ل<em&gt; في المختبر</em&gt; يزدرع الثقافة أو<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; زرع

The neural crest (NC) is a transient dorsal neural tube cell population that undergoes an epithelium-to-mesenchyme transition (EMT) at the end of ...

Establishment of an Extracellular Acidic pH Culture System

Establishment of an Extracellular Acidic pH Culture System (Video) | JoVE

إنشاء درجة الحموضة خارج الخلية الحمضية منظومة الثقافة

Conditions of the tumor microenvironment, such as hypoxia or nutrient starvation, play critical roles in cancer progression and malignancy. However, the ...