Name: the slice culture method for following development of tooth germs in explant culture
Uploaded: 2013-11-13T20:30:00
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सारा ए Alfaqeeh दंत चिकित्सा, उच्च शिक्षा मंत्रालय, सऊदी अरब के राज्य की तरह सऊद यूनिवर्सिटी कॉलेज द्वारा वित्त पोषित है.

1. सेट अप <ol><li> (खनिज तेल के साथ lubricated एक sharpening पत्थर का उपयोग) विच्छेदन उपकरणों पैनापन और एक 70% इथेनॉल स्प्रे और सूखी गर्मी नसबंदी का उपयोग अंग संस्कृति के लिए उपयोग करने से पहले बाँझ. एक 12 वी की आपूर्ति का उपयोग ...

<ol>
	<li>Rothova, M., Peterkova, R., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+map+of+the+dental+mesenchyme:+dynamic+development+of+the+dental+papilla+and+follicle.">Fate map of the dental mesenchyme: dynamic development of the dental papilla and follicle.</a> Developmental biology. 366, 244-254 (2012).</li><li>Ferguson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activin+is+an+essential+early+mesenchymal+signal+in+tooth+development+that+is+required+for+patterning+of+the+murine+dentition.">Activin is an essential early mesenchymal signal in tooth development that is required for patterning of the murine dentition.</a> Genes &amp; development. 12, 2636-2649 (1998).</li><li>Trowell, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+culture+of+mature+organs+in+a+synthetic+medium.">The culture of mature organs in a synthetic medium.</a> Experimental cell research. 16, 118-147 (1959).</li><li>Matalova, E., Antonarakis, G. S., Sharpe, P. T., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+lineage+of+primary+and+secondary+enamel+knots.">Cell lineage of primary and secondary enamel knots.</a> Developmental dynamics : an official publication of the American Association of Anatomists. 233, 754-759 (2005).</li><li>Mitsiadis, T. A., Tucker, A. S., De Bari, C., Cobourne, M. T., Rice, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+regulatory+relationship+between+Tbx1+and+FGF+signaling+during+tooth+morphogenesis+and+ameloblast+lineage+determination.">A regulatory relationship between Tbx1 and FGF signaling during tooth morphogenesis and ameloblast lineage determination.</a> Developmental biology. 320, 39-48 (2008).</li><li>Diep, L., Matalova, E., Mitsiadis, T. A., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+the+tooth+bud+mesenchyme+to+alveolar+bone.">Contribution of the tooth bud mesenchyme to alveolar bone.</a> Journal of experimental zoology. Part B, Molecular. 312B, 510-517 (2009).</li><li>Rothova, M., Feng, J., Sharpe, P. T., Peterkova, R., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+mesoderm+to+the+developing+dental+papilla.">Contribution of mesoderm to the developing dental papilla.</a> The International journal of developmental biology. 55, 59-64 (2011).</li><li>Buchtova, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation+and+patterning+of+the+snake+dentition+are+dependent+on+Sonic+hedgehog+signaling.">Initiation and patterning of the snake dentition are dependent on Sonic hedgehog signaling.</a> Developmental biology. 319, 132-145 (2008).</li><li>Buchtova, M., Stembirek, J., Glocova, K., Matalova, E., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+regression+of+the+dental+lamina+underlies+the+development+of+diphyodont+dentitions.">Early regression of the dental lamina underlies the development of diphyodont dentitions.</a> Journal of dental research. 91, 491-498 (2012).</li><li>Cho, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+primary+enamel+knot+determines+the+position+of+the+first+buccal+cusp+in+developing+mice+molars.">The primary enamel knot determines the position of the first buccal cusp in developing mice molars.</a> Differentiation; research in biological diversity. 75, 441-451 (2007).</li><li>Sakano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+dynamics+in+cervical+loop+epithelium+during+transition+from+crown+to+root:+implications+for+Hertwig's+epithelial+root+sheath+formation.">Cell dynamics in cervical loop epithelium during transition from crown to root: implications for Hertwig's epithelial root sheath formation.</a> Journal of periodontal research. , (2012).</li><li>Fisher, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+development+in+vitro+of+the+whole+and+halved+lower+molar+tooth+germ+of+the+mouse.">Morphological development in vitro of the whole and halved lower molar tooth germ of the mouse.</a> Archives of oral biology. 16, 1481-1496 (1971).</li><li>Coin, R., Schmitt, R., Lesot, H., Vonesch, J. L., Ruch, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+halved+embryonic+lower+first+mouse+molars:+correlation+with+the+distribution+pattern+of+non+dividing+IDE+cells,+the+putative+organizers+of+morphogenetic+units,+the+cusps.">Regeneration of halved embryonic lower first mouse molars: correlation with the distribution pattern of non dividing IDE cells, the putative organizers of morphogenetic units, the cusps.</a> The International journal of developmental biology. 44, 289-295 (2000).</li><li>Kavanagh, K. D., Evans, A. R., Jernvall, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predicting+evolutionary+patterns+of+mammalian+teeth+from+development.">Predicting evolutionary patterns of mammalian teeth from development.</a> Nature. 449, 427-432 (2007).</li><li>Munne, P. M., Tummers, M., Jarvinen, E., Thesleff, I., Jernvall, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tinkering+with+the+inductive+mesenchyme:+Sostdc1+uncovers+the+role+of+dental+mesenchyme+in+limiting+tooth+induction.">Tinkering with the inductive mesenchyme: Sostdc1 uncovers the role of dental mesenchyme in limiting tooth induction.</a> Development. 136, 393-402 (2009).</li></ol>

दांत संस्कृति का यह तरीका दांत रोगाणु के लिए पहुंचने वाले लाभ सही वंश उपकला या mesenchyme भीतर अनुरेखण और मोतियों की नियुक्ति की अनुमति, उत्कृष्ट है है. विकासशील दांत रोगाणु के निर्धारित क्षेत्रों इसलिए विश?...

प्रयोगों की एक संख्या के लिए यह संस्कृति ऊतक पूर्व vivo विकास का पालन करने के लिए सक्षम होने के लिए महत्वपूर्ण है. ऊतक विकसित करने की संस्कृति विकास की परिभाषित समय पर पहुँच प्रदान करता है और संस्कृति के माध्यम से कारकों के अलावा द्वारा जीन की हेरफेर, या भरी हुई मनकों पर, और अभिकर्मक और electroporation 1 के उपयोग के द्वारा की अनुमति देता है. कई प्रयोगों के लिए यह रूप में यह बढ़ती ऊतक morphogenesis से होकर गुजरती रूप वंश लेबल की कोशिकाओं के भाग्य का पालन करने के लिए, उदाहरण के लिए, ऊतक कल्पना करने में सक्षम होने के लिए महत्वपूर्ण है. इस भ्रूण से ऊतक का एक ब्लॉक सुसंस्कृत है जब स्पष्ट नहीं कर रहे हैं, जो गहरे भ्रूण के भीतर विकसित ऊतकों कि, के लिए विशेष रूप से समस्याग्रस्त हो सकता है. वे जबड़ा, जबडा और ललाट नाक प्रक्रिया के भीतर विकसित रूप में दांत, इस के अच्छे उदाहरण हैं. पूरे जबड़ा सुसंस्कृत है जब तय ऊतक के सेक्शनिंग के बाद दांत की सतही संरचनाओं देखा जा सकता है लेकिन आकारिकी में परिवर्तन ही विश्लेषण किया जा सकता है <sऊपर&gt; 2. हम हमारे दांत रोगाणु विकास का पालन करने की अनुमति देता है और विकास के दौरान दांत के विभिन्न भागों तक पहुँच प्रदान करने के लिए एक जीवित टुकड़ा संस्कृति तकनीक ढाल लिया है. एक संशोधित Trowell विधि 3 का उपयोग गैस तरल इंटरफेस में तकनीक संस्कृतियों दांत रोगाणु स्लाइस,. ये टुकड़ा संस्कृतियों सीधे दांत के morphogenesis निम्नलिखित, और इस तरह के तामचीनी गाँठ और दंताकुर और कूप 1,4-7 के रूप में अलग घटकों के वंश अनुरेखण अनुमति देने में बहुत उपयोगी किया गया है. तकनीक माउस भ्रूण तक सीमित नहीं है और सफलतापूर्वक सुअर की संस्कृति लाइव स्लाइस और साँप दंत ऊतक 8,9 करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. दांत विकास कल्पना करने के लिए सक्षम होने के लाभ के अलावा, टुकड़ा विधि भी ऊतक की पतली स्लाइस इनक्यूबेटर से मध्यम और हवा से पोषक तत्वों के लिए उपयोग में वृद्धि हुई है कि लाभ है. इस विवो में विकास से मेल जो दांत रोगाणु, और शो invas के बेहतर विकास में परिणामpapilla 7 में endothelial कोशिकाओं के आयन. इसके विपरीत, पूरे जबड़ा संस्कृतियों में दांत कीटाणुओं विवो में उन लोगों की तुलना में धीमी विकसित और संस्कृति के केंद्र में लंबी अवधि संस्कृतियों में परिगलित अक्सर है. टुकड़ा संस्कृति में, दांत जबड़े का एक टुकड़ा के भीतर विकसित करता है, और आसपास के विकास हड्डी और अन्य ऊतकों के साथ अपनी बातचीत पर नजर रखी जा सकती है. हमारे विधि में ऊतक सीधे एक समर्थन मध्यम 10,11 में एम्बेड करने के लिए कोई ज़रूरत नहीं है और काट खंड के लिए ऊतक संलग्न करने के लिए किसी भी प्रणाली के लिए कोई जरूरत के साथ विच्छेदन के बाद कटा हुआ है. विधि कई mandibles एक सत्र में sectioned करने की अनुमति, इसलिए noninvasive और तेजी से है.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>101077Y</td>
			<td>100% ethanol was diluted in distilled H2O to 70%.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12634-010</td>
			<td>Advanced Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium F12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P0781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DiI (Molecular probes)</td>
			<td>Vybrant</td>
			<td>V-22885</td>
			<td>Cell-labeling solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td></td>
			<td>Cell tracker CM-DiI, C-7000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DiO (Molecular probes)</td>
			<td>Vybrant</td>
			<td>V22886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geminator 500</td>
			<td>Thomas</td>
			<td>Thomas No. 3885A20</td>
			<td>Dry-heat sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>McIlwain tissue chopper</td>
			<td>Ted Pella, Inc.</td>
			<td>10180</td>
			<td>Standard table</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Organ culture dish (Center-Well Organ Culture Dish)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Membranes (Cell Culture Inserts, 0.4 &#956;m pore size)</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>353090</td>
			<td>PET track-etched membrane, 6-well format</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal grids (Stainless Steel - AISI 304 - Mesh)</td>
			<td>Goodfellow</td>
			<td>FE228710</td>
			<td>(Fe/Cr18/Ni10)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoFlow Direct Heat CO2 Incubator</td>
			<td>Nuaire</td>
			<td>NU-5500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picospritzer III</td>
			<td>Intracel Ltd</td>
			<td>051-0500-900 0-100 psi</td>
			<td>Single channel picospritzer III</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass capillary with filament 1 mm</td>
			<td>WPI</td>
			<td>TW100F-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire 0.1 mm</td>
			<td>Goodfellow</td>
			<td>W005138</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire 0.38 mm</td>
			<td>Goodfellow</td>
			<td>W005155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirator tubes</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5177</td>
			<td>Used for mouth aspiration lineage tracers</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the slice culture method for following development of tooth germs in explant culture

Explant संस्कृति विशिष्ट समय बिंदुओं पर अंगों के विकास और की जोड़ - तोड़ इसलिए विकास जीवविज्ञानी के लिए एक महत्वपूर्ण तरीका है की अनुमति देता है. कई अंगों के लिए यह पूर्व vivo संस्कृति दौरान निगरानी की अनुमति के लिए विकासशील ऊतक का उपयोग करने के लिए मुश्किल है. टुकड़ा संस्कृति विधि की अनुमति देता है ऊतक के लिए उपयोग इतना है कि morphogenetic आंदोलनों का पालन किया जा सकता है और विशेष सेल आबादी में गड़बड़ी या वंश पता लगाने के लिए लक्षित किया जा सकता है. इस पत्र में हम प्रजातियों में से एक रेंज में दांत कीटाणुओं की संस्कृति के लिए बहुत सफल रहा है कि टुकड़ा संस्कृति की एक विधि का वर्णन. विधि अन्य जबड़े ऊतकों से घिरे vivo में मनाया है कि एक समान दर से विकसित जो दांत रोगाणु, के लिए उत्कृष्ट पहुँच प्रदान करता है. यह दांत और आसपास के ऊतक के बीच ऊतक बातचीत पर नजर रखी जा करने की अनुमति देता. इस पत्र दांत कीटाणुओं पर केंद्रित है, एक ही प्रोटोकॉल एक नंबर के विकास का पालन करने के लिए लागू किया जा सकता हैऐसे लार ग्रंथियों, मेकेल उपास्थि, नाक ग्रंथियों, जीभ, और कान के रूप में अन्य अंगों, के.

पहली दाढ़ दंत कूप के आंदोलन का पालन करने के लिए, 250 माइक्रोन ललाट स्लाइस ऊपर वर्णित विधि का उपयोग कर एक जबड़ा के माध्यम से ले जाया गया. दंत कूप के विकास के दांत के बाहरी तामचीनी उपकला (OEE) है कि चारों ओर mesenchyme क?...

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यहाँ विस्तार एक ऊतक हेलिकॉप्टर का उपयोग जबड़ा स्लाइस में संस्कृति दांत कीटाणुओं के लिए एक विधि हम. इस पद्धति अधिक पारंपरिक संस्कृति तरीकों का उपयोग कर उपलब्ध हेरफेर और वंश अनुरेखण, नहीं करने के लिए शानदार अवसर प्रदान करने, विकास के दौरान दांत के लिए अद्वितीय उपयोग की अनुमति देता.

Explant संस्कृति में दांत कीटाणुओं के विकास के बाद के लिए टुकड़ा संस्कृति विधि

Explant culture allows manipulation of developing organs at specific time points&#160;and is therefore an important method for the developmental ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture

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