Name: the slice culture method for following development of tooth germs in explant culture
Uploaded: 2013-11-13T20:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture Video at JoVE.com

Sarah A. Alfaqeeh er finansiert av Kind Saud University School of Dentistry, Ministry of Higher Education, Kingdom of Saudi Arabia.

En. Set Up <ol><li> Skjerp instrumentene disseksjon (ved hjelp av en skjerping stein smurt med mineralolje) og sterilisere før bruk for orgel kultur ved hjelp av en 70% etanol spray og tørr-varme sterilisering. Skjerpe disseksjon nåler ved hjelp av elektrolyse i 2 M natriumhydroksid ved hjelp av en 12 V-forsyningen. </li><li> Forbered kultur medium som brukes for disseksjon og kultur av embryonale organer, som består av Advanced Dulbeccos Modified Eagle Medium F12 (DMEM F12) supplert med 1% Glutamax og 1% penicill...

<ol>
	<li>Rothova, M., Peterkova, R., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+map+of+the+dental+mesenchyme:+dynamic+development+of+the+dental+papilla+and+follicle.">Fate map of the dental mesenchyme: dynamic development of the dental papilla and follicle.</a> Developmental biology. 366, 244-254 (2012).</li><li>Ferguson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activin+is+an+essential+early+mesenchymal+signal+in+tooth+development+that+is+required+for+patterning+of+the+murine+dentition.">Activin is an essential early mesenchymal signal in tooth development that is required for patterning of the murine dentition.</a> Genes &amp; development. 12, 2636-2649 (1998).</li><li>Trowell, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+culture+of+mature+organs+in+a+synthetic+medium.">The culture of mature organs in a synthetic medium.</a> Experimental cell research. 16, 118-147 (1959).</li><li>Matalova, E., Antonarakis, G. S., Sharpe, P. T., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+lineage+of+primary+and+secondary+enamel+knots.">Cell lineage of primary and secondary enamel knots.</a> Developmental dynamics : an official publication of the American Association of Anatomists. 233, 754-759 (2005).</li><li>Mitsiadis, T. A., Tucker, A. S., De Bari, C., Cobourne, M. T., Rice, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+regulatory+relationship+between+Tbx1+and+FGF+signaling+during+tooth+morphogenesis+and+ameloblast+lineage+determination.">A regulatory relationship between Tbx1 and FGF signaling during tooth morphogenesis and ameloblast lineage determination.</a> Developmental biology. 320, 39-48 (2008).</li><li>Diep, L., Matalova, E., Mitsiadis, T. A., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+the+tooth+bud+mesenchyme+to+alveolar+bone.">Contribution of the tooth bud mesenchyme to alveolar bone.</a> Journal of experimental zoology. Part B, Molecular. 312B, 510-517 (2009).</li><li>Rothova, M., Feng, J., Sharpe, P. T., Peterkova, R., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+mesoderm+to+the+developing+dental+papilla.">Contribution of mesoderm to the developing dental papilla.</a> The International journal of developmental biology. 55, 59-64 (2011).</li><li>Buchtova, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation+and+patterning+of+the+snake+dentition+are+dependent+on+Sonic+hedgehog+signaling.">Initiation and patterning of the snake dentition are dependent on Sonic hedgehog signaling.</a> Developmental biology. 319, 132-145 (2008).</li><li>Buchtova, M., Stembirek, J., Glocova, K., Matalova, E., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+regression+of+the+dental+lamina+underlies+the+development+of+diphyodont+dentitions.">Early regression of the dental lamina underlies the development of diphyodont dentitions.</a> Journal of dental research. 91, 491-498 (2012).</li><li>Cho, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+primary+enamel+knot+determines+the+position+of+the+first+buccal+cusp+in+developing+mice+molars.">The primary enamel knot determines the position of the first buccal cusp in developing mice molars.</a> Differentiation; research in biological diversity. 75, 441-451 (2007).</li><li>Sakano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+dynamics+in+cervical+loop+epithelium+during+transition+from+crown+to+root:+implications+for+Hertwig's+epithelial+root+sheath+formation.">Cell dynamics in cervical loop epithelium during transition from crown to root: implications for Hertwig's epithelial root sheath formation.</a> Journal of periodontal research. , (2012).</li><li>Fisher, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+development+in+vitro+of+the+whole+and+halved+lower+molar+tooth+germ+of+the+mouse.">Morphological development in vitro of the whole and halved lower molar tooth germ of the mouse.</a> Archives of oral biology. 16, 1481-1496 (1971).</li><li>Coin, R., Schmitt, R., Lesot, H., Vonesch, J. L., Ruch, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+halved+embryonic+lower+first+mouse+molars:+correlation+with+the+distribution+pattern+of+non+dividing+IDE+cells,+the+putative+organizers+of+morphogenetic+units,+the+cusps.">Regeneration of halved embryonic lower first mouse molars: correlation with the distribution pattern of non dividing IDE cells, the putative organizers of morphogenetic units, the cusps.</a> The International journal of developmental biology. 44, 289-295 (2000).</li><li>Kavanagh, K. D., Evans, A. R., Jernvall, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predicting+evolutionary+patterns+of+mammalian+teeth+from+development.">Predicting evolutionary patterns of mammalian teeth from development.</a> Nature. 449, 427-432 (2007).</li><li>Munne, P. M., Tummers, M., Jarvinen, E., Thesleff, I., Jernvall, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tinkering+with+the+inductive+mesenchyme:+Sostdc1+uncovers+the+role+of+dental+mesenchyme+in+limiting+tooth+induction.">Tinkering with the inductive mesenchyme: Sostdc1 uncovers the role of dental mesenchyme in limiting tooth induction.</a> Development. 136, 393-402 (2009).</li></ol>

Denne metoden for tannkulturen har den fordel at tilgang til tannen bakterie er utmerket, slik at nøyaktig avstamning oppsporing og plassering av perler i epitelet, eller mesenchyme. Definerte regioner i utviklings tann bakterie kan derfor være spesielt målrettet. Under kultur skiftende morfologi av tannen bakterie kan følges, og effekten av manipulasjoner raskt vurderes. Fremgangsmåten er imidlertid bare egnet for små tann bakterier før vesentlig dannelse av hardt vev, for eksempel d...

For en rekke eksperimenter er det viktig å være i stand til kultur vev ex vivo for å følge utviklingen. Dyrkning av utvikling av vev gir tilgang ved definerte perioder med utvikling og tillater manipulasjon av genene ved tilsetning av faktorer til kulturmediet eller på lastet perler og ved bruk av transfeksjon og elektroporering 1.. For mange eksperimenter er det viktig å være i stand til å visualisere vevet som det vokser, for eksempel, for å følge skjebnen til lineage merkede celler som vevet gjennomgår morphogenesis. Dette kan være spesielt problematisk for vev som utvikler seg dypt inne i embryo, som ikke er åpenbare når en blokk av vev fra embryo dyrkes. Tennene er gode eksempler på dette, som de utvikler i kjeven, overkjeve og frontal nasal prosessen. Når hele kjeven blir dyrket overfladiske strukturer av tannen kan sees, men forandringer i morfologi kan bare analyseres etter snitting av fast vev <sopp&gt; to. Vi har tilpasset en live skive kultur teknikken tillater oss å følge tann bakterie utvikling og gi tilgang til de ulike deler av tannen under utvikling. Teknikken kulturer tann bakterie skiver på gass-væske-grensesnittet, ved hjelp av en modifisert Trowell metode tre. Disse skive kulturer har vært svært nyttig i direkte følge morfogenese av tannen, og slik avstamning sporing av forskjellige komponenter, for eksempel emalje knute og tann papilla og hårsekken 1,4-7. Teknikken er ikke begrenset til museembryoer og har med hell blitt brukt til kultur live-skiver av gris og slange dental vev 8,9. I tillegg til fordelen ved å være i stand til å visualisere tannutvikling, har den skive-metoden har også den fordel at de tynne skiver av vev har økt tilgang på næringsstoffer fra mediet og luft fra inkubatoren. Dette resulterer i forbedret vekst av tann bakterier, som svarer til utvikling av in vivo, og viser invasion av endotelceller i papilla 7.. I motsetning til dette tann bakteriene i hele kjevebenet kulturer utvikle langsommere enn de som er in vivo, og sentrum av kulturen er ofte nekrotisk i langtidskulturer. I skive kultur, utvikler tannen i løpet av en skive i kjeven, og dets interaksjon med det omgivende ben, og utvikling av andre vev kan overvåkes. I vår metode vevet er hakket rett etter disseksjon uten behov for å bygge inn i en støtte medium 10,11 og ikke behov for noen system for å feste vevet til hoggestabben. Fremgangsmåten er derfor ikke-invasiv og hurtig, slik at mange kjever for å bli delt i en sesjon.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>101077Y</td>
			<td>100% ethanol was diluted in distilled H2O to 70%.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12634-010</td>
			<td>Advanced Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium F12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P0781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DiI (Molecular probes)</td>
			<td>Vybrant</td>
			<td>V-22885</td>
			<td>Cell-labeling solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td></td>
			<td>Cell tracker CM-DiI, C-7000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DiO (Molecular probes)</td>
			<td>Vybrant</td>
			<td>V22886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geminator 500</td>
			<td>Thomas</td>
			<td>Thomas No. 3885A20</td>
			<td>Dry-heat sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>McIlwain tissue chopper</td>
			<td>Ted Pella, Inc.</td>
			<td>10180</td>
			<td>Standard table</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Organ culture dish (Center-Well Organ Culture Dish)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Membranes (Cell Culture Inserts, 0.4 &#956;m pore size)</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>353090</td>
			<td>PET track-etched membrane, 6-well format</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal grids (Stainless Steel - AISI 304 - Mesh)</td>
			<td>Goodfellow</td>
			<td>FE228710</td>
			<td>(Fe/Cr18/Ni10)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoFlow Direct Heat CO2 Incubator</td>
			<td>Nuaire</td>
			<td>NU-5500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picospritzer III</td>
			<td>Intracel Ltd</td>
			<td>051-0500-900 0-100 psi</td>
			<td>Single channel picospritzer III</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass capillary with filament 1 mm</td>
			<td>WPI</td>
			<td>TW100F-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire 0.1 mm</td>
			<td>Goodfellow</td>
			<td>W005138</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire 0.38 mm</td>
			<td>Goodfellow</td>
			<td>W005155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirator tubes</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5177</td>
			<td>Used for mouth aspiration lineage tracers</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the slice culture method for following development of tooth germs in explant culture

Eksplantering kultur tillater manipulering av å utvikle organer på bestemte tidspunkter og er derfor en viktig metode for utviklingsbiologen. For mange organer er det vanskelig å få tilgang til utvikling av vev for å tillate overvåking under ex vivo kultur. Stykket kultur metoden gir tilgang til vev slik at morphogenetic bevegelser kan følges og spesifikke cellepopulasjoner kan være målrettet for manipulasjon eller avstamning sporing. I denne artikkelen beskriver vi en metode for skive kultur som har vært svært vellykket for kultur av tann bakterier i en rekke arter. Metoden gir utmerket tilgang til tannen bakterier, som utvikler på et tilsvarende sats til den som ble observert in vivo, omgitt av de andre kjeve vev. Dette tillater vev interaksjoner mellom tannen og omgivende vev som skal overvåkes. Selv om dette dokumentet fokuserer på tann bakterier, kan den samme fremgangsmåte anvendes for å følge utviklingen av en rekkeav andre organer, som for eksempel spyttkjertler, Meckels brusk, nese kjertler, tunge og øre.

For å følge bevegelsen av den første molar tann hårsekken, ble 250 mikrometer frontale snitt tatt gjennom en underkjeve med metoden som er beskrevet ovenfor. Tann follicle er laget av mesenchyme som omgir den ytre emalje epitel (OEE) av den tredje tann, og har tidligere blitt vist å ta del i dannelsen av vev av periodontium 6.. Kjever ble dissekert ved E14.5, hetten stadium av tannutvikling. I stykket omrisset av tann epitel var klar, og den kondenserende tann mesenchyme kan bli identifisert som en mørk...

Watch this Scientific Journal Video about The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture Video at JoVE.com

The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture Video (Video) | JoVE

Her har vi detalj en metode for å kultur tann bakterier i kjeven skiver ved hjelp av en vev chopper. Denne metoden gir en unik tilgang til tannen under utvikling, og gir utmerket mulighet for manipulasjon og avstamning tracing, ikke tilgjengelig ved hjelp av mer tradisjonelle kultur metoder.

The Slice Kultur Metode for følgende utvikling av Tooth Germs I Eksplantering Kultur

Explant culture allows manipulation of developing organs at specific time points&#160;and is therefore an important method for the developmental ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture

Organotypic Slice Culture of E18 Rat Brains

Organotypic Slice Culture of E18 Rat Brains Video (Video) | JoVE

Organotypic slice cultures from embryonic rodent brains are widely used to study brain development. While there are often advantages to an in-vivo system, ...

Preparation of Gene Gun Bullets and Biolistic Transfection of Neurons in Slice Culture

Preparation of Gene Gun Bullets and Biolistic Transfection of Neurons in Slice Culture Video (Video) | JoVE

Biolistic transfection is a physical means of transfecting cells by bombarding tissue with high velocity DNA coated particles. We provide a detailed ...

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture Video (Video) | JoVE

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity Video (Video) | JoVE

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Culture and Maintenance of Human Embryonic Stem Cells  

Culture and Maintenance of Human Embryonic Stem Cells   Video (Video) | JoVE

Human embryonic stem (hES) cells must be monitored and cared for in order to maintain healthy, undifferentiated cultures. At minimum, the cultures must be ...

The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System

The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System Video (Video) | JoVE

Whole embryo culture (WEC) technique has been developed in 1950's by New and his colleagues, and applied for developmental biology 1. Although development ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart Video (Video) | JoVE

A Novel<em&gt; Ex vivo</em&gt; Kultur Metode for den embryonale mus Hjerte

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System Video (Video) | JoVE

Mus embryoutvikling i en Serum-fri Whole Embryo Kultur System

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

Dissection of Xenopus laevis Neural Crest for in vitro Explant Culture or in vivo Transplantation

Dissection of Xenopus laevis Neural Crest for in vitro Explant Culture or in vivo Transplantation Video (Video) | JoVE

Disseksjon av<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Neural Crest for<em&gt; In vitro</em&gt; Eksplantering kultur eller<em&gt; In vivo</em&gt; Transplantasjon

The neural crest (NC) is a transient dorsal neural tube cell population that undergoes an epithelium-to-mesenchyme transition (EMT) at the end of ...

Establishment of an Extracellular Acidic pH Culture System

Establishment of an Extracellular Acidic pH Culture System Video (Video) | JoVE

Etablering av en ekstracellulære surt pH kultur-systemet

Conditions of the tumor microenvironment, such as hypoxia or nutrient starvation, play critical roles in cancer progression and malignancy. However, the ...