Name: the slice culture method for following development of tooth germs in explant culture
Uploaded: 2013-11-13T20:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture Video at JoVE.com

Sarah A. Alfaqeeh Diş Hekimliği, Yüksek Eğitim Bakanlığı, Suudi Arabistan Krallığı Kind of Saud University College tarafından finanse edilmektedir.

1.. Kurma <ol><li> (Mineral yağ ile yağlanmış bir bileme taşı kullanarak) diseksiyon aletleri keskinleştirmek ve% 70 etanol sprey ve kuru ısı sterilizasyonu organ kültürü kullanmadan önce sterilize edin. 12 V kaynağı kullanarak 2 M sodyum hidroksit elektroliz kullanarak diseksiyon iğneler keskinleştirmek. </li><li> Glutamax,% 1 ve% 1 penisilin-streptomisin ile takviye edilmiş Dulbecco Advanced Modified Eagle Medium F12 (F12 DMEM) &#39;den oluşan, embriyonik organların diseksiyon ve kültür için k...

<ol>
	<li>Rothova, M., Peterkova, R., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+map+of+the+dental+mesenchyme:+dynamic+development+of+the+dental+papilla+and+follicle.">Fate map of the dental mesenchyme: dynamic development of the dental papilla and follicle.</a> Developmental biology. 366, 244-254 (2012).</li><li>Ferguson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activin+is+an+essential+early+mesenchymal+signal+in+tooth+development+that+is+required+for+patterning+of+the+murine+dentition.">Activin is an essential early mesenchymal signal in tooth development that is required for patterning of the murine dentition.</a> Genes &amp; development. 12, 2636-2649 (1998).</li><li>Trowell, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+culture+of+mature+organs+in+a+synthetic+medium.">The culture of mature organs in a synthetic medium.</a> Experimental cell research. 16, 118-147 (1959).</li><li>Matalova, E., Antonarakis, G. S., Sharpe, P. T., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+lineage+of+primary+and+secondary+enamel+knots.">Cell lineage of primary and secondary enamel knots.</a> Developmental dynamics : an official publication of the American Association of Anatomists. 233, 754-759 (2005).</li><li>Mitsiadis, T. A., Tucker, A. S., De Bari, C., Cobourne, M. T., Rice, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+regulatory+relationship+between+Tbx1+and+FGF+signaling+during+tooth+morphogenesis+and+ameloblast+lineage+determination.">A regulatory relationship between Tbx1 and FGF signaling during tooth morphogenesis and ameloblast lineage determination.</a> Developmental biology. 320, 39-48 (2008).</li><li>Diep, L., Matalova, E., Mitsiadis, T. A., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+the+tooth+bud+mesenchyme+to+alveolar+bone.">Contribution of the tooth bud mesenchyme to alveolar bone.</a> Journal of experimental zoology. Part B, Molecular. 312B, 510-517 (2009).</li><li>Rothova, M., Feng, J., Sharpe, P. T., Peterkova, R., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+mesoderm+to+the+developing+dental+papilla.">Contribution of mesoderm to the developing dental papilla.</a> The International journal of developmental biology. 55, 59-64 (2011).</li><li>Buchtova, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation+and+patterning+of+the+snake+dentition+are+dependent+on+Sonic+hedgehog+signaling.">Initiation and patterning of the snake dentition are dependent on Sonic hedgehog signaling.</a> Developmental biology. 319, 132-145 (2008).</li><li>Buchtova, M., Stembirek, J., Glocova, K., Matalova, E., Tucker, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+regression+of+the+dental+lamina+underlies+the+development+of+diphyodont+dentitions.">Early regression of the dental lamina underlies the development of diphyodont dentitions.</a> Journal of dental research. 91, 491-498 (2012).</li><li>Cho, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+primary+enamel+knot+determines+the+position+of+the+first+buccal+cusp+in+developing+mice+molars.">The primary enamel knot determines the position of the first buccal cusp in developing mice molars.</a> Differentiation; research in biological diversity. 75, 441-451 (2007).</li><li>Sakano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+dynamics+in+cervical+loop+epithelium+during+transition+from+crown+to+root:+implications+for+Hertwig's+epithelial+root+sheath+formation.">Cell dynamics in cervical loop epithelium during transition from crown to root: implications for Hertwig's epithelial root sheath formation.</a> Journal of periodontal research. , (2012).</li><li>Fisher, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+development+in+vitro+of+the+whole+and+halved+lower+molar+tooth+germ+of+the+mouse.">Morphological development in vitro of the whole and halved lower molar tooth germ of the mouse.</a> Archives of oral biology. 16, 1481-1496 (1971).</li><li>Coin, R., Schmitt, R., Lesot, H., Vonesch, J. L., Ruch, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+halved+embryonic+lower+first+mouse+molars:+correlation+with+the+distribution+pattern+of+non+dividing+IDE+cells,+the+putative+organizers+of+morphogenetic+units,+the+cusps.">Regeneration of halved embryonic lower first mouse molars: correlation with the distribution pattern of non dividing IDE cells, the putative organizers of morphogenetic units, the cusps.</a> The International journal of developmental biology. 44, 289-295 (2000).</li><li>Kavanagh, K. D., Evans, A. R., Jernvall, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predicting+evolutionary+patterns+of+mammalian+teeth+from+development.">Predicting evolutionary patterns of mammalian teeth from development.</a> Nature. 449, 427-432 (2007).</li><li>Munne, P. M., Tummers, M., Jarvinen, E., Thesleff, I., Jernvall, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tinkering+with+the+inductive+mesenchyme:+Sostdc1+uncovers+the+role+of+dental+mesenchyme+in+limiting+tooth+induction.">Tinkering with the inductive mesenchyme: Sostdc1 uncovers the role of dental mesenchyme in limiting tooth induction.</a> Development. 136, 393-402 (2009).</li></ol>

Diş kültürün Bu yöntem diş mikrop erişim avantajı doğru soy epiteli veya mezenşimin içinde izleme ve boncuk yerleştirme sağlayan, mükemmel vardır. Gelişmekte diş mikrop Tanımlı bölgeler dolayısıyla özellikle hedef alınabilir. Kültür sırasında diş mikrop değişen morfoloji takip edilebilir, ve manipülasyonlar etkisi hızlı bir şekilde değerlendirilmiştir. Bu doğru kıyılmış olamaz gibi bir yöntem olup, bununla birlikte, bu tür dentin ve emaye gibi sert...

Deneyler bir dizi için bu kültür dokusu ex vivo gelişimini takip edebilmek için önemlidir. Doku geliştirme Kültür gelişiminin tanımlanmış dönemlerinde erişim sağlayan ve kültür ortamına faktörlerin eklenmesiyle genlerin manipülasyon ya da yüklü boncuklar üzerine ve transfeksiyon ve elektroporasyon 1 kullanılmasıyla sağlar. Birçok deneyleri için o büyüdükçe doku morfolojilerinden maruz soy olarak etiketlenmiş hücrelerin kaderini takip etmek, örneğin, doku görselleştirmek edebilmek için önemlidir. Bu embriyo bir doku bloğu kültürlenir zaman açık değildir derin embriyo içinde geliştirmek dokular, özellikle sorunlu olabilir. Onlar mandibula, maksilla ve frontal burun süreç içinde geliştirmek gibi Dişler, bu iyi örneklerdir. Bütün çene kültive edildiğinde sabit doku kesit sonra dişin yüzeysel yapıları izlenebilir ancak morfolojisindeki değişiklikler sadece analiz edilebilir <skadar&gt; 2. Biz, bize diş mikrop gelişimini takip etmesine ve geliştirme sırasında dişin farklı bölgelerine erişim sağlayan canlı bir dilim kültür tekniği adapte var. Değiştirilmiş Trowell Yöntem 3 kullanılarak, gaz-sıvı arayüzünde teknik kültürler diş mikrop dilimleri,. Bu dilim kültürler doğrudan dişin morfolojilerinden ardından ve bu emaye düğüm ve diş papilla ve folikül 1,4-7 gibi farklı bileşenleri, soy izleme sağlayan çok yararlı olmuştur. Bu teknik, fare embriyoları ile sınırlı değildir ve başarılı bir domuz kültür canlı dilimleri ve yılan dental doku 8,9 etmek için kullanılmıştır. Diş gelişimi görselleştirmek olmanın yararına ilave olarak, dilim yöntemi de doku ince dilim inkübatörden orta ve havadan besin erişim artmıştır avantajına sahiptir. Bu in vivo gelişme neticesinde diş mikrop, ve gösteri invas geliştirilmiş büyümesiyle sonuçlanırpapilla 7 içine endotel hücre iyon. Buna karşılık, bütün alt çene kültürlerde diş mikrop vivo olarak daha yavaş geliştirmek ve kültürün orta uzun süreli kültürlerde nekrotik genellikle. Dilim kültüründe, diş çene bir dilim içinde gelişir ve çevresindeki gelişen kemik ve diğer dokuları ile etkileşimi izlenebilir. Bizim yöntemde doku düz bir destek ortamında 10,11 gömmek için gerek ve kesme blok için doku eklemek için herhangi bir sistem için gerek diseksiyon sonra doğranır. Yöntem birçok altçeneler tek oturumda kesitli izin veren, bu nedenle noninvaziv ve hızlıdır.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>101077Y</td>
			<td>100% ethanol was diluted in distilled H2O to 70%.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12634-010</td>
			<td>Advanced Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium F12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P0781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DiI (Molecular probes)</td>
			<td>Vybrant</td>
			<td>V-22885</td>
			<td>Cell-labeling solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td></td>
			<td>Cell tracker CM-DiI, C-7000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DiO (Molecular probes)</td>
			<td>Vybrant</td>
			<td>V22886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Geminator 500</td>
			<td>Thomas</td>
			<td>Thomas No. 3885A20</td>
			<td>Dry-heat sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>McIlwain tissue chopper</td>
			<td>Ted Pella, Inc.</td>
			<td>10180</td>
			<td>Standard table</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Organ culture dish (Center-Well Organ Culture Dish)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Membranes (Cell Culture Inserts, 0.4 &#956;m pore size)</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>353090</td>
			<td>PET track-etched membrane, 6-well format</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal grids (Stainless Steel - AISI 304 - Mesh)</td>
			<td>Goodfellow</td>
			<td>FE228710</td>
			<td>(Fe/Cr18/Ni10)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoFlow Direct Heat CO2 Incubator</td>
			<td>Nuaire</td>
			<td>NU-5500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picospritzer III</td>
			<td>Intracel Ltd</td>
			<td>051-0500-900 0-100 psi</td>
			<td>Single channel picospritzer III</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass capillary with filament 1 mm</td>
			<td>WPI</td>
			<td>TW100F-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire 0.1 mm</td>
			<td>Goodfellow</td>
			<td>W005138</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire 0.38 mm</td>
			<td>Goodfellow</td>
			<td>W005155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirator tubes</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5177</td>
			<td>Used for mouth aspiration lineage tracers</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the slice culture method for following development of tooth germs in explant culture

Eksplant kültür belirli zaman noktalarında organ geliştirmeyi ve manipülasyon, bu nedenle gelişimsel biyolog için önemli bir yöntemdir sağlar. Birçok organ için bu ex vivo kültür sırasında izleme sağlamak için gelişmekte olan doku ulaşmak zordur. Dilim kültür yöntemi sağlar dokusu erişim böylece morfogenetik hareketleri takip edilebilir ve belirli bir hücre popülasyonları manipülasyon veya soy izleme için hedef olabilir. Bu yazıda tür bir dizi diş mikrop kültürü için çok başarılı olmuştur dilim kültürü için bir yöntem tarif eder. Bu yöntem, diğer çene dokular tarafından çevrili in vivo gözlenene benzer bir oranda, en geliştirmek diş mikrop, mükemmel erişim sağlar. Bu, diş ve çevreleyen doku arasında doku etkileşimleri takip edilmesine olanak sağlamaktadır. Bu kağıt mikropların diş üzerinde yoğunlaşmaktadır de, aynı protokolü bir dizi gelişme takip uygulanabilirBöyle tükürük bezleri, Meckel kıkırdağı, burun bezleri, dil ve kulak gibi diğer organlara,.

İlk molar diş kökü hareketini takip etmek amacıyla, 250 um frontal kesitler, yukarıda tarif edilen yöntemi kullanılarak alt çeneye ile alınmıştır. Diş kökü, gelişmekte olan dişin dış emaye epitel (OEE) çevreleyen mezenşimin tabakası olan ve daha önce periodonsiyum 6 dokusu oluşumuna katılmak için gösterilmiştir. Altçeneler E14.5, diş gelişimi kapak aşamasında disseke edildi. Dilim ise diş epitelyumun anahat açıktı ve yoğuşmalı dental mezenşimin diş epitel (Ş...

Watch this Scientific Journal Video about The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture Video at JoVE.com

The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture Video (Video) | JoVE

Burada detay doku helikopter kullanarak mandibul dilimler kültür diş mikroplar için bir yöntemi biz. Bu yöntem, daha geleneksel kültürü yöntemleri kullanılarak mevcut manipülasyon ve soy izleme, değil mükemmel bir fırsat sağlayarak, gelişimi sırasında dişe eşsiz erişim sağlar.

Eksplantasyon Kültüründe Diş mikropların Geliştirme takiben için Dilim Kültür Yöntemi

Explant culture allows manipulation of developing organs at specific time points&#160;and is therefore an important method for the developmental ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Slice Culture Method for Following Development of Tooth Germs In Explant Culture

Organotypic Slice Culture of E18 Rat Brains

Organotypic Slice Culture of E18 Rat Brains Video (Video) | JoVE

E18 Rat Brain Organotipik Dilim Kültür

Organotypic slice cultures from embryonic rodent brains are widely used to study brain development. While there are often advantages to an in-vivo system, ...

Preparation of Gene Gun Bullets and Biolistic Transfection of Neurons in Slice Culture

Preparation of Gene Gun Bullets and Biolistic Transfection of Neurons in Slice Culture Video (Video) | JoVE

Gen Tabancası İşaretleri ve Dilim Kültür Nöronlar Biyolistik Transfeksiyon hazırlanması

Biolistic transfection is a physical means of transfecting cells by bombarding tissue with high velocity DNA coated particles. We provide a detailed ...

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture Video (Video) | JoVE

Erken Civciv Embriyolar ex vivo (Kültür) Kültür Yöntemi

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity Video (Video) | JoVE

Nörotoksisite Yüksek İçerik Analizi Nöronal ve Astrosit Hücre Co-Kültür Testi

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Culture and Maintenance of Human Embryonic Stem Cells  

Culture and Maintenance of Human Embryonic Stem Cells   Video (Video) | JoVE

İnsan Embriyonik Kök Hücre Kültürü ve Bakım

Human embryonic stem (hES) cells must be monitored and cared for in order to maintain healthy, undifferentiated cultures. At minimum, the cultures must be ...

The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System

The Method of Rodent Whole Embryo Culture using the Rotator-type Bottle Culture System Video (Video) | JoVE

Rotator-tipi Şişe Kültür Sistemi kullanılarak Kemirgen Tüm Embriyo Kültürü Yöntemi

Whole embryo culture (WEC) technique has been developed in 1950's by New and his colleagues, and applied for developmental biology 1. Although development ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart Video (Video) | JoVE

Yeni Bir<em&gt; Ex vivo</emEmbriyonik Fare Kalp için&gt; Kültür Yöntemi

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System

Mouse Embryonic Development in a Serum-free Whole Embryo Culture System Video (Video) | JoVE

Serumsuz Tüm Embriyo Kültür Sistemde Fare Embriyonik Development

Mid-gestation stage mouse embryos were cultured utilizing a serum-free culture medium prepared from commercially available stem cell media supplements in ...

Dissection of Xenopus laevis Neural Crest for in vitro Explant Culture or in vivo Transplantation

Dissection of Xenopus laevis Neural Crest for in vitro Explant Culture or in vivo Transplantation Video (Video) | JoVE

Diseksiyonu<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Sinir Crest için<em&gt; In vitro</em&gt; Eksplantasyon Kültür veya<em&gt; In vivo</em&gt; Transplantasyon

The neural crest (NC) is a transient dorsal neural tube cell population that undergoes an epithelium-to-mesenchyme transition (EMT) at the end of ...

Establishment of an Extracellular Acidic pH Culture System

Establishment of an Extracellular Acidic pH Culture System Video (Video) | JoVE

Bir hücre dışı asidik pH kültür sistemi kurulması

Conditions of the tumor microenvironment, such as hypoxia or nutrient starvation, play critical roles in cancer progression and malignancy. However, the ...