Name: growing neural stem cells from conventional and nonconventional regions of the adult rodent brain
Uploaded: 2013-11-18T20:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Growing Neural Stem Cells from Conventional and Nonconventional Regions of the Adult Rodent Brain at JoVE.com

وقد تم تمويل هذا العمل (جزئيا) من قبل التحالف هيلمهولتز ICEMED - التصوير والأمراض الاستقلابية علاج البيئة، من خلال صندوق مبادرة وشبكة جمعية هيلمهولتز، منحة من مؤسسة أخرى Kroener-فريزينيوس، ومنحة من جمعية الألمانية للبحوث ( SFB 655: خلايا في الأنسجة).

العمل تتمسك إعلان Helsinski وبيان الحيوان ARVO. واستخدمت الحيوانات لجمع الأنسجة وتم اتباع جميع أساليب ذات الصلة وفقا للتعليمات للمنشأة الحيوان في جامعة درسدن. وقد تم التعامل مع الحيوانات، ويضم وفقا للمبادئ التوجيهية الاتحادية الألمانية للاستخدام ورعاية الحيوانات المختب...

<ol>
	<li>Cajal, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Comparative Study of Sensory Areas of the Human Cortex. , (1899).</li><li>Altman, J., Das, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoradiographic+and+histological+evidence+of+postnatal+hippocampal+neurogenesis+in+rats.">Autoradiographic and histological evidence of postnatal hippocampal neurogenesis in rats.</a> J. Comp. Neurol. 124, 319-335 (1965).</li><li>Kaplan, M. S., Hinds, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis+in+the+adult+rat:+electron+microscopic+analysis+of+light+radioautographs.">Neurogenesis in the adult rat: electron microscopic analysis of light radioautographs.</a> Science. 197, 1092-1094 (1977).</li><li>Nottebohm, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+replacement+in+adulthood.">Neuronal replacement in adulthood.</a> Ann. N.Y. Acad. Sci. 457, 143-161 (1985).</li><li>Gould, E., Reeves, A. J., Graziano, M. S., Gross, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis+in+the+neocortex+of+adult+primates.">Neurogenesis in the neocortex of adult primates.</a> Science. 286, 548-552 (1999).</li><li>Kornack, D. R., Rakic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuation+of+neurogenesis+in+the+hippocampus+of+the+adult+macaque+monkey.">Continuation of neurogenesis in the hippocampus of the adult macaque monkey.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96, 5768-5773 (1999).</li><li>Alvarez-Buylla, A., Kohwi, M., Nguyen, T. M., Merkle, F. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+heterogeneity+of+adult+neural+stem+cells+and+the+emerging+complexity+of+their+niche.">The heterogeneity of adult neural stem cells and the emerging complexity of their niche.</a> Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 73, 357-365 (2008).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>Luskin, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restricted+proliferation+and+migration+of+postnatally+generated+neurons+derived+from+the+forebrain+subventricular+zone.">Restricted proliferation and migration of postnatally generated neurons derived from the forebrain subventricular zone.</a> Neuron. 11, 173-189 (1993).</li><li>Lendahl, U., Zimmerman, L. B., McKay, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CNS+stem+cells+express+a+new+class+of+intermediate+filament+protein.">CNS stem cells express a new class of intermediate filament protein.</a> Cell. 60, 585-595 (1990).</li><li>Androutsellis-Theotokis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+neural+precursors+in+the+adult+brain+rescues+injured+dopamine+neurons.">Targeting neural precursors in the adult brain rescues injured dopamine neurons.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106, 13570-13575 (2009).</li><li>Jin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis+in+dentate+subgranular+zone+and+rostral+subventricular+zone+after+focal+cerebral+ischemia+in+the+rat.">Neurogenesis in dentate subgranular zone and rostral subventricular zone after focal cerebral ischemia in the rat.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98, 4710-4715 (2001).</li><li>Zhang, R. L., Zhang, Z. G., Chopp, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemic+stroke+and+neurogenesis+in+the+subventricular+zone.">Ischemic stroke and neurogenesis in the subventricular zone.</a> Neuropharmacology. 55, 345-352 (2008).</li><li>Caplan, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+are+MSCs+therapeutic?+New+data:+new+insight.">Why are MSCs therapeutic? New data: new insight.</a> J. Pathol. 217, 318-324 (2009).</li><li>Goldman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+and+progenitor+cell-based+therapy+of+the+human+central+nervous+system.">Stem and progenitor cell-based therapy of the human central nervous system.</a> Nat. Biotechnol. 23, 862-871 (2005).</li><li>Sun, N., Longaker, M. T., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+iPS+cell-based+therapy:+considerations+before+clinical+applications.">Human iPS cell-based therapy: considerations before clinical applications.</a> Cell Cycle. 9, 880-885 (2010).</li><li>Amariglio, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor-derived+brain+tumor+following+neural+stem+cell+transplantation+in+an+ataxia+telangiectasia+patient.">Donor-derived brain tumor following neural stem cell transplantation in an ataxia telangiectasia patient.</a> PLoS Med. 6, e1000029 (2009).</li><li>Lindvall, O., Bjorklund, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+therapeutics+in+Parkinson's+disease.">Cell therapeutics in Parkinson's disease.</a> Neurotherapeutics. 8, 539-548 (2011).</li><li>Kittappa, R., Bornstein, S. R., Androutsellis-Theotokis, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+eNSCs+in+Neurodegenerative+Disease.">The Role of eNSCs in Neurodegenerative Disease.</a> Mo.l Neurobiol. , (2012).</li><li>Cattaneo, E., McKay, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+and+manipulating+neuronal+stem+cells.">Identifying and manipulating neuronal stem cells.</a> Trends Neurosci. 14, 338-340 (1991).</li><li>Jensen, J. B., Parmar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strengths+and+limitations+of+the+neurosphere+culture+system.">Strengths and limitations of the neurosphere culture system.</a> Mol. Neurobiol. 34, 153-161 (2006).</li><li>Duarte, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dosage-sensitive+requirement+for+mouse+Dll4+in+artery+development.">Dosage-sensitive requirement for mouse Dll4 in artery development.</a> Genes Dev. 18, 2474-2478 (2004).</li><li>Maisonpierre, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiopoietin-2,+a+natural+antagonist+for+Tie2+that+disrupts+in+vivo+angiogenesis.">Angiopoietin-2, a natural antagonist for Tie2 that disrupts in vivo angiogenesis.</a> Science. 277, 55-60 (1997).</li><li>Androutsellis-Theotokis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+signalling+regulates+stem+cell+numbers+in+vitro+and+in+vivo.">Notch signalling regulates stem cell numbers in vitro and in vivo.</a> Nature. 442, 823-826 (2006).</li><li>Alderson, R. F., Alterman, A. L., Barde, Y. A., Lindsay, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain-derived+neurotrophic+factor+increases+survival+and+differentiated+functions+of+rat+septal+cholinergic+neurons+in+culture.">Brain-derived neurotrophic factor increases survival and differentiated functions of rat septal cholinergic neurons in culture.</a> Neuron. 5, 297-306 (1990).</li><li>Johe, K. K., Hazel, T. G., Muller, T., Dugich-Djordjevic, M. M., McKay, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+factors+direct+the+differentiation+of+stem+cells+from+the+fetal+and+adult+central+nervous+system.">Single factors direct the differentiation of stem cells from the fetal and adult central nervous system.</a> Genes Dev. 10, 3129-3140 (1996).</li><li>Ourednik, J., Ourednik, V., Lynch, W. P., Schachner, M., Snyder, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+display+an+inherent+mechanism+for+rescuing+dysfunctional+neurons.">Neural stem cells display an inherent mechanism for rescuing dysfunctional neurons.</a> Nat. Biotechnol. 20, 1103-1110 (2002).</li><li>Ryu, J. K., Cho, T., Wang, Y. T., McLarnon, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+progenitor+cells+attenuate+inflammatory+reactivity+and+neuronal+loss+in+an+animal+model+of+inflamed+AD+brain.">Neural progenitor cells attenuate inflammatory reactivity and neuronal loss in an animal model of inflamed AD brain.</a> J. Neuroinflammation. 6, 39 (2009).</li><li>Androutsellis-Theotokis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenic+factors+stimulate+growth+of+adult+neural+stem+cells.">Angiogenic factors stimulate growth of adult neural stem cells.</a> PLoS One. 5, e9414 (2010).</li><li>Park, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hes3+regulates+cell+number+in+cultures+from+glioblastoma+multiforme+with+stem+cell+characteristics.">Hes3 regulates cell number in cultures from glioblastoma multiforme with stem cell characteristics.</a> Sci. Rep. 3, 1095-1010 (2013).</li><li>Poser, S. W., Shostak, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+5.">Ch. 5.</a> Cancer Stem Cells - The Cutting. , 89-110 (2011).</li><li>Androutsellis-Theotokis, A., Rueger, M. A., Mkhikian, H., Korb, E., McKay, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+pathways+controlling+neural+stem+cells+slow+progressive+brain+disease.">Signaling pathways controlling neural stem cells slow progressive brain disease.</a> Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 73, 403-410 (2008).</li></ol>

ويجري تقاسم العديد من الخطوات الحاسمة لنجاح العزلة، والتوسع، وتمايز الخلايا الجذعية العصبية من الدماغ الكبار من القواسم المشتركة مع تقنيات زراعة الأنسجة القياسية. الهدف أن نضع في الاعتبار هو أن NSCs معزولة عن الدماغ الكبار يجب أن نحافظ على أكبر عدد ممكن من هذه الخصائ?...

العقيدة المركزية لعلم الأعصاب، التي وضعتها الملاحظات الأساسية للالتهندس الخلوي الدماغ التي أدلى بها رامون كاجال Y. منذ أكثر من قرن، رأت أن من غير المرجح تكوين الخلايا العصبية بعد المراهقة نظرا لتعقيد الشبكات العصبية الموجودة في الجهاز العصبي المركزي 1. على الرغم من عمل التمان في 1960s، وبعد كابلان، مما يدل على أن 3 H-ثيميدين يمكن العثور عليها في الخلايا العصبية الناضجة مشيرا إلى أنه في الواقع يجري إنشاؤها الخلايا العصبية في مناطق متميزة من الدماغ الكبار، واصل العقيدة لعقد 2، 3. واصلت الأدلة لجبل مع البحث نوتيبوم التي تصف التغيرات الموسمية في عدد الخلايا العصبية الموجودة في أدمغة الطائر المغرد 4. لم يكن حتى عام 1999، عندما جولد وآخرون. الأعمال المنشورة على جيل من الخلايا العصبية في قرن آمون مع الزيادات أداء مهام التعلم النقابي في الفئران، فضلا عن ملاحظات Kornack والبرهان راكيتشواصلت تينغ تكوين الخلايا العصبية في المكاك الكبار أن مفهوم الدماغ أقل صرامة وأكثر من البلاستيك، واعترف 5، 6. البحث عن مصدر الخلوية لهذه العصبونات ولدت من جديد يؤدي إلى اكتشاف عدد سكانها منفصلة من الخلايا الجذعية (المنبوذة) التي تتواجد في مناطق من الدماغ ويشار إلى الكوات 7. وتعتبر منطقة ومنطقة الحبيبية subventricular الفرعية الحصين أن تكون المنطقتين العصبية الرئيسي 8،9. خلايا معزولة من هذه المواقع عرض مميز الكلاسيكية المنبوذة المستمدة الجنينية أو الجنين، وتجديد الذات والتمايز المحتملة. في حالة الخلايا الجذعية العصبية (NSCs)، فإنها يمكن أن تكون متمايزة في الخلايا العصبية، الخلايا النجمية، و oligodendrocytes. بالإضافة إلى ذلك، هذه وصمة عار المنبوذة إيجابية للعلامات الجنين مجلس الأمن القومي مثل البروتين وسيطة خيوط nestin 10. يسلط الضوء على المزيد من العمل الأخيرة التي المنبوذة قد لا تقتصر على هذه رالتعليم الجامعي المجالات، ويتم في الواقع المترجمة في جميع أنحاء الدماغ كما يبلغ عدد سكانها هادئة إلى حد كبير من الخلايا المرتبطة بشكل وثيق مع الأوعية الدموية 11. الملاحظات التي يتم تعبئتها المنبوذة في استجابة لإصابة يشير إلى احتمال أن تكون قادرة على الاستفادة من هذه الخلايا لأغراض التجديدي للمساعدة في التعافي من اضطراب الاعصاب والسكتة الدماغية 12، 13. هذا هو لا يختلف عن الدور الذي تلعبه الخلايا الجذعية الوسيطة (اللجان الدائمة) في شفاء الأنسجة الضامة، والتي توجد الخلايا المحيطة بالأوعية كما أن لديها القدرة على أن تصبح بانيات، غضروفية، والخلايا الدهنية 14. ومع ذلك، NSCs لا يمكن حصادها في بنفس الطريقة اللجان الدائمة من نخاع العظام بواسطة طموح الروتينية وكثافة تقنيات الطرد المركزي التدرج والاستفادة منها لاحقا في علاجات الخلايا استنادا ذاتي. ونتيجة لذلك، ومصادر أخرى من الخلايا، مثل استخدام NSCs الجنين أو السلائف الخلايا العصبية المشتقة من الإدارة الانتخابيةالخلايا الجذعية ryonic تم استكشاف نطاق واسع في الأمراض الحيوانية ونماذج إصابة بدرجات متفاوتة من النجاح 15. تقنيات الخلايا الجذعية المحفزة التي يسببها استخدام مصادر خلية جسدية تقدم سبيلا محتملا آخر لإنتاج العلاجات المستندة إلى الخلايا مفيدة علاجيا لمجموعة واسعة من التطبيقات، والتغلب على محدودية والمخاوف الأخلاقية بشأن استخدام الخلايا الجنينية والأنسجة الجنينية 16. ومع ذلك، فقد ثبت الترجمة السريرية لهذه النتائج أن يكون مهمة صعبة، كما هو موضح في نضالات علاج الحالات العصبية المختلفة مع العلاجية استنادا SC-النهج 17،18، فضلا عن مسار متعرج لإزالة التنظيمية. كنهج بديل، يمكن إدخال العلاجات الدوائية محددة تعدل أرقام مجلس الأمن القومي وتسهيل الانتعاش في نماذج من مرض الشلل الرعاش والسكتة الدماغية 19. مهما كانت الاستراتيجية قد يكون، فهم كيفية التعامل مع هذه الخلايا بشكل فعاليتطلب النظام في المختبر يمكن الوصول إليها. ثقافات NSCs لا يمكن أن يؤديها إما الثقافات الكلي، المعروف أيضا باسم neurospheres، أو على شكل أحادي الطبقة 8،20. وقد استخدمت على نطاق واسع على حد سواء التقنيات، مما يتيح لتهيئة الظروف ثقافة محددة، أي استخدام عامل نمو البشرة (صندوق تعديل العولمة الأوروبي) أو عامل نمو الخلايا الليفية الأساسية (bFGF) كمصدر mitogen، التي تنص على توسيع السلائف متعددة القدرات. بينما الثقافات neurosphere قد تكون أكثر ملاءمة لدراسة إمكانية نشر نسيلي من نوع من الخلايا المعزولة، وقد تبين هذا النظام لإنتاج يسكنها خليط من الخلايا خلال التوسع 21. بالإضافة إلى ذلك، بنية مغلقة من neurospheres يجعل التلاعب الدوائية من خلايا غير عملي، ويمكن أن يكون مرتبك تفسير تأثير هذه العوامل قد يكون بسبب المكروية التي أنشئت داخل neurosphere نفسها. الثقافات أحادي الطبقة، من ناحية أخرى، يمكن أن يكونالمستخدمة في شاشات إنتاجية عالية من مكتبات جزيء صغير، وتوفير أداة قوية لاستكشاف آليات نقل الإشارة التي تنظم نمو وتمايز SC ويفتح الفرصة لاكتشاف مركبات جديدة تستهدف تحديدا هذه الفئة من السكان الخلية. ونتيجة لذلك، والقدرة على توليد بتكاثر ثقافات NSCs الكبار من مناطق مختلفة من الاهتمام في الدماغ يمكن استخدامها في مجموعة واسعة من التطبيقات البحثية، بدءا من الدراسات التنموية من الجهاز العصبي المركزي (CNS) لاستكشاف نهج الطب التجديدي رواية . بروتوكول المعروضة هنا يوضح كيفية تشريح وتقييم إمكانية التفريق بين الطوائف المنبوذة CNS المعزولة من الدماغ القوارض الكبار.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="596">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">6-well tissue culture dishes</td>
			<td style="width:95px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">353934</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="190" rowspan="1" style="height:190px;width:216px;">Poly-L-ornithine</td>
			<td rowspan="1" style="width:95px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td rowspan="1" style="width:119px;">P-3655</td>
			<td style="width:167px;">
			5 mg/ml stock solution prepared in double distilled water (Stable for several months at -20 &#176;C).
			Working concentration 0.5 mg/ml in water (Stable for 1 month at 4 &#176;C).
			</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Fibronectin</td>
			<td style="width:95px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:119px;">1030-Fn</td>
			<td style="width:167px;">Do not agitate stock solution</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Filtration Apparatus</td>
			<td style="width:95px;">Corning Life Sciences</td>
			<td style="width:119px;">430769</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">DMEM/F-12</td>
			<td style="width:95px;">Mediatech</td>
			<td style="width:119px;">10-090-CV</td>
			<td style="width:167px;">See note below for complete N2 media preparation</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Apo-transferrin</td>
			<td style="width:95px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">T-2036</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Insulin</td>
			<td style="width:95px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">I-0516</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="68">
			<td height="68" style="height:68px;width:216px;">Putrescine</td>
			<td style="width:95px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P-5780</td>
			<td style="width:167px;">1 M stock solution in ddH2O (Stable at 20 &#176;C for 6 months)</td>
		</tr>
		<tr height="68">
			<td height="68" style="height:68px;width:216px;">Sodium Selenite</td>
			<td style="width:95px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">S-5261</td>
			<td style="width:167px;">500 &#181;M stock solution in ddH2O (Stable at -20 &#176;C for 6 months)</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Progesterone</td>
			<td style="width:95px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P-8783</td>
			<td style="width:167px;">100 &#181;M stock solution in ethanol (Stable at -20&#176;C for 6 months)</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:95px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">15140-122</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Phosphate Buffered Saline</td>
			<td style="width:95px;">Mediatech</td>
			<td style="width:119px;">21-040-CV</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Basic Fibroblast Growth Factor (bFGF)</td>
			<td style="width:95px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:119px;">233-FB</td>
			<td style="width:167px;">Working concentration 20 ng/ml&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Delta4 (Dll4)</td>
			<td style="width:95px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:119px;">1389-D4</td>
			<td style="width:167px;">Working concentration&#160; 500 ng/ml</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Angiopoetin 2 (Ang2)</td>
			<td style="width:95px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:119px;">623-AN</td>
			<td style="width:167px;">Working concentration&#160; 500 ng/ml</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">JAK Inhibitor</td>
			<td style="width:95px;">Calbiochem</td>
			<td style="width:119px;">420099</td>
			<td style="width:167px;">Working concentration 200 nM&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Bovine Serum Albumin</td>
			<td style="width:95px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">A-2058</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">15- and 50-ml Conical tubes</td>
			<td style="width:95px;">Corning Life Sciences</td>
			<td style="width:119px;">430053, 430829</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="243">
			<td colspan="4" height="243" style="height:243px;width:596px;">Other necessary items include: General dissection instruments, including razor blade and forceps, Adult rat (3-6 months old; Sprague-Dawley or Long Evans), CO2 intoxication chamber, Laminar flow hood for cell culture and incubator Incubator (humidified, 37 &#176;C, 5% CO2, 5% O2). Note: For complete N2 media preparation, to one bottle of DMEM/F-12 (500 ml) add 0.05 g of apotransferin, 0.0125 g of insulin (freshly predissolved in 1 ml of 10 mM NaOH), 50 &#956;l of putrescine, 30 &#956;l of sodium selenite, 100 &#956;l of progesterone stocks, and 5 ml of penicillin/streptomycin solution.&#160; Adjust pH to 7.2, if needed. Filter-sterilize and store at 4 &#176;C for up to 3 weeks and protect from light.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;"></td>
			<td style="width:95px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>[header]</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td colspan="2" height="22" style="height:22px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Immunofluorescence Reagents Table</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:216px;">Paraformaldehyde</td>
			<td style="width:95px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:119px;">15719</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Normal Donkey Serum (NDS)</td>
			<td style="width:95px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D-9663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:95px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">T-8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">4,6-Diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td style="width:95px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">D-8417</td>
			<td style="width:167px;">5 mg/ml stock solution in methanol</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>[header]</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;"></td>
			<td style="width:95px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Primary Antibody Table</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="43" rowspan="1" style="height:43px;width:216px;">Nestin</td>
			<td rowspan="1" style="width:95px;">Chemicon</td>
			<td rowspan="1" style="width:119px;">MAB353</td>
			<td style="width:167px;">
			Dilution Factor: 1:400
			Species: Mouse IgG1
			</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="43" rowspan="1" style="height:43px;width:216px;">Hes3</td>
			<td rowspan="1" style="width:95px;">Santa Cruz</td>
			<td rowspan="1" style="width:119px;">sc-25393</td>
			<td style="width:167px;">
			Dilution Factor: 1:100
			Species: Rabbit IgG
			</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="43" rowspan="1" style="height:43px;width:216px;">Sox2</td>
			<td rowspan="1" style="width:95px;">R&#38;D Systems</td>
			<td rowspan="1" style="width:119px;">MAB2018&#160;</td>
			<td style="width:167px;">
			Dilution Factor: 1:100
			Species: Mouse IgG2a
			</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="43" rowspan="1" style="height:43px;width:216px;">CNPase</td>
			<td rowspan="1" style="width:95px;">Chemicon</td>
			<td rowspan="1" style="width:119px;">MAB326</td>
			<td style="width:167px;">
			Dilution Factor: 1:200
			Species: Mouse IgG1
			</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="43" rowspan="1" style="height:43px;width:216px;">&#946;-tubulin III (TUJ1)</td>
			<td rowspan="1" style="width:95px;">R&#38;D Systems</td>
			<td rowspan="1" style="width:119px;">MAB1195</td>
			<td style="width:167px;">
			Dilution Factor: 1:500
			Species: Mouse IgG2a
			</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="43" rowspan="1" style="height:43px;width:216px;">Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP)</td>
			<td rowspan="1" style="width:95px;">Dako North America</td>
			<td rowspan="1" style="width:119px;">Z0334</td>
			<td style="width:167px;">
			Dilution Factor 1:500
			Species: Rabbit
			</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>[header]</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;"></td>
			<td style="width:95px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Secondary Antibody Table</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="64" rowspan="1" style="height:64px;width:216px;">Alexa&#160;&#160; 568</td>
			<td rowspan="1" style="width:95px;">Invitrogen</td>
			<td rowspan="1" style="width:119px;">A-21124</td>
			<td style="width:167px;">
			Dilution Factor: 1:200
			Species: Goat anti Mouse IgG1
			</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="64" rowspan="1" style="height:64px;width:216px;">Alexa 488</td>
			<td rowspan="1" style="width:95px;">Invitrogen</td>
			<td rowspan="1" style="width:119px;">A-21131</td>
			<td style="width:167px;">
			Dilution Factor: 1:200
			Species: Goat anti Mouse IgG2a
			</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="64" rowspan="1" style="height:64px;width:216px;">Cy5</td>
			<td rowspan="1" style="width:95px;">Jackson ImmunoResearch</td>
			<td rowspan="1" style="width:119px;">59883</td>
			<td style="width:167px;">
			Dilution Factor: 1:200
			Species: Goat anti Rabbit
			</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

growing neural stem cells from conventional and nonconventional regions of the adult rodent brain

يوضح العمل الأخيرة التي الجهاز العصبي المركزي (CNS) تجديد وتكون الأورام ينطوي السكان من الخلايا الجذعية (المنبوذة) المقيم في الدماغ الكبار. ومع ذلك، فإن آليات هذه الخلايا عادة هادئة توظف لضمان حسن سير العمل في الشبكات العصبية، فضلا عن دورها في التعافي من الإصابة والتخفيف من عمليات الاعصاب مفهومة قليلا. هذه الخلايا الموجودة في المناطق المشار إليها باسم &quot;منافذ&quot; التي توفر بيئة مكتفية التي تنطوي على إشارات تغييري من كل من الأوعية الدموية وجهاز المناعة. العزلة، والصيانة، والتفريق بين الطوائف المنبوذة CNS في ظل ظروف ثقافة المعرفة التي تستبعد العوامل غير معروف، يجعلها في متناول العلاج بالوسائل الدوائية أو وراثية، وبالتالي توفير نظرة ثاقبة سلوكهم في الجسم الحي. هنا نقدم معلومات مفصلة عن طرق لتوليد ثقافات المنبوذة CNS من مناطق مختلفة من الدماغ الكبار ونهج لتقييم د بهمifferentiation المحتملة في الخلايا العصبية، الخلايا النجمية، و oligodendrocytes في المختبر. هذه التقنية تعطي السكان خلية متجانسة بوصفها ثقافة أحادي الطبقة التي يمكن أن تصور لدراسة الفردية المنبوذة وذريتها. وعلاوة على ذلك، فإنه يمكن تطبيقها عبر أنظمة مختلفة نموذج حيواني والعينات السريرية، التي كانت تستخدم في السابق للتنبؤ ردود التجدد في الكبار الجهاز العصبي التالفة.

تحديد المنطقة ذات الاهتمام التي لحصاد الخلايا الجذعية العصبية هو خطوة أولى حاسمة وستحدد مقدار الوقت المستغرق للحصول على لوحة متكدسة من الخلايا. على سبيل المثال، هي منطقة SVZ العصبية الكلاسيكية ويحتوي على نسبة أعلى من نسبة الخلايا الجذعية العصبية لذلك. ومع ذلك، فإن تق...

Watch this Scientific Journal Video about Growing Neural Stem Cells from Conventional and Nonconventional Regions of the Adult Rodent Brain at JoVE.com

Growing Neural Stem Cells from Conventional and Nonconventional Regions of the Adult Rodent Brain

حصاد الخلايا الجذعية العصبية من الدماغ الكبار تتزايد استخدامها في تطبيقات تتراوح بين البحوث الأساسية لتطوير النظام العصبي لاستكشاف التطبيقات السريرية المحتملة في مجال الطب التجديدي. وهذا يجعل رقابة صارمة في ظروف العزلة وزراعة المستخدمة لزراعة هذه الخلايا حاسمة لصوت النتائج التجريبية.

تزايد الخلايا الجذعية العصبية من المناطق التقليدية وغير التقليدية من الدماغ الكبار القوارض

Recent work demonstrates that central nervous system (CNS) regeneration and tumorigenesis involves populations of stem cells (SCs) resident within the ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Growth and Differentiation of Adult Hippocampal Arctic Ground Squirrel Neural Stem Cells

نمو وتمايز الخلايا القطب الشمالي الأرضي الكبار السنجاب الجذعية العصبية الحصين

Arctic ground squirrels (Urocitellus parryii, AGS) are unique in their ability to hibernate with a core body temperature near or below freezing 1. These ...

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

العزل والتوسع في الخلايا الجذعية العصبية الكبار باستخدام الفحص Neurosphere

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

العزلة والثقافة من الخلايا العصبية كريست من الأنبوبة العصبية الجنينية الفئران

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice

ماوس واحدة، واثنين من الثقافات: العزلة وثقافة الكبار الخلايا الجذعية العصبية من المناطق العصبية اثنان من الفئران الفردية

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

خالية من التغذية اشتقاق الخلايا العصبية كريست السلف من افرة القوة البشرية الخلايا الجذعية

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

فرز خلية العصبية الجذعية وخلايا السلف من الفأر Subventricular المنطقة الكبار وحية على التصوير من حيوية دورة الخلية الخاصة

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

العزلة والثقافة من الخلايا الجذعية البالغة العصبية من المنطقة تحت الثفني ماوس

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...

Use of Synaptic Zinc Histochemistry to Reveal Different Regions and Laminae in the Developing and Adult Brain

استخدام هيستوتشيميستري الزنك متشابك للكشف عن مختلف المناطق وعن في الدماغ النامي والكبار

Characterization of anatomical and functional brain organization and development requires accurate identification of distinct neural circuits and regions ...

Collection of Frozen Rodent Brain Regions for Downstream Analyses

مجموعة من مناطق الدماغ القوارض المجمدة لتحليلات المصب

As our understanding of neurobiology has progressed, molecular analyses are often performed on small brain areas such as the medial prefrontal cortex ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

التسليم داخل الشرايين للخلايا الجذعية العصبية إلى الدماغ الفئران والفأر: تطبيق على الإقفاري الدماغي

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...