Name: bone marrow-derived macrophage production
Uploaded: 2013-11-22T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bone Marrow-derived Macrophage Production at JoVE.com

وأيد هذا العمل من قبل CNRS (PICS 2012-2014 لEG) وعن طريق منحة من REGIONE كامبانيا (LR N.5، 2002/03/28 إلى جيوفانا موتولا). فيليبو كونتي هو زميل في مؤسسة التعاون&#39;&#39; Infectiopole سود العلمي.&#39;&#39; نيكولا Boucherit هو زميل وزارة الفرنسي للأبحاث والتكنولوجيا. وكانت مصادر التمويل أي دور في تصميم الدراسة وجمع البيانات وتحليل البيانات، وقرار نشر أو إعداد المخطوطة.

بيان الأخلاق تمت الموافقة على بروتوكول للتعامل مع الحيوانات التي لدينا لجنة الأخلاقيات المؤسسية الحيوان &quot;CONSEIL العلمي دو مركز التدريب وآخرون للبحوث الطبية التجريبية-Chirurgical&quot; (CFREMC، تصريح المشروع 10-300٬122٬013 لاريك غيغو) من جامعة إي...

<ol>
	<li>Rutherford, M. S., Witsell, A., Schook, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+generating+functionally+heterogeneous+macrophages:+chaos+revisited.">Mechanisms generating functionally heterogeneous macrophages: chaos revisited.</a> J. Leukocyte Biol. 53, 602-618 (1993).</li><li>Van Furth, R., Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. 112, 325-336 (1992).</li><li>Adams, D., Halmiton, T., Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. 112, 325-336 (1992).</li><li>Morris, L., Graham, C. F., Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+in+haemopoietic+and+other+tissues+of+the+developing+mouse+detected+by+the+monoclonal+antibody+F4/80.">Macrophages in haemopoietic and other tissues of the developing mouse detected by the monoclonal antibody F4/80.</a> Development. 112, 517-526 (1991).</li><li>Haas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+phagosome:+compartment+with+a+license+to+kill.">The phagosome: compartment with a license to kill.</a> Traffic. 8, 311-330 (2007).</li><li>Underhill, D. M., Ozinsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phagocytosis+of+microbes:+complexity+in+action.">Phagocytosis of microbes: complexity in action.</a> Annu. Rev. Immunol. 20, 825-852 (2002).</li><li>Castagna, A., Polati, R., Bossi, A. M., Girelli, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte/macrophage+proteomics:+recent+findings+and+biomedical+applications.">Monocyte/macrophage proteomics: recent findings and biomedical applications.</a> Expert Rev. Proteomics. 9, 201-215 (2012).</li><li>Benoit, M., Desnues, B., Mege, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+polarization+in+bacterial+infections.">Macrophage polarization in bacterial infections.</a> J. Immunol. 181, 3733-3739 (2008).</li><li>Barry, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+stimulation+of+p38alpha-MAPK/Vps41-HOPS+by+LPS+from+pathogenic+Coxiella+burnetii+prevents+trafficking+to+microbicidal+phagolysosomes.">Impaired stimulation of p38alpha-MAPK/Vps41-HOPS by LPS from pathogenic Coxiella burnetii prevents trafficking to microbicidal phagolysosomes.</a> Cell Host Microbe. 12, 751-763 (2012).</li><li>Henry, R. M., Hoppe, A. D., Joshi, N., Swanson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+uniformity+of+phagosome+maturation+in+macrophages.">The uniformity of phagosome maturation in macrophages.</a> J. Cell Biol. 164, 185-194 (2004).</li><li>Sundaramurthy, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+Chemical+and+RNAi+Multiparametric+Profiles+Identifies+Triggers+of+Intracellular+Mycobacterial+Killing.">Integration of Chemical and RNAi Multiparametric Profiles Identifies Triggers of Intracellular Mycobacterial Killing.</a> Cell Host Microbe. 13, 129-142 (2013).</li><li>Boltz-Nitulescu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+rat+bone+marrow+cells+into+macrophages+under+the+influence+of+mouse+L929+cell+supernatant.">Differentiation of rat bone marrow cells into macrophages under the influence of mouse L929 cell supernatant.</a> J. Leukocyte Biol. 41, 83-91 (1987).</li></ol>

بروتوكول الموصوفة هنا تفاصيل طريقة لانتاج أعداد كبيرة من BMDMs. BMDM هي الخلايا الأولية ولها وظيفة بيولوجية وخصائص متباينة من الضامة وحيدات لأن هناك نضجا، على النقيض من خطوط الخلايا بلعم، والتي هي غير ناضجة. BMDMs يمكن استخدامها لفحص الجيني (رني)، وفحص المخدرات، والدراسات ?...

وهناك جانب كبير من وظيفة البلاعم هو دورها في المناعة الفطرية والتكيفية. بسبب قدرتها على يبلعم الجسيمات الخاملة، والبكتيريا أو الطفيليات، الضامة هي خط الدفاع الأول ضد الغزاة الأجانب. مرة واحدة المنضوية، وتدهورت الميكروبات داخل phagolysosomes. الضامة أيضا إرسال إشارات لتجنيد ومستضدات موجودة على الخلايا المناعية الأخرى مثل الخلايا اللمفية تي. وتستمد من وحيدات الضامة. حيدات تنشأ في نخاع العظم من الخلايا الجذعية النخاعي والهجرة إلى الدم الطرفية والأنسجة المختلفة حيث تفرق في الضامة. يقدر أن الفأر البالغين الأصحاء يحتوي على حوالي 10 8 الضامة التي يتم توزيعها في جميع أنحاء الجسم في مختلف الأجهزة والأنسجة (الجدول 1) 1،2. عرض الضامة المظهري كبيرة والتنوع الوظيفي بسبب قدرتها على التكيف مع 3،4 المكروية بهم. وmacrop أهمالملكية الحاج هو النشاط ميكروبات، والتي تم تعريفها بواسطة قدرتها على يبلعم الميكروبات وتدميرها. يتم تعريف استجابة أكلة من خلال تفعيل الشبكات الإشارات المعقدة التي تحفزها الاتصال الميكروبية، وبالتالي، الضامة تعدل التعبير الجيني بشكل مناسب في استجابة للمؤثرات متنوعة. بعد البلعمة، يتم القضاء على الميكروبات في بنية تسمى يحلول يبلوعي، ومع ذلك، وضعت العديد من الميكروبات المسببة للأمراض استراتيجيات لتخريب وظيفة ميكروبات الضامة 5. تنوع آليات التخريب التي يتم استخدامها من قبل الأنواع الميكروبية المختلفة هو دليل على تعقيد عملية البلعمة 6 و يحلول يبلوعي نشوء حيوي. الأمراض المعدية هي المشاكل الرئيسية صحة الإنسان، والعديد من الآليات والجزيئات المشاركة في الأنشطة المضادة للميكروبات البلاعم. وعلاوة على ذلك، فإن الأهداف من الخصائص ميكروبات التي يتم اختطافها من قبل الميكروبات لا تزال مجهولة، وبالتالي، هناك هxplosion من الاهتمام في الجوانب التطورية والجينية والبيوكيميائية والتفاعلات المضيف الممرض الذي تجدد الاهتمام العلمي فيما يتعلق الضامة. حاليا، يتم الغالبية العظمى من البحوث في هذا المجال على خطوط الخلايا الضامة، والتي تختلف من الضامة الأساسي في النشاط أكلة، وإنتاج السيتوكينات وتنظيم انفجار التأكسدي. بالإضافة إلى ذلك، فهي أقل ملاءمة للفحص المجهري. للتحقيق في التفاعل الضامة، مسببات الأمراض فمن المستحسن استخدام الضامة الأولية، مثل نخاع العظم الضامة المشتقة (BMDMs)، والتي تظهر المزيد من الميزات الفسيولوجية. وعلاوة على ذلك، فمن الممكن أن يعمل على BMDMs المعدلة وراثيا، وذلك لأن هذه الضامة قد تكون معزولة مباشرة من الفئران المعدلة وراثيا و، مع توافر تقنيات جديدة مثل ترنسفكأيشن lentiviral، ملفهم الشخصي التعبير الجيني يمكن تعديلها من قبل من overexpression الجينات أو تدخل الحمض النووي الريبي. هنا، نحن تصف الإجراء لتمييز العظام الفئران مسهم في الضامة التي من شأنها توفير أعداد كبيرة من الضامة في 7 أيام وظيفية لمختلف التحاليل مثل البروتينات 7، 8 transcriptomics، يدرس الاتجار داخل الخلايا 9، ودراسات ديناميكية 10، وشاشات جينية (رني) وفحص المخدرات 11.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Material/Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Gibco Life Technologies</td>
			<td>21969-035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Calf Serum</td>
			<td>Gibco Life Technologies</td>
			<td>10270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco Life Technologies</td>
			<td>15070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamine</td>
			<td>Gibco Life Technologies</td>
			<td>25030-024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (10x)</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BEM515F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red Blood Cell Lysis buffer</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R7757</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer 70 &#956;m Nylon</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer 40 &#956;m Nylon</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml tubes</td>
			<td>any supplier</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml tubes</td>
			<td>any supplier</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes (100/20 mm)</td>
			<td>any supplier</td>
			<td>n/a</td>
			<td>culture treated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes (35/10 mm)</td>
			<td>any supplier</td>
			<td>n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bone marrow-derived macrophage production

الضامة هي عناصر حاسمة من الاستجابات المناعية الفطرية والتكيفية، وأنها هي خط الدفاع الأول ضد الغزاة الأجانب بسبب أنشطة ميكروبات قوية بهم. وتوزع على نطاق واسع في جميع أنحاء الضامة في الجسم وموجودة في الأجهزة اللمفاوية والكبد والرئتين والجهاز الهضمي والجهاز العصبي المركزي، والعظام، والجلد. بسبب إعادة تقسيم، فإنها تشارك في مجموعة واسعة من العمليات الفسيولوجية والمرضية. الضامة هي خلايا تنوعا للغاية التي هي قادرة على الاعتراف التعديلات microenvironmental والحفاظ على توازن الأنسجة. وقد تطورت العديد من مسببات الأمراض آليات لاستخدام الضامة كما أحصنة طروادة من أجل البقاء، في تكرار، وتصيب كل من البشر والحيوانات وتنتشر في جميع أنحاء الجسم. الانفجار الأخير من الاهتمام في الجوانب التطورية والجينية والبيوكيميائية والتفاعلات المضيف الممرض جددت الاهتمام العلمي فيما يتعلق الضامة. هنا، نحن تصفالإجراء لعزل وزراعة نخاع العظم الضامة من الفئران من شأنها أن توفر أعداد كبيرة من الضامة لدراسة التفاعلات المضيف الممرض وكذلك العمليات الأخرى.

كان الهدف من هذه الطريقة للحصول بسهولة أعداد كبيرة من الضامة في الأيام القليلة القادمة. ويتضح إعداد خلية نخاع العظم في الشكل 1. تم جمع العظام من الساق الخلفية وحطموا في بمدافع الهاون. مرة واحدة تم إزالة الضامة المقيمين من إعداد خلية نخاع العظم، وحضنت خلايا نخ...

Watch this Scientific Journal Video about Bone Marrow-derived Macrophage Production at JoVE.com

Bone Marrow-derived Macrophage Production

منذ فترة طويلة معترف بها الضامة بوصفها عنصرا حيويا من الاستجابات المناعية الفطرية والتكيفية. الانفجار الأخير من المعرفة المتعلقة بالجوانب التطورية والجينية والبيوكيميائية والتفاعل بين الميكروبات الضامة وجددت الاهتمام العلمي لالضامة. توضح هذه المقالة طريقة للتمييز الضامة الماوس من نخاع العظام.

نخاع العظام المستمدة من بلعم الإنتاج

Macrophages are critical components of the innate and adaptive immune responses, and they are the first line of defense against foreign invaders because ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

التوكسوبلازما جدار الكيس الغوندية تشكيل المنشط تقوم البلاعم في نخاع العظام والمستمدة من الشروط المتباطئة

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite that can invade any nucleated cell of warm-blooded animals. During infection, T. gondii ...

Generation and Labeling of Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells with Qdot Nanocrystals for Tracking Studies

جيل ووسمها الفئران خلايا نخاع العظام المستمدة من البلورات النانوية مع شجيري Qdot تتبع للدراسات

Dendritic cells (DCs) are professional antigen presenting cells (APCs) found in peripheral tissues and in immunological organs such as thymus, bone ...

Investigation of Macrophage Polarization Using Bone Marrow Derived Macrophages

التحقيق في الاستقطاب البلاعم عن طريق نخاع العظم الضامة المشتقة

The article describes a readily easy adaptive in vitro model to investigate macrophage polarization. In the presence of GM-CSF/M-CSF, hematopoietic ...

Isolation and Intravenous Injection of Murine Bone Marrow Derived Monocytes

عزل وحقن في الوريد من الفئران نخاع العظام المستمدة حيدات

As a subtype of leukocytes and progenitors of macrophages, monocytes are involved in many important processes of organisms and are often the subject of ...

Metabolic Characterization of Polarized M1 and M2 Bone Marrow-derived Macrophages Using Real-time Extracellular Flux Analysis

توصيف الأيض من الاستقطاب M1 M2 الضامة والعظام نخاع المستمدة من طريق في الوقت الحقيقي التحليل خارج الخلية الجريان

Specific metabolic pathways are increasingly being recognized as critical hallmarks of macrophage subsets. While LPS-induced classically activated M1 or ...

Assessment of Antibody-based Drugs Effects on Murine Bone Marrow and Peritoneal Macrophage Activation

تقييم آثار المخدرات على أساس الأجسام المضادة على موريني نخاع العظام وتنشيط بلعم البريتوني

Macrophages are phagocytic innate immune cells, which initiate immune responses to pathogens and contribute to healing and tissue restitution. Macrophages ...

Detection of Inflammasome Activation and Pyroptotic Cell Death in Murine Bone Marrow-derived Macrophages

الكشف عن التنشيط إينفلاماسومي وموت الخلايا بيروبتوتيك في مورين الضامة المشتقة من نخاع العظام

Inflammasomes are innate immune signaling platforms that are required for the successful control of many pathogenic organisms, but also promote ...

An In Vivo Mouse Model to Measure Na&#239;ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells

نموذج ماوس في فيفو إلى تدبير السذاجة CD4 تي خلية التنشيط وانتشارها والتمايز Th1 الناجمة عن الخلايا الجذعية المشتقة من نخاع العظام

Quantification of na&#239;ve CD4 T cell activation, proliferation, and differentiation to T helper 1 (Th1) cells is a useful way to assess the role played ...

Isolation and In vitro Culture of Bone Marrow-Derived Macrophages for the Study of NO-Redox Biology

Isolation and In vitro Culture of Bone Marrow-Derived Macrophages for the Study of NO-Redox Biology

عزل البلاعم المشتقة من نخاع العظم واستزراعها في المختبر لدراسة بيولوجيا عدم الأكسدة والاختزال

Macrophages are derived from hematopoietic progenitor cells throughout the body, are central to inflammatory processes, and participate in innate and ...

Economical and Efficient Protocol for Isolating and Culturing Bone Marrow-derived Dendritic Cells from Mice

بروتوكول اقتصادي وفعال لعزل وزراعة الخلايا الشجيرية المشتقة من نخاع العظم من الفئران

The demand for dendritic cells (DCs) is gradually increasing as immunology research advances. However, DCs are rare in all tissues. The traditional method ...