Name: a novel light damage paradigm for use in retinal regeneration studies in adult zebrafish
Uploaded: 2013-10-24T15:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Novel Light Damage Paradigm for Use in Retinal Regeneration Studies in Adult Zebrafish at JoVE.com

Forfatterne ønsker å takke Xixia Luo for utmerket fisk dyrehold og teknisk støtte. Dette arbeidet ble finansiert av National Institutes of Health tilskudd R21EY019401 (RT) og P30EY04068 (RT), og oppstart midler til RT, inkludert et ubegrenset tilskudd fra forskning for å hindre blindhet til Wayne State University, Department of Ophthalmology. JT ble støttet av en Thomas C. Rumble Fellowship levert av Wayne State University Graduate School.

Alle prosedyrene som er beskrevet i denne protokollen ble godkjent av dyr bruk komiteen ved Wayne State University School of Medicine. En. Mørk Adaptation <ol><li> Transfer ~ 10 voksen albino eller pigmentert fisk fra normal bolig system inn i et mørkt skap. Hvis tilgjengelig, kan du bruke en mørk kabinett som er bygget inn i sebrafisk bolig modul, som gjør det mulig for normal vannføring gjennom tanken. (Hvis et slikt system ikke er tilgjengelig, legg fisken tank i et helt m...

Her viser vi at å kombinere en kort UV-eksponering med en kontinuerlig sterkt lys eksponering fører til utbredt fotoreseptoren tap og en robust regenerering respons. Sammenlignet med de enkelte LIRD metoder, er denne kombinerte metode også den mest effektive protokollen til å føre til skade både staver og tapper i begge halvdeler av netthinnen. Viktigere, er denne behandlingen effektiv i pigmenterte dyr samt albino dyr. Selv om vi dokumentere at de samlede protokollen gir mer ...

Lysindusert retinal degenerasjon (LIRD) er ofte brukt i både gnagere og sebrafisk til skade stang og kjegle fotoreseptorer. I voksen sebrafisk, utløser fotoreseptor degenerasjon Müller gliaceller å re-gå inn i cellen syklus og produsere transient-forsterke stamfedre. Disse stamfedre fortsette å spre seg som de vandrer til det skadede området, hvor de til slutt gi opphav til nye fotoreseptorer. For tiden er det to svært utbredte LIRD paradigmer, som hver resulterer i varierende grad av fotoreseptoren tap og tilsvarende forskjeller i regenerering respons. Som mer genetiske og farmakologiske verktøy er tilgjengelige for å teste rollen av individuelle gener av interesse under regenereringen, er det behov for å utvikle et robust LIRD paradigme. Her beskriver vi en LIRD protokoll som resulterer i omfattende og konsekvent tap av både stang og kjegle fotoreseptorer der vi har kombinert bruk av to tidligere etablerte LIRD teknikker. Videre, Kan denne protokollen bli utvidet til bruk i pigmenterte dyr, noe som eliminerer behovet for å opprettholde transgene linjer av interesse på albino bakgrunnen for LIRD studier.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="586">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">UV light source</td>
			<td style="width:215px;">Leica</td>
			<td style="width:155px;">EL600</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass Petri dish (150 x 20 mm)</td>
			<td>Sigma-Aldrich/Pyrex</td>
			<td>CLS3160152BO</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">250 ml glass beaker</td>
			<td>Sigma-Aldrich/Pyrex</td>
			<td>CLS1000250</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4 L glass beaker</td>
			<td>Sigma-Aldrich/Pyrex</td>
			<td>CLS10004L</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Aluminum foil</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>01-213-105</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">250 W halogen lamps</td>
			<td>Workforce</td>
			<td>265-669</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.8 L clear acrylic tanks</td>
			<td>Aquaneering</td>
			<td>ZT180T</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.8 L clear acrylic tank lids</td>
			<td>Aquaneering</td>
			<td>ZT180LCL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fan</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>HT-900</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Aerator</td>
			<td>Tetra</td>
			<td>77853-900</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thermometer</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>YO-08008-58</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bent forceps (5/45)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504155</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a novel light damage paradigm for use in retinal regeneration studies in adult zebrafish

Lysindusert retinal degenerasjon (LIRD) er ofte brukt i både gnagere og sebrafisk til skade stang og kjegle fotoreseptorer. I voksen sebrafisk, utløser fotoreseptor degenerasjon Müller gliaceller å re-gå inn i cellen syklus og produsere transient-forsterke stamfedre. Disse stamfedre fortsette å spre seg som de vandrer til det skadede området, hvor de til slutt gi opphav til nye fotoreseptorer. For tiden er det to svært utbredte LIRD paradigmer, som hver resulterer i varierende grad av fotoreseptoren tap og tilsvarende forskjeller i regenerering respons. Som mer genetiske og farmakologiske verktøy er tilgjengelige for å teste rollen av individuelle gener av interesse under regenereringen, er det behov for å utvikle et robust LIRD paradigme. Her beskriver vi en LIRD protokoll som resulterer i omfattende og konsekvent tap av både stang og kjegle fotoreseptorer der vi har kombinert bruk av to tidligere etablerte LIRD teknikker. Videre, Kan denne protokollen bli utvidet til bruk i pigmenterte dyr, noe som eliminerer behovet for å opprettholde transgene linjer av interesse på albino bakgrunnen for LIRD studier.

Den hittil beskrevet lysbehandling protokollen ble sammenlignet med hver enkelt metode for LIRD. I mørke-behandlede voksne albino dyr (figur 3-5), resulterte de enkelte lys behandlinger i betydelig tap av stang (figur 3) og konen (figur 4) fotoreseptorer. Imidlertid, både individuelle behandlinger primært skadet fotoreseptorer i dorsal halvdel av retina, og etterlater den ventrale netthinnen relativt beskyttet fra lys behandlinger (figurene 3</strong...

Watch this Scientific Journal Video about A Novel Light Damage Paradigm for Use in Retinal Regeneration Studies in Adult Zebrafish at JoVE.com

A Novel Light Damage Paradigm for Use in Retinal Regeneration Studies in Adult Zebrafish

Flere lette skader protokoller har blitt beskrevet å skade fotoreseptorer og dermed indusere en retinal regenerering respons i voksen sebrafisk. Denne protokollen beskriver en forbedret fremgangsmåte som kan brukes i pigmenterte dyr, og som skader det store flertallet av stang-og kjegle fotoreseptorer tvers av hele netthinnen.

A Novel Lett Skade Paradigm for bruk i Retinal Regeneration Studies in Adult sebrafisk

Light-induced retinal degeneration (LIRD) is commonly used in both rodents and zebrafish to damage rod and cone photoreceptors. In adult zebrafish, ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Recording and Analysis of Circadian Rhythms in Running-wheel Activity in Rodents

When rodents have free access to a running wheel in their home cage, voluntary use of this wheel will depend on the time of day1-5. Nocturnal rodents, ...

Retrograde Labeling of Retinal Ganglion Cells in Adult Zebrafish with Fluorescent Dyes

Retrograd Merking av retinal ganglion celler i voksen sebrafisk med fluorescerende fargestoffer

As retrograde labeling retinal ganglion cells (RGCs) can isolate RGCs somata from dying sites, it has become the gold standard for counting RGCs in RGCs ...

Stab Wound Injury of the Zebrafish Adult Telencephalon: A Method to Investigate Vertebrate Brain Neurogenesis and Regeneration

Stab Wound Skade av sebrafisk Adult Telencephalon: En metode for å etterforske Virveldyr Brain Neurogenesis and Regeneration

Adult zebrafish have an amazing capacity to regenerate their central nervous system after injury. To investigate the cellular response and the molecular ...

The Use of Trace Eyeblink Classical Conditioning to Assess Hippocampal Dysfunction in a Rat Model of Fetal Alcohol Spectrum Disorders

Bruk av spor Eyeblink klassisk betinging å vurdere hippocampus dysfunksjon i en rotte modell av Fetal Alcohol Spectrum Disorders

Neonatal rats were administered a relatively high concentration of ethyl alcohol (11.9% v/v) during postnatal days 4-9, a time when the fetal brain ...

Modeling Amyloid-&#946;42 Toxicity and Neurodegeneration in Adult Zebrafish Brain

Modellering Amyloid-β42 giftighet og Neurodegeneration i voksen sebrafisk hjernen

Alzheimer's disease (AD) is a debilitating neurodegenerative disease in which accumulation of toxic amyloid-&#946;42 (A&#946;42) peptides leads to ...

M&#252;ller Glia Cell Activation in a Laser-induced Retinal Degeneration and Regeneration Model in Zebrafish

Müller Glia celle aktivering i en Laser-indusert Retinal degenerasjon og Regeneration modell i sebrafisk

A fascinating difference between teleost and mammals is the lifelong potential of the teleost retina for retinal neurogenesis and regeneration after ...

Preparing Fresh Retinal Slices from Adult Zebrafish for Ex Vivo Imaging Experiments

Preparing Fresh Retinal Slices from Adult Zebrafish for Ex Vivo Imaging Experiments

Forberede frisk Retinal skiver fra voksne sebrafisk for Ex Vivo Imaging eksperimenter

The retina is a complex tissue that initiates and integrates the first steps of vision. Dysfunction of retinal cells is a hallmark of many blinding ...

Ablation of a Neuronal Population Using a Two-photon Laser and Its Assessment Using Calcium Imaging and Behavioral Recording in Zebrafish Larvae

Ablasjon av Neuronal innbyggere med en to-fotonet Laser og sin vurdering ved hjelp av kalsium Imaging og atferdsmessige opptak i sebrafisk larver

To identify the role of a subpopulation of neurons in behavior, it is essential to test the consequences of blocking its activity in living animals. Laser ...

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

Romanen In Vitro modell for Blast traumatisk hjerneskade

Traumatic brain injury is a leading cause of death and disability in military and civilian populations. Blast traumatic brain injury results from the ...

An Emerging Target Paradigm to Evoke Fast Visuomotor Responses on Human Upper Limb Muscles

En emerging target paradigme å fremkalle rask visuomotoriske svar på menneskelige øvre lem muskler

To reach towards a seen object, visual information has to be transformed into motor commands. Visual information such as the object&#8217;s color, shape, ...