Name: a novel light damage paradigm for use in retinal regeneration studies in adult zebrafish
Uploaded: 2013-10-24T15:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Novel Light Damage Paradigm for Use in Retinal Regeneration Studies in Adult Zebrafish at JoVE.com

Författarna vill tacka Xixia Luo för utmärkt fisk djurhållning och teknisk support. Detta arbete har finansierats av National Institutes of Health bidrag R21EY019401 (RT) och P30EY04068 (RT), och nystartade fonder till RT, inklusive en obegränsad bidrag från forskning att förebygga blindhet till Wayne State University, Department of Ophthalmology. JT fick stöd av ett Thomas C. Rumble Fellowship tillhandahålls av Wayne State University Graduate School.

Alla procedurer som beskrivs i detta protokoll godkändes av djuret användning kommittén vid Wayne State University School of Medicine. Ett. Mörkeranpassning <ol><li> Transfer ~ 10 vuxna albino eller pigmenterad fisk från den ordinarie bostadsmarknaden systemet i en mörk låda. Om tillgängligt, använd en mörk låda som är inbyggd i zebrafisk husmodulen, vilket möjliggör normal vattenflödet genom tanken. (Om ett sådant system inte är tillgängligt, placera akvariet i ...

Här visar vi att kombinera en kort UV-exponering med en kontinuerlig ljusa resultat ljusexponering i utbredd ljusmätare förlust och en robust förnyelse svar. Jämfört med de enskilda LIRD metoder, detta är kombinerad metod också det mest effektiva protokollet för att skada både stavar och koner i båda halvorna av näthinnan. Huvudsakligen är denna behandling effektivt pigmenterade djur samt albino djur. Även om vi bevisa att de kombinerade protokoll resulterar i mer omfa...

Ljusinducerad retinal degeneration (LIRD) används ofta i både gnagare och zebrafisk till skada spö och fotoreceptorer konen. I vuxen zebrafisk, utlöser ljusmätare degeneration Müller gliaceller att återinträda i cellcykeln och producera transient-förstärkande stamfäder. Dessa stamceller fortsätter att föröka sig när de flyttar till det skadade området, där de i slutändan ger upphov till nya fotoreceptorer. För närvarande finns det två utbredda LIRD paradigm, som var och en leder till olika grader av ljusmätare förlust och motsvarande skillnader i förnyelse svar. Som flera genetiska och farmakologiska verktyg är tillgängliga för att testa rollen av individuella gener av intresse under regenerering, finns det ett behov att utveckla en robust LIRD paradigm. Här beskriver vi en LIRD protokoll som resulterar i omfattande och konsekvent förlust av både tappar och stavar fotoreceptorer där vi har kombinerat användningen av två tidigare etablerade LIRD tekniker. Vidare, Kan detta protokoll förlängas för användning i pigmenterade djur, vilket eliminerar behovet av att upprätthålla transgena linjer av intresse på albino bakgrund för LIRD studier.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="586">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">UV light source</td>
			<td style="width:215px;">Leica</td>
			<td style="width:155px;">EL600</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass Petri dish (150 x 20 mm)</td>
			<td>Sigma-Aldrich/Pyrex</td>
			<td>CLS3160152BO</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">250 ml glass beaker</td>
			<td>Sigma-Aldrich/Pyrex</td>
			<td>CLS1000250</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4 L glass beaker</td>
			<td>Sigma-Aldrich/Pyrex</td>
			<td>CLS10004L</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Aluminum foil</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>01-213-105</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">250 W halogen lamps</td>
			<td>Workforce</td>
			<td>265-669</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.8 L clear acrylic tanks</td>
			<td>Aquaneering</td>
			<td>ZT180T</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.8 L clear acrylic tank lids</td>
			<td>Aquaneering</td>
			<td>ZT180LCL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fan</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>HT-900</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Aerator</td>
			<td>Tetra</td>
			<td>77853-900</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thermometer</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>YO-08008-58</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bent forceps (5/45)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504155</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a novel light damage paradigm for use in retinal regeneration studies in adult zebrafish

Ljusinducerad retinal degeneration (LIRD) används ofta i både gnagare och zebrafisk till skada spö och fotoreceptorer konen. I vuxen zebrafisk, utlöser ljusmätare degeneration Müller gliaceller att återinträda i cellcykeln och producera transient-förstärkande stamfäder. Dessa stamceller fortsätter att föröka sig när de flyttar till det skadade området, där de i slutändan ger upphov till nya fotoreceptorer. För närvarande finns det två utbredda LIRD paradigm, som var och en leder till olika grader av ljusmätare förlust och motsvarande skillnader i förnyelse svar. Som flera genetiska och farmakologiska verktyg är tillgängliga för att testa rollen av individuella gener av intresse under regenerering, finns det ett behov att utveckla en robust LIRD paradigm. Här beskriver vi en LIRD protokoll som resulterar i omfattande och konsekvent förlust av både tappar och stavar fotoreceptorer där vi har kombinerat användningen av två tidigare etablerade LIRD tekniker. Vidare, Kan detta protokoll förlängas för användning i pigmenterade djur, vilket eliminerar behovet av att upprätthålla transgena linjer av intresse på albino bakgrund för LIRD studier.

Den hittills beskrivna ljusbehandling protokoll jämfördes med varje enskild metod för LIRD. I mörker-behandlade vuxna albinodjur (fig 3-5), gav de enskilda ljusbehandlingar i betydande förlust av staven (Figur 3) och könen (Figur 4) fotoreceptorer. Men både individuella behandlingar skadade hand fotoreceptorer i den dorsala delen av näthinnan, lämnar den ventrala näthinnan relativt skyddat från ljus behandlingar (figur 3 och ...

Watch this Scientific Journal Video about A Novel Light Damage Paradigm for Use in Retinal Regeneration Studies in Adult Zebrafish at JoVE.com

A Novel Light Damage Paradigm for Use in Retinal Regeneration Studies in Adult Zebrafish

Flera ljusskada protokoll har beskrivits till skada fotoreceptorer och därmed framkalla en retinal regeneration svar i vuxen zebrafisk. Detta protokoll beskriver en förbättrad metod som kan användas i pigmenterade djur och som skadar den stora majoriteten av stav och fotoreceptorer kon över hela näthinnan.

A Novel ljusskada Paradigm för användning i Retinal Regeneration Studier i vuxna zebrafisk

Light-induced retinal degeneration (LIRD) is commonly used in both rodents and zebrafish to damage rod and cone photoreceptors. In adult zebrafish, ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Recording and Analysis of Circadian Rhythms in Running-wheel Activity in Rodents

Registrering och analys av dygnsrytmen i Running-wheel aktivitet hos gnagare

When rodents have free access to a running wheel in their home cage, voluntary use of this wheel will depend on the time of day1-5. Nocturnal rodents, ...

Retrograde Labeling of Retinal Ganglion Cells in Adult Zebrafish with Fluorescent Dyes

Retrograd Märkning av retinal ganglion celler i vuxna zebrafisk med fluorescerande färger

As retrograde labeling retinal ganglion cells (RGCs) can isolate RGCs somata from dying sites, it has become the gold standard for counting RGCs in RGCs ...

Stab Wound Injury of the Zebrafish Adult Telencephalon: A Method to Investigate Vertebrate Brain Neurogenesis and Regeneration

Sticksår ​​Skada i Zebrafish Adult telencefalon: En metod för att undersöka Vertebrate Brain Neurogenes och Regeneration

Adult zebrafish have an amazing capacity to regenerate their central nervous system after injury. To investigate the cellular response and the molecular ...

The Use of Trace Eyeblink Classical Conditioning to Assess Hippocampal Dysfunction in a Rat Model of Fetal Alcohol Spectrum Disorders

Användning av Trace Blink klassisk betingning att bedöma Hippocampus dysfunktion i en råtta modell av fetala alkoholeffekter spektrum

Neonatal rats were administered a relatively high concentration of ethyl alcohol (11.9% v/v) during postnatal days 4-9, a time when the fetal brain ...

Modeling Amyloid-&#946;42 Toxicity and Neurodegeneration in Adult Zebrafish Brain

Modeling Amyloid-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²42 Toxicity and Neurodegeneration in Adult Zebrafish Brain

Modellering Amyloid-β42 toxicitet och Neurodegeneration i vuxna zebrafiskar hjärnan

Alzheimer's disease (AD) is a debilitating neurodegenerative disease in which accumulation of toxic amyloid-&#946;42 (A&#946;42) peptides leads to ...

M&#252;ller Glia Cell Activation in a Laser-induced Retinal Degeneration and Regeneration Model in Zebrafish

MÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¼ller Glia Cell Activation in a Laser-induced Retinal Degeneration and Regeneration Model in Zebrafish

Müller Glia cellaktivering i en Laser-inducerad Retinal Degeneration och Regeneration modell i zebrafiskar

A fascinating difference between teleost and mammals is the lifelong potential of the teleost retina for retinal neurogenesis and regeneration after ...

Preparing Fresh Retinal Slices from Adult Zebrafish for Ex Vivo Imaging Experiments

Preparing Fresh Retinal Slices from Adult Zebrafish for Ex Vivo Imaging Experiments

Förbereda färska Retinal skivor från vuxna zebrafiskar för Ex Vivo Imaging experiment

The retina is a complex tissue that initiates and integrates the first steps of vision. Dysfunction of retinal cells is a hallmark of many blinding ...

Ablation of a Neuronal Population Using a Two-photon Laser and Its Assessment Using Calcium Imaging and Behavioral Recording in Zebrafish Larvae

Ablation av neuronala invånare använder en två-photon Laser och sin bedömning med kalcium Imaging och beteendemässiga inspelning i zebrafiskar larver

To identify the role of a subpopulation of neurons in behavior, it is essential to test the consequences of blocking its activity in living animals. Laser ...

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

En roman In Vitro modell av Blast traumatisk hjärnskada

Traumatic brain injury is a leading cause of death and disability in military and civilian populations. Blast traumatic brain injury results from the ...

An Emerging Target Paradigm to Evoke Fast Visuomotor Responses on Human Upper Limb Muscles

En framväxande Target Paradigm för att framkalla fast Visuomotor Svar på mänskliga övre extremiteten muskler

To reach towards a seen object, visual information has to be transformed into motor commands. Visual information such as the object&#8217;s color, shape, ...