Name: isolation of blood-vessel-derived multipotent precursors from human skeletal muscle
Uploaded: 2014-08-21T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Blood-vessel-derived Multipotent Precursors from Human Skeletal Muscle at JoVE.com

Forfatterne ønsker å takke Alison Logar for henne utmerket teknisk assistanse med flowcytometri. Dette arbeidet ble støttet med tilskudd fra Department of Defense (JH), Henry J. Mankin Velsignet Stol (JH), og departementet for utdanning og forskning av republikken Kasakhstan (AS). CWC ble støttet delvis av American Heart Association predoctoral fellesskap (11PRE7490001). M.Corselli ble støttet av California Institute for Regenerative Medicine trening stipend (TG2-01169).

1. muskelbiopsi Processing <ol><li> Bevar human skjelettmuskel biopsi på is i Dulbeccos Modified Eagle Medium (DMEM) supplert med 5% fetalt bovint serum (FBS) og 1% penicillin-streptomycin (P / S) under transport. </li><li> Etter mottak av muskelbiopsi, fjernes prøven fra transportbeholderen og vasker den to ganger i fosfat-bufret saltløsning (PBS) supplert med 2% antibiotisk-antimykotisk løsning (A / A) under sterile betingelser. </li><li> Fjern vedlagte fettvev og bindevev med steril saks og pinsett i DMEM suppl...

<ol>
	<li>Peault, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+and+Progenitor+Cells+in+Skeletal+Muscle+Development.">Stem and Progenitor Cells in Skeletal Muscle Development.</a> Maintenance, and Therapy. Mol Ther. 15, 867-877 (2007).</li><li>Toma, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+multipotent+adult+stem+cells+from+the+dermis+of+mammalian+skin.">Isolation of multipotent adult stem cells from the dermis of mammalian skin.</a> Nat Cell Biol. 3, 778-784 (2001).</li><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Adipose+Tissue+Is+a+Source+of+Multipotent+Stem+Cells.">Human Adipose Tissue Is a Source of Multipotent Stem Cells.</a> Mol. Biol. Cell. 13, 4279-4295 (2002).</li><li>Zimmerlin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+vascular+progenitors+in+adult+human+adipose+tissue.">Stromal vascular progenitors in adult human adipose tissue.</a> Cytometry. 77, 22-30 (2010).</li><li>Reyes, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+of+endothelial+progenitors+in+human+postnatal+bone+marrow.">Origin of endothelial progenitors in human postnatal bone marrow.</a> The Journal of Clinical Investigation. 109, 337-346 (2002).</li><li>Choi, Y., Ta, M., Atouf, F., Lumelsky, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+pancreas+generates+multipotent+stem+cells+and+pancreatic+and+nonpancreatic+progeny.">Adult pancreas generates multipotent stem cells and pancreatic and nonpancreatic progeny.</a> Stem Cells. 22, 1070-1084 (2004).</li><li>Zengin, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+wall+resident+progenitor+cells:+a+source+for+postnatal+vasculogenesis.">Vascular wall resident progenitor cells: a source for postnatal vasculogenesis.</a> Development. 133, 1543-1551 (2006).</li><li>Corselli, M., Chen, C. W., Crisan, M., Lazzari, L., Peault, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+ancestors+of+adult+multipotent+stem+cells.">Perivascular ancestors of adult multipotent stem cells.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 30, 1104-1109 (2010).</li><li>Ballas, C. B., Zielske, S. P., Gerson, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+bone+marrow+stem+cells+for+cell+and+gene+therapies:+Implications+for+greater+use.">Adult bone marrow stem cells for cell and gene therapies: Implications for greater use.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 85, 20-28 (2002).</li><li>Chen, C. -. W., Corselli, M., P&#233;ault, B., Huard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Blood-Vessel-Derived+Stem+Cells+for+Tissue+Repair+and+Regeneration.">Human Blood-Vessel-Derived Stem Cells for Tissue Repair and Regeneration.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. , 597439 (2012).</li><li>Zheng, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+identification+of+myogenic+endothelial+cells+in+human+skeletal+muscle.">Prospective identification of myogenic endothelial cells in human skeletal muscle.</a> Nat Biotech. 25, 1025-1034 (2007).</li><li>Okada, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myogenic+Endothelial+Cells+Purified+From+Human+Skeletal+Muscle+Improve+Cardiac+Function+After+Transplantation+Into+Infarcted+Myocardium.">Myogenic Endothelial Cells Purified From Human Skeletal Muscle Improve Cardiac Function After Transplantation Into Infarcted Myocardium.</a> Journal of the American College of Cardiology. 52, 1869-1880 (2008).</li><li>Crisan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Perivascular+Origin+for+Mesenchymal+Stem+Cells+in+Multiple+Human+Organs.">A Perivascular Origin for Mesenchymal Stem Cells in Multiple Human Organs.</a> Cell Stem Cell. 3, 301-313 (2008).</li><li>Park, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+Perivascular+Cells+for+Human+Muscle+Regeneration.">Placental Perivascular Cells for Human Muscle Regeneration.</a> Stem Cells and Development. 20, 451-463 (2011).</li><li>Dellavalle, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericytes+of+human+skeletal+muscle+are+myogenic+precursors+distinct+from+satellite+cells.">Pericytes of human skeletal muscle are myogenic precursors distinct from satellite cells.</a> Nat Cell Biol. 9, 255-267 (2007).</li><li>Dellavalle, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericytes+resident+in+postnatal+skeletal+muscle+differentiate+into+muscle+fibres+and+generate+satellite+cells.">Pericytes resident in postnatal skeletal muscle differentiate into muscle fibres and generate satellite cells.</a> Nat Commun. 2, 499 (2011).</li><li>Chen, C. -. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+pericytes+for+ischemic+heart+repair.">Human pericytes for ischemic heart repair.</a> STEM CELLS. 31 (2), 305-316 (2012).</li><li>Corselli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tunica+adventitia+of+human+arteries+and+veins+as+a+source+of+mesenchymal+stem+cells.">The tunica adventitia of human arteries and veins as a source of mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells and Development. 21, 1299-1308 (2012).</li><li>Campagnolo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Adult+Vena+Saphena+Contains+Perivascular+Progenitor+Cells+Endowed+With+Clonogenic+and+Proangiogenic+Potential.">Human Adult Vena Saphena Contains Perivascular Progenitor Cells Endowed With Clonogenic and Proangiogenic Potential.</a> Circulation. 121, 1735-1745 (2010).</li><li>Katare, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+Human+Pericyte+Progenitor+Cells+Improves+the+Repair+of+Infarcted+Heart+Through+Activation+of+an+Angiogenic+Program+Involving+Micro-RNA-132+/+Novelty+and+Significance.">Transplantation of Human Pericyte Progenitor Cells Improves the Repair of Infarcted Heart Through Activation of an Angiogenic Program Involving Micro-RNA-132 / Novelty and Significance.</a> Circulation Research. 109, 894-906 (2011).</li><li>Zheng, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+myogenic+endothelial+cells+exhibit+chondrogenic+and+osteogenic+potentials+at+the+clonal+level.">Human myogenic endothelial cells exhibit chondrogenic and osteogenic potentials at the clonal level.</a> Journal of Orthopaedic Research. 31, 1089-1095 (2013).</li><li>Caplan, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=All+MSCs+Are+Pericytes.">All MSCs Are Pericytes.</a> Cell Stem Cell. 3, 229-230 (2008).</li><li>Feng, J., Mantesso, A., Sharpe, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+cells+as+mesenchymal+stem+cells.">Perivascular cells as mesenchymal stem cells.</a> Expert Opinion on Biological Therapy. 10, 1441-1451 (2010).</li><li>Tang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White+Fat+Progenitor+Cells+Reside+in+the+Adipose+Vasculature.">White Fat Progenitor Cells Reside in the Adipose Vasculature.</a> Science. 322, 583-586 (2008).</li><li>Krautler, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicular+Dendritic+Cells+Emerge+from+Ubiquitous+Perivascular+Precursors.">Follicular Dendritic Cells Emerge from Ubiquitous Perivascular Precursors.</a> Cell. 150, 194-206 (2012).</li><li>Phinney, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+heterogeneity+of+mesenchymal+stem+cells:+Implications+for+cell+therapy.">Functional heterogeneity of mesenchymal stem cells: Implications for cell therapy.</a> Journal of Cellular Biochemistry.113. 113, 2806-2812 (2012).</li><li>Chen, C. -. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+multi-lineage+progenitor+cells+in+human+organs:+Regenerative+units,+cytokine+sources+or+both.">Perivascular multi-lineage progenitor cells in human organs: Regenerative units, cytokine sources or both.</a> Cytokine and Growth Factor Reviews. 20, 429-434 (2009).</li><li>Lin, C. -. S., Lue, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+Vascular+Stem+Cells.">Defining Vascular Stem Cells.</a> Stem Cells Dev. 22, 1018-1026 (2013).</li><li>Tang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+multipotent+vascular+stem+cells+contributes+to+vascular+diseases.">Differentiation of multipotent vascular stem cells contributes to vascular diseases.</a> Nat Commun. 3, 875 (2012).</li><li>Zheng, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+myogenic+stem+cells+from+cultures+of+cryopreserved+human+skeletal+muscle.">Isolation of myogenic stem cells from cultures of cryopreserved human skeletal muscle.</a> Cell Transplant. 21, 1087-1093 (2012).</li></ol>

Identifisering og rensing av hBVSC subpopulasjoner representerer et stort fremskritt i forståelsen av MSC ontogenetiske. Det er økende bevis som indikerer perivaskulær opprinnelsen til MSC og foreningen mellom vevsspesifikke forløper celler og blodkar 22-25. I tillegg til evnen til å isolere homogene subpopulasjoner av hBVSCs ytterligere hjelpemidler forståelsen av MSC heterogenitet og vaskulær cellebiologi 26. I de siste årene har mecs, PC og ACs individuelt er...

Menneskelige skjelettmuskulatur har blitt betraktet som en klinisk attraktiv kilde til stammen / stamceller. Skjelettmuskulatur inneholder ikke bare forpliktet myogeniske stamceller, skjelett myoblaster, men også primitive myogeniske stamceller, inkludert satellittceller og muskel-avledet stamceller (MDSCs) en. Bruken av menneskelige muskel-avledet stilk / stamceller, autolog eller allogen, i regenerativ medisin har blitt grundig undersøkt i prekliniske dyremodeller og kliniske studier. De regenerative anvendelser av muskel stammen / stamceller spenner fra regenerere dystrofe muskel i Duchenne muskeldystrofi (DMD) pasienter til å reparere den skadde hjertet hos pasienter med hjerteinfarkt. Siden oppdagelsen av mesenchymale stamceller / stromale celler (MSC) og andre multipotente forløper cellepopulasjoner, inkludert benmarg-avledet voksen multipotente stamceller (MAPCs) og adipose-avledede stamceller (ADSCs), voksen stilk /stamceller har blitt grundig undersøkt hittil 1-9. Likevel har sitt eget identitet og lokalisering in situ blitt skjult av den retrospektive isolasjonsmetoder. Nylig, ved hjelp av fluorescens-aktivert celle sortering (FACS), vi og andre grupper har prospektivt identifisert og renset tre multipotente forløper cellepopulasjoner fra blodårene i menneskelig skjelettmuskulatur og flere andre organer: myogeniske endotelceller (mecs), pericytes (PCer), og adventitial celler (ACS) 10. Disse tre subpopulasjoner av humane blodårer avledet stamceller (hBVSCs) kan henholdsvis funnet i de tre strukturelle lag av blodkar: tunica intima, tunica media, og tunica adventitia. Mer spesifikt, mecs og PCer blir oppdaget i microvessels og kapillærer mens ACs er lokalisert i adventitia lag med større arterier og vener. Hver forløper celle undergruppe uttrykker en unik kombinasjon av celleoverflateantigener: mecs (CD34 + / 56 + / 144 + / 45 -), PCer (CD146 + / 34 - / 45 - / 56 -), og ACs (CD34 + / 31 - / 45 - / 56 - / 146 -). Ytterligere karakterisering av disse hBVSC undergrupper viste at alle tre forløper cellepopulasjoner har mesodermal utviklingspotensialer som ligner på typiske MSC, inkludert skjelett myogenese, osteogenesis, chondrogenesis, og adipogenese. Alle hBVSC undergrupper også vise klassiske MSC markører, inkludert CD44, CD73, CD90, og CD105, fersk og i kulturen. Kollektivt disse bevisene støttet vaskulær opprinnelse MSC. Dessuten har de terapeutiske kapasiteter på mecs, PC og ACs nylig blitt vist i separate studier. Mecs sortert fra voksent menneske muskelbiopsi ble vist å regenerere skadde og dystrofe skjelettlidelser muskler og reparere skadet myokard mer effektivt enn skjelett myoblaster og vaskulær endothelial celler (ECS). Purified PCer fra forskjellige organer har også vist seg å reparere / regenerere skadde og dystrofe skjelettmuskulatur og bidra til satellitten celle pool 13-16. Helt nylig har vi vist at PCer avledet fra humant skjelettmuskulatur effektivt reparere infarkt myokardium gjennom indirekte parakrint effekt og direkte cellulære interaksjoner 17. ACS, på den annen side, har vært enten direkte isolert fra eksplanterte blodkar eller renset ved FACS humant fettvev og skjelettmuskel. Et bemerkelsesverdig pro-angiogenic effekten av ACs ble demonstrert i en mus hind-lem iskemi modell 19. Videre har ACs også vist seg å reparere infarkt myokardium mer effektivt enn konvensjonelle MSC, noe som indikerer den robuste terapeutiske potensialet av ACS i ischemisk vev reparasjon 20.. De nåværende rensing protokoll tilskudd samtidige, prospektiv rensing av MECS, PCer, ogACs fra vaskulaturen av en enkelt menneskeskjelettmuskel biopsi. Dette gir oss muligheten til å studere og / eller velge den optimale hBVSC undergruppe for forskjellige terapeutiske formål. I tillegg gir denne nye teknikken ytterligere utvider repertoaret av stilk / stamceller som kan utledes fra humant skjelettmuskulatur, noe som gjør det en ideell kilde til multipotente forløper celler for regenerativ medisin.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="697">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Collagenase Type 1</td>
			<td style="width:99px;">Sigma</td>
			<td style="width:148px;">C5894</td>
			<td style="width:193px;">Sterile vial</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Collagenase Type 2</td>
			<td style="width:99px;">Sigma</td>
			<td style="width:148px;">C1764</td>
			<td style="width:193px;">Sterile vial</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Collagenase Type 4</td>
			<td style="width:99px;">Sigma</td>
			<td style="width:148px;">C1889</td>
			<td style="width:193px;">Sterile vial</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Anti-human CD34 APC</td>
			<td style="width:99px;">BD Pharmingen</td>
			<td style="width:148px;">555824</td>
			<td style="width:193px;">Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Anti-human CD45 APC-Cy7</td>
			<td style="width:99px;">BD Pharmingen</td>
			<td style="width:148px;">557833</td>
			<td style="width:193px;">Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Anti-human CD56 PE-Cy7</td>
			<td style="width:99px;">BD Pharmingen&#160;</td>
			<td style="width:148px;">557747</td>
			<td style="width:193px;">Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Anti-human CD144 PE</td>
			<td style="width:99px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:148px;">A07481</td>
			<td style="width:193px;">Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Anti-human CD146 FITC</td>
			<td style="width:99px;">AbD Serotec</td>
			<td style="width:148px;">MCA2141F</td>
			<td style="width:193px;">Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">FACSAria II Flow Cytometer</td>
			<td style="width:99px;">Becton-Dickinson</td>
			<td style="width:148px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">EGM-2 Complete Medium</td>
			<td style="width:99px;">Lonza</td>
			<td style="width:148px;">CC-3162</td>
			<td style="width:193px;">For culturing PCs (only P0)</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:257px;">DMEM high glucose (1X), liquid, with L-glutamine, without sodium pyruvate</td>
			<td style="width:99px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:148px;">11965</td>
			<td style="width:193px;">For culturing PCs</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">DMEM high glucose (1X), liquid, with L-glutamine, with sodium pyruvate</td>
			<td style="width:99px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:148px;">11995</td>
			<td style="width:193px;">For culturing MECs and ACs</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:99px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:148px;">10437-028</td>
			<td style="width:193px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Heat-inactivated horse serum</td>
			<td style="width:99px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:148px;">26050-088</td>
			<td style="width:193px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:99px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:148px;">15140-122</td>
			<td style="width:193px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Antibiotic-Antimycotic (100X)</td>
			<td style="width:99px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:148px;">15240-062</td>
			<td style="width:193px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Trypsin-EDTA 0.5%(10X)</td>
			<td style="width:99px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:148px;">15400-054</td>
			<td style="width:193px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Dulbecco&#8217;s PBS without calcium and magnesium</td>
			<td style="width:99px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:148px;">14190-250</td>
			<td style="width:193px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Chick embryo extract</td>
			<td style="width:99px;">Accurate Chemical</td>
			<td style="width:148px;">CE650T-10</td>
			<td style="width:193px;">Filter before use</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of blood-vessel-derived multipotent precursors from human skeletal muscle

Siden oppdagelsen av mesenchymale stamceller / stromale celler (MSC), har den opprinnelige identitet og lokalisering av MSC blitt skjult av sin retrospektive isolasjon i kultur. Nylig, ved hjelp av fluorescens-aktivert cellesortering (FACS), vi og andre forskere prospektivt identifisert og renset tre subpopulasjoner av multipotente forløper celler knyttet til vaskulaturen i menneskeskjelettmuskel. Disse tre cellepopulasjoner: myogeniske endotelceller (mecs), pericytes (PCer), og adventitial celler (ACS), er lokalisert henholdsvis til de tre strukturelle lag av blodkar: intima, media og adventitia. Alle disse menneskeblod-fartøy-avledet stamcelle (hBVSC) bestander ikke bare uttrykke klassiske MSC markører, men også ha mesodermal utviklingspotensialer som ligner på typiske MSC. Tidligere har mecs, PC og ACs vært isolert gjennom forskjellige protokoller og senere karakterisert ved separate studier. Den nåværende isolasjon protocol, gjennom endringer i isolasjon prosessen og justeringer i de selektive markører celleoverflaten, gjør at vi kan samtidig rense alle tre hBVSC subpopulasjoner av FACS fra en enkelt menneskelig muskelbiopsi. Denne nye metoden vil ikke bare effektivisere isolering av flere BVSC subpopulasjoner, men også legge til rette for fremtidige kliniske anvendelser av hBVSCs for ulike terapeutiske formål.

FACS parametere er først rettet basert på data innhentet fra unstained kontroll, negative kontroller, og ensfargede positive kontroller. Etter utelukkelse av døde celler, er fluorescens-merkede cellesuspensjonen utsettes for en serie av negative og positive celleoverflatemarkørvalg. Først, blir CD45 + celler gated ut før CD56 + og CD56 - celler separeres fra CD45 - fraksjonen. De CD56 + fraksjonen blir ytterligere utsatt for CD34-CD144 utvalg der bare CD34 <su...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Blood-vessel-derived Multipotent Precursors from Human Skeletal Muscle at JoVE.com

Isolation of Blood-vessel-derived Multipotent Precursors from Human Skeletal Muscle

Blodårene i menneskelige skjelettmuskulatur havne flere multi-avstamning forløper populasjoner som er ideelle for regenerativ applikasjoner. Denne isolasjonsmetoden tillater samtidig rensing av tre multipotente forløper cellepopulasjoner henholdsvis fra tre strukturelle lag av blodkar: myogeniske endotelceller fra intima, pericytes fra media, og adventitial celler fra adventitia.

Isolering av Blood-fartøy-avledet multipotent Forstadier fra Menneskelig Skeletal Muscle

Since the discovery of mesenchymal stem/stromal cells (MSCs), the native identity and localization&#160;of MSCs have been obscured by their retrospective ...

Research

JoVE Journal

Biology

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant ...

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Mitochondrial Isolation from Skeletal Muscle

Mitochondria are organelles controlling the life and death of the cell. They participate in key metabolic reactions, synthesize most of the ATP, and ...

Purification of Progenitors from Skeletal Muscle

Skeletal muscle contains multiple progenitor populations of distinct embryonic origins and developmental potential. Myogenic progenitors, usually residing ...

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

Isolasjon og kultur av individuelle myofibers og deres satellitt celler fra voksne Skeletal Muscle

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Tissue Triage and Freezing for Models of Skeletal Muscle Disease

Tissue Triage og Frysing av modeller av Skeletal Muscle Disease

Skeletal muscle is a unique tissue because of its structure and function, which requires specific protocols for tissue collection to obtain optimal ...

Isolation of Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High Throughput Microplate Respiratory Measurements

Isolering av Mitokondrier fra minimale mengder av Mouse Skeletal Muscle for høy gjennomstrømming Micro respirasjonsmålinger

Dysfunctional skeletal muscle mitochondria play a role in altered metabolism observed with aging, obesity and Type II diabetes. Mitochondrial ...

Isolation of Intact Mitochondria from Skeletal Muscle by Differential Centrifugation for High-resolution Respirometry Measurements

Isolering av Intakt Mitokondrier fra Skeletal Muscle av differensialsentrifugering for høy oppløsning respirometri Målinger

Mitochondria are involved in cellular energy metabolism and use oxygen to produce energy in the form of adenosine triphosphate (ATP). Differential ...

Isolation, Purification, and Differentiation of Osteoclast Precursors from Rat Bone Marrow

Isolasjon, rensing, og differensiering av Osteoclast forløpere fra Rat Bone marg

Osteoclasts are large, multinucleated, and bone-resorbing cells of the monocyte-macrophage lineage that are formed by the fusion of monocytes or ...

Isolation and Characterization of Exosomes from Skeletal Muscle Fibroblasts

Isolering og karakterisering av eksosomer fra skjelettmuskulaturfibroblaster

Exosomes are small extracellular vesicles released by virtually all cells and secreted in all biological fluids. Many methods have been developed for the ...