Name: capsular serotyping of streptococcus pneumoniae using the quellung reaction
Uploaded: 2014-02-24T15:50:00
Duration: 4 min 25 s
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Diese Arbeit wurde von der Bill-und-Melinda-Gates-Stiftung (PneuCarriage Projekt, Grant 52099) und operativen Infrastruktur-Support-Programm der Regierung von Victoria unterstützt. Dank Eileen Dunne, Janet Strachan, und Kim Hasen für die kritische Durchsicht des Manuskripts.

1. Herstellung von Zellsuspension Typing <ol><li> Mit einer sterilen Einweg-1 ul-Schleife, einen kleinen Schwung der frischen Übernachtreinkultur von Pneumokokken auf festen nichtselektiven Pferdeblut-Agar und impfen 100 ul Heart Infusion (HALLO) Brühe. Die Suspension sollte zu sein scheinen nur sichtbar trüb. Rühren Sie vorsichtig das Rohr zu emulgieren. Hinweis: Andere Medien, wie Hirn-Herz-Infusionsbrühe kann ebenfalls geeignet sein. Zugabe von Serum (z. B. eine Endkonzentration von 10% (v / v) Pferdeserum) und Inkubation bei 37 ° C für ungefähr 1 Stunde vor der Verwendung verwendet werden, um die Reaktion zu verbessern. </li></ol> 2. Überprüfen Dichte der Zellsuspension Die Zellsuspension in Schritt 1.1 hergestellten auch als negative Kontrolle verwendet werden, und sollte für die Zelldichte überprüft werden, bevor die Eingabe Seren. <ol><li> Mit einem 1 ul Schleife übertragen einen Tropfen des Inokulums in Schritt 1.1 vorbereitet auf ein Glass Objektträger. </li><li> Mit einer Pinzette, legen Sie einen kleinen kreisförmigen Deckglas auf der Suspension. </li><li> Mit Phasenkontrasteinstellung, beobachten die Vorbereitung mikroskopisch unter 400-facher Vergrößerung, um die Dichte der Suspension (Abbildung 1A) zu überprüfen. <ol><li> Wenn der Impfstoff ist zu schwer (2A), fügen Sie mehr Brühe zu der Zellsuspension in Schritt 1.1 zu verdünnen gemacht. Vorsichtig wieder mischen. </li><li> Wenn das Inokulum zu gering ist, gibt es beispielsweise bei &lt;50 Zellen sichtbar im mikroskopischen Bereich (2B), fügen mehr Bakterien zur Herstellung der Zellsuspension in Schritt 1.1 hergestellt und vorsichtig mischen. Hinweis: Mit der Erfahrung kann die Dichte der Zellsuspension durch Schütteln und hält sie gegen das Licht, wo es zu sein scheinen nur sichtbar trübe beurteilt werden. </li></ol></li><li> Wiederholen Sie die Schritte 2.1-2.3, bis eine geeignete Anzahl von Zellen in der mikroskopischen Feld sichtbar sind. Hinweis: Glasdias und coverslips präsentieren eine scharfe Gegenstände Gefahr. Nach Gebrauch werden die Objektträger und Deckgläser mit infektiösem Material kontaminiert und muss in ein Biohazard scharfen Container entsorgt werden. </li></ol> 3. Typing <ol><li> Übertragen ~ 1 ul der vorbereiteten Inokulums (zB mit einem 1 ul-Schleife) auf die Glasobjektträger. Entsorgen Sie die Schleife in den Biohazard-Behälter für scharfe Gegenstände. </li><li> Gleiches Volumen (1 ul Öse) von Raumtemperatur-Antiserum auf den Objektträger und mischen beide fällt auch mit der Schleife. </li><li> Mit einer Pinzette, legen Sie einen kleinen kreisförmigen Deckglas auf die Suspension, kümmert das Drop nicht zu berühren. Platzieren des Deckglases auf die Suspension unmittelbar nach der Zugabe von Antiseren, um die Flüssigkeit auf der Folie vor dem Austrocknen zu verhindern. </li><li> Unter dem Mikroskop beobachten die Suspension unter Phasenkontrast mit 400-facher Vergrößerung. Eine negative Reaktion Quellung beobachtet wird, wenn wenig oder kein &quot;Schwellung&quot; der Pneumokokken-Zellen bei 40 gesehen werden0X Vergrößerung, ähnlich dem, was in der Pneumokokken-Zellsuspension ohne Antiseren beobachtet hinzugefügt (Negativkontrolle). Eine positive Reaktion Quellung wird beobachtet, wenn die Zellen im Vergleich zu den Zellen in der Negativkontrolle erscheint vergrößert oder &quot;geschwollen&quot; und mehr sichtbar. Hinweis: Nicht eindeutige Reaktionen sollten durch Untersuchen der Reaktion nach 5-10 min Inkubation bei Raumtemperatur, oder durch Wiederholen der Reaktion mit Antiserum, weiter untersucht werden, zum Beispiel. </li><li> Führen Pneumokokken Serotypisierung mit aufeinanderfolgenden Prüfung der einzelnen Antiseren Pools, bis eine positive Reaktion beobachtet. Alternativ können Pools in Abhängigkeit von lokalen Auftreten von Serotypen &quot;Runden&quot; angewendet werden. Hinweis: Die Prüfung in &quot;Runden&quot; sorgt dafür, dass die Pools mit Antikörpern gegen die häufigsten Serotypen werden zunächst getestet, minimiert Aufwand und Kosten. Gleichzeitige Prüfung von mehreren Pools bietet auch zusätzliche Negativkontrollen, die in interp nützlich sein kann,retation. Wenn alle Pools in einem bestimmten &quot;runde&quot; negativ sind, testen Sie das Isolat mit folgenden Runden der Schwimmbäder. </li><li> Testen Sie das Isolat mit der entsprechenden Muster-oder Gruppenantiserum innerhalb des reaktiven Pool enthalten. Verwenden Sie gegebenenfalls Faktor Antiseren gegen den Serotyp weiter zu differenzieren. Hinweis: Schlüssel zur Pneumokokken-Antiserum vom Hersteller geliefert werden, bei der Auswahl der entsprechenden Pool, Typ, Gruppe oder Faktor Antiseren und Interpretation der Ergebnisse (einschließlich Kreuzreaktionen) eingesetzt. </li><li> Wenn negative Ergebnisse werden mit allen Pools erhalten, testen Sie die Isolat mit Omniserum Reagenz (enthält Antikörper gegen 91 Serotypen 21). Wenn eine positive Reaktion Quellung noch nicht beobachtet, wenn die Prüfung ein Pneumokokken-Isolat mit der Omniserum Reagenz kann dies daran liegen, das Isolat exprimieren geringe oder keine Kapsel oder dass Antikörper gegen die Serotypen sind nicht im Omniserum dargestellt. Die letztere Kategorie können neue Serotypen enthalten. </li> &lt;/ Ol&gt;

<ol>
	<li>O'Brien, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burden+of+disease+caused+by+Streptococcus+pneumoniae+in+children+younger+than+5+years:+global+estimates.">Burden of disease caused by Streptococcus pneumoniae in children younger than 5 years: global estimates.</a> Lancet. 374, 893-902 (2009).</li><li>Bogaert, D., De Groot, R., Hermans, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Streptococcus+pneumoniae+colonisation:+the+key+to+pneumococcal+disease.">Streptococcus pneumoniae colonisation: the key to pneumococcal disease.</a> Lancet Infect. Dis. 4, 144-154 (2004).</li><li>Henrichsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Six+newly+recognized+types+of+Streptococcus+pneumoniae.">Six newly recognized types of Streptococcus pneumoniae.</a> J. Clin. Microbiol. 33, 2759-2762 (1995).</li><li>Calix, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical,+genetic,+and+serological+characterization+of+two+capsule+subtypes+among+Streptococcus+pneumoniae+Serotype+20+strains:+discovery+of+a+new+pneumococcal+serotype.">Biochemical, genetic, and serological characterization of two capsule subtypes among Streptococcus pneumoniae Serotype 20 strains: discovery of a new pneumococcal serotype.</a> J. Biol. Chem. 287, 27885-27894 (2012).</li><li>Hausdorff, W. P., Bryant, J., Paradiso, P. R., Siber, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Which+pneumococcal+serogroups+cause+the+most+invasive+disease:+implications+for+conjugate+vaccine+formulation+and+use,+part+I.">Which pneumococcal serogroups cause the most invasive disease: implications for conjugate vaccine formulation and use, part I.</a> Clin. Infect. Dis. 30, 100-121 (2000).</li><li>Johnson, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+evaluation+of+serotypes+causing+invasive+pneumococcal+disease+among+children+under+five:+the+pneumococcal+global+serotype+project.">Systematic evaluation of serotypes causing invasive pneumococcal disease among children under five: the pneumococcal global serotype project.</a> PLoS Med. 8, (2010).</li><li>Weinberger, D. M., Malley, R., Lipsitch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotype+replacement+in+disease+after+pneumococcal+vaccination.">Serotype replacement in disease after pneumococcal vaccination.</a> Lancet. 378, 1962-1973 (2011).</li><li>Obaro, S. K., Adegbola, R. A., Banya, W. A., Greenwood, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carriage+of+pneumococci+after+pneumococcal+vaccination.">Carriage of pneumococci after pneumococcal vaccination.</a> Lancet. 348, 271-272 (1996).</li><li>Mulholland, K., Satzke, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotype+replacement+after+pneumococcal+vaccination.">Serotype replacement after pneumococcal vaccination.</a> Lancet. 379, 1388-1389 (2012).</li><li>Austrian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+quellung+reaction,+a+neglected+microbiologic+technique.">The quellung reaction, a neglected microbiologic technique.</a> Mt. Sinai. J. Med. 43, 699-709 (1976).</li><li>Konradsen, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+serotyping+of+Streptococcus+pneumoniae+in+Europe.">Validation of serotyping of Streptococcus pneumoniae in Europe.</a> Vaccine. 23, 1368-1373 (2005).</li><li>Lovgren, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+an+international+external+quality+assurance+model+to+support+laboratory+investigation+of+Streptococcus+pneumoniae,+developed+for+the+SIREVA+project+in+Latin+America,+from.">Evolution of an international external quality assurance model to support laboratory investigation of Streptococcus pneumoniae, developed for the SIREVA project in Latin America, from.</a> J. Clin. Microbiol. 45, 3184-3190 (2007).</li><li>Reasonover, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+International+Circumpolar+Surveillance+interlaboratory+quality+control+program+for+Streptococcus+pneumoniae.">The International Circumpolar Surveillance interlaboratory quality control program for Streptococcus pneumoniae.</a> J. Clin. Microbiol. 49, 138-143 (2011).</li><li>Hare, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=#34;Dodgy+6As&amp;#34;:+differentiating+pneumococcal+serotype+6C+from+6A+by+use+of+the+Quellung+reaction.">#34;Dodgy 6As&amp;#34;: differentiating pneumococcal serotype 6C from 6A by use of the Quellung reaction.</a> J. Clin. Microbiol. 47, 1981-1982 (2009).</li><li>Kong, F., Gilbert, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+cpsA-cpsB+sequence+polymorphisms+and+serotype-/group-specific+PCR+to+predict+51+Streptococcus+pneumoniae+capsular+serotypes.">Using cpsA-cpsB sequence polymorphisms and serotype-/group-specific PCR to predict 51 Streptococcus pneumoniae capsular serotypes.</a> J. Med. Microbiol. 52, 1047-1058 (2003).</li><li>Castillo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+Streptococcus+pneumoniae.">Identification and characterization of Streptococcus pneumoniae.</a> Laboratory Methods for the Diagnosis of Meningitis caused by Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, and Haemophilus influenzae. 2nd ed. , 73-86 (2011).</li><li>Kaijalainen, T., Rintamaki, S., Herva, E., Leinonen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+gene-technological+and+conventional+methods+in+the+identification+of+Streptococcus+pneumoniae.">Evaluation of gene-technological and conventional methods in the identification of Streptococcus pneumoniae.</a> J. Microbiol. Methods. 51, 111-118 (2002).</li><li>Sorensen, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Typing+of+pneumococci+by+using+12+pooled+antisera.">Typing of pneumococci by using 12 pooled antisera.</a> J. Clin. Microbiol. 31, 2097-2100 (1993).</li><li>Diagnostica SSI, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Key+to+pneumococcal+factor+antisera.">Key to pneumococcal factor antisera.</a> , (2013).</li><li>Diagnostica SSI, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pneumococcal+antisera+for+in+vitro+diagnostic+use.">Pneumococcal antisera for in vitro diagnostic use.</a> , (2011).</li><li>Lund, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+diagnosis+of+Pneumococcus+infections.">Laboratory diagnosis of Pneumococcus infections.</a> Bull. World Health Organ. 23, 5-13 (1960).</li><li>Satzke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standard+method+for+detecting+upper+respiratory+carriage+of+Streptococcus+pneumoniae:+Updated+recommendations+from+the+World+Health+Organization+Pneumococcal+Carriage+Working+Group.">Standard method for detecting upper respiratory carriage of Streptococcus pneumoniae: Updated recommendations from the World Health Organization Pneumococcal Carriage Working Group.</a> Vaccine. 32, 165-179 (2013).</li><li>Vernet, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory-based+diagnosis+of+pneumococcal+pneumonia:+state+of+the+art+and+unmet+needs.">Laboratory-based diagnosis of pneumococcal pneumonia: state of the art and unmet needs.</a> Clin. Microbiol. Infect. 17, 1-13 (2011).</li><li>Casewell, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experiences+in+the+use+of+commercial+antisera+for+the+capsular+typing+of+klebsiella+species.">Experiences in the use of commercial antisera for the capsular typing of klebsiella species.</a> J. Clin. Pathol. 25, 734-737 (1972).</li></ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Ein kritischer Schritt in diesem Verfahren ist eine reine Kultur sicherzustellen, wird die Suspension zusammen mit dem Hinzufügen einer geeigneten Anzahl von Bakterienzellen, in die Brühe herzustellen. Es sei darauf hingewiesen, dass das Wachstum und Koloniemorphologie auf Agarplatten variiert zwischen verschiedenen Pneumokokken-Isolaten werden. Einige produzieren trockene und raue Kolonien, die schwierig sein kann, zu holen mit einer Schleife und nicht gut in der Brühe zu emulgieren. Aus diesem Grund kann eine größere Schleife der Bakterien benötigt werden bei der Herstellung der Zellsuspension. In jedem Fall ist es unerlässlich, dass die einzelnen Zellen und keine Aggregate sind in der Negativkontrolle offensichtlich so ihre relative Größe der Zellen mit Antiseren verglichen werden zugegeben. Zusätzlich können zu viele Bakterienzellen in einem falsch-negativen Reaktion, in dem ein Überschuss von Kapsel-Antigen kann die Quellung Reaktion 10 hemmen führen. Aus diesem Grund ist es wichtig, eine Bakteriensuspension mit geeigneter Zelldichte (Fig. 1) zu schaffen. Die susRente kann für mehrere Monate durch die Zugabe von einigen Tropfen konzentrierter Formalin konserviert werden. Dies ermöglicht eine einfachere Chargenprüfung und sterilisiert die Brühe reduziert das Risiko von Laborinfektionen, obwohl dies muss vor dem Sicherheitsrisiko im Umgang mit Formalin, die giftig, ätzend, krebserzeugend, sensibilisierend und entflammbar ist abgewogen werden. Außerdem haben wir beobachtet, dass einige Isolate zeigen schwächere Reaktionen in Gegenwart von Formalin (Daten nicht gezeigt). Quellung Reaktionen werden unter Verwendung eines Mikroskops untersucht. Die Verwendung von Phasenkontrast verbessert die Sichtbarkeit der Kapsel. In einigen Labors wird die Reaktion unter Verwendung von Ölimmersions bei 1000-facher Vergrößerung 14, 16 betrachtet. Darüber hinaus sind einige Laboratorien eine Gegenfärbung (Methylenblau), um die Sichtbarkeit einer positiven Reaktion 10, 16, 22 weiter zu verbessern. Die hier vorgestellte Methode wird ohne Öl-i angesehenmmersion und unter 400-facher Vergrößerung 15, 17. Diese Methode ist schnell, einfach und relativ leicht zu lesen 23. Es ist wichtig, gute interne Qualitätskontrolle zu halten, um sicherzustellen, dass die Antisera und Testverfahren sind in Ordnung. Die Teilnahme an einer externen Qualitätssicherungsprogramm ist oft von Vorteil. Eine wesentliche Einschränkung der Quellung Reaktion zur Serotypisierung von Pneumokokken sind die hohen Kosten der benötigten Antiseren. Dies wird jedoch in dem obigen Protokoll aufgrund der geringen Menge von Antiserum für jede Reaktion verwendet wird, minimiert. Mehrere andere Verfahren wurden zur Serotypisierung Pneumokokken 23, 24 beschrieben. Allerdings bleibt Quellung der Goldstandard und die Entwicklung von neuen Methoden erfordert Standardisierung gegen die Quellung Reaktion 23. Mit entsprechenden Antiseren kann die Quellung Reaktion auch genutzt werden, um zu identifizieren, und geben Sie anderen Kappen werdenModul 25 produzierenden Bakterien. Die Quellung Reaktion ist maßgeblich an der Charakterisierung der aktuellen und zukünftigen Pneumokokken-Serotypen, sowie Bereitstellung von Informationen über die Wirksamkeit des Impfstoffes und die langfristigen Auswirkungen der Impfung auf Schlitten und Krankheit.

Streptococcus pneumoniae (Pneumokokken) ist für den Tod von schätzungsweise 800.000 Kinder unter fünf Jahren pro Jahr verantwortlich, wobei die Last der Krankheit vor allem in ressourcenarmen Ländern 1 fällt. Pneumokokken-Erkrankungen reichen im Schweregrad von lokalisierten Infektionen wie akute Mittelohrentzündung zu schweren lebensbedrohlichen Infektionen wie Sepsis, Meningitis und Lungenentzündung 2. Über 90 Serotypen von Pneumokokken-Kapselpolysaccharid beschrieben worden, 3, 4. Strom Pneumokokken-Impfstoffe einen Schutz gegen die Serotypen, die für die Mehrzahl der invasiven Erkrankung 5, 6 verantwortlich sind. Allerdings hat weit verbreiteten Einsatz von Impfstoffen mit dem Ersatz der Serotypen, die im Impfstoff enthaltenen Serotypen von nonvaccine in Verbindung gebracht, sowohl im Nasen-Rachen-Wagen und invasive Erkrankungen 7, 8. Dies unterstreicht die Bedeutung der Serotypisierung für epidemiologischeÜberwachungs-und langfristigen Auswirkungen Impfstoffstudien 9. Die Goldstandardmethode für die Pneumokokken-Typisierung ist der Kapselreaktionstest, da die Quellung Reaktion bekannt, die zuerst von Neufeld im Jahre 1902 beschrieben (siehe österreichischen 10). Ein hohes Maß an Übereinstimmung zwischen Laboratorien und zwischen der Quellung Reaktion und andere Methoden Serotypisierung 11-13 gefunden. Es gibt mehrere Varianten der Quellung Reaktion 10, 14-16. Das hier beschriebene Verfahren erfordert nicht die Verwendung einer Gegenfärbung oder der Ölimmersionslinse, sondern es wird ein Tropfen vorbereiteten Probe gemischt mit dem Eingabe-Serum untersucht und direkt unter 400-facher Vergrößerung. Die Quellung Reaktion wird üblicherweise unter Verwendung von handelsüblichen Antisera. Das hier beschriebene Verfahren verwendet weniger Antiseren verglichen mit anderen Methoden, 16, 17, so dass es kostengünstiger. Sobald ein isol.gegessen wird als Pneumokokken identifiziert, wird es nacheinander mit Antiseren Pools getestet, bis eine positive Reaktion beobachtet wird. Jeder Pool Antiserum enthält verschiedene Mischungen von Antiseren gegen 91 Pneumokokken-Serotypen 18 angehoben. Sobald der Pool aufgebaut ist, werden die einzelnen Muster und Gruppen Antiseren, die im reaktiven Pool aufgenommen werden einzeln nacheinander getestet. Typ Antiseren reagieren in der Regel mit einem einzigen Serotyp (zB Typ-1-Antiserum mit Serotyp 1 reagiert), während die Gruppe Antiseren reagieren mit allen Serotypen, die in einer bestimmten Gruppe (zB Gruppe 22 Antiserum reagiert mit Serotypen 22F und 22A). Einige Serotypen innerhalb der Gruppen werden weiter mit Faktor Antiseren (zB Serotyp 22F reagiert mit Faktor 22b, aber nicht 22c) unterschieden. In diesem Fall ist die Prüfung erfolgt mit allen relevanten Faktor Antiseren fortgesetzt, bis Serotyp bestimmt 19, 20. Die Quellung Reaktion ist einfach und schnell 14 und kann in jeder l durchgeführt werdenabor ist, dass mit einer guten Qualität Mikroskop und entsprechenden Satz von Antiseren ausgestattet.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1305">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Pneumococcus (Neufeld) antisera</td>
			<td>SSI Diagnostica</td>
			<td></td>
			<td><a href="http://www.ssi.dk/ssidiagnostica">http://www.ssi.dk/ssidiagnostica</a> 
			Bring all antisera to room temperature before use</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Pneumococcus (Omni) antiserum</td>
			<td>SSI Diagnostica</td>
			<td>2438</td>
			<td>Bring all antisera to room temperature before use</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Optical Microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>Leica DML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Calibrated Disposable Inoculating Loops 1 &#181;l</td>
			<td>Copan</td>
			<td>CD175S01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Horse Blood Agar (HBA) plates</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>PP2001</td>
			<td><a href="http://www.thermofisher.com.au/">http://www.thermofisher.com.au/</a> 
			Bring to room temperature before use</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Heart Infusion (HI) broth</td>
			<td>Media Preparation Unit (MPU), The University of Melbourne</td>
			<td>40HIN</td>
			<td>Bring to room temperature before use</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Glass microscope slides 76 mm x 26 mm</td>
			<td>Lomb Scientific</td>
			<td>7101</td>
			<td>Sharps hazard: Dispose in a biohazard sharps container</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Circular glass coverslips</td>
			<td>NeuVitro&#160;</td>
			<td>GG-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td colspan="2" height="20" style="height:20px;">*Excluding the antisera, all other materials can be purchased from alternative suppliers</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td colspan="4" height="20" style="height:20px;">*Plates prepared from defibranated sheep blood are suitable but blood plates prepared from citrated blood or human blood are not</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

capsular serotyping of streptococcus pneumoniae using the quellung reaction

Es gibt über 90 verschiedene Kapsel Serotypen von Streptococcus pneumoniae (Pneumokokken). Abgesehen davon, dass ein Werkzeug für das Verständnis Pneumokokken-Epidemiologie, können Kapsel Serotypisierung nützliche Informationen für die Impfstoff-Wirksamkeit und Wirkungsstudien liefern. Die Quellung Reaktion ist der Goldstandard-Methode für Pneumokokken-Kapsel Serotypisierung. Das Verfahren beinhaltet das Testen einer Pneumokokken-Zellsuspension mit gepoolten und spezifische Antiseren gegen die Kapsel-Polysaccharid gerichtet. Die Antigen-Antikörper-Reaktionen werden mikroskopisch beobachtet. Das Protokoll besteht aus drei Schritten: 1) Herstellung einer Bakterienzellsuspension, 2) Mischen der Zellen und Antiseren auf einem Glasträger, und 3) das Lesen der Quellung Reaktion unter Verwendung eines Mikroskops. Die Quellung Reaktion ist relativ einfach durchzuführen und kann angewendet werden, wo ein geeignetes Mikroskop und Antiseren zur Verfügung.

<html> Eine positive Reaktion tritt auf, wenn Quellung typspezifischen Antikörper bindet an die Kapsel der Pneumokokken, die zu einer Änderung seines Brechungsindex 10. Wenn unter einem Mikroskop betrachtet, erscheinen die Bakterien &quot;geschwollen&quot; und mehr sichtbar 14. 1A zeigt Pneumokokken-Zellen in HALLO Brühe. Bei Typ-spezifische Antiserum wird in die Bakteriensuspension hinzugefügt, Pneumokokken erscheinen &quot;geschwollen&quot;, refraktive und mehr abgerundet (Abbildung 1B). Zu viele Bakterienzellen in die Brühe zugegeben wird, kann in Aggregation von Zellen oder einem falsch-negativen Reaktion führen. Abbildung 2 zeigt Inokula der Pneumokokken-Zellen in HALLO Brühe, die &quot;zu schwer&quot; (2A) oder &quot;zu leicht&quot; (2B) sind. 08fig1highres.jpg &quot;src =&quot; / files/ftp_upload/51208/51208fig1.jpg &quot;/&gt; Fig. 1 ist. Negative und positive Quellung Reaktion. Zubereitungen von der Serotyp 9V Pneumokokken isolieren, ohne Antiserum (1A) und mit der Gruppe 9-Antiserum (1B), wurden unter 400-facher Vergrößerung betrachtet. Letzteres zeigt die &quot;Schwellung&quot; und Runden von Bakterienzellen in der Regel in einem positiven Quellung Reaktion gesehen. <img alt="Figur 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51208/51208fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51208/51208fig2.jpg" /> 2. Zu schwer und zu leicht Inokula. Zubereitungen von der Pneumokokken-Zellsuspensionen, die zu schwer (2A) oder zu hell (2B) sind, wenn sie unter 400-facher Vergrößerung betrachtet.

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Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

Kapsel Serotypisierung von<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Verwenden der Quellung Reaktion

Die Quellung Reaktion ist der Gold-Standard-Technik für Serotypisierung Streptococcus pneumoniae. Diese Technik nutzt ein Mikroskop und Pneumokokken-spezifische Antiseren und wird häufig in Referenz-und Forschungslaboren weltweit eingesetzt.

There are over 90 different capsular serotypes of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). As well as being a tool for understanding pneumococcal ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

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During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

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Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Charakterisierung von Entzündungsreaktionen während der intranasalen Kolonisation mit Streptococcus pneumoniae

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Überwachen von Änderungen in Membran-Polarity, Membrane Integrity und intrazelluläre Ionenkonzentrationen in<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Verwenden von Fluoreszenzfarbstoffen

Membrane depolarization and ion fluxes are events that have been studied extensively in biological systems due to their ability to profoundly impact ...

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Kapsel Serotypisierung<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Durch Latexagglutination

Latex agglutination reagents are widely used in microbial diagnosis, identification and serotyping. Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) is a major ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Nicht-invasive Bildgebung von der angeborenen Immunantwort in einem Zebrafisch-Larven Modell<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; Infektions

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Ein Mausmodell der Gruppe B<em&gt; Streptococcus</em&gt; Vaginal Colonization

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or A. baumannii

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or  A. baumannii

A Robust Pneumonia Modell in intaktem Immunsystem Nagetiere zur Bewertung antibakterieller Wirksamkeit gegen<i&gt; S. pneumoniae</i&gt;,<i&gt; H. influenzae</i&gt;,<i&gt; K. pneumoniae</i&gt;,<em&gt; P. aeruginosa</em&gt; oder<em&gt; A. baumannii</em

Efficacy of candidate antibacterial treatments must be demonstrated in animal models of infection as part of the discovery and development process, ...

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Intrakranielle Subarachnoidal Route der Infektion für die Untersuchung Rollen von Streptococcus Suis Biofilmen in Meningitis in einem Mausmodell der Infektion

Streptococcus suis is not only a major bacterial pathogen of pigs worldwide but also an emerging zoonotic agent. In humans and pigs, meningitis is a major ...

Measuring Dengue Virus RNA in the Culture Supernatant of Infected Cells by Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction

Messung der Dengue-Virus RNA im Kultur Überstand der infizierten Zellen durch Echtzeit-Quantitative Polymerase-Kettenreaktion

At present, real-time polymerase chain reaction (PCR) technology is an indispensable tool for the detection and quantification of viral genomes in ...