Name: capsular serotyping of streptococcus pneumoniae using the quellung reaction
Uploaded: 2014-02-24T15:50:00
Duration: 4 min 25 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction at JoVE.com

Detta arbete stöddes av Bill och Melinda Gates Foundation (PneuCarriage projekt, Grant 52099) och den viktorianska regeringens Operational Infrastruktur Support Program. Tack vare Eileen Dunne, Janet Strachan, och Kim Hare för kritisk läsning av manuskriptet.

1. Förberedelse för cell suspension Typing <ol><li> Med hjälp av en steril engångs 1 pl loop, ta ett litet svep av färsk natten renkultur av pneumokocker odlas på fast icke-selektiva hästblodagar och inokulera 100 ^ Heart Infusion (HI) buljong. Suspensionen skulle tyckas vara bara synligt grumlig. Skaka försiktigt på röret för att emulgera. Anmärkning: Andra media såsom Brain Heart Infusion-buljong kan också vara lämpliga. Tillsats av serum (t ex en slutlig koncentration av 10% (volym / volym) hästserum) och inkubering vid 37 ° C under ca 1 timme före användning kan användas för att förbättra reaktionen. </li></ol> 2. Kontroll Densitet för cell Suspension Cellsuspensionen bereddes i steg 1,1 kommer också att användas som den negativa kontrollen, och bör kontrolleras för celldensitet före tillsats av typning sera. <ol><li> Med hjälp av en 1 il slinga, överföra en droppe av inokulat beredd i steg 1.1 på ett glass objektglas. </li><li> Med hjälp av en pincett, placera en liten rund täckglas på upphängningen. </li><li> Använda inställnings fas-kontrast, observera preparatet mikroskopiskt i 400X förstoring, för att kontrollera tätheten av suspensionen (Figur 1A). <ol><li> Om inokulatet är för tung (fig 2A), tillsätt mer buljong till cellsuspensionen i steg 1,1 för att späda ut det. Blanda försiktigt igen. </li><li> Om ympen är för ljus, till exempel, finns det &lt;50 celler synliga i det mikroskopiska området (Figur 2B), lägga till fler bakterier till cellsuspensionen preparat görs i steg 1,1 och blanda försiktigt. Anm: Med erfarenhet, kan densiteten av cellsuspensionen bedömas genom att skaka och hålla upp den mot ljuset, där det ska framstå som bara synligt grumlig. </li></ol></li><li> Upprepa steg 2,1-2,3 tills ett lämpligt antal celler är synliga i det mikroskopiska området. OBS: Glasskivor och coverslips presentera en avfalls fara. Efter användning, diabilder och täck förorenade med infektiöst material och måste bortskaffas i en biologiskt avfallsbehållare. </li></ol> 3. Typing <ol><li> Överför ~ 1 l av det beredda inokulat (t.ex. med 1 pl loop) på glasobjektglas. Kasta in öglan i biologiskt avfallsbehållare. </li><li> Lägg till en lika stor volym (1 pl ögla) i rumstemperatur antiserum på objektglaset och blanda båda faller väl med slingan. </li><li> Med hjälp av en pincett, placera en liten rund täckglas på fjädring, se till att inte röra vid nedgången. Placera täckglas på suspensionen omedelbart efter tillsatsen av antisera för att förhindra att vätska på sliden från att torka ut. </li><li> Med hjälp av ett mikroskop, observera suspensionen i fas-kontrast med 400X förstoring. En negativ Quellung reaktion observeras när liten eller ingen &quot;svullnad&quot; av pneumococcal celler kan ses vid 400X förstoring, liknande det som observerats i pneumokock cellsuspensionen utan antiserum tillsätts (negativ kontroll). En positiv Quellung reaktioner observeras när cellerna visas förstorad eller &quot;svullen&quot; och mer synlig i jämförelse med cellerna i den negativa kontrollen. OBS: Tvetydiga reaktioner bör utredas vidare, till exempel genom att undersöka reaktionen efter 5-10 min inkubation vid rumstemperatur, eller genom att upprepa reaktionen med mer antiserum. </li><li> Genomför pneumokock serotypning med successiv testning av individuella antisera pooler tills en positiv reaktion kan iakttas. Alternativt kan pooler tillämpas i &quot;rundor&quot; beroende på lokal förekomst av serotyper. Notera: Testning i &quot;rundor&quot; säkerställer att poolerna innehåller antikroppar mot de vanligaste serotyperna testas först, minimerar ansträngning och kostnad. Samtidig testning av flera pooler ger också ytterligare negativa kontroller, vilket kan vara användbart i interpretation. Om alla pooler i en särskild &quot;runda&quot; är negativa, testa isolat med efterföljande rundor av pooler. </li><li> Testa isolat med hjälp av lämplig typ eller grupp antiserum som finns i det reaktiva poolen. Vid behov använder faktorantiserum för att ytterligare differentiera serotyp. OBS: Nycklar till pneumokock antiserum från tillverkaren används i valet av lämplig pool, typ, grupp eller faktor sera och tolkning av resultat (inklusive eventuella korsreaktioner). </li><li> Om negativa resultat erhålls med alla pooler, testa isolat med Omniserum reagens (innehåller antikroppar mot 91 serotyper 21). Om en positiv Quellung reaktion fortfarande inte observeras när man testar ett pneumokock isolat med Omniserum reagens, kan detta bero på att isolera uttrycker liten eller ingen kapsel, eller att antikroppar mot serotyp är inte representerade i Omniserum. Den senare kategorin kan inkludera nya serotyper. </li> &lt;/ Ol&gt;

<ol>
	<li>O'Brien, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burden+of+disease+caused+by+Streptococcus+pneumoniae+in+children+younger+than+5+years:+global+estimates.">Burden of disease caused by Streptococcus pneumoniae in children younger than 5 years: global estimates.</a> Lancet. 374, 893-902 (2009).</li><li>Bogaert, D., De Groot, R., Hermans, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Streptococcus+pneumoniae+colonisation:+the+key+to+pneumococcal+disease.">Streptococcus pneumoniae colonisation: the key to pneumococcal disease.</a> Lancet Infect. Dis. 4, 144-154 (2004).</li><li>Henrichsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Six+newly+recognized+types+of+Streptococcus+pneumoniae.">Six newly recognized types of Streptococcus pneumoniae.</a> J. Clin. Microbiol. 33, 2759-2762 (1995).</li><li>Calix, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical,+genetic,+and+serological+characterization+of+two+capsule+subtypes+among+Streptococcus+pneumoniae+Serotype+20+strains:+discovery+of+a+new+pneumococcal+serotype.">Biochemical, genetic, and serological characterization of two capsule subtypes among Streptococcus pneumoniae Serotype 20 strains: discovery of a new pneumococcal serotype.</a> J. Biol. Chem. 287, 27885-27894 (2012).</li><li>Hausdorff, W. P., Bryant, J., Paradiso, P. R., Siber, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Which+pneumococcal+serogroups+cause+the+most+invasive+disease:+implications+for+conjugate+vaccine+formulation+and+use,+part+I.">Which pneumococcal serogroups cause the most invasive disease: implications for conjugate vaccine formulation and use, part I.</a> Clin. Infect. Dis. 30, 100-121 (2000).</li><li>Johnson, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+evaluation+of+serotypes+causing+invasive+pneumococcal+disease+among+children+under+five:+the+pneumococcal+global+serotype+project.">Systematic evaluation of serotypes causing invasive pneumococcal disease among children under five: the pneumococcal global serotype project.</a> PLoS Med. 8, (2010).</li><li>Weinberger, D. M., Malley, R., Lipsitch, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotype+replacement+in+disease+after+pneumococcal+vaccination.">Serotype replacement in disease after pneumococcal vaccination.</a> Lancet. 378, 1962-1973 (2011).</li><li>Obaro, S. K., Adegbola, R. A., Banya, W. A., Greenwood, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carriage+of+pneumococci+after+pneumococcal+vaccination.">Carriage of pneumococci after pneumococcal vaccination.</a> Lancet. 348, 271-272 (1996).</li><li>Mulholland, K., Satzke, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotype+replacement+after+pneumococcal+vaccination.">Serotype replacement after pneumococcal vaccination.</a> Lancet. 379, 1388-1389 (2012).</li><li>Austrian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+quellung+reaction,+a+neglected+microbiologic+technique.">The quellung reaction, a neglected microbiologic technique.</a> Mt. Sinai. J. Med. 43, 699-709 (1976).</li><li>Konradsen, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+serotyping+of+Streptococcus+pneumoniae+in+Europe.">Validation of serotyping of Streptococcus pneumoniae in Europe.</a> Vaccine. 23, 1368-1373 (2005).</li><li>Lovgren, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+an+international+external+quality+assurance+model+to+support+laboratory+investigation+of+Streptococcus+pneumoniae,+developed+for+the+SIREVA+project+in+Latin+America,+from.">Evolution of an international external quality assurance model to support laboratory investigation of Streptococcus pneumoniae, developed for the SIREVA project in Latin America, from.</a> J. Clin. Microbiol. 45, 3184-3190 (2007).</li><li>Reasonover, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+International+Circumpolar+Surveillance+interlaboratory+quality+control+program+for+Streptococcus+pneumoniae.">The International Circumpolar Surveillance interlaboratory quality control program for Streptococcus pneumoniae.</a> J. Clin. Microbiol. 49, 138-143 (2011).</li><li>Hare, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=#34;Dodgy+6As&amp;#34;:+differentiating+pneumococcal+serotype+6C+from+6A+by+use+of+the+Quellung+reaction.">#34;Dodgy 6As&amp;#34;: differentiating pneumococcal serotype 6C from 6A by use of the Quellung reaction.</a> J. Clin. Microbiol. 47, 1981-1982 (2009).</li><li>Kong, F., Gilbert, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+cpsA-cpsB+sequence+polymorphisms+and+serotype-/group-specific+PCR+to+predict+51+Streptococcus+pneumoniae+capsular+serotypes.">Using cpsA-cpsB sequence polymorphisms and serotype-/group-specific PCR to predict 51 Streptococcus pneumoniae capsular serotypes.</a> J. Med. Microbiol. 52, 1047-1058 (2003).</li><li>Castillo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+Streptococcus+pneumoniae.">Identification and characterization of Streptococcus pneumoniae.</a> Laboratory Methods for the Diagnosis of Meningitis caused by Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, and Haemophilus influenzae. 2nd ed. , 73-86 (2011).</li><li>Kaijalainen, T., Rintamaki, S., Herva, E., Leinonen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+gene-technological+and+conventional+methods+in+the+identification+of+Streptococcus+pneumoniae.">Evaluation of gene-technological and conventional methods in the identification of Streptococcus pneumoniae.</a> J. Microbiol. Methods. 51, 111-118 (2002).</li><li>Sorensen, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Typing+of+pneumococci+by+using+12+pooled+antisera.">Typing of pneumococci by using 12 pooled antisera.</a> J. Clin. Microbiol. 31, 2097-2100 (1993).</li><li>Diagnostica SSI, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Key+to+pneumococcal+factor+antisera.">Key to pneumococcal factor antisera.</a> , (2013).</li><li>Diagnostica SSI, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pneumococcal+antisera+for+in+vitro+diagnostic+use.">Pneumococcal antisera for in vitro diagnostic use.</a> , (2011).</li><li>Lund, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+diagnosis+of+Pneumococcus+infections.">Laboratory diagnosis of Pneumococcus infections.</a> Bull. World Health Organ. 23, 5-13 (1960).</li><li>Satzke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standard+method+for+detecting+upper+respiratory+carriage+of+Streptococcus+pneumoniae:+Updated+recommendations+from+the+World+Health+Organization+Pneumococcal+Carriage+Working+Group.">Standard method for detecting upper respiratory carriage of Streptococcus pneumoniae: Updated recommendations from the World Health Organization Pneumococcal Carriage Working Group.</a> Vaccine. 32, 165-179 (2013).</li><li>Vernet, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory-based+diagnosis+of+pneumococcal+pneumonia:+state+of+the+art+and+unmet+needs.">Laboratory-based diagnosis of pneumococcal pneumonia: state of the art and unmet needs.</a> Clin. Microbiol. Infect. 17, 1-13 (2011).</li><li>Casewell, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experiences+in+the+use+of+commercial+antisera+for+the+capsular+typing+of+klebsiella+species.">Experiences in the use of commercial antisera for the capsular typing of klebsiella species.</a> J. Clin. Pathol. 25, 734-737 (1972).</li></ol>

Författarna har ingenting att lämna ut.

Ett kritiskt steg i denna teknik är att säkerställa en ren kultur används för att bereda suspensionen tillsammans med tillsats av ett lämpligt antal av bakterieceller till buljongen. Det bör noteras att kolonitillväxt och morfologi på agarplattor varierar mellan olika pneumococcal isolat. Vissa producerar torra och grova kolonier, som kan vara svåra att plocka bort med en ögla och inte emulgerar bra i buljongen. Därför kan en större svep av bakterier krävs vid upprättande av cellsuspension. I varje fall är det absolut nödvändigt att enskilda celler och inte aggregat, är uppenbara i den negativa kontrollen, så att deras relativa storlek kan jämföras med cellerna med antiserum tillsattes. Dessutom kan alltför många bakteriella celler resultera i en falsk negativ reaktion, där ett överskott av kapselantigen kan hämma Quellung reaktion 10. Av denna anledning är det viktigt att skapa en bakteriesuspension med en lämplig celldensitet (figur 1). SUSpension kan bevaras i flera månader genom tillsats av några droppar koncentrerad formalin. Detta möjliggör enklare batch tester och även steriliserar buljongen minskar risken för laboratorie-infektioner, även om detta måste vägas mot risken säkerheten i hanteringen formalin, som är giftigt, frätande, cancerframkallande, allergiframkallande, och brandfarligt. Dessutom har vi observerat att vissa isolat visar svagare reaktioner i närvaro av formalin (data ej visade). Quellung reaktioner undersöktes med användning av ett mikroskop. Användningen av faskontrast ökar synligheten av kapseln. I vissa laboratorier reaktionen visas med oljeimmersion vid 1000 X förstoring 14, 16. Dessutom, vissa laboratorier använder en räknare fläck (metylenblått) för att ytterligare öka synligheten för en positiv reaktion 10, 16, 22. Den metod som presenteras här betraktas utan olja-immersion och under 400X förstoring 15, 17. Denna metod är snabb, enkel och relativt lätt att läsa 23. Det är viktigt att upprätthålla en god intern kvalitetskontroll för att säkerställa att sera och testmetoderna är i ordning. Deltagande i ett externt kvalitetssäkringsprogram är ofta fördelaktigt. En viktig begränsning av Quellung reaktion för serotypning av pneumokocker är den höga kostnaden för antisera krävs. Detta är dock minimeras i ovanstående protokoll på grund av den lilla mängd av antiserum som används för varje reaktion. Flera andra metoder har beskrivits för serotypning pneumokocker 23, 24. Men Quellung fortfarande guldmyntfoten och utvecklingen av nya metoder kräver standardisering mot Quellung reaktion 23. Med hjälp av lämpligt antiserum kan Quellung reaktion också användas för att identifiera och skriva andra lockule producerande bakterier 25. Den Quellung reaktion är avgörande för karaktärisering av befintliga och nya serotyper av pneumokocker, samt att ge information om vaccinets effektivitet och långsiktiga effekter av vaccination på vagnen och sjukdom.

Streptococcus pneumoniae (den pneumokocker) är ansvarig för döden av uppskattningsvis 800.000 barn under fem års ålder varje år, med sjukdomsbördan faller främst i resursfattiga länder 1. Pneumokocksjukdomar variera i svårighetsgrad från lokala infektioner såsom akut öroninflammation till allvarliga livshotande infektioner såsom sepsis, hjärnhinneinflammation och lunginflammation 2. Över 90 kapsel serotyper av pneumokocker har beskrivits 3, 4. Aktuella pneumokocker ger skydd mot de serotyper som är ansvariga för majoriteten av invasiv sjukdom 5, 6. Emellertid har en utbredd användning av vacciner förknippats med byte av serotyper som ingår i vaccinet genom nonvaccine serotyper, både i nasopharyngeal vagnen och invasiv sjukdom 7, 8. Detta belyser vikten av serotypning för epidemiologiskövervakning och långsiktiga vaccin konsekvensbeskrivningar 9. Guldmyntfoten metod för pneumokocker typning är kapselreaktionstestet, som kallas Quellung reaktionen, först beskriven av Neufeld 1902 (se österrikisk 10). En hög grad av överensstämmelse har konstaterats mellan laboratorier, och mellan Quellung reaktion och andra serotypning metoder 11-13. Det finns flera varianter av Quellung reaktion 10, 14-16. Den metod som beskrivs här kräver inte användning av en räknare bets eller oljeimmersionslins, snarare är en droppe av beredda provet blandas med typning serum och undersöktes omedelbart under 400X förstoring. Den Quellung Reaktionen utförs vanligtvis med hjälp av kommersiellt tillgängliga antiserum. Den metod som beskrivs här använder mindre antisera jämfört med vissa andra metoder 16, 17, vilket gör det mer kostnadseffektivt. När ett isolåt identifieras som en pneumokocker, den är i tur och ordning provas med antisera pooler tills en positiv reaktion kan iakttas. Varje pool antiserum innehåller olika blandningar av antisera mot 91 pneumokockserotyper 18. När poolen är etablerad, är den individuella typ och grupp antisera som ingår i den reaktiva poolen testas individuellt i följd. Typ antisera reagerar i allmänhet med en enda serotyp (t.ex. typ 1-antiserum reagerar med serotyp 1), medan gruppantiserum reagerar med alla serotyper i en viss grupp (t.ex. Grupp 22-antiserum reagerar med serotyperna 22F och 22A). Vissa serotyper inom grupper är vidare differentieras med hjälp av faktorantiserum (t.ex. serotyp 22F reagerar med faktor 22b, men inte 22c). I så fall testa fortsätter med all relevant faktor sera tills serotyp bestäms 19, 20. Den Quellung reaktion är enkel och snabb 14 och kan utföras i alla laboratory som är utrustad med en god kvalitet mikroskop och lämplig uppsättning av antisera.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1305">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Pneumococcus (Neufeld) antisera</td>
			<td>SSI Diagnostica</td>
			<td></td>
			<td><a href="http://www.ssi.dk/ssidiagnostica">http://www.ssi.dk/ssidiagnostica</a> 
			Bring all antisera to room temperature before use</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Pneumococcus (Omni) antiserum</td>
			<td>SSI Diagnostica</td>
			<td>2438</td>
			<td>Bring all antisera to room temperature before use</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Optical Microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>Leica DML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Calibrated Disposable Inoculating Loops 1 &#181;l</td>
			<td>Copan</td>
			<td>CD175S01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Horse Blood Agar (HBA) plates</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>PP2001</td>
			<td><a href="http://www.thermofisher.com.au/">http://www.thermofisher.com.au/</a> 
			Bring to room temperature before use</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Heart Infusion (HI) broth</td>
			<td>Media Preparation Unit (MPU), The University of Melbourne</td>
			<td>40HIN</td>
			<td>Bring to room temperature before use</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Glass microscope slides 76 mm x 26 mm</td>
			<td>Lomb Scientific</td>
			<td>7101</td>
			<td>Sharps hazard: Dispose in a biohazard sharps container</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Circular glass coverslips</td>
			<td>NeuVitro&#160;</td>
			<td>GG-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td colspan="2" height="20" style="height:20px;">*Excluding the antisera, all other materials can be purchased from alternative suppliers</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td colspan="4" height="20" style="height:20px;">*Plates prepared from defibranated sheep blood are suitable but blood plates prepared from citrated blood or human blood are not</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

capsular serotyping of streptococcus pneumoniae using the quellung reaction

Det finns över 90 olika kapsel serotyper av Streptococcus pneumoniae (den pneumokocker). Förutom att vara ett verktyg för att förstå pneumokocker epidemiologi, kan kapsel serotypning ge användbar information för vaccin effekt och effektstudier. Den Quellung reaktion är den gyllene standarden metod för pneumokock kapsulär serotypning. Metoden innebär att testa en pneumokock cellsuspension med poolade och specifika antisera riktade mot kapselpolysackariden. De antigen-antikroppsreaktioner observeras mikroskopiskt. Protokollet har tre huvudsteg: 1) framställning av en bakteriecellsuspension, 2) blandning av celler och antisera på en glasskiva, och 3) läser Quellung reaktion med användning av ett mikroskop. Den Quellung reaktion är relativt enkelt att utföra och kan användas överallt där en lämplig mikroskop och antisera är tillgängliga.

<html> En positiv Quellung reaktion sker när typspecifik antikropp binder till kapseln av pneumokocker, vilket leder till en ändring i dess brytningsindex 10. När ses i mikroskop, bakterierna verkar &quot;svullen&quot; och mer synliga 14. Figur 1A visar pneumokocker celler i HI buljong. Vid typ-specifika antiserum tillsätts bakteriesuspensionen, pneumokocker visas &quot;svullen&quot;, brytnings och mer rundad (Figur 1B). Alltför många bakterieceller till buljongen kan resultera i aggregation av celler eller en falsk negativ reaktion. Figur 2 visar inokula av pneumococcal celler i Hl-buljong som är &quot;för tung&quot; (figur 2A) eller &quot;för ljus&quot; (figur 2B). 08fig1highres.jpg &quot;src =&quot; / files/ftp_upload/51208/51208fig1.jpg &quot;/&gt; Figur 1. Negativ och positiv Quellung reaktion. Beredningar av serotyp 9V pneumokock isolat utan antiserum (1A) och med grupp 9 antiserum (1B), sågs i 400X förstoring. Det senare visar &quot;svullnad&quot; och avrundning av bakterieceller typiskt sett i en positiv Quellung reaktion. <img alt="Figur 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51208/51208fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51208/51208fig2.jpg" /> Figur 2. För tungt och för lätt inokulat. Beredningar av pneumokocker cellsuspensioner som är för tung (2A) eller för ljus (2B), när den visas med 400X förstoring.

Watch this Scientific Journal Video about Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction at JoVE.com

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

Capsular Serotypningen av<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Använda Quellung Reaction

Den Quellung reaktion är den gyllene standarden teknik för serotypning Streptococcus pneumoniae. Denna teknik utnyttjar ett mikroskop och specifik pneumokock antisera och används ofta i referens-och forskningslaboratorier över hela världen.

There are over 90 different capsular serotypes of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus). As well as being a tool for understanding pneumococcal ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae Using the Quellung Reaction

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Använda Bioluminescent Imaging för att undersöka synergi mellan Streptococcus pneumoniae Och influensa A-virus i modersmjölksersättning Möss

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Live Cell Imaging of Bacillus subtilis and Streptococcus pneumoniae using Automated Time-lapse Microscopy

Levande cell imaging av Bacillus subtilis Och Streptococcus pneumoniae Med hjälp av automatiserade Time-lapse Mikroskopi

During the last few years scientists became increasingly aware that average data obtained from microbial population based experiments are not ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Karakterisering av inflammatoriska svar under intranasal kolonisering med Streptococcus pneumoniae

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Monitoring Changes in Membrane Polarity, Membrane Integrity, and Intracellular Ion Concentrations in Streptococcus pneumoniae Using Fluorescent Dyes

Övervaknings Förändringar i Membrane polaritet, Membrane Integritet och intracellulära jonkoncentrationer i<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Med hjälp av fluorescerande färger

Membrane depolarization and ion fluxes are events that have been studied extensively in biological systems due to their ability to profoundly impact ...

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Capsular Serotyping of Streptococcus pneumoniae by Latex Agglutination

Kapselkontraktur Serotypningen av<em&gt; Streptococcus pneumoniae</em&gt; Av latexagglutination

Latex agglutination reagents are widely used in microbial diagnosis, identification and serotyping. Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) is a major ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Icke-invasiv avbildning av det medfödda immun Response i en Zebrafish Larv Modell av<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; Infektion

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

En musmodell av grupp B<em&gt; Streptococcus</em&gt; Vaginal Colonization

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or A. baumannii

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or  A. baumannii

En robust Lunginflammation Model Immunokompetenta Gnagare att utvärdera Antibakteriell effekt mot<i&gt; S. pneumoniae</i&gt;,<i&gt; H. influenzae</i&gt;,<i&gt; K. pneumoniae</i&gt;,<em&gt; P. aeruginosa</em&gt; eller<em&gt; A. baumannii</em

Efficacy of candidate antibacterial treatments must be demonstrated in animal models of infection as part of the discovery and development process, ...

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Intracranial Subarachnoidal Route of Infection for Investigating Roles of Streptococcus suis Biofilms in Meningitis in a Mouse Infection Model

Intrakraniell Subarachnoidal rutten av infektion för undersöker roller av Streptococcus suis biofilmer i hjärnhinneinflammation i en musmodell för infektion

Streptococcus suis is not only a major bacterial pathogen of pigs worldwide but also an emerging zoonotic agent. In humans and pigs, meningitis is a major ...