Name: anti-nuclear antibody screening using hep-2 cells
Uploaded: 2014-06-23T18:15:00
Duration: 13 min 1 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Anti-Nuclear Antibody Screening Using HEp-2 Cells at JoVE.com

نشكر كاساندرا براينت لأداء التجربة معهد التمويل الدولي وكارول بوخنر لها الاستعراض التقني الخبير.

1. عينة إعداد واختيار الركيزة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الكواشف من التعبئة والتغليف والسماح لكل بند أن يأتي إلى درجة حرارة الغرفة. إعداد الكواشف وتمييع الأمصال المريض وفقا لإدراج الاتجاه. ملاحظة: يتم barcoded الشرائح NOVA لايت ويمكن دمجها بسهولة في النظم الآلية بالاشتراك مع مختبر نظام المعلومات LIS. يوضح هذا الإجراء تجهيز الشريحة دليل؛ مختبرات إنتاجية عالية، ومع ذلك، قد تختار لمعدات تجهيز الشريحة الآلي. </li></ol> 2. إضافة الضوابط وعينات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الاستغناء 1 قطرة من السيطرة الإيجابية و1 قطرة من المراقبة السلبية إلى الآبار الشريحة المناسبة. ماصة 20-25 ميكرولتر من مصل المريض المخفف إلى الآبار المتبقية. معالجة شريحة واحدة في المرة الواحدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الشريحة (ق) في وعاء تلطيخ مع منشفة ورقية مبللة في القاع. تغطية الحاويات واحتضان الشريحة (ق) لمدة 30 دقيقة. ملاحظة: سيتم الظروف الرطبةمنع الركيزة من الجفاف. جفاف الآبار يمكن أن يؤدي إلى تلطيخ مصطنعة. خلال هذه الفترة الحضانة، فإن الأجسام المضادة المناهضة للاسلحة النووية في مصل المريض ربط المستضدات للخلايا التي يتم إصلاحها على كل بئر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد فترة الحضانة، شطف المصل باستخدام تيار لطيف من غسل العازلة. من أجل تجنب الإضرار الركيزة ومنع انتقال أكثر من عينات بين الآبار، وزاوية الشريحة قليلا لتجنب توجيه تيار مباشرة على الآبار. الاستفادة من غسل العازلة الزائدة ووضع الشريحة في جرة Coplin تحتوي على غسل العازلة لحوالي 5 دقائق. </li></ol> 3. إضافة نيون الاقتراني <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> واحدا تلو الآخر، وإزالة الشرائح من غسل العازلة والاستفادة بلطف لإزالة غسل العازلة الزائدة. تطبيق 1 قطرة من المكورات فلوري (FITC المسمى مفتش مكافحة الإنسان) على كل بئر. احتضان الشرائح لمدة 30 دقيقة في حاوية مرطب، وتأكد من استبدال تلطيخغطاء الحاوية. ملاحظة: للحصول على اختبار ANA، فمن المستحسن استخدام وسيلة محددة المكورات مفتش لكرة القدم. والمكورات هو الحساسة للضوء، وسوف غطاء حماية الشرائح من التعرض للضوء، بالإضافة إلى الحفاظ على البيئة مرطب. خلال هذه الفترة الحضانة، فإن المكورات ربط الأجسام المضادة المناهضة للاسلحة النووية المريض التي منضما إلى مستضدات الخلية. هذه المكورات نتائج ملزمة بحضور مضان في الآبار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف وغسل الشريحة كما هو موضح أعلاه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع ساترة على منشفة ورقية وتطبيق تصاعد المتوسطة في خط متواصل إلى الحافة السفلى من ساترة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة كل شريحة من غسل العازلة والاستفادة من الشريحة بلطف لإزالة غسل العازلة الزائدة. لمس الحافة السفلية من الشريحة إلى حافة ساترة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خفض بلطف الشريحة على ساترة في مثل هذه الطريقة التي المتوسطة المتزايدة على ساترة يتدفق إلى الحافة العلوية من الشريحة دون تشكيل فقاعة الهواء. ملاحظة: التعاونverslipping، بما في ذلك استخدام كمية الأمثل للتصاعد المتوسطة، هو الاسلوب الذي يأخذ الممارسة لاتقان. </li></ol> 4. تحديد النتائج الإيجابية والسلبية دليل تفسير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عرض الشرائح مع المجهر الفلورسنت، وتقع في غرفة مظلمة. تنفيذ مسح البئر بالكامل مع الهدف 20X 25X أو لتقييم توزيع الخلايا وتوحيد مضان </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التبديل إلى الهدف 40X لجعل التفسير النهائي بشأن الإيجابية والنمط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ننظر إلى الضوابط الإيجابية والسلبية. الإيجابية الصف باستخدام مقياس الدرجات تفاعل من 1 إلى 4 + +. ملاحظة: سيطرة سلبية قد لا تظهر مظلمة تماما، ولكن في كثير من الأحيان عرض مضان غير محدد مستوى منخفض. فإن السيطرة الإيجابية عرض التفاح مشرق مضان أخضر في النواة (الشكل 1). </li></ol> التفسير الآلي ملاحظة: في additiإلى تفسير مختصر، تحميل الشرائح وتفحص بواسطة NOVA مشاهدة الآلي الإسفار مجهر أو غيرها من أداة التصوير الرقمي الآلي؛ لا غرفة مظلمة هو ضروري. بعد إنشاء المشروع عن طريق تحديد نوع الشريحة المناسبة، يكتسب الصك ومخازن عالية الدقة الصور الرقمية من الخلايا في كل بئر. بالإضافة إلى ذلك، عرض NOVA يقيس شدة الضوء الفلورسنت، ويصنف النتائج بأنها إيجابية أو سلبية، ويوفر نمط الاعتراف للعينات الإيجابية. يتم عرض الصور من قبل المشغل على جهاز الكمبيوتر عالية الدقة، مما يتيح للالتفسير النهائي، ومراجعة وتأكيد NOVA عرض نتيجة. يمكن أن تتولد تقارير عن النتائج المؤكدة. وينبغي استخدام المجهر الرقمي بالتعاون مع فني مختبر من ذوي الخبرة لأنه معد للمساعدة في تفسير النتائج.

<ol>
	<li>Meroni, P. L., Schur, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ANA+screening:+an+old+test+with+new+recommendations.">ANA screening: an old test with new recommendations.</a> Ann Rheum Dis. 69 (8), 1420-1422 (2010).</li><li>Tan, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibodies+to+nuclear+antigens+(ANA):+Their+immunobiology+and+medicine.">Autoantibodies to nuclear antigens (ANA): Their immunobiology and medicine.</a> Advances in immunology. 33, 167-240 (1982).</li><li>Sack, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoantibody+detection+using+indirect+immunofluorescence+on+HEp-2+cells.">Autoantibody detection using indirect immunofluorescence on HEp-2 cells.</a> Ann NY Acad Sci. 1173, 166-173 (2009).</li><li>Watanabe, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-DFS70+antibodies+in+597+healthy+hospital+workers.">Anti-DFS70 antibodies in 597 healthy hospital workers.</a> Arthritis Rheum. 50 (3), 892-900 (2004).</li><li>Mahler, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importance+of+the+dense+fine+speckled+pattern+on+HEp-2+cells+and+anti-DFS70+antibodies+for+the+diagnosis+of+systemic+autoimmune+diseases.">Importance of the dense fine speckled pattern on HEp-2 cells and anti-DFS70 antibodies for the diagnosis of systemic autoimmune diseases.</a> Autoimmun Revi. 11 (9), 642-645 (2012).</li><li>Mahler, M., Fritzler, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+significance+of+the+dense+fine+speckled+immunofluorescence+pattern+on+HEp-2+cells+for+the+diagnosis+of+systemic+autoimmune+diseases.">The clinical significance of the dense fine speckled immunofluorescence pattern on HEp-2 cells for the diagnosis of systemic autoimmune diseases.</a> Clin Dev Immunol. , (2012).</li><li>Miyara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+phenotypes+of+patients+with+anti-DFS70/LEDGF+antibodies+in+a+routine+ANA+referral+cohort.">Clinical phenotypes of patients with anti-DFS70/LEDGF antibodies in a routine ANA referral cohort.</a> Clin Dev Immunol. , (2013).</li><li>Mariz, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+on+the+antinuclear+antibody-HEp-2+test+is+a+critical+parameter+for+discriminating+antinuclear+antibody+positive+healthy+individuals+and+patients+with+autoimmune+rheumatic+diseases.">Pattern on the antinuclear antibody-HEp-2 test is a critical parameter for discriminating antinuclear antibody positive healthy individuals and patients with autoimmune rheumatic diseases.</a> Arthritis Rheum. 63 (1), 191-200 (2011).</li><li>Muro, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+concomitance+of+disease+marker+autoantibodies+in+anti-DFS70/LEDGF+autoantibody-positive+patients+with+autoimmune+rheumatic+disease.">High concomitance of disease marker autoantibodies in anti-DFS70/LEDGF autoantibody-positive patients with autoimmune rheumatic disease.</a> Lupus. 17 (3), 171-176 (2008).</li><li>Agmon-Levin, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+recommendations+for+the+assessment+of+autoantibodies+to+cellular+antigens+referred+to+as+anti-nuclear+antibodies.">International recommendations for the assessment of autoantibodies to cellular antigens referred to as anti-nuclear antibodies.</a> Ann Rheum Dis. 73 (1), 17-23 (2014).</li><li>Craft, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+U2+small+nuclear+ribonucleoprotein+particle+as+an+autoantigen.">The U2 small nuclear ribonucleoprotein particle as an autoantigen.</a> J Clin Invest. 81 (6), 1716-1724 (1998).</li><li>Salomonsson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+serologic+marker+for+fetal+risk+of+congenital+heart+block.">A serologic marker for fetal risk of congenital heart block.</a> Arthritis Rheum. 46 (5), 1233-1241 (2002).</li><li>Miyawaki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+and+serological+heterogeneity+in+patients+with+anticentromere+antibodies.">Clinical and serological heterogeneity in patients with anticentromere antibodies.</a> J Rheumatology. 32 (8), 1488-1494 (2005).</li><li>Raijamkers, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PM-Scl-75+is+the+main+autoantigen+in+patients+with+the+polymyositis/scleroderma+overlap+syndrome.">PM-Scl-75 is the main autoantigen in patients with the polymyositis/scleroderma overlap syndrome.</a> Arthritis Rheum. 50 (2), 565-569 (2004).</li><li>Yang, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+scleroderma+sera+contain+autoantibodies+to+protein+components+specific+to+the+UC+small+nucleolar+RNP+complex.">Human scleroderma sera contain autoantibodies to protein components specific to the UC small nucleolar RNP complex.</a> Arthritis Rheum. 48 (1), 210-217 (2003).</li><li>Granito, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antinuclear+antibodies+as+ancillary+markers+in+primary+biliary+cirrhosis.">Antinuclear antibodies as ancillary markers in primary biliary cirrhosis.</a> Expert Rev Mol Diagn. 12 (1), 65-74 (2012).</li></ol>

المؤلفين غابرييلا Lakos، كاساندرا براينت، كارول بوخنر، وآنا اسلامي هم موظفون من INOVA التشخيص.

Screening by HEp-2 cells is a critical first step in the diagnosis of patients with SARD. However, IIF methods lack harmonization. Sources of variability include preparation of slides, conjugate specificity, and efficiency of the fluorescent microscope and experience of the reader. Despite these concerns, IIF remains the &#8220;gold standard&#8221; for ANA testing. HEp-2 cells contain a large variety of autoantigens, and provide the ideal substrate for the detection of these autoantibodies. In some laboratories, IIF has been replaced with solid phase screening methods such as multiplex assay or ELISA. The shortcoming of such tests is that they do not display the full range of antigens to be sufficiently sensitive. As a consequence, true positive patients may be missed which can have deleterious consequences In addition to the issues of treatment delay and wrong diagnosis, additional healthcare costs may occur due to the repetition of confirmatory tests or unnecessary diagnostic investigations. Given the inherent challenges to IIF, it is paramount to perform this technique properly to avoid subjectivity in results.
To ensure accurate interpretation and reporting of results for ANA screening, it is vital to use the highest quality substrate. When selecting a HEp-2 substrate, it is critical that the cells be optimized to express clinically relevant epitopes in their native protein state. Transfected or otherwise modified HEp-2 cell lines may not allow proper antibody-antigen binding. In addition, when several different autoantibodies are present simultaneously, recombinant cells may mask one or more patterns. High number of mitotic cells should also be present in the substrate. Adequate number of mitotic cells allows quick and accurate identification of patterns. 
In addition to the attributes of the substrate, the objective of this video protocol is to describe the IIF technique by showing critical steps such as the addition of sample, slide washing, addition of conjugate, cover slipping, and determination of positive and negative results. Results can be compromised if proper technique is not used for each of these steps. Proper washing is important to remove all unbound antibody. Some patients display very high amounts of autoantibodies and in these cases it is important to wash the serum from the wells such that it does not contaminate other wells. 
Although IIF has traditionally been a very labor intensive and subjective laboratory method, new technologies such as slide processors, barcoded slides and automated digital microscopy can greatly simplify the workflow, increase the consistency and reduce the sources of variability of interpretation.

الأجسام المضادة للنواة المدى (ANA) يصف مجموعة متنوعة من الأجسام المضادة التي تتفاعل مع مكونات نواة الخلية بما في ذلك الحمض النووي والبروتينات وribonucleoproteins 1، 2. الخلية التهاب الكبد-2، مجموعة البروتين الأصلي مع مئات من المستضدات، يوفر ركيزة مثالية للكشف عن ANA 1. الكشف عن ANA في مصل الدم البشري هو أداة مهمة لفحص أمراض النسيج الضام، ومعهد التمويل الدولي هو الأسلوب مرجعية لANA اختبار 1. مؤخرا، تم استبدال معهد التمويل الدولي على التهاب الكبد-2 في الخلايا المناعية بعض المختبرات مع مستضد محددة وأساليب متعددة. بسبب المخاوف من نتائج سلبية كاذبة وانعدام الشفافية للأطباء، والكلية الأمريكية لأمراض الروماتيزم شكلت فرقة العمل التي خلصت إلى أن معهد التمويل الدولي باستخدام خلايا التهاب الكبد-2 يجب أن يكون &quot;المعيار الذهبي&quot; لفحص ANA 1. نظرا لطبيعة الشخصية للANA الفحص ونوعية التهاب الكبد-2 الخلايا فيtegral إلى تقارير دقيقة واثقة من النتائج. وجود عدد كبير من الخلايا الإنقسامية، مورفولوجيا الخلايا الأمثل، confluency كافية، والتعبير عن مستضدات ذات الصلة أهمية خاصة. يقدم معهد التمويل الدولي والتعرف على نمط كأداة مهمة للمساعدة في تشخيص المريض. فهم أهمية أنماط مختلفة تمكن الأطباء والعاملين في المختبرات المناسبة لأداء اختبار المتابعة لتأكيد التشخيص. على سبيل المثال، يمكن أن يحدث متجانسة نمط ANA بحضور مكافحة dsDNA والأجسام المضادة أو لونين، وربما تترافق مع الذئبة الحمامية الجهازية (SLE) 3. من الجانب الآخر، وصفت مؤخرا أن يسمى كثيفة نمط الأرقط غرامة (DFS) التي ينظر اليها عادة في ما يصل إلى 12٪ من عينات روتينية، ومعظمها ارتبطت الأجسام المضادة للDFS70. هذه الأجسام المضادة، عندما وجدت في عزلة (دون أخرى ANA بأمراض محددة) لا يرتبط مع الأمراض الروماتيزمية المناعة الذاتية الجهازية &lt;سوب&gt; 4-9. الاختبار التأكيدي بذلك عن الأجسام المضادة لمكافحة DFS70 يمكن أن تساعد في الحد من غير الضروري اختبار رد الفعل، وتقديم وفورات كبيرة في التكاليف، وتخفيف القلق المريض. بالنظر إلى أن معهد التمويل الدولي هو أول منهجية الفحص للكشف عن الأجسام المضادة الخط، فإنه من الأهمية بمكان أن يفهم كيف للمستخدم اختيار الكواشف وركائز الأنسجة يمكن أن تؤثر على النتائج. منذ تقنية معهد التمويل الدولي هو ذاتي بطبيعتها، فمن المهم أن الكواشف المستخدمة توفير أعلى نوعية النتائج. هذا الهدف من هذا البروتوكول الفيديو هو تعريف المستخدم مع الخطوات الصحيحة اللازمة لأداء الأسلوب معهد التمويل الدولي، والأنماط الشائعة المرتبطة ANA، وإدخال التطورات الجديدة التي يمكن تبسيط سير العمل وتوحيد النتائج المختبرية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="753">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:252px;">NOVA Lite HEp-2 IgG (DAPI conjugate)</td>
			<td style="width:189px;">INOVA Diagnostics</td>
			<td style="width:135px;">708102</td>
			<td style="width:179px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">NOVA View Instrument</td>
			<td>INOVA Diagnostics</td>
			<td>NV2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">QUANTA Link Workstation</td>
			<td>INOVA Diagnostics</td>
			<td>LINK010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">QUANTA Link Workstation License</td>
			<td>INOVA Diagnostics</td>
			<td>LINK001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Barcode Scanner</td>
			<td>INOVA Diagnostics</td>
			<td>LINK019</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

anti-nuclear antibody screening using hep-2 cells

الكلية الأمريكية لأمراض الروماتيزم في بيان موقف اختبار ANA ينص على استخدام IIF كأسلوب المعيار الذهبي لفحص ANA 1. على الرغم من أن معهد التمويل الدولي هو اختبار الفحص ممتازة في أيدي الخبراء، والصعوبات التقنية لمعالجة وقراءة الشرائح معهد التمويل الدولي - مثل تجهيز العمل المكثف الشرائح، قراءة دليل، والحاجة إلى ذوي الخبرة والتقنيين المدربين واستخدام غرفة مظلمة - جعل الأسلوب معهد التمويل الدولي من الصعب احتواؤها في سير العمل، والمختبرات الآلي الحديثة. الخطوة الأولى والحاسمة تجاه جودة عالية ANA الفحص هو تجهيز الشريحة حذرا. هذا الإجراء هو العمل المكثف، ويتطلب الفهم الكامل لهذه العملية، وكذلك الانتباه إلى التفاصيل والخبرة. يتم تنفيذ القراءة الشريحة بواسطة المجهر الفلورسنت في غرف مظلمة، ويتم ذلك عن طريق التقنيين المدربين الذين معتادا على أنماط مختلفة، في سياق دورة الخليةومورفولوجية البيني وتقسيم الخلايا. شريطة أن معهد التمويل الدولي هو أول أداة فحص خط التنمية الزراعية والريفية، وفهم الخطوات لتنفيذ هذه التقنية بشكل صحيح أمر بالغ الأهمية. مؤخرا، تم تطوير أنظمة التصوير الرقمي للقراءة الآلية من الشرائح معهد التمويل الدولي. هذه الأنظمة، مثل NOVA مشاهدة الآلي نيون مجهر، وقد صممت لتبسيط سير العمل الروتينية معهد التمويل الدولي. عرض NOVA يكتسب ومخازن عالية الدقة الصور الرقمية من الآبار، وبالتالي فصل الحصول على الصور من التفسير؛ وينظر إلى الصور وتفسيرها على شاشات الكمبيوتر عالية الدقة. فإنه يخزن الصور كمرجع في المستقبل، وتدعم تفسير المشغل من خلال توفير البيانات الفلورسنت شدة الضوء على الصور. كما أنه يصنف مبدئيا النتائج بأنها إيجابية أو سلبية، ويوفر نمط الاعتراف للعينات الإيجابية. وباختصار، فإنه يلغي الحاجة إلى غرفة مظلمة، وبأتمتة ويبسط readi معهد التمويل الدولينانوغرام / تفسير سير العمل. الأهم من ذلك، لأنه يزيد من الاتساق بين القراء والقراءات. علاوة على ذلك، مع استخدام الشرائح barcoded، يتم استبعاد أخطاء النسخ من خلال توفير إمكانية التتبع وتحديد عينة إيجابية المريض. هذا يؤدي إلى زيادة تكامل البيانات وسلامة المريض. الهدف العام من هذا الفيديو هو للتدليل على الإجراء معهد التمويل الدولي، بما في ذلك تجهيز الشريحة، والتعرف على أنماط معهد التمويل الدولي المشترك، وإدخال التطورات الجديدة إلى تبسيط ومواءمة هذه التقنية.

عند تقييم نتائج تلطيخ خلية لالتهاب الكبد-2، خمسة أنماط النووية الكبرى هي الأكثر شيوعا: متجانسة، الأرقط، السنترومير، نويي، والنقاط النووية. هذه الأنماط هي نتيجة الأجسام المضادة ملزمة للهيئات المكونة محددة من النواة. على الرغم من أن اختبار ANA غير محددة لهياكل النووية، ويمكن أيضا أن يلاحظ أنماط حشوية المرتبطة الأجسام المضادة ضد الهياكل حشوية. في بعض الحالات، قد يكون العديد من الأجسام المضادة الموجودة في العينة، ويمكن أن تظهر الصورة باعتبارها نمط مختلط. هناك غيرها، لاحظ كثير من الأحيان أقل، وغالبا ما أنماط محددة دورة الخلية التي يمكن الكشف عنها بواسطة الأسلوب معهد التمويل الدولي؛ مؤخرا، وقد وصفت ما يسمى كثيفة نمط الأرقط مع غرامة أهمية سريرية خاصة في بعض الأمصال إيجابية ANA. نمط متجانس لتحديد نمط متجانس، تفحص جيدا وتحديد الإنقسامية أو الفاصلالخلايا. لونين مكثف من الخلايا الإنقسامية (الشكل 2، البرتقال السهم) يسلك الصلبة، مضان موحدة والتي غالبا ما تكون أكثر وضوحا مما كانت عليه في خلية يستريح nuclei.In نمط متجانس، ويستريح الخلايا المعرض موحدة، مضان منتشر للنواة بأكملها (الشكل 2، السهم الأبيض). هذا النمط مميزة وغالبا ما يكون نتيجة لأجسام مضادة لمكافحة dsDNA و10. نمط الأرقط في نمط الأرقط الخشنة، تظهر الخلايا الإنقسامية أي تلطيخ للمناطق الكروموسومات المختصرة (الشكل 3، البرتقال السهم). الخلايا الحبيبية مضان يستريح تظهر في جميع أنحاء نواة بأكملها. والتنقيط النووية يمكن تعريفها بأنها الخشنة أو الغرامة. نمط التنقيط الخشنة وغالبا ما يكون نتيجة لمكافحة-SM ومكافحة RNP 11. في نمط الأرقط غرامة، تظهر الخلايا يستريح التنقيط الغرامة أو منتشر في جميع أنحاء نوى، وعادة في زي دistribution (الشكل 4، السهم الأبيض). نمط الأرقط غرامة وغالبا ما يكون نتيجة لمكافحة SSAand مكافحة SSB 12. الكثيفة مبقع الجميلة نمط من المسلم به الآن أن كثيفة نمط الأرقط غرامة (DFS) هو أمر شائع في الفحوصات الروتينية، وبقدر 12٪ من العينات إيجابية لمكافحة الأجسام المضادة DFS70. ومع ذلك، فإن هذه الأجسام المضادة، عندما وجدت في عزلة، لا يرتبط مع الأمراض الروماتيزمية المناعة الذاتية الجهازية 4 -6. هذه الأجسام المضادة هي السائدة في الأفراد والمرضى واضعة أمراض لا علاقة لها التنمية الزراعية والريفية 6 صحية. الاختبار التأكيدي لأجسام مضادة لمكافحة DFS70 يمكن أن تساعد في الحد من غير الضروري اختبار رد الفعل، وتقديم وفورات كبيرة في التكاليف، وتخفيف القلق المريض. منذ نمط DFS من الصعب تحديد وANA الإيجابية يمكن أن يسبب القلق لكل من المرضى والأطباء، فمن المستحسن للغاية لإجراء اختبار تأكيدي بعد identi<html> fying نمط موح من الأجسام المضادة المقاومة للDFS70 لتوضيح الأهمية السريرية لANA positivty 5،6. في هذا النمط، والخلايا الإنقسامية (الشكل 5 والبرتقالي السهم) تظهر تلطيخ إيجابية الأرقط من لونين الطورية، في حين يستريح نواة الخلية (الشكل 5، السهم الأبيض) المعرض بقع غرامة وزعت بشكل موحد في جميع أنحاء النواة. السنترومير نمط لتحديد نمط السنترومير، مسح الآبار وتحديد الإنقسامية أو تقسيم الخلايا. في الخلايا الإنقسامية (الشكل 6، البرتقال السهم)، وهذه البقع تصبح منفصلة مرتبطة ارتباطا وثيقا في ما غالبا ما يوصف بأنه &quot;شريط الطورية&quot;. في نمط السنترومير، ويستريح الخلايا (الشكل 6، السهم الأبيض) تظهر ما يقرب من 40-60 بقع منفصلة موزعة في جميع أنحاء نوى. نمط السنترومير هو نتيجة لمكافحة CENP A، B، C الأجسام المضادة 13. خطوة &quot;&gt; نمط نويي وترتبط بعض أنماط نويي مع تلطيخ حشوية منتشر في الخلايا الإنقسامية (الشكل 7، البرتقال السهم) والمنطقة الكروموسومات السلبية، في حين عرض أنماط أخرى nucleolear تلطيخ إيجابية في المنطقة الكروموسومات. ويرتبط هذا النمط نويي مع تلطيخ متجانسة أو الأرقط من نويات (الشكل 7، السهم الأبيض)، جنبا إلى جنب مع ضعف الأرقط أو تلطيخ متجانسة من جبلة النواة. وترتبط هذه الأنماط مع مكافحة الحمض النووي الريبي بوليميراز الثالث، ومكافحة fibrillarin، anti-Th/To وanti-PM/Scl الأجسام المضادة 14،15. دوت النووية نمط ويرتبط نمط نقطة النووية مع الخلايا السلبية الطورية الإنقسامية (الشكل 8 والبرتقالي السهم) ومع عدد قليل من بقع منفصلة في نواة الخلية يستريح (الشكل 8، السهم الأبيض). هذا النمط مميزة وغالبا ما يكون نتيجة لSP-100، الرابطة الاسلامية، أو P80 الأجسام المضادة كولن. هذه الأجسام المضادة هي على النحو<html> sociated مع التشمع الصفراوي الابتدائي والتهاب الكبد الذاتية 16. <img alt="الشكل 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51211/51211fig1highres.jpg" width="500" /> . الرقم 1 السيطرة السلبية (إلى اليسار): خلايا عرضه انخفاض مستوى مضان غير محددة، ولكن لا تلطيخ النووية الرقابة المحددة الإيجابية (اليمين): عرض خلايا التفاح الأخضر مضان النووية. <img alt="الرقم 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51211/51211fig2highres.jpg" width="500" /> الشكل 2. نمط متجانسة. الخلايا الميتوزى (orangearrow) تظهر مضان الصلبة. تظهر الخلايا يستريح حتى، وتلطيخ منتشر (whitearrow). <html> &quot;العرض =&quot; 500 &quot;/&gt; الرقم 3. الأرقط الخشنة النمط. الخلايا الميتوزى (السهم البرتقالي) تظهر تلطيخ السلبية. تظهر الخلايا يستريح وصمة عار الأرقط متميزة (السهم الأبيض). <img alt="الرقم 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51211/51211fig4highres.jpg" width="500" /> الشكل 4. نمط الجميلة الأرقط. الخلايا الميتوزى (السهم البرتقالي) تظهر تلطيخ السلبية. تظهر الخلايا يستريح على تلطيخ الأرقط غرامة متميزة (السهم الأبيض). <img alt="الرقم 5" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51211/51211fig5highres.jpg" width="500" /> الرقم 5. الكثيفة نمط غرامة الأرقط. الخلايا الميتوزى (السهم البرتقالي) تظهر تلطيخ الصلبة الحبيبية غرامة. تظهر الخلايا يستريح غرامة جدا، وصمة عار الأرقط منتشر (whitearrow). ogether.within صفحة = &quot;دائما&quot;&gt; <img alt="الرقم 6" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51211/51211fig6highres.jpg" width="500" /> الرقم 6. نمط السنترومير. الخلايا الميتوزى (orangearrow) عرض موحد، بقع منفصلة. يستريح الخلايا (whitearrow) يظهر بقع منفصلة 40-60 في نواة الخلية. <img alt="الرقم 7" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51211/51211fig7highres.jpg" width="500" /> الرقم 7. نمط نويي. الخلايا الميتوزى (orangearrow) تظهر مجموعات كبيرة اعتبارا من تلطيخ الحبيبية. يستريح الخلايا nucleishows مضان في نويات (whitearrow). <img alt="الرقم 8" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51211/51211fig8highres.jpg" width="500" /> الرقم 8. نمط نقطة النووية. الخلايا الميتوزى (orangearrow) تظهر سلبية. تظهر الخلايا يستريح بضع discrبقع مؤسسة التدريب الأوروبية في النواة (whitearrow). بالإضافة إلى ذلك، فإن نمط نقطة nucelar يمكن أن تتعايش مع تلطيخ حشوية المرتبطة الأجسام المضادة لمستضدات الميتوكوندريا (السهم الأحمر).

Watch this Scientific Journal Video about Anti-Nuclear Antibody Screening Using HEp-2 Cells at JoVE.com

Anti-Nuclear Antibody Screening Using HEp-2 Cells

وقد جرت العادة على استخدامها مناعي غير المباشرة (معهد التمويل الدولي) فحوصات للكشف عن الأجسام المضادة للنواة (ANA) في مصل الدم البشري. وجود هذه الأجسام المضادة يمكن أن تساعد في تشخيص الأمراض الروماتيزمية المناعة الذاتية الجهازية (التنمية الزراعية والريفية). يوضح هذا البروتوكول كيفية تنفيذ الفعال للتقنية معهد التمويل الدولي للكشف عن الأجسام المضادة هذه بدقة.

مكافحة النووية عن طريق فحص الأجسام المضادة التهاب الكبد-2 خلايا

The American College of Rheumatology position statement on ANA testing stipulates the use of IIF as the gold standard method for ANA screening1. Although ...

Research

JoVE Journal

Biology

Live Dissection of Drosophila Embryos: Streamlined Methods for Screening Mutant Collections by Antibody Staining

Live Dissection of Drosophila Embryos: Streamlined Methods for Screening Mutant Collections by Antibody Staining

تعيش تشريح ذبابة الفاكهة الأجنة : طرق مبسطة للفحص من قبل مجموعات المسخ تلطيخ جسم

Drosophila embryos between stages 14 and 17 of embryonic development can be readily dissected to generate "fillet" preparations.  In these preparations, ...

MISSION esiRNA for RNAi Screening in Mammalian Cells

esiRNA بعثة لفحص رني في خلايا الثدييات

RNA interference (RNAi) is a basic cellular mechanism for the control of gene expression. RNAi is induced by short double-stranded RNAs also known as ...

MISSION LentiPlex Pooled shRNA Library Screening in Mammalian Cells

LentiPlex بعثة مجمع shRNA الفرز مكتبة في خلايا الثدييات

RNA interference (RNAi) is an intrinsic cellular mechanism for the regulation of gene expression. Harnessing the innate power of this system enables us to ...

Conversion of a Capture ELISA to a Luminex xMAP Assay using a Multiplex Antibody Screening Method

تحويل لالتقاط ELISA لفحص xMAP Luminex باستخدام فحص الجسم المضاد الطريقة ملتيبليكس

The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) has long been the primary tool for detection of analytes of interest in biological samples for both life ...

High-throughput Functional Screening using a Homemade Dual-glow Luciferase Assay

الإنتاجية العالية فحص وظيفية باستخدام محلية الصنع ثنائي توهج luciferase الفحص

We present a rapid and inexpensive high-throughput screening protocol to identify transcriptional regulators of alpha-synuclein, a gene associated with ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

الاستقراء وتحليل الظهارية الوسيطة الانتقالية ل

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Antibody Staining in C. Elegans Using &quot;Freeze-Cracking&quot;

Antibody Staining in C. Elegans Using "Freeze-Cracking"

تلوين الأجسام المضادة في<em&gt; C. ايليجانس</em&gt; عن طريق &quot;تجميد تكسير&quot;

To stain C.  elegans with antibodies, the relatively impermeable cuticle must be  bypassed by chemical or mechanical methods.  "Freeze-cracking" is one ...

High-throughput Screening for Chemical Modulators of Post-transcriptionally Regulated Genes

الإنتاجية العالية للكشف عن المغيرون الكيميائية من الجينات المشاركة ما بعد transcriptionally الخاضعة للرقابة

Both transcriptional and post-transcriptional regulation have a profound impact on genes expression. However, commonly adopted cell-based screening assays ...

Identification of Kinase-substrate Pairs Using High Throughput Screening

تحديد أزواج كيناز الركيزة عن طريق فحص إنتاجية عالية


We have developed a screening platform to identify dedicated human protein kinases for phosphorylated substrates which can be used to elucidate novel ...

Multi-enzyme Screening Using a High-throughput Genetic Enzyme Screening System

متعدد انزيم الفحص باستخدام عالية الإنتاجية نظام فحص انزيم الوراثية

The recent development of a high-throughput single-cell assay technique enables the screening of novel enzymes based on functional activities from a ...