Name: anti-nuclear antibody screening using hep-2 cells
Uploaded: 2014-06-23T18:15:00
Duration: 13 min 1 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Anti-Nuclear Antibody Screening Using HEp-2 Cells at JoVE.com

हम उसे विशेषज्ञ तकनीकी समीक्षा के लिए IIF प्रयोग और कैरोल Buchner प्रदर्शन के लिए Cassandra ब्रायंट धन्यवाद.

1. तैयारी और सब्सट्रेट चयन नमूना <ol><li> पैकेजिंग से अभिकर्मकों निकालें और प्रत्येक आइटम के कमरे के तापमान पर आने के लिए अनुमति देते हैं. अभिकर्मकों तैयार करें और दिशा डालने के अनुसार रोगी सीरा पतला. नोट: नोवा लाइट स्लाइड barcoded कर रहे हैं और आसानी से प्रयोगशाला सूचना प्रणाली एलआईएस के साथ संयोजन के रूप में स्वचालित प्रणाली में एकीकृत किया जा सकता है. इस प्रक्रिया का मार्गदर्शन स्लाइड प्रसंस्करण दिखाता है; उच्च throughput प्रयोगशालाओं, हालांकि, स्वचालित स्लाइड प्रसंस्करण के उपकरण के लिए विकल्प चुन सकते हैं. </li></ol> नियंत्रण और नमूनों की 2. इसके अलावा <ol><li> सकारात्मक नियंत्रण और उचित स्लाइड वेल्स को नकारात्मक नियंत्रण की 1 बूंद की 1 बूंद बांटना. शेष कुओं को पतला रोगी सीरम की पिपेट 20-25 μl. एक समय में एक स्लाइड प्रक्रिया. </li><li> तल पर एक नम कागज तौलिया के साथ एक धुंधला कंटेनर में स्लाइड (ओं) रखें. कंटेनर कवर और 30 मिनट के लिए स्लाइड (ओं) सेते हैं. नोट: उमस भरी परिस्थितियों होगाबाहर सुखाने से सब्सट्रेट रोका जा सके. कुओं के सूखने artifactual धुंधला हो सकती थी. इस ऊष्मायन अवधि के दौरान, रोगी के सीरम में परमाणु विरोधी एंटीबॉडी अच्छी तरह से प्रत्येक पर तय कर रहे हैं कि कोशिकाओं के एंटीजन को बाध्य होगा. </li><li> ऊष्मायन अवधि के बाद, धोने बफर के एक सौम्य धारा का उपयोग सीरम बंद कुल्ला. सब्सट्रेट हानिकारक से बचने और वेल्स के बीच नमूने के पार से अधिक, कोण स्लाइड को रोकने के क्रम में थोड़ा कुओं पर सीधे धारा निर्देशन से बचने के लिए. अतिरिक्त धोने बफर बंद नल और लगभग 5 मिनट के लिए धोने बफर युक्त एक Coplin जार में स्लाइड जगह. </li></ol> फ्लोरिसेंट संयुग्म के 3. इसके अलावा <ol><li> एक के बाद एक, धोने बफर से स्लाइड्स निकालें और धीरे अतिरिक्त धोने बफर दूर करने के लिए नल. प्रत्येक कुएं पर (FITC विरोधी मानव आईजीजी लेबल) फ्लोरोसेंट रूप साधना की 1 बूंद लागू करें. Humidified कंटेनर में 30 मिनट के लिए स्लाइड सेते हैं, और धुंधला बदलने के लिए सुनिश्चित होकंटेनर कवर. नोट: एना परीक्षण के लिए, एक आईजीजी एफसी विशिष्ट रूप साधना के उपयोग की सिफारिश की है. संयुग्म प्रकाश के प्रति संवेदनशील है, और कवर humidified वातावरण बनाए रखने के अलावा प्रकाश के संपर्क से स्लाइड्स की रक्षा करेगा. इस ऊष्मायन अवधि के दौरान, संयुग्म सेल एंटीजन को बाध्य कर दिया है कि रोगी के परमाणु विरोधी एंटीबॉडी के लिए बाध्य होगा. इस संयुग्म कुओं में प्रतिदीप्ति की उपस्थिति में परिणाम बंधन. </li><li> कुल्ला और ऊपर वर्णित के रूप में स्लाइड धो लो. </li><li> एक कागज तौलिया पर एक coverslip जगह और coverslip के नीचे किनारे करने के लिए एक सतत लाइन में बढ़ते मध्यम लागू होते हैं. </li><li> धोने बफर से प्रत्येक स्लाइड निकालें और अतिरिक्त धोने बफर दूर करने के लिए धीरे स्लाइड टैप करें. Coverslip के किनारे करने के लिए स्लाइड के निचले किनारे को स्पर्श करें. </li><li> धीरे coverslip पर बढ़ते मध्यम हवा बुलबुला गठन के बिना स्लाइड के शीर्ष किनारे करने के लिए बहती है कि इस तरह से coverslip पर स्लाइड कम है. नोट: सह, बढ़ते मध्यम के इष्टतम राशि का उपयोग भी शामिल है, verslipping सही करने के लिए अभ्यास लेता है कि एक तकनीक है. </li></ol> सकारात्मक और नकारात्मक परिणामों के 4. पहचान मैनुअल व्याख्या <ol><li> देखें एक अंधेरे कमरे में स्थित एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप, साथ स्लाइड. सेल वितरण और प्रतिदीप्ति की एकरूपता का आकलन करने के लिए एक 20X या 25x उद्देश्य के साथ पूरे अच्छी तरह से स्कैनिंग प्रदर्शन </li><li> सकारात्मकता और पैटर्न के बारे में अंतिम व्याख्या करने के लिए एक 40x उद्देश्य के लिए स्विच. </li><li> सकारात्मक और नकारात्मक नियंत्रण को देखो. 1 से 4 + से एक जेट ग्रेडिंग पैमाने का उपयोग करते हुए ग्रेड सकारात्मकता. नोट: नकारात्मक नियंत्रण पूरी तरह से अंधेरा नहीं दिख सकता है, लेकिन अक्सर कम स्तर अविशिष्ट प्रतिदीप्ति प्रदर्शित करेगा. सकारात्मक नियंत्रण नाभिक में उज्ज्वल सेब हरी प्रतिदीप्ति (चित्रा 1) प्रदर्शित करेगा. </li></ol> स्वचालित व्याख्या नोट: additi मेंपुस्तिका व्याख्या, भार और नोवा देखें स्वचालित प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप या अन्य स्वचालित डिजिटल इमेजिंग साधन से स्कैन स्लाइड करने पर; कोई darkroom आवश्यक है. उपयुक्त स्लाइड प्रकार का चयन करके एक परियोजना बनाने के बाद, साधन अच्छी तरह से प्रत्येक में कोशिकाओं की उच्च संकल्प डिजिटल छवियों प्राप्त है और भंडार. इसके अतिरिक्त, नोवा देखें फ्लोरोसेंट रोशनी की तीव्रता को मापता है, और सकारात्मक या नकारात्मक रूप में परिणाम categorizes, और सकारात्मक नमूने के लिए पैटर्न मान्यता प्रदान करता है. छवियाँ नोवा देखें परिणाम की अंतिम व्याख्या, संशोधन और पुष्टि के लिए अनुमति देता है, एक उच्च संकल्प कंप्यूटर मॉनीटर पर ऑपरेटर द्वारा देखा जाता है. रिपोर्टों की पुष्टि परिणामों पर उत्पन्न किया जा सकता है. यह परिणाम की व्याख्या करने में सहायता करने का इरादा है के रूप में डिजिटल माइक्रोस्कोपी एक अनुभवी प्रयोगशाला तकनीशियन के साथ संयोजन के रूप में इस्तेमाल किया जाना चाहिए.

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लेखकों गैब्रिएला Lakos, Cassandra ब्रायंट, कैरल Buchner, और अन्ना Eslami INOVA निदान के कर्मचारी हैं.

Screening by HEp-2 cells is a critical first step in the diagnosis of patients with SARD. However, IIF methods lack harmonization. Sources of variability include preparation of slides, conjugate specificity, and efficiency of the fluorescent microscope and experience of the reader. Despite these concerns, IIF remains the &#8220;gold standard&#8221; for ANA testing. HEp-2 cells contain a large variety of autoantigens, and provide the ideal substrate for the detection of these autoantibodies. In some laboratories, IIF has been replaced with solid phase screening methods such as multiplex assay or ELISA. The shortcoming of such tests is that they do not display the full range of antigens to be sufficiently sensitive. As a consequence, true positive patients may be missed which can have deleterious consequences In addition to the issues of treatment delay and wrong diagnosis, additional healthcare costs may occur due to the repetition of confirmatory tests or unnecessary diagnostic investigations. Given the inherent challenges to IIF, it is paramount to perform this technique properly to avoid subjectivity in results.
To ensure accurate interpretation and reporting of results for ANA screening, it is vital to use the highest quality substrate. When selecting a HEp-2 substrate, it is critical that the cells be optimized to express clinically relevant epitopes in their native protein state. Transfected or otherwise modified HEp-2 cell lines may not allow proper antibody-antigen binding. In addition, when several different autoantibodies are present simultaneously, recombinant cells may mask one or more patterns. High number of mitotic cells should also be present in the substrate. Adequate number of mitotic cells allows quick and accurate identification of patterns. 
In addition to the attributes of the substrate, the objective of this video protocol is to describe the IIF technique by showing critical steps such as the addition of sample, slide washing, addition of conjugate, cover slipping, and determination of positive and negative results. Results can be compromised if proper technique is not used for each of these steps. Proper washing is important to remove all unbound antibody. Some patients display very high amounts of autoantibodies and in these cases it is important to wash the serum from the wells such that it does not contaminate other wells. 
Although IIF has traditionally been a very labor intensive and subjective laboratory method, new technologies such as slide processors, barcoded slides and automated digital microscopy can greatly simplify the workflow, increase the consistency and reduce the sources of variability of interpretation.

अवधि antinuclear प्रतिरक्षी (एएनए) डीएनए, प्रोटीन और ribonucleoproteins 1, 2 सहित सेल नाभिक के घटक के साथ प्रतिक्रिया है कि autoantibodies की एक किस्म का वर्णन करता है. एचईपी-2 सेल, एंटीजन के सैकड़ों के साथ एक देशी प्रोटीन सरणी, एना 1 का पता लगाने के लिए एक आदर्श सब्सट्रेट प्रदान करता है. मानव सीरम में एना का पता लगाने के संयोजी ऊतक रोगों के लिए एक महत्वपूर्ण स्क्रीनिंग उपकरण है, और IIF एना 1 के परीक्षण के लिए संदर्भ विधि है. हाल ही में, एचईपी-2 कोशिकाओं पर IIF प्रतिजन विशेष immunoassays और मल्टीप्लेक्स के तरीकों के साथ कुछ प्रयोगशालाओं में जगह दी गई है. कारण झूठी नकारात्मक परिणामों पर चिंता और चिकित्सकों के लिए पारदर्शिता की कमी के कारण, संधिवातीयशास्त्र के अमेरिकी कॉलेज एचईपी-2 कोशिकाओं का उपयोग IIF एना 1 स्क्रीनिंग के लिए &quot;सोने के मानक &#39;होना चाहिए कि निष्कर्ष निकाला है कि एक टास्क फोर्स का गठन किया. कारण एना स्क्रीनिंग के व्यक्तिपरक स्वभाव के कारण, एचईपी-2 कोशिकाओं की गुणवत्ता में हैपरिणाम की सटीक और आत्मविश्वास से रिपोर्टिंग करने tegral. mitotic कोशिकाओं के एक उच्च संख्या की उपस्थिति, इष्टतम सेल आकारिकी, पर्याप्त confluency, और प्रासंगिक एंटीजन की अभिव्यक्ति विशेष रूप से महत्वपूर्ण हैं. IIF पैटर्न मान्यता रोगी निदान में सहायता करने के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण के रूप में कार्य करता है. विभिन्न पैटर्न के महत्व को समझना चिकित्सकों और प्रयोगशाला कर्मियों निदान की पुष्टि करने के लिए उपयुक्त अनुवर्ती परीक्षण प्रदर्शन करने के लिए सक्षम बनाता है. उदाहरण के लिए, सजातीय एना पैटर्न विरोधी dsDNA या chromatin एंटीबॉडी की उपस्थिति में हो सकता है, और प्रणालीगत एक प्रकार का वृक्ष erythematosus (SLE) 3 के साथ जुड़ा हो सकता है. दूसरे पक्ष से, यह हाल ही में सामान्यतः दिनचर्या नमूने के ऊपर से 12% में देखा जाता है कि तथाकथित घने ठीक धब्बेदार पैटर्न (डीएफएस), ज्यादातर विरोधी DFS70 एंटीबॉडी के साथ संबद्ध किया गया है कि वर्णित किया गया है. इन autoantibodies, (अन्य रोग विशेष एना के बिना) अलगाव में पाया जब प्रणालीगत autoimmune आमवाती रोगों के साथ संबद्ध नहीं हैं &lt;&gt; 4-9 समर्थन. विरोधी DFS70 एंटीबॉडी के लिए इस प्रकार पुष्टि परीक्षण, अनावश्यक पलटा परीक्षण कम करने में मदद काफी लागत बचत की पेशकश, और रोगी चिंता कम कर सकते हैं. IIF autoantibodies पता लगाने के लिए पहली पंक्ति स्क्रीनिंग पद्धति है कि यह देखते हुए, यह उपयोगकर्ता अभिकर्मकों और ऊतक substrates के चयन के परिणाम को प्रभावित कर सकते हैं कि कैसे समझता है कि सर्वोपरि है. IIF तकनीक स्वाभाविक व्यक्तिपरक है, यह प्रयोग किया अभिकर्मकों उच्चतम गुणवत्ता परिणाम प्रदान जरूरी है. इस वीडियो प्रोटोकॉल के इस लक्ष्य IIF विधि, एना के साथ जुड़े आम पैटर्न प्रदर्शन करने की जरूरत है सही कदम के साथ उपयोगकर्ता को परिचित करने के लिए, और प्रयोगशाला कार्यप्रवाह को कारगर बनाने और परिणाम मानकीकृत कर सकते हैं जो नई प्रगति का परिचय है.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="753">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:252px;">NOVA Lite HEp-2 IgG (DAPI conjugate)</td>
			<td style="width:189px;">INOVA Diagnostics</td>
			<td style="width:135px;">708102</td>
			<td style="width:179px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">NOVA View Instrument</td>
			<td>INOVA Diagnostics</td>
			<td>NV2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">QUANTA Link Workstation</td>
			<td>INOVA Diagnostics</td>
			<td>LINK010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">QUANTA Link Workstation License</td>
			<td>INOVA Diagnostics</td>
			<td>LINK001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Barcode Scanner</td>
			<td>INOVA Diagnostics</td>
			<td>LINK019</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

anti-nuclear antibody screening using hep-2 cells

एना परीक्षण पर संधिवातीयशास्त्र स्थिति बयान की अमेरिकी कॉलेज एना 1 स्क्रीनिंग के लिए स्वर्ण मानक पद्धति के रूप में IIF के उपयोग के अनुबंध. IIF विशेषज्ञ हाथ में एक उत्कृष्ट स्क्रीनिंग परीक्षा है, प्रसंस्करण और IIF पढ़ने के तकनीकी कठिनाइयों स्लाइड - जैसे श्रम गहन स्लाइड प्रसंस्करण, मैनुअल पढ़ने, अनुभवी लिए की जरूरत है, प्रशिक्षित प्रौद्योगिकीविदों और अंधेरे कमरे के उपयोग के रूप - IIF विधि बनाने आधुनिक, स्वचालित प्रयोगशालाओं के कार्यप्रवाह में फिट करने के लिए मुश्किल. उच्च गुणवत्ता एना स्क्रीनिंग की दिशा में पहला और महत्वपूर्ण कदम सावधान स्लाइड प्रसंस्करण है. यह प्रक्रिया श्रम गहन है, और पूरी प्रक्रिया की समझ है, साथ ही विवरण और अनुभव करने के लिए ध्यान की आवश्यकता है. स्लाइड पढ़ने अंधेरे कमरे में फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी द्वारा किया जाता है, और सेल चक्र के संदर्भ में, विभिन्न पैटर्न के साथ परिचित हैं, जो प्रशिक्षित प्रौद्योगिकीविदों द्वारा किया जाता हैऔर अंतरावस्था और विभाजित कोशिकाओं की आकारिकी. IIF सही ढंग से इस तकनीक का प्रदर्शन करने के लिए कदम को समझने, सार्ड के लिए पहली पंक्ति प्रदर्शन उपकरण प्रदान की है कि महत्वपूर्ण है. हाल ही में, डिजिटल इमेजिंग सिस्टम IIF स्लाइड्स की स्वचालित पढ़ने के लिए विकसित किया गया है. ऐसे नोवा देखें स्वचालित फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के रूप में इन पद्धतियों, दिनचर्या IIF कार्यप्रवाह को कारगर बनाने के लिए तैयार कर रहे हैं. नोवा देखें जिससे व्याख्या से छवि अधिग्रहण को अलग करने, कुओं की उच्च संकल्प डिजिटल छवियों का अधिग्रहण और दुकानों; छवियों उच्च संकल्प कंप्यूटर मॉनिटर पर व्याख्या की एक में देखा जाता है. यह भविष्य में संदर्भ के लिए छवियों को संग्रहीत करता है और छवियों पर फ्लोरोसेंट रोशनी की तीव्रता डेटा उपलब्ध कराने के द्वारा संचालक की व्याख्या का समर्थन करता है. यह भी प्रारंभिक सकारात्मक या नकारात्मक रूप में परिणाम categorizes, और सकारात्मक नमूने के लिए पैटर्न मान्यता प्रदान करता है. संक्षेप में, यह darkroom के लिए की आवश्यकता समाप्त, और automates और IIF readi सुव्यवस्थितएनजी / व्याख्या कार्यप्रवाह. सबसे महत्वपूर्ण बात यह पाठकों और रीडिंग के बीच स्थिरता बढ़ जाती है. इसके अलावा, बारकोड वाले स्लाइड्स के उपयोग के साथ, प्रतिलेखन त्रुटियों नमूना traceability और सकारात्मक रोगी की पहचान कराने के द्वारा समाप्त हो जाते हैं. इस वृद्धि रोगी डेटा अखंडता और सुरक्षा में परिणाम है. इस वीडियो के समग्र लक्ष्य स्लाइड प्रसंस्करण, आम IIF पैटर्न की पहचान है, और इस तकनीक को आसान बनाने और अनुरूप नई प्रगति का परिचय सहित, IIF प्रक्रिया का प्रदर्शन है.

एचईपी-2 के लिए सेल धुंधला परिणामों का मूल्यांकन, पांच प्रमुख परमाणु पैटर्न सबसे अधिक बताया हैं: समरूप, धब्बेदार, गुणसूत्रबिंदु, nucleolar, और परमाणु डॉट्स. इन नमूनों स्वप्रतिरक्षी नाभिक की विशेष घटक के लिए बाध्य करने के परिणाम हैं. एना परीक्षण परमाणु संरचनाओं के लिए विशिष्ट है, cytoplasmic संरचनाओं के खिलाफ autoantibodies के साथ जुड़े cytoplasmic पैटर्न भी देखा जा सकता है. कुछ मामलों में, कई autoantibodies एक नमूने में मौजूद हो सकता है, और छवि एक मिश्रित पैटर्न के रूप में प्रकट हो सकता है. अन्य कम अक्सर देखा, और IIF विधि से पता लगाया जा सकता है कि अक्सर सेल चक्र विशिष्ट पैटर्न हैं; सबसे हाल ही में, विशेष चिकित्सीय महत्व के साथ एक तथाकथित घने ठीक धब्बेदार पैटर्न कुछ एना सकारात्मक सीरा में वर्णित किया गया है. सजातीय पैटर्न एक सजातीय पैटर्न की पहचान करने के लिए, अच्छी तरह से स्कैन और mitotic या विभाजन की पहचानकोशिकाओं. mitotic कोशिकाओं की सघन chromatin (चित्रा 2, नारंगी तीर) अक्सर सजातीय पैटर्न, आराम कोशिकाओं प्रदर्शनी वर्दी, पूरे नाभिक की फैलाना प्रतिदीप्ति (चित्रा nuclei.In विश्राम कक्ष में की तुलना में अधिक स्पष्ट है, जो ठोस, ​​वर्दी प्रतिदीप्ति दर्शाती 2, सफेद तीर). यह विशेषता पैटर्न अक्सर विरोधी dsDNA एंटीबॉडी 10 का परिणाम है. धब्बेदार पैटर्न मोटे धब्बेदार पैटर्न में, mitotic कोशिकाओं गाढ़ा गुणसूत्र क्षेत्रों का कोई धुंधला (चित्रा 3, नारंगी तीर) दिखा. आराम कोशिकाओं पूरे नाभिक भर बारीक प्रतिदीप्ति दिखा रहे हैं. परमाणु speckling मोटे या ठीक के रूप में परिभाषित किया जा सकता है. मोटे speckling पैटर्न अक्सर विरोधी एस.एम. और विरोधी RNP 11 का परिणाम है. ठीक धब्बेदार पैटर्न में, आराम कोशिकाओं को आमतौर पर एक समान विकास में, नाभिक भर में ठीक या फैलाना speckling दिखानेistribution (चित्रा 4, सफेद तीर). ठीक धब्बेदार पैटर्न अक्सर विरोधी SSAand विरोधी एसएसबी 12 का परिणाम है. घने ललित धब्बेदार पैटर्न यह अब घने ठीक धब्बेदार पैटर्न (डीएफएस) नियमित परीक्षण में आम है कि मान्यता प्राप्त है, और नमूने के रूप में ज्यादा के रूप में 12% विरोधी DFS70 autoantibodies के लिए सकारात्मक रहे है. हालांकि, अलगाव में पाया जब इन autoantibodies, प्रणालीगत autoimmune आमवाती रोगों 4 -6 से संबद्ध नहीं हैं. ये एंटीबॉडी स्वस्थ व्यक्तियों और सार्ड 6 के लिए असंबंधित रोगों असर रोगियों में प्रचलित हैं. विरोधी DFS70 एंटीबॉडी के लिए पुष्टि परीक्षण, अनावश्यक पलटा परीक्षण कम करने में मदद काफी लागत बचत की पेशकश, और रोगी चिंता कम कर सकते हैं. डीएफएस पैटर्न की पहचान करने और एना सकारात्मकता दोनों मरीजों और चिकित्सकों के लिए चिंता पैदा कर सकता है मुश्किल है, यह अत्यधिक की पहचान के बाद एक पुष्टि परीक्षण करने की सिफारिश की है<html> एना के नैदानिक ​​महत्व को स्पष्ट करने के लिए विरोधी DFS70 एंटीबॉडी का सूचक एक पैटर्न fying 5,6 positivty. सेल नाभिक (चित्रा 5, सफेद तीर) नाभिक भर में प्रदर्शनी समान रूप से वितरित ठीक speckles के आराम जबकि इस पैटर्न में, mitotic कोशिकाओं (चित्रा 5, नारंगी तीर), मेटाफ़ेज़ chromatin की सकारात्मक धब्बेदार धुंधला दिखा. Centromere पैटर्न , गुणसूत्रबिंदु पैटर्न की पहचान कुओं को स्कैन और mitotic या विभाजित कोशिकाओं की पहचान करने के लिए. Mitotic कोशिकाओं (चित्रा 6, नारंगी तीर) में, इन असतत speckles के निकट से अक्सर एक &quot;मेटाफ़ेज़ बार &#39;के रूप में वर्णित किया जाता है में जुड़े हो जाते हैं. गुणसूत्रबिंदु पैटर्न में, आराम कोशिकाओं (चित्रा 6, सफेद तीर) नाभिक भर में वितरित लगभग 40-60 असतत speckles दिखा. गुणसूत्रबिंदु पैटर्न विरोधी CENP एक का परिणाम है, बी, सी 13 एंटीबॉडी. कदम &quot;&gt; nucleolar पैटर्न अन्य nucleolear पैटर्न गुणसूत्र क्षेत्र की सकारात्मक धुंधला प्रदर्शित करते हुए कुछ nucleolar पैटर्न, mitotic कोशिकाओं में फैलाना cytoplasmic धुंधला (चित्रा 7, नारंगी तीर) और नकारात्मक गुणसूत्र क्षेत्र के साथ जुड़े रहे हैं. nucleolar पैटर्न कमजोर धब्बेदार या nucleoplasm के समरूप धुंधला के साथ, nucleoli के समरूप या धब्बेदार धुंधला (चित्रा 7, सफेद तीर) के साथ जुड़ा हुआ है. इन नमूनों विरोधी शाही सेना पोलीमरेज़ III के साथ जुड़े रहे हैं, विरोधी fibrillarin, anti-Th/To और anti-PM/Scl 14,15 एंटीबॉडी. परमाणु डॉट पैटर्न परमाणु डॉट पैटर्न नकारात्मक मेटाफ़ेज़ mitotic कोशिकाओं (चित्रा 8, नारंगी तीर) के साथ और विश्राम सेल नाभिक में कुछ असतत speckles (8 चित्रा, सफेद तीर) के साथ जुड़ा हुआ है. यह विशेषता पैटर्न अक्सर SP-100, पीएमएल, या P80 कॉलिन autoantibodies का परिणाम है. ये एंटीबॉडी के रूप में कर रहे हैं<html> प्राथमिक पैत्तिक सिरोसिस और autoimmune हैपेटाइटिस 16 के साथ sociated. <img alt="चित्रा 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51211/51211fig1highres.jpg" width="500" /> . चित्रा 1 नकारात्मक नियंत्रण (बाएं): कोशिकाओं गैर विशिष्ट प्रतिदीप्ति कम स्तर है, लेकिन कोई विशिष्ट परमाणु धुंधला प्रदर्शित सकारात्मक नियंत्रण (दाएं):. प्रकोष्ठों सेब हरे परमाणु प्रतिदीप्ति प्रदर्शित करते हैं. <img alt="चित्रा 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51211/51211fig2highres.jpg" width="500" /> चित्रा 2. समरूप पैटर्न. Mitotic कोशिकाओं (orangearrow) ठोस प्रतिदीप्ति दिखा. आराम कोशिकाओं भी, फैलाना धुंधला (whitearrow) दिखा. &quot;चौड़ाई =&quot; 500 &quot;/&gt; चित्रा 3. मोटे धब्बेदार पैटर्न. Mitotic कोशिकाओं (नारंगी तीर) नकारात्मक धुंधला दिखा. आराम कोशिकाओं को एक अलग धब्बेदार दाग (सफेद तीर) दिखा. <img alt="चित्रा 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51211/51211fig4highres.jpg" width="500" /> चित्रा 4. ललित धब्बेदार पैटर्न. Mitotic कोशिकाओं (नारंगी तीर) नकारात्मक धुंधला दिखा. आराम कोशिकाओं एक विशिष्ट ठीक धब्बेदार धुंधला (सफेद तीर) दिखा. <img alt="चित्रा 5" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51211/51211fig5highres.jpg" width="500" /> चित्रा 5. घने ठीक धब्बेदार पैटर्न. Mitotic कोशिकाओं (नारंगी तीर) के ठीक एक बारीक ठोस धुंधला दिखा. आराम कोशिकाओं (whitearrow) एक बहुत ही सुन्दर, फैलाना धब्बेदार दाग दिखा. चित्रा 6. Centromere पैटर्न. Mitotic कोशिकाओं (orangearrow) शो वर्दी, असतत speckles. कोशिकाओं (whitearrow) आराम सेल नाभिक प्रति 40-60 असतत speckles से पता चलता है. <img alt="चित्रा 7" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51211/51211fig7highres.jpg" width="500" /> चित्रा 7. Nucleolar पैटर्न. Mitotic कोशिकाओं (orangearrow) बारीक धुंधला के रूप में बड़े समूहों में दिखाई देते हैं. Nucleoli में आराम कर रही सेल nucleishows प्रतिदीप्ति (whitearrow). <img alt="8 चित्रा" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51211/51211fig8highres.jpg" width="500" /> चित्रा 8. परमाणु डॉट पैटर्न. Mitotic कोशिकाओं (orangearrow) नकारात्मक दिखाई देते हैं. आराम कोशिकाओं कुछ discr दिखानेनाभिक (whitearrow) में ETE speckles. इसके अतिरिक्त, nucelar डॉट पैटर्न mitochondrial एंटीजन (लाल तीर) को autoantibodies के साथ जुड़े cytoplasmic धुंधला के साथ साथ रह सकते हैं.

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