Name: adaptation of semiautomated circulating tumor cell (ctc) assays for clinical and preclinical research applications
Uploaded: 2014-02-28T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Adaptation of Semiautomated Circulating Tumor Cell CTC Assays for Clinical and Preclinical Research Applications at JoVE.com

وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من معهد أونتاريو للبحوث السرطان (# 08NOV230)، ومؤسسة كندا للإبداع (# 13199)، سرطان البروستاتا كندا، يانسن الأورام، وبرنامج سرطان الإقليمي لندن، ودعم الجهات المانحة من جون ودونا بريستول من خلال مؤسسة العلوم الصحية في لندن (لALA). يتم اعتماد الحد الأدنى للانفجار من قبل فريدريك بانتينغ وتشارلز أفضل كندا العليا منحة جائزة الدكتوراه. ويدعم ALA من قبل جائزة الباحث جديد CIHR وجائزة الباحث في وقت مبكر من وزارة أونتاريو للبحوث والابتكار.

أجريت جميع الدراسات الإنسانية وصفها في هذه المخطوطة في إطار البروتوكولات التي وافق عليها مجلس أخلاقيات البحوث البشرية بجامعة الغربية. أجريت جميع الدراسات الحيوانية وفقا لتوصيات المجلس الكندي للرعاية الحيوان، في إطار البروتوكولات التي وافقت عليها جامعة ويسترن الف...

<ol>
	<li>Siegel, R., Naishadham, D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics.">Cancer statistics.</a> 63 (1), 11-30 (2013).</li><li>Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissemination+and+growth+of+cancer+cells+in+metastatic+sites.">Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites.</a> Nat. Rev. Cancer. 2 (8), 563-572 (2002).</li><li>Pantel, K., Brakenhoff, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+the+metastatic+cascade.">Dissecting the metastatic cascade.</a> Nat. Rev. Cancer. 4 (6), 448-456 (2004).</li><li>Cristofanilli, M., Budd, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells,+disease+progression,+and+survival+in+metastatic+breast+cancer.">Circulating tumor cells, disease progression, and survival in metastatic breast cancer.</a> New Engl. J. Med. 351 (8), 781-791 (2004).</li><li>De Bono, J. S., Scher, H. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells+predict+survival+benefit+from+treatment+in+metastatic+castration-resistant+prostate+cancer.">Circulating tumor cells predict survival benefit from treatment in metastatic castration-resistant prostate cancer.</a> Clin. Cancer Res. 14 (19), 6302-6309 (2008).</li><li>Cohen, S. J., Ja Punt, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+significance+of+circulating+tumor+cells+in+patients+with+metastatic+colorectal+cancer.">Prognostic significance of circulating tumor cells in patients with metastatic colorectal cancer.</a> Ann. Oncol. 20 (7), 1223-1229 (2009).</li><li>Hayes, D. F., Cristofanilli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells+at+each+follow-up+time+point+during+therapy+of+metastatic+breast+cancer+patients+predict+progression-free+and+overall+survival.">Circulating tumor cells at each follow-up time point during therapy of metastatic breast cancer patients predict progression-free and overall survival.</a> Clin. Cancer Res. 12 (14), 4218-4224 (2006).</li><li>Budd, G. T., Cristofanilli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells+versus+imaging--predicting+overall+survival+in+metastatic+breast+cancer.">Circulating tumor cells versus imaging--predicting overall survival in metastatic breast cancer.</a> Clin. Cancer Res. 12 (21), 6403-6409 (2006).</li><li>Olmos, D., Arkenau, H. -. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumour+cell+(CTC)+counts+as+intermediate+end+points+in+castration-resistant+prostate+cancer+(CRPC):+a+single-centre+experience.">Circulating tumour cell (CTC) counts as intermediate end points in castration-resistant prostate cancer (CRPC): a single-centre experience.</a> Ann. Oncol. 20 (1), 27-33 (2009).</li><li>De Bono, J. S., Scher, H. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells+predict+survival+benefit+from+treatment+in+metastatic+castration-resistant+prostate+cancer.">Circulating tumor cells predict survival benefit from treatment in metastatic castration-resistant prostate cancer.</a> Clin. Cancer Res. 14 (19), 6302-6309 (2008).</li><li>Allan, A. L., Keeney, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cell+analysis:+technical+and+statistical+considerations+for+application+to+the+clinic.">Circulating tumor cell analysis: technical and statistical considerations for application to the clinic.</a> J. Oncol. 2010, 426218 (2010).</li><li>Lowes, L. E., Goodale, D., Keeney, M., Allan, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image+cytometry+analysis+of+circulating+tumor+cells.">Image cytometry analysis of circulating tumor cells.</a> Methods Cell Biol. 102, 261-290 (2011).</li><li>Lianidou, E. S., Markou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells+in+breast+cancer:+detection+systems,+molecular+characterization,+and+future+challenges.">Circulating tumor cells in breast cancer: detection systems, molecular characterization, and future challenges.</a> Clin. Chem. 57 (9), 1242-1255 (2011).</li><li>Alix-Panabi&#232;res, C., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells:+liquid+biopsy+of+cancer.">Circulating tumor cells: liquid biopsy of cancer.</a> Clin. Chem. 59 (1), 110-118 (2013).</li><li>Parkinson, D. R., Dracopoli, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Considerations+in+the+development+of+circulating+tumor+cell+technology+for+clinical+use.">Considerations in the development of circulating tumor cell technology for clinical use.</a> J. Transl. Med. 10, 138 (2012).</li><li>Lowes, L. E., Hedley, B. D., Keeney, M., Allan, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=User-defined+protein+marker+assay+development+for+characterization+of+circulating+tumor+cells+using+the+CellSearch+system.">User-defined protein marker assay development for characterization of circulating tumor cells using the CellSearch system.</a> Cytomet. A. 81 (11), 983-995 (2012).</li><li>Fehm, T., M&#252;ller, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HER2+status+of+circulating+tumor+cells+in+patients+with+metastatic+breast+cancer:+a+prospective,+multicenter+trial.">HER2 status of circulating tumor cells in patients with metastatic breast cancer: a prospective, multicenter trial.</a> Breast Cancer Res. Treat. 124 (2), 403-412 (2010).</li><li>Liu, Y., Liu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells+in+HER2-positive+metastatic+breast+cancer+patients:+a+valuable+prognostic+and+predictive+biomarker.">Circulating tumor cells in HER2-positive metastatic breast cancer patients: a valuable prognostic and predictive biomarker.</a> BMC Cancer. 13, 202 (2013).</li><li>Slamon, D. J., Leyland-Jones, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+chemotherapy+plus+a+monoclonal+antibody+against+HER2+for+metastatic+breast+cancer+that+overexpresses+HER2.">Use of chemotherapy plus a monoclonal antibody against HER2 for metastatic breast cancer that overexpresses HER2.</a> New Engl. J. Med. 344 (11), 783-792 (2001).</li><li>Marty, M., Cognetti, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Randomized+phase+II+trial+of+the+efficacy+and+safety+of+trastuzumab+combined+with+docetaxel+in+patients+with+human+epidermal+growth+factor+receptor+2-positive+metastatic+breast+cancer+administered+as+first-line+treatment:+the+M77001+study+group.">Randomized phase II trial of the efficacy and safety of trastuzumab combined with docetaxel in patients with human epidermal growth factor receptor 2-positive metastatic breast cancer administered as first-line treatment: the M77001 study group.</a> J. Clin. Oncol. 23 (19), 4265-4274 (2005).</li><li>Slamon, D., Eiermann, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adjuvant+trastuzumab+in+HER2-positive+breast+cancer.">Adjuvant trastuzumab in HER2-positive breast cancer.</a> New Engl. J. Med. 365 (14), 1273-1283 (2011).</li><li>Welch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+considerations+for+studying+cancer+metastasis+in+vivo.">Technical considerations for studying cancer metastasis in vivo.</a> Clin. Exp. Metast. 15 (3), 272-306 (1997).</li><li>Goodale, D., Phay, C., Postenka, C. O., Keeney, M., Allan, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+tumor+cell+dissemination+patterns+in+preclinical+models+of+cancer+metastasis+using+flow+cytometry+and+laser+scanning+cytometry.">Characterization of tumor cell dissemination patterns in preclinical models of cancer metastasis using flow cytometry and laser scanning cytometry.</a> Cytometry A. 75 (4), 344-355 (2009).</li><li>Gorges, T. M., Tinhofer, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumour+cells+escape+from+EpCAM-based+detection+due+to+epithelial-to-mesenchymal+transition.">Circulating tumour cells escape from EpCAM-based detection due to epithelial-to-mesenchymal transition.</a> BMC Cancer. 12, 178 (2012).</li><li>Eliane, J. -. P., Repollet, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+serial+changes+in+circulating+human+breast+cancer+cells+in+murine+xenograft+models.">Monitoring serial changes in circulating human breast cancer cells in murine xenograft models.</a> Cancer Res. 68 (14), 5529-5532 (2008).</li><li>Flores, L. M., Kindelberger, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+the+yield+of+circulating+tumour+cells+facilitates+molecular+characterisation+and+recognition+of+discordant+HER2+amplification+in+breast.">Improving the yield of circulating tumour cells facilitates molecular characterisation and recognition of discordant HER2 amplification in breast.</a> 102 (10), 1495-1502 (2010).</li><li>Sieuwerts, A. M., Kraan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characterization+of+circulating+tumor+cells+in+large+quantities+of+contaminating+leukocytes+by+a+multiplex+real-time+PCR.">Molecular characterization of circulating tumor cells in large quantities of contaminating leukocytes by a multiplex real-time PCR.</a> Breast Cancer Res. Treat. 118 (3), 455-468 (2009).</li><li>Cohen, S. J., Ja Punt, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+circulating+tumor+cells+to+tumor+response,+progression-free+survival,+and+overall+survival+in+patients+with+metastatic+colorectal+cancer.">Relationship of circulating tumor cells to tumor response, progression-free survival, and overall survival in patients with metastatic colorectal cancer.</a> J. Clin. Oncol. 26 (19), 3213-3221 (2008).</li><li>Allard, W. J., Matera, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+cells+circulate+in+the+peripheral+blood+of+all+major+carcinomas+but+not+in+healthy+subjects+or+patients+with+nonmalignant+diseases.">Tumor cells circulate in the peripheral blood of all major carcinomas but not in healthy subjects or patients with nonmalignant diseases.</a> Clin. Cancer Res. 10 (20), 6897-6904 (2004).</li><li>Thiery, J. P., Acloque, H., Huang, R. Y. J., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial-mesenchymal+transitions+in+development+and+disease.">Epithelial-mesenchymal transitions in development and disease.</a> Cell. 139 (5), 871-890 (2009).</li><li>Yang, J., Weinberg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Epithelial-mesenchymal+transition:+at+the+crossroads+of+development+and+tumor+metastasis.">A Epithelial-mesenchymal transition: at the crossroads of development and tumor metastasis.</a> Dev. Cell. 14 (6), 818-829 (2008).</li><li>Gradilone, A., Raimondi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumour+cells+lacking+cytokeratin+in+breast+cancer:+the+importance+of+being+mesenchymal.">Circulating tumour cells lacking cytokeratin in breast cancer: the importance of being mesenchymal.</a> J. Cell. Mol. Med. 15 (5), 1066-1070 (2011).</li><li>K&#246;nigsberg, R., Obermayr, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+EpCAM+positive+and+negative+circulating+tumor+cells+in+metastatic+breast+cancer+patients.">Detection of EpCAM positive and negative circulating tumor cells in metastatic breast cancer patients.</a> Acta Oncol. 50 (5), 700-710 (2011).</li><li>Kasimir-Bauer, S., Hoffmann, O., Wallwiener, D., Kimmig, R., Fehm, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+stem+cell+and+epithelial-mesenchymal+transition+markers+in+primary+breast+cancer+patients+with+circulating+tumor+cells.">Expression of stem cell and epithelial-mesenchymal transition markers in primary breast cancer patients with circulating tumor cells.</a> Breast Cancer Res. 14 (1), (2012).</li><li>Mego, M., Mani, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+epithelial-mesenchymal+transition-inducing+transcription+factors+in+primary+breast+cancer:+The+effect+of+neoadjuvant+therapy.">Expression of epithelial-mesenchymal transition-inducing transcription factors in primary breast cancer: The effect of neoadjuvant therapy.</a> Int. J. Cancer. 130 (4), 808-816 (2012).</li><li>Yu, M., Bardia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+breast+tumor+cells+exhibit+dynamic+changes+in+epithelial+and+mesenchymal+composition.">Circulating breast tumor cells exhibit dynamic changes in epithelial and mesenchymal composition.</a> Science. 339 (6119), 580-584 (2013).</li><li>Armstrong, A. J., Marengo, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells+from+patients+with+advanced+prostate+and+breast+cancer+display+both+epithelial+and+mesenchymal+markers.">Circulating tumor cells from patients with advanced prostate and breast cancer display both epithelial and mesenchymal markers.</a> Mol. Cancer Res. 9 (8), 997-1007 (2011).</li></ol>

على الرغم من تطوير العديد من التقنيات الجديدة لجنة مكافحة الإرهاب منذ إدخال المغلق في عام 2004، هذه التقنية لا تزال التكنولوجيا المعتمدة فقط سريريا في السوق اليوم، وبالتالي فهو يعتبر المعيار الذهبي الحالي للكشف عن لجنة مكافحة الإرهاب والتعداد. وقد أثبتت هذه المخطوطة ...

في عام 2013 يقدر أن 580350 الأفراد سوف يموت من السرطان وسيتم تشخيص الحالات الجديدة التي 1660290 من هذا المرض في الولايات المتحدة وحدها 1. غالبية هذه الوفيات تحدث لاحقة لتطوير المرض المنتشر 2. النقص الحالي من العلاجات الفعالة في علاج الانبثاث وفهم محدود من تتالي النقيلي يجعل هذه المرحلة من المرض فتاك بدرجة عالية. وقد ثبت وجود الخلايا السرطانية المنتشرة (التدرجي) داخل مجرى الدم لربط مع المرض المنتشر 3. هذه الخلايا هي نادرة للغاية والكشف عنها يدل على البقاء على قيد الحياة عموما في الثدي النقيلي 4، 5 البروستاتا، والقولون والمستقيم سرطان 6. في هؤلاء المرضى، فإن وجود ≥ 5 (الثدي والبروستات) أو ≥ 3 (القولون والمستقيم) التدرجي في 7.5 مل من الدم يدل على التكهن الأكثر فقرا مقارنة مع هؤلاء المرضى أقل أو أي التدرجي كشفها في سامحجم البريد الدم. بالإضافة إلى ذلك، وقد تجلى التغيير في عدد CTC أثناء أو بعد التدخل العلاجي لتكون مفيدة باعتبارها مؤشرا من الاستجابة للعلاج، وغالبا في وقت أقرب مما التقنيات المستخدمة حاليا 7-10. وتشير التقديرات إلى أنه في مرضى السرطان النقيلي، التدرجي تحدث على تردد ما يقرب من 1 CTC في 10 5 -10 7 خلايا الدم وحيدات النوى والمرضى الذين يعانون من مرض في المترجمة، قد يكون هذا التردد حتى أقل (~ 1 في 10 8). طبيعة نادرة من هذه الخلايا يمكن أن تجعل من الصعب دقيق وموثوق كشف وتحليل التدرجي 11. عدة طرق (مراجعة سابقا 12-14) وقد استخدمت لإثراء وكشف هذه الخلايا من خلال استغلال الخصائص التي تميزهم عن مكونات الدم المحيطة. بشكل عام، CTC التعداد هو عملية جزئين الذي يتطلب على حد سواء خطوة التخصيب وخطوة الكشف. تقليديا، خطوات تخصيب تعتمد على الاختلافات في فيزخصائص كال من التدرجي (حجم الخلية، والكثافة، التشوه) أو على البروتين علامة التعبير (أي جزيء التصاق الخلايا الظهارية [EpCAM]، cytokeratin [CK]). بعد تخصيب، والكشف عن لجنة مكافحة الإرهاب لا يمكن أن يؤديها في عدد من الطرق المختلفة، والأكثر شيوعا منها فحوصات الحمض النووي القائم و / أو النهج cytometric. كل من هذه الاستراتيجيات هي فريدة من نوعها، وجود مزايا وعيوب واضحة، إلا أنها تفتقر إلى توحيد جميع؛ ضرورة للدخول في الإعداد السريرية. لذا تم تطوير نظام CellSearch (CSS) لتوفير وسيلة موحدة للكشف وتعداد التدرجي نادر في الدم البشري باستخدام المجهر مضان والتقنيات المعتمدة على الأجسام المضادة 4-6. وتعتبر هذه المنصة حاليا معيار الذهب في لجنة مكافحة الإرهاب والتعداد هو الأسلوب الوحيد المعتمد من قبل هيئة الغذاء والدواء الأمريكية (FDA) لاستخدامها في العيادة 15. المغلق هو منصة اثنين مكون consistinز من، (1) نظام CellTracks AutoPrep (يشار إليها فيما الصك الإعداد)، التي بأتمتة إعداد عينات دم الإنسان، و (2) CellTracks محلل الثاني (يشار إليها كأداة تحليل)، الذي يمسح هذه العينات التالية التحضير. للتمييز التدرجي من تلويث الكريات البيض الصك إعداد توظف الأجسام المضادة بوساطة، والنهج القائم على الفصل المغناطيسي ferrofluid ومضان الفرق تلطيخ. في البداية، ونظام العلامات التدرجي باستخدام الأجسام المضادة للEpCAM مترافق إلى النانوية الحديد. ثم يتم تحضين العينة في مجال مغناطيسي، ويستنشق كل الخلايا غير المسماة. ومعلق الخلايا السرطانية المحدد، وحضنت في مضان وصمة عار الفرق، تتكون الأجسام المضادة من fluorescently المسمى وكاشف تلطيخ النووية. أخيرا، يتم نقل العينة إلى خرطوشة المغناطيسي، ودعا MagNest (المشار إليها فيما يلي باسم الجهاز المغناطيسي)، والشوريanned باستخدام أداة التحليل. يتم استخدام أداة تحليل لمسح عينات استعداد باستخدام مرشحات مضان مختلفة، كل الأمثل لجسيمات الفلورسنت المناسب، وذلك باستخدام عدسة 10X الهدف. ويتم تحديد التدرجي كما الخلايا التي يتم ملزمة لمكافحة EpCAM، ومكافحة عموم CK-فيكوإيريترين (PE) (CK8، 18، و 19)، وصمة عار النووية 4 &#39;،6-diamidino-2-phenylindole (دابي). على العكس، ويتم تحديد الكريات البيض كما تلويث الخلايا التي يتم ملزمة لمكافحة CD45-allophycocyanin (APC) ودابي. بعد المسح الضوئي، يتم عرض الخلايا السرطانية المحتملة المعرفة الكمبيوتر للمستخدم. من هذه الصور، يجب على المستخدم استخدام التحليل النوعي باستخدام معايير محددة والتفضيلية تلطيخ نوقشت أعلاه لتحديد أي الأحداث التدرجي. بالإضافة إلى توفير طريقة موحدة لمكافحة الإرهاب التعداد، المغلق يسمح للالتوصيف الجزيئي للالتدرجي على أساس علامات البروتين من الفائدة. هذا الاستجواب جعلى أن يؤديها على مستوى خلية واحدة، وذلك باستخدام ثيوسيانات فلوريسئين (FITC) قناة مضان ليس مطلوبا لتحديد لجنة مكافحة الإرهاب 16. على الرغم من هذا المنبر يوفر القدرة على التوصيف الجزيئي، لم يتم تعريف جيدا عملية مفصلة للتنمية بروتوكول والتحسين. وقد وضعت ثلاث علامات المتاحة تجاريا من قبل الشركة المصنعة للاستخدام مع CSS، بما في ذلك عامل نمو البشرة مستقبلات (EGFR)، نمو البشرة الإنسان مستقبلات عامل 2 (HER2)، والذي يشبه الانسولين عامل النمو 1 مستقبلات (IGF-1R). تحليل HER2، في تركيبة مع CSS، وقد تم استخدامها من قبل عدة مجموعات لتوضيح المحتملة لجنة مكافحة الإرهاب توصيف لإبلاغ صنع القرار السريري ويحتمل أن تكون المبادئ التوجيهية لتغيير العلاج الحالية. على سبيل المثال، Fehm وآخرون 17 أثبتت أن حوالي ثلث مرضى سرطان الثدي HER2 مع الأورام الأولية زيارتها HER2 + التدرجي. بالإضافة إلى ذلك، ليو وآخرون.18 ذكرت مؤخرا أن ما يصل إلى 50٪ من المرضى الذين يعانون من HER + سرطان الثدي النقيلي لم يكن لديهم HER2 + التدرجي. هيرسيبتين، ومستقبلات HER2 التدخل الأضداد وحيدة النسيلة أثبتت أن تستفيد كثيرا المرضى الذين الأورام مستويات كافية من التعبير عن HER2، هو علاج تستخدم عادة لمرضى الأورام الأولية HER2 + 19-21. ومع ذلك، تشير هذه الدراسات إلى أن هيرسيبتين قد يجري استخدامها على النحو الأمثل ودون أن CTC توصيف قد تساعد في التنبؤ الاستجابة للعلاج. في نهاية المطاف، قد يكون توصيف CTC القدرة على تحسين الرعاية الشخصية. البحث CTC هي فريدة من نوعها من حيث أنها قد تستغل إلى حد كبير نهج السرير إلى الفوق. هذا الأسلوب، على عكس الفوق-إلى السرير الأبحاث، والتي يمكن في كثير من الأحيان يستغرق سنوات للتأثير رعاية المرضى، وقد سمح التدرجي دخول سريع في الإعداد السريرية. ومع ذلك، والأطباء يترددون في استخدام نتائج التحليل من رابع كلوريد الكربون في علاج المريض القرار ماكجي بسبب عدم فهم البيولوجيا الكامنة وراءها. لذا نماذج الماوس قبل السريرية المناسبة من تقنيات ورم خبيث وتحليل CTC التكميلية يجب أن تستخدم من أجل التحقيق في هذه المسائل العالقة. بشكل عام، هناك نوعان من النماذج قبل السريرية تستخدم لدراسة تتالي النقيلي، (1) نماذج الانبثاث عفوية، والتي تسمح لدراسة جميع الخطوات في تتالي النقيلي، و (2) النماذج التجريبية ورم خبيث، والتي تسمح فقط ل دراسة خطوات لاحقة في عملية المنتشر مثل التسرب وتشكيل الورم الثانوية 22. نماذج الانبثاث عفوية، تنطوي على حقن الخلايا السرطانية في مواقع مثلي المناسبة (مثل حقن خلايا سرطان البروستاتا في غدة البروستاتا لدراسة سرطان البروستاتا). ثم يتم إعطاء الوقت لتشكيل خلايا الأورام الابتدائية وتنتشر تلقائيا إلى مواقع ثانوية مثل العظام والرئة والغدد الليمفاوية. فيالنقيض من ذلك، النماذج التجريبية ورم خبيث تشمل الحقن المباشر للخلايا الورم في مجرى الدم (على سبيل المثال عن طريق الوريد الذيل أو حقن داخل القلب لاستهداف الخلايا لمواقع محددة)، وبالتالي تخطي الخطوات الأولي لدخول الوعاء وتعميمها على الأجهزة الثانوية 22. حتى الآن تم تنفيذ غالبية تحليل رابع كلوريد الكربون في الجسم الحي في نظم النموذج باستخدام إما على أساس الخلوي 23 أو تكييفها تقنيات مكافحة الإرهاب القائمة على الإنسان (على سبيل المثال AdnaTest) 24. على الرغم من المفيد، فإن أيا من هذه التقنيات تعكس على نحو كاف CTC التعداد باستخدام معيار الذهب CSS. بناء على موافقة السريرية، والطبيعة موحدة، واستخدام واسع النطاق للCSS، فإن وضع التقاط وكشف تقنية رابع كلوريد الكربون لفي الجسم الحي النمذجة التي تستخدم إعداد العينات ما يعادلها، تجهيز، ومعايير تحديد الهوية كما يكون من المفيد النتائج ستكون مماثلة لتلك التي تم الحصول عليها من عينات المرضى. ومع ذلك، ونظرا لحجم مساuirements من إعداد الصك أنه ليس من الممكن لمعالجة كميات صغيرة من الدم باستخدام هذه المنصة الآلي. بالإضافة إلى ذلك، وقد أثبتت الأعمال السابقة من قبل إليان 25 آخرون بأن تلوث العينات مع الخلايا الظهارية الماوس (والتي تفي أيضا بتعريف CTC القياسية [EpCAM + CK + + CD45 دابي -]). يمكن أن يؤدي إلى سوء تصنيف الماوس الخلايا الظهارية الحرشفية كما التدرجي. لمعالجة هذه القضايا وتكييفها التقنية التي تسمح تم تطوير استخدام الكواشف عدة CSS جنة مكافحة الإرهاب جنبا إلى جنب مع إجراء العزل اليدوي. إضافة لFITC المسمى مستضد الكريات البيض البشرية (HLA) الأجسام المضادة لفحص الخلايا السرطانية يسمح الإنسان لتمييزها عن الماوس الخلايا الظهارية الحرشفية. يصف هذا المخطوط المعيار، وضعت تجاريا وبروتوكول CSS الأمثل لمعالجة عينات الدم المريض والمخاطر المشتركة التي يمكن مواجهتها، بما في ذلك discrepanر العناصر التي يمكن أن تؤدي إلى أخطاء سوء تصنيف لجنة مكافحة الإرهاب. بالإضافة إلى ذلك، يتم وصف التخصيص للمقايسة CSS لدراسة خصائص البروتين المعرفة من قبل المستخدم من التقاطها التدرجي ومقارنة تقنية CSS تكييفها التي تسمح لتخصيب اليورانيوم والكشف عن التدرجي من كميات صغيرة من الدم في نماذج الماوس قبل السريرية لورم خبيث.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="790">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">REAGENTS</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:188px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">0.5M EDTA</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">Anti-human CD44-FITC</td>
			<td style="width:175px;">BD Pharmigen&#160;</td>
			<td style="width:161px;">555478</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">Anti-human CD44-PE</td>
			<td style="width:175px;">BD Pharmigen&#160;</td>
			<td style="width:161px;">555479</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">Anti-human HLA-AlexaFluor488</td>
			<td style="width:175px;">BioLegend</td>
			<td style="width:161px;">311415</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">Anti-mouse CD45-APC</td>
			<td style="width:175px;">eBioscience</td>
			<td style="width:161px;">17-0451-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">Bond Primary Antibody Diluent</td>
			<td style="width:175px;">Leica</td>
			<td style="width:161px;">AR9352</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:267px;">CellSave Preservative Tubes</td>
			<td style="width:175px;">Veridex</td>
			<td style="width:161px;">952820 (20 pack)&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 79100005 (100 pack)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">CellSearch CTC Control Kit</td>
			<td style="width:175px;">Veridex</td>
			<td style="width:161px;">7900003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">CellSearch CTC Kit</td>
			<td style="width:175px;">Veridex</td>
			<td style="width:161px;">7900001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">CellSearch CXC Control Kit</td>
			<td style="width:175px;">Veridex</td>
			<td style="width:161px;">7900018RUO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">CellSearch CXC Kit</td>
			<td style="width:175px;">Veridex</td>
			<td style="width:161px;">7900017RUO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">Instrument Buffer</td>
			<td style="width:175px;">Veridex</td>
			<td style="width:161px;">7901003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:267px;">Streck Cell Preservative (aka CytoChex)</td>
			<td style="width:175px;">Streck</td>
			<td>213350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;"></td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">EQUIPMENT</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">1 ml syringe</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">10 ml serological pipette</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">1000&#181;l pipette</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">1000&#181;l pipette tips</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">12 x 75mm flow tubes</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">200&#181;l gel loading tips</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">200&#181;l pipette</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">22 gauge needle</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">5 3/4&#34; disposible pasteur pipet</td>
			<td style="width:175px;">VWR</td>
			<td style="width:161px;">14672-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:267px;">5 ml serological pipette</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:267px;">Automated pipettor</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:267px;">Capillary Blood Collection Tube (EDTA)</td>
			<td style="width:175px;">BD Microtainer</td>
			<td style="width:161px;">365974</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">CellSearch Analyzer II</td>
			<td style="width:175px;">Veridex</td>
			<td style="width:161px;">9555</td>
			<td rowspan="2" style="width:188px;">Includes magnests and verification cartirdges</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">CellSearch AutoPrep System</td>
			<td style="width:175px;">Veridex</td>
			<td style="width:161px;">9541</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">MagCellect Magnet&#160;</td>
			<td style="width:175px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:161px;">MAG997</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Small Latex Bulb</td>
			<td style="width:175px;">VWR</td>
			<td>82024-550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Vortex</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

adaptation of semiautomated circulating tumor cell (ctc) assays for clinical and preclinical research applications

غالبية الوفيات المرتبطة بالسرطان تحدث لاحقة لتطوير المرض المنتشر. ويرتبط هذا مرحلة المرض قاتلة للغاية مع وجود تعميم الخلايا السرطانية (التدرجي). وقد أثبتت هذه الخلايا النادرة لتكون ذات أهمية سريرية في الثدي النقيلي والبروستات، وسرطان القولون والمستقيم. معيار الذهب الحالية في الكشف السريري جنة مكافحة الإرهاب والتعداد هو نظام CellSearch ادارة الاغذية والعقاقير تطهيرها (CSS). يحدد هذا المخطوط بروتوكول قياسي يستخدم بها هذه المنصة فضلا عن اثنين من البروتوكولات الإضافية تكييفها التي تصف عملية مفصلة من المعرفة الأمثل لتوصيف البروتين علامة من التدرجي المريض وبروتوكول مشابه لالتقاط لجنة مكافحة الإرهاب في أحجام منخفضة جدا من الدم، وذلك باستخدام معيار الكواشف CSS، للدراسة في نماذج الماوس قبل السريرية المجراة من ورم خبيث. بالإضافة إلى ذلك، ارتفعت فروق في نوعية جنة مكافحة الإرهاب بين الدم المانحة صحية مع الخلايا من نسيج الثقافة مقابل مريض عصيدة الدمويسلط الضوء ليه. أخيرا، وترد عدة بنود خلافات شيوعا التي يمكن أن تؤدي إلى أخطاء سوء تصنيف لجنة مكافحة الإرهاب. أخذت معا، فإن هذه البروتوكولات توفر مصدرا مفيدا للمستخدمين من هذا المنبر المهتمين في مجال البحوث قبل السريرية والسريرية المتعلقة ورم خبيث والتدرجي.

معيار لجنة مكافحة الإرهاب تعداد الفحص حساسية وخصوصية CSS تم توثيقه جيدا في الأدب. ومع ذلك، للتحقق من صحة الانتعاش CTC ما يعادلها، ارتفعت (1،000 LNCaP خلايا سرطان البروستاتا البشرية) وتمت معالجة unspiked عينات الدم البشري من المتبرعين الأصحاء ...

Watch this Scientific Journal Video about Adaptation of Semiautomated Circulating Tumor Cell CTC Assays for Clinical and Preclinical Research Applications at JoVE.com

Adaptation of Semiautomated Circulating Tumor Cell CTC Assays for Clinical and Preclinical Research Applications

تعميم الخلايا السرطانية (التدرجي) هي النذير في العديد من أنواع السرطان النقيلي. يصف هذا المخطوط الذهب نظام موحد CellSearch (CSS) منصة التعداد لجنة مكافحة الإرهاب ويسلط الضوء على الأخطاء الشائعة الخطأ في التصنيف. بالإضافة إلى ذلك، يتم وصف بروتوكولين تكييفها لتوصيف علامة المعرفة من قبل المستخدم من التدرجي وCTC التعداد في نماذج الماوس قبل السريرية لورم خبيث باستخدام هذه التكنولوجيا.

التكيف من Semiautomated اعارة ورم الخلية (CTC) فحوصات للتطبيقات السريرية وقبل السريرية البحوث

The majority of cancer-related deaths occur subsequent to the development of metastatic disease. This highly lethal disease stage is associated with the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Adaptation of Semiautomated Circulating Tumor Cell (CTC) Assays for Clinical and Preclinical Research Applications

Generation of Alginate Microspheres for Biomedical Applications

جيل من المجهرية الجيني للتطبيقات الطبية الحيوية

Alginate-based materials have received considerable attention for biomedical applications because of their hydrophilic nature, biocompatibility, and ...

Processing of Primary Brain Tumor Tissue for Stem Cell Assays and Flow Sorting

تجهيز الدماغ الأولية للفحوصات الأنسجة السرطانية والخلايا الجذعية تدفق الفرز

Brain tumors are typically comprised of morphologically diverse cells that express a variety of neural lineage markers. Only a relatively small fraction ...

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

زراعة الخلايا المشتقة المريض وعزل CD133<sup&gt; +</sup&gt; خلايا الجذعية السرطانية المزعومين من الميلانوما

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

في الجسم الحي 19 F التصوير بالرنين المغناطيسي لتتبع الخليوي

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

A Novel in vivo Gene Transfer Technique and in vitro Cell Based Assays for the Study of Bone Loss in Musculoskeletal Disorders

A Novel in vivo Gene Transfer Technique and in vitro Cell Based Assays for the Study of Bone Loss in Musculoskeletal Disorders

رواية<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; تقنيات نقل الجينات و<em&gt; في المختبر</em&gt; فحوصات وبناء خلية لدراسة فقدان العظام في اضطرابات العضلات والعظام

Differentiation and activation of osteoclasts play a key role in the development of musculoskeletal diseases as these cells are primarily involved in bone ...

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

العزلة، والحفظ بالتبريد والثقافة من الخلايا الظهارية البشرية السلى للتطبيقات السريرية

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

الاستجابة للعلاج خارج الحي من الأورام الابتدائية و / أو أسوشيتد الانبثاث لما قبل السريرية والسريرية التنمية من التداوي

The molecular analysis of established cancer cell lines has been the mainstay of cancer research for the past several decades. Cell culture provides both ...

Isolation and Propagation of Circulating Tumor Cells from a Mouse Cancer Model

العزلة ونشر تعميم الخلايا السرطانية من ماوس السرطان نموذج

Cancer metastasis is the foremost cause of cancer-associated deaths. Recent studies have shown that circulating tumor cells (CTCs) are important in cancer ...

Generation of Prostate Cancer Patient Derived Xenograft Models from Circulating Tumor Cells

جيل من سرطان البروستاتا المريض المشتقة نماذج طعم أجنبي من تعميم الخلايا السرطانية

Patient derived xenograft (PDX) models are gaining popularity in cancer research and are used for preclinical drug evaluation, biomarker identification, ...

Percutaneous Contrast Echocardiography-guided Intramyocardial Injection and Cell Delivery in a Large Preclinical Model

حقن إينتراميوكارديال توجيه ضربات القلب التباين عن طريق الجلد وتسليم خلية في نموذج الإكلينيكية كبير

Cell and gene therapy are exciting and promising strategies for the purpose of cardiac regeneration in the setting of heart failure with reduced ejection ...