Name: adaptation of semiautomated circulating tumor cell (ctc) assays for clinical and preclinical research applications
Uploaded: 2014-02-28T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Adaptation of Semiautomated Circulating Tumor Cell CTC Assays for Clinical and Preclinical Research Applications at JoVE.com

Bu çalışma Kanser Araştırma Ontario Enstitüsü (# 08NOV230), Yenilik için Kanada Vakfı (# 13199), Prostat Kanseri Kanada, Janssen Onkoloji, Londra Bölgesel Kanser Programı, ve John ve Donna Bristol donör desteği ile hibe tarafından desteklenmiştir (ALA) Londra Sağlık Bilimleri Vakfı. LEL bir Frederick Banting ve Charles Best Kanada Yüksek Lisans Bursu Doktora Ödülü tarafından desteklenmektedir. ALA CIHR Yeni Araştırmacı Ödülü ve Araştırma ve Yenilik Ontario Bakanlığı&#39;ndan Erken Araştırmacı Ödülü tarafından desteklenmektedir.

Bu yazıda anlatılan tüm insan çalışmalarda Batı Üniversitesi İnsan Araştırmaları Etik Kurulu tarafından onaylanan protokol çerçevesinde yürütülmüştür. Tüm Hayvan çalışmaları Western University Hayvan Kullanımı Alt Komitesi tarafından onaylanan protokoller çerçevesinde, Hayvan Bakımı Kanada Konseyi tavsiyeleri doğrultusunda yapılmıştır. 1.. CSS kullanarak Hasta kan örnekleri standart CTC Numaralama 1.. Hazırlık Enstrüman İnsan...

<ol>
	<li>Siegel, R., Naishadham, D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics.">Cancer statistics.</a> 63 (1), 11-30 (2013).</li><li>Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissemination+and+growth+of+cancer+cells+in+metastatic+sites.">Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites.</a> Nat. Rev. Cancer. 2 (8), 563-572 (2002).</li><li>Pantel, K., Brakenhoff, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+the+metastatic+cascade.">Dissecting the metastatic cascade.</a> Nat. Rev. Cancer. 4 (6), 448-456 (2004).</li><li>Cristofanilli, M., Budd, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells,+disease+progression,+and+survival+in+metastatic+breast+cancer.">Circulating tumor cells, disease progression, and survival in metastatic breast cancer.</a> New Engl. J. Med. 351 (8), 781-791 (2004).</li><li>De Bono, J. S., Scher, H. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells+predict+survival+benefit+from+treatment+in+metastatic+castration-resistant+prostate+cancer.">Circulating tumor cells predict survival benefit from treatment in metastatic castration-resistant prostate cancer.</a> Clin. Cancer Res. 14 (19), 6302-6309 (2008).</li><li>Cohen, S. J., Ja Punt, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+significance+of+circulating+tumor+cells+in+patients+with+metastatic+colorectal+cancer.">Prognostic significance of circulating tumor cells in patients with metastatic colorectal cancer.</a> Ann. Oncol. 20 (7), 1223-1229 (2009).</li><li>Hayes, D. F., Cristofanilli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells+at+each+follow-up+time+point+during+therapy+of+metastatic+breast+cancer+patients+predict+progression-free+and+overall+survival.">Circulating tumor cells at each follow-up time point during therapy of metastatic breast cancer patients predict progression-free and overall survival.</a> Clin. Cancer Res. 12 (14), 4218-4224 (2006).</li><li>Budd, G. T., Cristofanilli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells+versus+imaging--predicting+overall+survival+in+metastatic+breast+cancer.">Circulating tumor cells versus imaging--predicting overall survival in metastatic breast cancer.</a> Clin. Cancer Res. 12 (21), 6403-6409 (2006).</li><li>Olmos, D., Arkenau, H. -. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumour+cell+(CTC)+counts+as+intermediate+end+points+in+castration-resistant+prostate+cancer+(CRPC):+a+single-centre+experience.">Circulating tumour cell (CTC) counts as intermediate end points in castration-resistant prostate cancer (CRPC): a single-centre experience.</a> Ann. Oncol. 20 (1), 27-33 (2009).</li><li>De Bono, J. S., Scher, H. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells+predict+survival+benefit+from+treatment+in+metastatic+castration-resistant+prostate+cancer.">Circulating tumor cells predict survival benefit from treatment in metastatic castration-resistant prostate cancer.</a> Clin. Cancer Res. 14 (19), 6302-6309 (2008).</li><li>Allan, A. L., Keeney, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cell+analysis:+technical+and+statistical+considerations+for+application+to+the+clinic.">Circulating tumor cell analysis: technical and statistical considerations for application to the clinic.</a> J. Oncol. 2010, 426218 (2010).</li><li>Lowes, L. E., Goodale, D., Keeney, M., Allan, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Image+cytometry+analysis+of+circulating+tumor+cells.">Image cytometry analysis of circulating tumor cells.</a> Methods Cell Biol. 102, 261-290 (2011).</li><li>Lianidou, E. S., Markou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells+in+breast+cancer:+detection+systems,+molecular+characterization,+and+future+challenges.">Circulating tumor cells in breast cancer: detection systems, molecular characterization, and future challenges.</a> Clin. Chem. 57 (9), 1242-1255 (2011).</li><li>Alix-Panabi&#232;res, C., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells:+liquid+biopsy+of+cancer.">Circulating tumor cells: liquid biopsy of cancer.</a> Clin. Chem. 59 (1), 110-118 (2013).</li><li>Parkinson, D. R., Dracopoli, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Considerations+in+the+development+of+circulating+tumor+cell+technology+for+clinical+use.">Considerations in the development of circulating tumor cell technology for clinical use.</a> J. Transl. Med. 10, 138 (2012).</li><li>Lowes, L. E., Hedley, B. D., Keeney, M., Allan, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=User-defined+protein+marker+assay+development+for+characterization+of+circulating+tumor+cells+using+the+CellSearch+system.">User-defined protein marker assay development for characterization of circulating tumor cells using the CellSearch system.</a> Cytomet. A. 81 (11), 983-995 (2012).</li><li>Fehm, T., M&#252;ller, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HER2+status+of+circulating+tumor+cells+in+patients+with+metastatic+breast+cancer:+a+prospective,+multicenter+trial.">HER2 status of circulating tumor cells in patients with metastatic breast cancer: a prospective, multicenter trial.</a> Breast Cancer Res. Treat. 124 (2), 403-412 (2010).</li><li>Liu, Y., Liu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells+in+HER2-positive+metastatic+breast+cancer+patients:+a+valuable+prognostic+and+predictive+biomarker.">Circulating tumor cells in HER2-positive metastatic breast cancer patients: a valuable prognostic and predictive biomarker.</a> BMC Cancer. 13, 202 (2013).</li><li>Slamon, D. J., Leyland-Jones, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+chemotherapy+plus+a+monoclonal+antibody+against+HER2+for+metastatic+breast+cancer+that+overexpresses+HER2.">Use of chemotherapy plus a monoclonal antibody against HER2 for metastatic breast cancer that overexpresses HER2.</a> New Engl. J. Med. 344 (11), 783-792 (2001).</li><li>Marty, M., Cognetti, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Randomized+phase+II+trial+of+the+efficacy+and+safety+of+trastuzumab+combined+with+docetaxel+in+patients+with+human+epidermal+growth+factor+receptor+2-positive+metastatic+breast+cancer+administered+as+first-line+treatment:+the+M77001+study+group.">Randomized phase II trial of the efficacy and safety of trastuzumab combined with docetaxel in patients with human epidermal growth factor receptor 2-positive metastatic breast cancer administered as first-line treatment: the M77001 study group.</a> J. Clin. Oncol. 23 (19), 4265-4274 (2005).</li><li>Slamon, D., Eiermann, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adjuvant+trastuzumab+in+HER2-positive+breast+cancer.">Adjuvant trastuzumab in HER2-positive breast cancer.</a> New Engl. J. Med. 365 (14), 1273-1283 (2011).</li><li>Welch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+considerations+for+studying+cancer+metastasis+in+vivo.">Technical considerations for studying cancer metastasis in vivo.</a> Clin. Exp. Metast. 15 (3), 272-306 (1997).</li><li>Goodale, D., Phay, C., Postenka, C. O., Keeney, M., Allan, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+tumor+cell+dissemination+patterns+in+preclinical+models+of+cancer+metastasis+using+flow+cytometry+and+laser+scanning+cytometry.">Characterization of tumor cell dissemination patterns in preclinical models of cancer metastasis using flow cytometry and laser scanning cytometry.</a> Cytometry A. 75 (4), 344-355 (2009).</li><li>Gorges, T. M., Tinhofer, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumour+cells+escape+from+EpCAM-based+detection+due+to+epithelial-to-mesenchymal+transition.">Circulating tumour cells escape from EpCAM-based detection due to epithelial-to-mesenchymal transition.</a> BMC Cancer. 12, 178 (2012).</li><li>Eliane, J. -. P., Repollet, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+serial+changes+in+circulating+human+breast+cancer+cells+in+murine+xenograft+models.">Monitoring serial changes in circulating human breast cancer cells in murine xenograft models.</a> Cancer Res. 68 (14), 5529-5532 (2008).</li><li>Flores, L. M., Kindelberger, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+the+yield+of+circulating+tumour+cells+facilitates+molecular+characterisation+and+recognition+of+discordant+HER2+amplification+in+breast.">Improving the yield of circulating tumour cells facilitates molecular characterisation and recognition of discordant HER2 amplification in breast.</a> 102 (10), 1495-1502 (2010).</li><li>Sieuwerts, A. M., Kraan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characterization+of+circulating+tumor+cells+in+large+quantities+of+contaminating+leukocytes+by+a+multiplex+real-time+PCR.">Molecular characterization of circulating tumor cells in large quantities of contaminating leukocytes by a multiplex real-time PCR.</a> Breast Cancer Res. Treat. 118 (3), 455-468 (2009).</li><li>Cohen, S. J., Ja Punt, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+circulating+tumor+cells+to+tumor+response,+progression-free+survival,+and+overall+survival+in+patients+with+metastatic+colorectal+cancer.">Relationship of circulating tumor cells to tumor response, progression-free survival, and overall survival in patients with metastatic colorectal cancer.</a> J. Clin. Oncol. 26 (19), 3213-3221 (2008).</li><li>Allard, W. J., Matera, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+cells+circulate+in+the+peripheral+blood+of+all+major+carcinomas+but+not+in+healthy+subjects+or+patients+with+nonmalignant+diseases.">Tumor cells circulate in the peripheral blood of all major carcinomas but not in healthy subjects or patients with nonmalignant diseases.</a> Clin. Cancer Res. 10 (20), 6897-6904 (2004).</li><li>Thiery, J. P., Acloque, H., Huang, R. Y. J., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial-mesenchymal+transitions+in+development+and+disease.">Epithelial-mesenchymal transitions in development and disease.</a> Cell. 139 (5), 871-890 (2009).</li><li>Yang, J., Weinberg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Epithelial-mesenchymal+transition:+at+the+crossroads+of+development+and+tumor+metastasis.">A Epithelial-mesenchymal transition: at the crossroads of development and tumor metastasis.</a> Dev. Cell. 14 (6), 818-829 (2008).</li><li>Gradilone, A., Raimondi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumour+cells+lacking+cytokeratin+in+breast+cancer:+the+importance+of+being+mesenchymal.">Circulating tumour cells lacking cytokeratin in breast cancer: the importance of being mesenchymal.</a> J. Cell. Mol. Med. 15 (5), 1066-1070 (2011).</li><li>K&#246;nigsberg, R., Obermayr, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+EpCAM+positive+and+negative+circulating+tumor+cells+in+metastatic+breast+cancer+patients.">Detection of EpCAM positive and negative circulating tumor cells in metastatic breast cancer patients.</a> Acta Oncol. 50 (5), 700-710 (2011).</li><li>Kasimir-Bauer, S., Hoffmann, O., Wallwiener, D., Kimmig, R., Fehm, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+stem+cell+and+epithelial-mesenchymal+transition+markers+in+primary+breast+cancer+patients+with+circulating+tumor+cells.">Expression of stem cell and epithelial-mesenchymal transition markers in primary breast cancer patients with circulating tumor cells.</a> Breast Cancer Res. 14 (1), (2012).</li><li>Mego, M., Mani, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+epithelial-mesenchymal+transition-inducing+transcription+factors+in+primary+breast+cancer:+The+effect+of+neoadjuvant+therapy.">Expression of epithelial-mesenchymal transition-inducing transcription factors in primary breast cancer: The effect of neoadjuvant therapy.</a> Int. J. Cancer. 130 (4), 808-816 (2012).</li><li>Yu, M., Bardia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+breast+tumor+cells+exhibit+dynamic+changes+in+epithelial+and+mesenchymal+composition.">Circulating breast tumor cells exhibit dynamic changes in epithelial and mesenchymal composition.</a> Science. 339 (6119), 580-584 (2013).</li><li>Armstrong, A. J., Marengo, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cells+from+patients+with+advanced+prostate+and+breast+cancer+display+both+epithelial+and+mesenchymal+markers.">Circulating tumor cells from patients with advanced prostate and breast cancer display both epithelial and mesenchymal markers.</a> Mol. Cancer Res. 9 (8), 997-1007 (2011).</li></ol>

2004 yılında CSS yana birçok yeni CTC teknolojilerin geliştirilmesine rağmen, bu teknik bugün piyasada sadece klinik onaylı bir teknolojidir ve bu nedenle CTC tespiti ve sayımı için geçerli altın standart olarak kabul edilir. Bu el yazması CSS sıkı kalite kontrol standartları olmasına rağmen bu yanlı yorumlanmasına tabi olacak ve hasta örneklerinde CTC kimlik çivili örneklerinde kimlik çok farklı olduğunu olduğunu göstermiştir. Yaygın olarak uyumsuz öğelerin altı kategoride CTC yanlış ...

2013 yılında 580.350 kişi kanserden öleceği tahmin edilmektedir ve bu hastalığın o 1.660.290 yeni vaka başına 1 ABD&#39;de tanısı olacaktır. Bu ölümlerin çoğunluğu metastatik hastalık 2 gelişiminde sonra ortaya. Metastaz ve metastatik kaskad sınırlı bir anlayış tedavisinde etkili tedavilerin mevcut olmaması hastalığın bu aşamada son derece ölümcül yapar. Kan içinde, tümör hücrelerinin (kapalı zaman eğrilerinin) sirküle varlığı metastatik hastalık 3 ile ilişkili olduğu gösterilmiştir. Bu hücreler son derece nadirdir ve algılama metastatik meme 4, prostat 5 genel sağkalım göstergesidir ve kolorektal kanser 6. Daha az olan hastalar ya da Sam tespit edilebilir bir kapalı zaman eğrileri ile karşılaştırıldığında, bu hastalarda, varlığı ≥ 5 (göğüs ve prostat) veya kan 7.5 ml ≥ 3 (kolorektal) kapalı zaman eğrilerinin daha kötü prognoz göstergesidire kan hacmi. Buna ek olarak, terapötik müdahale sırasında ya da sonrasında CTC sayısındaki değişim çoğu zaman daha önce şu anda kullanılan tekniklere göre 7-10, tedaviye yanıt bir göstergesi olarak yararlı olduğu gösterilmiştir. Bu metastatik kanser hastalarında, kapalı zaman eğrilerinin 10 5 -10 7 kan tek-çekirdekli hücreleri için yaklaşık 1 CTC bir frekansta ortaya çıkar ve lokalize hastalığı olan hastalarda, bu frekans (1 ila 8 10 ~) daha düşük olabilir, bu tahmin edilmiştir. Bu hücrelerin nadir doğası zor doğru ve güvenilir CTCS 11 algılamak ve analiz yapabilirsiniz. Çeşitli yöntemler (önceden 12-14 gözden), kan bileşenleri çevreleyen onları ayırt özelliklerini istismar ederek bu hücreleri zenginleştirmek ve algılamak için kullanılmıştır. Genel olarak, CTC numaralandırma bir zenginleştirme aşaması ve bir adım algılama gerektiren hem iki bölümlü bir işlemdir. Geleneksel olarak, zenginleştirme adımlar fizik farklılıkları güveniyorkapalı zaman eğrileri (hücre boyutu, yoğunluk, deformabilite) veya protein işaretleyici ifade (yani epitel hücre adezyon molekülü [EpCAM], sitokeratin [CK]) iCal&#39;ın özellikleri. Zenginleştirme sonra, CTC tespiti, nükleik asit bazlı deneyler ve / veya sitometrik yaklaşımlar en yaygın olarak farklı şekillerde, bir dizi gerçekleştirilebilir. Bu stratejilerin her biri farklı avantaj ve dezavantajları olan, ancak hepsi standardizasyon eksikliği, benzersiz, klinik ortamda içine giriş için bir zorunluluk. CellSearch sistemi (CSS) dolayısıyla floresan mikroskobu ve antikor bazlı teknikler 4-6 kullanılarak insan kanında nadir kapalı zaman eğrileri tespiti ve sayımı için standart bir yöntem temin etmek üzere geliştirilmiştir. Bu platform şu anda CTC numaralandırma altın standart kabul edilir ve klinikte 15 kullanılmak üzere ABD Gıda ve İlaç İdaresi (FDA) tarafından onaylanmış tek teknik olduğunu. CSS iki bileşenli bir platformdur consistin olduğunug, insan kan numunelerinin hazırlanması ve bu tarar (bundan sonra analiz aracı olarak da adlandırılır) (2) CellTracks Analiz II, otomatik (bundan sonra hazırlama aracı olarak da adlandırılır) (1) CellTracks otoprep sistemi, Aşağıdaki örnekler, hazırlama. Lökositler hazırlık aleti karışmasını CTCS ayırt aracılı bir antikor, ferrofluid tabanlı manyetik ayırma yaklaşımı ve diferansiyel floresan boyama kullanır. İlk olarak, sistem demir nanopartiküllerinin konjuge anti-EpCAM antikor kullanılarak CTCS etiketler. Numune daha sonra, bir manyetik alan içinde inkübe edilir ve tüm etiketlenmemiş hücreler aspire edilir. Seçilen tümör hücrelerinin floresan-etiketli antikorlar ve nükleer boyama reaktif oluşan, farklı flüoresans leke içinde yeniden süspansiyona alınmış, ve inkübe edilir. Son olarak, numune, bir manyetik kartuş için (bundan böyle manyetik cihazı olarak anılacaktır) bir MagNest denir ve sc ediliranaliz aleti kullanılarak anned. Bu analiz aleti, bir 10X objektif lens kullanarak, farklı floresan filtreler, uygun floresan parçacık için optimize her kullanılarak hazırlanan örnekleri taramak için kullanılır. Kapalı zaman eğrilerinin anti-EpCAM, anti-pan-CK-fikoeritrin (PE) ile bağlıdırlar hücreleri (CK8, 18 ve 19), ve nükleer leke 4 &#39;,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) olarak tanımlanır. Bunun aksine, anti-kirletici lökosit CD45-Allophycocyanin (APC) ve DAPI ile bağlı hücreler olarak tanımlanır. Tarama sonra, bilgisayar tanımlanmış potansiyel tümör hücrelerinin kullanıcıya sunulmaktadır. Bu görüntülerden, kullanıcı olayları KTC olduğunu belirlemek için yukarıda tartışılan tanımlı parametreleri ve diferansiyel boyama kullanılarak kalitatif analizi istihdam etmek zorundadır. CTC numaralandırma için standart bir yöntem sağlamaya ek olarak, CSS ilgi protein belirteçleri göre kapalı zaman eğrileri moleküler karakterizasyonu için izin verir. Bu sorgulama cbir CTC tanımlama 16 için gerekli olmayan bir floresan izotiyosiyanat (FITC) floresan kanalını kullanarak, tek hücre düzeyinde gerçekleştirilebilir. Bu platform moleküler karakterizasyonu için kapasite sağlamasına rağmen, protokol geliştirme ve optimizasyon detaylı süreci iyi tanımlanmış değildir. Üç ticari olarak temin edilebilen belirteçler, epidermal büyüme faktörü reseptörü (EGFR), insan epidermal büyüme faktörü reseptörü 2 (HER2) ve insülin benzeri büyüme faktörü reseptörü 1 (IGF-1 R) dahil olmak üzere, CSS ile kullanım için, üretici tarafından geliştirilmiştir. HER2 analizi, CSS ile birlikte, klinik karar verme bilgilendirmek ve potansiyel mevcut tedavi kuralları değiştirmek için CTC karakterizasyonu için potansiyel göstermek için çeşitli gruplar tarafından kullanılmıştır. Örneğin, Fehm et al. 17 HER2-primer tümörlü göğüs kanserli hastaların yaklaşık üçte biri HER2 + CTCS sahip olduğunu göstermiştir. Buna ek olarak, Liu et al.18 yakın HER + metastatik meme kanseri hastalarının% 50 kadar HER2 + CTCS yoktu bildirdi. Herceptin, büyük olan tümörler HER2 yeterli düzeyde ifade HER2 + primer tümörleri 19-21 olan hastalar için yaygın olarak kullanılan tedavi hastaların yararına göstermiştir monoklonal antikor müdahale HER2 reseptörü. Ancak bu çalışmalar Herceptin alt-optimal düzeyde kullanıldığı ve CTC karakterizasyonu tedavi yanıtını belirlemede yardımcı olabilir varlık olabileceğini düşündürmektedir. Sonuçta, CTC karakterizasyon kişisel bakım geliştirmek için potansiyeli olabilir. Büyük ölçüde bir başucu-to-benchtop yaklaşımı kullanmış olmasıyla CTC araştırma benzersizdir. Bu yöntem, genellikle hasta bakımını etkileyecek yıl sürebilir benchtop-to-başucu araştırma, aksine, klinik ortamda içine KTC hızlı bir giriş sağladı. Ancak, hekimlerin hasta tedavi kararı-mak CTC analiz sonuçları kullanmak için tereddütlünedeniyle altta yatan biyolojinin anlayış eksikliği ing. Bu nedenle metastaz ve tamamlayıcı CTC analiz teknikleri, uygun klinik öncesi fare modelleri bu olağanüstü soruları araştırmak amacıyla kullanılmalıdır. Genel olarak, metastatik kademeli olarak tüm adımların çalışma için izin metastatik kaskad çalışma için kullanılan klinik öncesi modellerinin iki tür, (1) kendiliğinden metastaz modelleri vardır ve sadece izin verir (2) deneysel metastaz modelleri Böyle ekstravazasyonun ve ikincil tümör oluşumu 22 olarak metastatik süreçte adımlardan çalışma. Spontan metastaz modelleri uygun ortotopik yerle (prostat kanseri araştırması için prostat bezine prostat kanseri hücreleri, örneğin enjeksiyon) içine tümör hücre enjeksiyonu içerir. Hücreler daha sonra, birincil tümörler oluşturan ve kendiliğinden gibi kemik, akciğer, lenf düğümleri gibi ikincil bölgelere metastaz için zaman verilir. Içindekontrast, deneysel metastaz modelleri (belirli yerlere hücrelerini hedef kuyruk ven veya intrakardiyak enjeksiyon yoluyla örneğin) kan dolaşımına, tümör hücrelerinin doğrudan enjeksiyon içerir ve bu nedenle ikincil organlara 22 intravasation ve yaygınlaştırma ilk adımları atlayın. Bu zamana kadar in vivo model sistemlerinde de CTC analiz çoğunluğu sitometri tabanlı 23 ya da dönüştürülmüş insan merkezli CTC teknikler (örneğin AdnaTest) 24 kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Yararlı olsa da, bu tekniklerin hiçbiri yeterince altın standart CSS kullanarak CTC numaralandırma yansıtmaktadır. Sonuçlar kıyaslanabilir olacağı gibi klinik onayı, standart doğa ve CSS yaygın kullanıma göre, bir eşdeğer numune hazırlama, işleme kullanır in vivo modelleme için CTC yakalama ve algılama tekniği ve kimlik kriterleri geliştirme avantajlı olacaktır hasta örneklerinden elde edilmiştir. Bununla birlikte, hacim reqhazırlama aygıtının uirements bu otomatik bir platform kullanılarak kan küçük hacimli işlemek mümkün değildir. . Olarak fare skuamöz epitel hücrelerinin yanlış sınıflandırma yol açabilir - Ayrıca, Eliane ark 25 tarafından önceki çalışma (aynı zamanda standart CTC tanımını [EpCAM + CK + DAPI + CD45] karşılamak) fare epitel hücreleri ile numunelerin kontaminasyonu olduğunu göstermiştir KTC. Bu sorunlar, manuel izolasyon prosedürü ile birlikte CSS CTC kiti reaktiflerin kullanımı geliştirilen sağlayan bir uyarlanmış tekniği ele almak için. Tahlile bir FITC etiketli insan lökosit antijeni (HLA) antikor ilave insan tümör hücreleri, fare skuamöz epitel hücrelerden ayırt edilmesini sağlar. Bu el yazması uyumsuzluğu dahil karşılaştı olabilir Hasta kan örnekleri ve ortak tuzaklar, işlenmesi için ticari olarak geliştirilen standart ve optimize CSS kuralını açıklarCTC yanlış sınıflandırma hatalara yol açabilir t ürün. Buna ek olarak, yakalanan kapalı zaman eğrileri ve metastaz klinik öncesi fare modellerinde kan küçük hacimlerinden kapalı zaman eğrileri zenginleşmesi ve saptanması için uyarlanmış izin veren karşılaştırılabilir bir CSS tekniğinin kullanıcı tanımlı protein özelliklerini incelemek için CSS tahlilinin özelleştirme açıklanmıştır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="790">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">REAGENTS</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:188px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">0.5M EDTA</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">Anti-human CD44-FITC</td>
			<td style="width:175px;">BD Pharmigen&#160;</td>
			<td style="width:161px;">555478</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">Anti-human CD44-PE</td>
			<td style="width:175px;">BD Pharmigen&#160;</td>
			<td style="width:161px;">555479</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">Anti-human HLA-AlexaFluor488</td>
			<td style="width:175px;">BioLegend</td>
			<td style="width:161px;">311415</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">Anti-mouse CD45-APC</td>
			<td style="width:175px;">eBioscience</td>
			<td style="width:161px;">17-0451-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">Bond Primary Antibody Diluent</td>
			<td style="width:175px;">Leica</td>
			<td style="width:161px;">AR9352</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:267px;">CellSave Preservative Tubes</td>
			<td style="width:175px;">Veridex</td>
			<td style="width:161px;">952820 (20 pack)&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 79100005 (100 pack)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">CellSearch CTC Control Kit</td>
			<td style="width:175px;">Veridex</td>
			<td style="width:161px;">7900003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">CellSearch CTC Kit</td>
			<td style="width:175px;">Veridex</td>
			<td style="width:161px;">7900001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">CellSearch CXC Control Kit</td>
			<td style="width:175px;">Veridex</td>
			<td style="width:161px;">7900018RUO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">CellSearch CXC Kit</td>
			<td style="width:175px;">Veridex</td>
			<td style="width:161px;">7900017RUO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">Instrument Buffer</td>
			<td style="width:175px;">Veridex</td>
			<td style="width:161px;">7901003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:267px;">Streck Cell Preservative (aka CytoChex)</td>
			<td style="width:175px;">Streck</td>
			<td>213350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;"></td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">EQUIPMENT</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">1 ml syringe</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">10 ml serological pipette</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">1000&#181;l pipette</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">1000&#181;l pipette tips</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">12 x 75mm flow tubes</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">200&#181;l gel loading tips</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">200&#181;l pipette</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">22 gauge needle</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">5 3/4&#34; disposible pasteur pipet</td>
			<td style="width:175px;">VWR</td>
			<td style="width:161px;">14672-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:267px;">5 ml serological pipette</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:267px;">Automated pipettor</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:267px;">Capillary Blood Collection Tube (EDTA)</td>
			<td style="width:175px;">BD Microtainer</td>
			<td style="width:161px;">365974</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">CellSearch Analyzer II</td>
			<td style="width:175px;">Veridex</td>
			<td style="width:161px;">9555</td>
			<td rowspan="2" style="width:188px;">Includes magnests and verification cartirdges</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">CellSearch AutoPrep System</td>
			<td style="width:175px;">Veridex</td>
			<td style="width:161px;">9541</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:267px;">MagCellect Magnet&#160;</td>
			<td style="width:175px;">R&#38;D Systems</td>
			<td style="width:161px;">MAG997</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Small Latex Bulb</td>
			<td style="width:175px;">VWR</td>
			<td>82024-550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:267px;">Vortex</td>
			<td style="width:175px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

adaptation of semiautomated circulating tumor cell (ctc) assays for clinical and preclinical research applications

Kansere bağlı ölümlerin çoğunluğu metastatik hastalık gelişimine daha sonra meydana gelir. Bu son derece öldürücü hastalık aşama tümör hücrelerinin (kapalı zaman eğrilerinin) dolaşan varlığı ile ilişkilidir. Bu nadir hücreler metastatik göğüs, prostat, kolorektal kanser ve klinik öneme sahip olduğu gösterilmiştir. Klinik CTC algılama ve numaralandırma güncel altın standardı FDA onaylı CellSearch sistemi (CSS) &#39;dir. Bu el yazması standart bu platformu tarafından kullanılan protokolü yanı sıra özetliyor standardını kullanarak, hasta kapalı zaman eğrileri protein karakterizasyonu için kullanıcı-tanımlı işaretleyici optimizasyonu ve kanın çok düşük hacimlerde CTC yakalamak için benzer bir protokol ayrıntılı sürecini açıklayan iki ek protokol uyarlanmıştır CSS reaktifler, metastaz vivo preklinik fare modellerinde okuyan için. Buna ek olarak, sağlıklı kan verici arasında CTC kalitesinde farklılıklar hastanın kan samp karşılık doku kültürü hücreleri ile tutturuldules vurgulanır. Son olarak, CTC yanlış sınıflandırma hatalara yol açabilir birçok yaygın discrepant öğeler özetlenmiştir. Birlikte ele alındığında, bu protokoller metastaz ve kapalı zaman eğrileri ilişkin klinik öncesi ve klinik araştırma ile ilgilenen bu platform kullanıcıları için yararlı bir kaynak sağlayacaktır.

Standart CTC Sayım Deneyi CSS duyarlılığı ve özgünlüğü de literatürde belgelenmiştir. Bununla birlikte, eşit CTC kurtarma doğrulamak için, çivili (1000 LNCaP insan prostat kanser hücreleri) ve sağlıklı gönüllü vericilerden Katkısız bir insan kan numuneleri, standart CSSCTC protokolü kullanılarak CSS işlenmiştir. Beklendiği gibi, Katkısız numuneler, 0.00 ± 0.00% kapalı zaman eğrileri ücretsiz vardı ve CTC kurtarma çivili numuneler (Şekil 1A)</strong...

Watch this Scientific Journal Video about Adaptation of Semiautomated Circulating Tumor Cell CTC Assays for Clinical and Preclinical Research Applications at JoVE.com

Adaptation of Semiautomated Circulating Tumor Cell CTC Assays for Clinical and Preclinical Research Applications

Sirkülasyon tümör hücrelerinin (kapalı zaman eğrilerinin) birçok metastatik kanser prognostik bulunmaktadır. Bu el yazması altın standart CellSearch sistemi (CSS) CTC sayım platformu ve golleri ortak yanlış sınıflandırma hatalar açıklanır. Buna ek olarak, iki uyarlanmış protokolleri bu teknolojiyi kullanarak metastaz klinik öncesi fare modellerinde kapalı zaman eğrilerinin ve CTC numaralandırma kullanıcı tanımlı işaretleyici karakterizasyonu için tarif edilmiştir.

Klinik ve Klinik Öncesi Araştırma Uygulamaları Tümör Hücre (CTC) Tahliller Sirkülasyon semiautomated adaptasyon

The majority of cancer-related deaths occur subsequent to the development of metastatic disease. This highly lethal disease stage is associated with the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Adaptation of Semiautomated Circulating Tumor Cell (CTC) Assays for Clinical and Preclinical Research Applications

Generation of Alginate Microspheres for Biomedical Applications

Biyomedikal Uygulamalar için Aljinatta Mikrokürelerin Üretimi

Alginate-based materials have received considerable attention for biomedical applications because of their hydrophilic nature, biocompatibility, and ...

Processing of Primary Brain Tumor Tissue for Stem Cell Assays and Flow Sorting

Sıralama Kök Hücre Tahliller ve Akış Primer Beyin Tümörü Doku İşleme

Brain tumors are typically comprised of morphologically diverse cells that express a variety of neural lineage markers. Only a relatively small fraction ...

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Hasta Türetilen Hücre Kültürü ve CD133 İzolasyonu<sup&gt; +</supMelanom dan&gt; sağlayan olası Kanser Kök Hücreleri

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

Hücre Takip için vivo 19 F MRG

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

A Novel in vivo Gene Transfer Technique and in vitro Cell Based Assays for the Study of Bone Loss in Musculoskeletal Disorders

A Novel in vivo Gene Transfer Technique and in vitro Cell Based Assays for the Study of Bone Loss in Musculoskeletal Disorders

Bir Roman<em&gt; In vivo</em&gt; Gen Transferi Tekniği ve<em&gt; In vitro</emİskelet Hastalıkları Kemik Kaybı Çalışmaları&gt; Hücre Tabanlı Tahliller

Differentiation and activation of osteoclasts play a key role in the development of musculoskeletal diseases as these cells are primarily involved in bone ...

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

İzolasyon, Kriyoprezervasyon ve Kültür Klinik Uygulamaları İnsan Amniyon Epitel Hücreleri

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

İlköğretim Tümörleri ve / veya klinik öncesi için İlişkili Metastazlarının ve Tedavi Klinik Geliştirme Ex Vivo Tedavisi Tepki

The molecular analysis of established cancer cell lines has been the mainstay of cancer research for the past several decades. Cell culture provides both ...

Isolation and Propagation of Circulating Tumor Cells from a Mouse Cancer Model

Fare Kanser Modeli Tümör Hücreleri Sirkülasyon İzolasyonu ve Yayılım

Cancer metastasis is the foremost cause of cancer-associated deaths. Recent studies have shown that circulating tumor cells (CTCs) are important in cancer ...

Generation of Prostate Cancer Patient Derived Xenograft Models from Circulating Tumor Cells

Prostat Kanseri Hasta Üretimi Tümör Hücreleri Sirkülasyon gelen Xenograftlarında Modeller Türetilmiş

Patient derived xenograft (PDX) models are gaining popularity in cancer research and are used for preclinical drug evaluation, biomarker identification, ...

Percutaneous Contrast Echocardiography-guided Intramyocardial Injection and Cell Delivery in a Large Preclinical Model

Perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü Intramyocardial enjeksiyon ve hücre teslim büyük preklinik modeli

Cell and gene therapy are exciting and promising strategies for the purpose of cardiac regeneration in the setting of heart failure with reduced ejection ...