Name: assessment of morphine-induced hyperalgesia and analgesic tolerance in mice using thermal and mechanical nociceptive modalities
Uploaded: 2014-07-29T13:00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Morphine-induced Hyperalgesia and Analgesic Tolerance in Mice Using Thermal and Mechanical Nociceptive Modalities at JoVE.com

نشكر الدكتور JL. Galzi (UMR7242 CNRS؛ إلكيرش، فرنسا) لدعمه. وأيد هذا العمل من قبل CNRS، INSERM، جامعة ستراسبورغ، الألزاس وBioValley من المنح المقدمة من Conectus، لوكالة الوطني للبحوث (ANR 08 EBIO 014.02) CONSEIL الجهوي كوت الألزاس (Pharmadol)، COMMUNAUTE URBAINE دي ستراسبورغ (Pharmadol)، ICFRC (Pharmadol)، OSEO (Pharmadol)، جنرال اتجاه قصر الانتاجية (Pharmadol).

أجريت جميع التجارب وفقا صارمة مع المبادئ التوجيهية الأوروبية لرعاية الحيوانات المختبرية (مجلس الجماعات الأوروبية التوجيه 86/609/ECC) والمبادئ التوجيهية الأخلاقية للتحقيق من الألم التجريبية في الحيوانات واعية 13. وتم إيواء في منشأة الحيوان المؤسسية مع موظفي الرعاية المسؤولة عن تشغيل المرفق في الامتثال للمعايير البيئية - ذكور الفئران C57BL6 / N تاك (30 ز 10 أسابيع، 25). وتم إيواء الحيوانات في مجموعات (بحد أقصى خمسة الفئران في قفص) تحت 12 ساعة / 12 ساعة ضوء / دورة الظلام في درجة حرارة ثابتة (21 ± 1 درجة مئوية) مع حرية الوصول إلى الغذاء والماء. أجريت جميع التجارب في نفس الفترة من اليوم (10:00 حتي 16:00) باستخدام فوج من 16 الفئران. يشار إلى المواد والمعدات المحددة في الجدول المواد. إجراء خمس خطوات لمراقبة المورفين التي يسببها فرط التألم والتسامح البروتوكول هوتنقسم إلى خمس خطوات متسلسلة (AE) خلال مدة 15 يوما الشكل 1. 1 التعامل مع الفئران (الخطوة A؛ د-7 إلى د-5) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التعامل مع الفئران وروض لهم بالدخول بحرية إلى كابح. هذه الخطوة الأولية يقلل من الإجهاد - وبالتالي التقليل من أي خلط مع الإجهاد الناجم عن وعي - ويسمح للحيوانات لتكون معتادا على المحقق والمناولة والتلاعب في كابح الماوس. يتم التعامل مع كل الماوس بلطف لمدة 5 دقائق كل يوم. </li></ol> 2 الاستجابة مسبب للألم بصل (الخطوة B؛ د-4 إلى د-1) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس الإختفاء انسحاب ذيل باستخدام اختبار الذيل الغمر (TIT): <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين الحرارة إلى 48 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أعرض بلطف الماوس في كابح. تراجع جاحظ 2/3 نهاية ذيله في حمام مائي وبدء الكرونومتر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وقف الكرونومتر في أقرب وقت الماوس تسحب ذيله من الماء الساخن وتسجيل الوقت الكمون (في ثانية). في اله عدم وجود أي رد فعل مسبب للألم، يتم استخدام 25 ثانية وقف انتاج المواد الانشطارية لمنع تلف الأنسجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استبدال الماوس في قفصه واختبار واحد القادم حتى نهاية السلسلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تكرار القياسات استجابة مسبب للألم مرتين أكثر من ذلك، أخذ قياسات من الحيوانات في نفس الترتيب. يتم تحديد استجابة الكمون مسبب للألم (ثانية) لكل الماوس حيث بلغت قيمة متوسط ​​لمدة ثلاثة قرارات متتالية. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس استجابات الميكانيكية باستخدام اختبار الضغط الذيل (TPT) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أعرض بلطف الماوس إلى كابح ووضع ذيله تحت غيض مخروطي من analgesimeter. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اضغط على مفتاح القدم لتطبيق الضغط المتزايد بشكل موحد على الجزء القريب من الذيل حتى أول رد فعل مسبب للألم (المناضلة، الصرير) يحدث. في لحظة رد فعل الحيوان، تسجيل القوة الحالية (بالغرام) الذي يتسبب الاستجابة مسبب للألم. في غياب أي رد فعل، يتم استخدام 600 غرام قيمة الوقف لتجنب رإصدار الضرر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر هذا الإجراء على أجزاء الوسيط والبعيدة من الذيل من نفس الماوس. ويلاحظ فاصل زمني لا يقل عن 30 ثانية بين التدابير على الماوس نظرا لتجنب التكيف أو التحيز الإجهاد. استبدال الماوس في قفصه واختبار الحيوان المقبل حتى نهاية سلسلة (أي يتم اختبار جميع الفئران). يتم أخذ القيمة مسبب للألم (جرام) لكل الماوس حيث بلغت قيمة متوسط ​​لمدة ثلاثة قياسات (أي الداني، وسيطة وأجزاء البعيدة من الذيل من كل حيوان). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختبار مسبب للألم كرر (المبينة كافة الإجراءات تحت الخطوة 2) في أيام لاحقة، د 3 إلى د-1. </li></ol> 3 قياس المورفين تسكين (الخطوة C؛ D0) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد أفضل مزيج من الحيوانات التي يسمح يعتبر اختيار مجموعتين (ن = 8 لكل مجموعة) من الفئران مع متوسط ​​القيم مسبب للألم مستقرة وقابلة للمقارنة، أيهما الطريقة مسبب للألم (TIT أو TPT). وستتخذ هذه القيمة على أنها القاعديةاستجابة مسبب للألم مرجعية ل&quot;المالحة&quot; و &quot;المورفين&quot; جماعات المستقبل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس وزن الجسم من كل حيوان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد محلول المورفين (0.5 ملغ لكل مل المورفين) في العقيمة المالحة الفسيولوجية (كلوريد الصوديوم 0.9٪) للإدارة تحت الجلد (5 ملغ مورفين لكل كيلوغرام من وزن الجسم الحيوان). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس الكمون استجابة مسبب للألم (كما اتخذت الوقت نقطة 0) لكل الماوس على حد سواء &quot;المالحة&quot; وجماعات &quot;المورفين&quot; في TIT (جميع الخطوات تحت 2.1 أعلاه). ثم قياس حس الألم في TPT (جميع الخطوات تحت 2.2 أعلاه). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن المورفين تحت الجلد (عادة 0.25 مل من 0.5 ملغ / مل حل المورفين لكل 25 غرام وزن الماوس) والمالحة (0.25 مل لكل 25 غرام وزن الماوس) إلى &quot;المورفين&quot; وجماعات &quot;المالحة&quot;، على التوالي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس القيم مسبب للألم على TIT وTPT (جميع الإجراءات المذكورة أعلاه في إطار الخطوات 2.1 و 2.2 على التوالي) على مدى بالطبع الوقت (في 30 دقيقة intervتسكين آل) لتقييم المورفين (5 ملغ / كلغ) التي يسببها: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 30 دقيقة بعد الحقن، وقياس استجابة مسبب للألم (تقرير واحد) لكل من الماوس &quot;المالحة&quot; وجماعات &quot;المورفين&quot;، وذلك باستخدام TIT ثم TPT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم قياس القيم استجابة مسبب للألم (TIT وTPT) في جميع الفئران في نقاط زمنية (في ساعة): 3.5 1-1.5-2-2.5-3 وبعد الحقن. </li></ol></li></ol> 4 علاج المورفين المزمنة - التي يسببها المورفين هبرلجسا. (الخطوة D؛ D1 إلى D6) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في يوم: D1 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس القيم استجابة مسبب للألم على TIT وTPT كما هو موضح أعلاه (الخطوات 2.1 و 2.2). تعليم بعناية الإختفاء الانسحاب وحدود الضغط لكل حيوان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد محلول المورفين الطازجة كما هو مفصل في الخطوة 3.2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن المورفين تحت الجلد (5 ملغ / كغ من وزن الجسم) إلى المجموعة بأكملها &quot;المورفين&quot; والمالحة الفسيولوجية (0.25 مل لكل 25 غرام وزن الماوس) إلى مجموعة &quot;المالحة&quot;. اسمحوا عشرالحيوانات البريد راحة حتى اليوم التالي. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> على أيام: D2، D3، D4، D5 D6 وتكرار عمليات وصفها تحت القسم 4.1 </li></ol> 5 الإثبات للتسامح مسكن (الخطوة E؛ D7) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقييم يسببها المورفين تسكين وفقا لنموذج الوقت بالطبع المفصل بالفعل في القسم 3. </li></ol> 6. الحصول على البيانات والتحليلات الإحصائية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقييم القيم الاستجابة بصل مسبب للألم (الخطوة ب) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب عن كل يوم (على د-4-1 د لفترة) ويعني ± SEM القيم (ن = 8) لاستجابات مسبب للألم القاعدية كما الممنوحة من TIT وTPT داخل &quot;المالحة&quot; وجماعات &quot;المورفين&quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مؤامرة يعني مسبب للألم القيم القاعدية بوصفها وظيفة من الوقت (اليوم) لكلا الفريقين الشكل 2. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل المورفين تسكين الوقت بالطبع في يوم D0 (الخطوة C) وD7 (الخطوة E) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب، في كل نقطة زمنية بعد المورفينالحقن، يعني ± SEM القيم (ن = 8) لاستجابات مسبب للألم كما الممنوحة من TIT (في ثانية) وTPT (في ز) في كل مجموعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مؤامرة يعني القيم استجابة مسبب للألم بوصفها وظيفة من الوقت ل &#39;المالحة &quot;وجماعات&quot; المورفين &quot;في اليوم 0 الشكل 3 ويوم 7 الشكل 5. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطوير المورفين التي يسببها هبرلجسا (الخطوة D) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب عن كل يوم (أكثر من فترة العلاج D0-D7) يعني ± SEM القيم (ن = 8) للقيم استجابة مسبب للألم القاعدية كما الممنوحة من TIT وTPT داخل &#39;المعالجة المالحة&#39; والجماعات المعالجة المورفين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مؤامرة يعني القيم استجابة مسبب للألم القاعدية بوصفها وظيفة من الوقت (اليوم) ل &#39;المعالجة المالحة&#39; والجماعات المعالجة مورفين &#39;الشكل 4. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دليل للتسامح مسكن (خطوات C و E) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد من المورفين الوقت بالطبع الإلكترونيةتنفيذ xperiment في D0 الشكل 3 قيمة الوقت (أو نطاق الوقت) المطلوبة لالمورفين للحث على الاستجابة مسكن القصوى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأخذ هذه القيمة (عادة 30 دقيقة) كما في المرة إشارة إلى تقدير في D7 الشكل 5 قيمة حس الألم الأساس (المجموعة التي عولجت المالحة) واستجابة مسكن الفعلية (المجموعة التي عولجت المورفين) إلى المورفين الحادة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ، يتم عرض القيم مسبب للألم التي اتخذت في نقطة زمنية 30 دقيقة من المورفين تجارب الوقت بالطبع أجريت في D0 D7 وللمجموعات وتعامل المورفين-المعالجة المالحة كما رسوم بيانية الشكل 6. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إحصاءات: تحليل البيانات باستخدام طريقة واحدة التدابير المتكررة ANOVA. كانت عوامل الاختلاف العلاج (بين المواضيع) والوقت (ضمن الموضوع). للتحقق من الخلافات بشكل منفصل في كل مجموعة، تم تنفيذ تدابير المتكررة ANOVA. وأجريت مقارنات بين مجموعتين باستخدام المفردة اختبار t أو إقران اختبار t عند الاقتضاء. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم تعيين مستوى أهمية في P &lt;0.05. وتجرى جميع التحليلات الإحصائية باستخدام البرامج من STATview. </li></ol>

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

الأفيونية التي يسببها فرط التألم (OIH) ومسكن التسامح تحد من الفعالية السريرية للمواد الأفيونية في الحيوانات والبشر 1-3. يتم استكشاف إشراك الموالية للالتهابات 4،5 أو المؤيدة للمسبب للألم (مكافحة الأفيونية) 6،7 نظم حاليا الفرضيات. توضيح من الآليات الكامنة OIH والتسامح يتطلب مزيجا من المجراة في المختبر النهج، وذلك باستخدام نماذج حيوانية مناسبة، البروتوكولات التجريبية والأدوات الجزيئية. الصيدلة السلوكية هو النموذج المهيمن لرصد وتحديد ولايات مسكن ومفرط التألم في الحيوانات المختبرية (الجرذان والفئران). تطبيق الحوافز الضارة (الحرارية والميكانيكية أو الكيميائية) لجزء من الجسم مريحة (hindpaw، الذيل) من الحيوان يؤدي إلى انسحاب nocifensive التي يمكن وسجل بسهولة. نقترح هنا مقاربة منهجية لإحداث وتسجيل وقياس OIH والتسامح في البرية من نوع الفئران، وذلك باستخدام الذيل والذيل الغمر اختبارات الضغط. يسمح الإجراء لتحديد سهلة وحساسة وقابلة للتكرار القيم استجابة مسبب للألم الحرارية والميكانيكية في الفئران. كما هو موضح في بروتوكول الفيديو، C57BL / 6 الفئران تجربة فرط التألم الهامة التالية الإدارة المورفين المزمنة والحفاظ على هذا لعدة أيام. وخفضت بشكل كبير سواء القيم مسبب للألم الحرارية والميكانيكية، مقارنة مع المقاييس على الحيوانات السذاجة. علاوة على ذلك، لدينا التجريبية مجموعة المتابعة يسمح لمراقبة، بالإضافة إلى تطوير OIH، وانخفاض الاستجابة للمسكن المورفين (التسامح). دعم البيانات المقدمة عن رأي مفاده أن فرط التألم والتسامح قد تنطوي على الآليات الخلوية والجزيئية شيوعا 8،9، على الرغم من أن هذا هو المتنازع عليها في الأدب 1،10-12. أخيرا، هذا البروتوكول يمكن تكييفها على نحو مماثل لالفئران المعدلة وراثيا من أجل تقييم دور الجينات الفردية في MODULAنشوئها من الألم. كما يوفر النظام نموذج لتقييم فعالية وكلاء العلاجية المحتملة لتحسين تأثيرات مسكنة الأفيونية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="879">
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="34" rowspan="2" style="height:34px;width:220px;">Name</td>
			<td rowspan="2" style="width:231px;">Company</td>
			<td rowspan="2" style="width:139px;">Catalog Number</td>
			<td rowspan="2" style="width:291px;">Comments/description</td>
		</tr>
		<tr height="17">
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">C57BL/6N Tac mice</td>
			<td style="width:231px;">Taconic, Ry, Denmark</td>
			<td style="width:139px;">C57BL/6N Tac B6-M</td>
			<td style="width:291px;">Male mice (25-30g)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Morphine hydrochloride</td>
			<td style="width:231px;">Francopia, Paris, France</td>
			<td style="width:139px;">CAS n&#176; 52-26-6</td>
			<td style="width:291px;">Delivered with special authorization</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Syringes (Terumo)</td>
			<td style="width:231px;">Dutscher, Brumath, France</td>
			<td style="width:139px;">050000</td>
			<td style="width:291px;">Polypropylene; Sterile; Volume : 1 ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Needles (Terumo)</td>
			<td style="width:231px;">Dutscher, Brumath, France</td>
			<td style="width:139px;">050101</td>
			<td style="width:291px;">G26 &#189; (Terumo reference : NN2613RO1)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:220px;">Mouse restrainer</td>
			<td style="width:231px;">Home-made</td>
			<td style="width:139px;">-</td>
			<td style="width:291px;">Two metallic grids (5x11cm) assembled with adhesive tape and staples.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Thermostated water bath GR150</td>
			<td style="width:231px;">Grant Instruments, Cambridge, UK</td>
			<td style="width:139px;">GP 0540003</td>
			<td style="width:291px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">Analgesimeter</td>
			<td style="width:231px;">Panlab, Barcelona, Spain</td>
			<td style="width:139px;">LE 7306</td>
			<td style="width:291px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:220px;">Kaleidagraph software</td>
			<td style="width:231px;">Synergy software, Reading, PA, USA</td>
			<td style="width:139px;">Kaleidagraph 4.03&#160;</td>
			<td style="width:291px;">Scientific graphing</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:220px;">STATview software</td>
			<td style="width:231px;"></td>
			<td style="width:139px;"></td>
			<td style="width:291px;">Free download; Statistics</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of morphine-induced hyperalgesia and analgesic tolerance in mice using thermal and mechanical nociceptive modalities

فرط التألم الناجم عن المواد الأفيونية والتسامح تؤثر بشدة على الفعالية السريرية للمواد الأفيونية مسكنات الألم كما في الحيوانات والبشر. الآليات الجزيئية الكامنة وراء كل من الظواهر ليست مفهومة جيدا وينبغي أن تستفيد من التوضيح لهم من دراسة النماذج الحيوانية ومن تصميم البروتوكولات التجريبية المناسبة. نحن هنا وصف الأسلوب المنهجي للحمل، وتسجيل وقياس التي يسببها المورفين فرط التألم وكذلك لتثبت التسامح مسكن، وذلك باستخدام الذيل والذيل الغمر اختبارات الضغط في البرية من نوع الفئران. كما هو موضح في الفيديو، وينقسم إلى خمسة بروتوكول خطوات متسلسلة. التعامل والتعود مراحل تسمح بتحديد الآمن للاستجابة مسبب للألم القاعدية من الحيوانات. إدارة المورفين المزمن يؤدي فرط التألم كبيرة كما يتضح من زيادة في كل من الحساسية الحرارية والميكانيكية، في حين أن المقارنة بين تسكين الوقت دورات بعد الحاد أو مندوبيشير علاج المورفين عتيد بوضوح تنمية التسامح تتجلى في انخفاض في السعة استجابة مسكن. هذا البروتوكول يمكن تكييفها على نحو مماثل لالفئران المعدلة وراثيا من أجل تقييم دور الجينات الفردية في التشكيل من حس الألم وتسكين المورفين. كما يوفر نظام نموذجي للتحقيق في فعالية العوامل العلاجية المحتملة لتحسين فعالية المسكنات الأفيونية.

تقييم القيم بصل مسبب للألم من الفئران السذاجة (الخطوة ب) طبقت TIT وTPT بالتتابع إلى فوج كامل من الفئران (ن = 16)، وتوفير متوسط ​​القيم استجابة مسبب للألم. أفضل مزيج من الحيوانات سمح تعريف البعدية للمجموعتين (ن = 8) من الفئران، ويشار إلى المالحة والمورفين، الذي عرض قيم مسبب للألم القاعدية مماثلة ومستقرة الشكل 2. وتكافؤ المجموعتين صالحة مهما كانت اختبار مسبب للألم ( TIT: الشكل 2A؛ TPT: الشكل 2B) الذي تم تحديده. الوقت طبعا للمورفين في تسكين يوم 0 (الخطوة C) تم تقييم المورفين تسكين بعد حقنة واحدة (الشوري) من المورفين (5 ملغ / كلغ) في الفئران السذاجة باستخدام كل TIT الشكل 3A وTPT الشكل 3B. في كل الاختبارات، والتحليلات الإحصائية مع طريقة واحدة التدابير المتكررة ANOVA reveaل أن هناك تفاعل كبير بين العلاج والوقت لTIT (F (7، 98) = 72، ع &lt;0.001) وTPT (F (7، 98) = 31، ع &lt;0.001). TIT والبيانات TPT يحلل استخدام تدابير المتكررة ANOVA تشير إلى أنه لا يوجد تأثير حقن المياه المالحة (F (7، 49) = 0.49، ع&gt; 0.05) وجمعة (7، 49) = 1.85، P&gt; 0.05 على التوالي لTIT وTPT الاختبارات)، في حين حقن المورفين يؤدي الى تسكين قوية في الفئران (F (7، 49) = 92.46، ع &lt;0.001) وجمعة (7، 49) = 34.37، ع &lt;0.001 على التوالي لTIT والاختبارات TPT). تم التوصل إلى تأثير مسكن القصوى من المورفين بعد 30 دقيقة في TIT وبعد 60 دقيقة في TPT بالمقارنة مع الضوابط حقن المياه المالحة (ع &lt;0.001، المفردة اختبار t). كرر المورفين إدارات يقنع هبرلجسا في الفئران (الخطوة D) تم قياس القيم القاعدية مسبب للألم كل يومقبل المالحة أو المورفين ادارة (انظر البروتوكول). كما هو مبين في الشكل (4)، والإدارات المورفين مرة واحدة يوميا على مدى فترة العلاج 6 أيام يسببها لخفض الحرارية (F (7، 56) = 11.6، P &lt;0.001، والتدابير المتكررة ANOVA؛ الشكل 4A) كبيرة والتقدمية والميكانيكية (F ( 7،56) = 15،55، ع &lt;0.001، وكرر التدابير ANOVA؛ الشكل 4B) مسبب للألم القيم القاعدية. وضعت فرط التألم بسرعة كما بدأت تكون كبيرة في يوم 1 في TIT (ع &lt;0.01، المفردة اختبار t، مقارنة مع الضوابط حقن المياه المالحة) وفي يوم 2 في TPT (ع &lt;0.05، المفردة اختبار t، مقارنة المالحة حقن الضوابط). الوقت طبعا للمورفين في تسكين 7 يوم، بعد المزمن علاج المورفين (الخطوة E) في يوم 7، تم فحص الفئران التي تلقت المورفين أو المالحة حقن يومية على مدى 7 أيام (D0 إلى D6) في TIT الشكل 5A وTPT الشكل 5B الأول للقيم مسبب للألم القاعدية وثم لاستجابتها لمسكن المورفين الحاد (5 ملغ / كغ، واتفاقية استكهولم). في اتفاق مع تطور فرط التألم هو مبين في الشكل (4)، وكان قيمة مسبب للألم القاعدية (الوقت 0) من الفئران التي عولجت بشكل مزمن مع المورفين أقل بكثير من السيطرة على الفئران حقن المياه المالحة (ع &lt;0.001، المفردة اختبار t). التالية المورفين الحادة، واستجابة مسبب للألم من المجموعة التي عولجت المورفين المزمن بشكل ملحوظ، ولكن فقط قليلا تجاوزت قيمة مسبب للألم القاعدية من السيطرة على الفئران المحقونة المالحة قياسها 30 دقيقة في TIT وTPT (ع &lt;0.01 و p &lt;0.05، ر المفردة اختبار، على التوالي)، وعلى 60 دقيقة في TIT (ع &lt;0.05؛ المفردة اختبار t). من 2 ساعة بعد العلاج المورفين حتى نهاية التجربة، عاد الردود مسبب للألم إلى قيم أقل من تلك الفئران التحكم (ع&lt;0.001، المفردة اختبار t). مقارنة بين الردود مسكن القصوى من الفئران إلى مورفين قبل (يوم 0) وبعد علاج المورفين المزمن (يوم 7). القيم عتبة مسبب للألم المعروضة في الشكل (6) هم من TIT (A) وTPT (B) تنفيذ 30 دقيقة بعد حقن المورفين أو المالحة كما هو موضح في الشكلين 3 (يوم 0) و 5 (يوم 7). ولوحظ وجود انخفاض قوي في تسكين المورفين في الفئران بعد العلاج المورفين المزمن لمدة 7 أيام في مقارنة مع استجابتهم الأولية للوعي في اليوم 0 في كل الاختبارات مسبب للألم (ع &lt;0.001 إقران اختبار t). تظهر هذه البيانات أن التسامح لم تتطور في آلام شديدة الحساسية الحيوانات. <img alt="الشكل 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51264/51264fig1highres.jpg" width="500" /> الشكل 1. A خمس خطوات المواليةcedure لمراقبة المورفين التي يسببها فرط التألم والتسامح. وينقسم البروتوكول إلى خمس خطوات متسلسلة (AE) خلال المدة الإجمالية 15 يوما. <img alt="الرقم 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51264/51264fig2highres.jpg" width="500" /> . الرقم 2 تعريف القيم القاعدية مسبب للألم استجابة (الخطوة B؛ د-4 إلى د-1). يتم تطبيق الغمر الذيل (TIT) (A) والذيل الضغط (TPT) (B) اختبارات لسلسلة كاملة من الحيوانات من أجل تقييم القيم القاعدية مسبب للألم بهم. بعد ذلك، مجموعتين من الفئران (ن = 8)، ويشار إلى &quot;المالحة&quot; وجماعات &quot;المورفين&quot;، يتم تعريف بحيث تظهر متوسط ​​القيم مسبب للألم مستقرة وقابلة للمقارنة، ومهما كانت طريقة مسبب للألم الذي يعتبر. <img alt="الرقم 3" fo:content-width="5in" srج = &quot;/ files/ftp_upload/51264/51264fig3highres.jpg&quot; العرض = &quot;500&quot; /&gt; الرقم 3. بالطبع حان الوقت لتسكين المورفين في اليوم 0 (الخطوة C) في TIT (A) وTPT (B). تم تحديد القيمة القاعدية استجابة مسبب للألم من الفئران كل 30 دقيقة بعد المورفين واحد (5 ملغ / كغ، واتفاقية استكهولم. ) أو حقن المياه المالحة. يتم التعبير عن البيانات كما يعني ± SEM، ن = 8 الفئران في كل مجموعة. * P &lt;0.05، ** P &lt;0.01، *** P &lt;0.001، المفردة اختبار t مقارنة بالمجموعة الضابطة. <img alt="الرقم 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51264/51264fig4highres.jpg" width="500" /> الشكل 4 تطوير فرط التألم التالية الإدارة المتكررة المورفين (الخطوة D؛ D1 إلى D6). تم تحديد القيمة مسبب للألم القاعدية من الفئران عن طريق TIT (A) وTPT (B) مرة واحدة يوميا قبل المورفين (5 ملغ / كغ،الشوري) أو الإدارة المالحة. يتم التعبير عن بيانات القيم يعني ± SEM كما، ن = 8 الفئران في كل مجموعة. * P &lt;0.05، ** P &lt;0.01، *** P &lt;0.001 كتبها المفردة اختبار t بالمقارنة مع مجموعة المراقبة المعالجة المالحة. <img alt="الرقم 5" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51264/51264fig5highres.jpg" width="500" /> الرقم 5. الوقت بالطبع لتسكين المورفين في المورفين المزمنة الفئران التي عولجت في يوم 7 (الخطوة E) في TIT (A) وTPT (B). الفئران التي عولجت بشكل مزمن مع المورفين (النقاط السوداء) أو المالحة (مثلثات بيضاء) من يوم ليوم 6 0، وردت في اليوم 7 حقنة واحدة من المورفين (5 ملغ / كغ، SC) أو المالحة، على التوالي. تم تحديد استجابة مسبب للألم من الفئران كل 30 دقيقة بعد حقن المورفين أو المالحة. يتم التعبير عن البيانات كما يعني ± SEM، ن = 8 الفئران في كل مجموعة. * P &lt;0.05، ** P &amp; #60؛ 0.01 بواسطة المفردة اختبار t بالمقارنة مع مجموعة المراقبة المعالجة المالحة. أشرطة الخطأ التي لا يتجاوز حجم رموز مخفية. <img alt="الرقم 6" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51264/51264fig6highres.jpg" width="500" /> الشكل 6. مقارنة بين الحد الأقصى الردود مسكن من الفئران لالمورفين (5 ملغ / كغ، واتفاقية استكهولم.) قبل (يوم 0) وبعد العلاج المورفين المزمن (يوم 7). القيم ذكرت هنا من التجارب هو مبين في الشكل (3) والشكل (5). تم قياس القيم مسبب للألم باستخدام TIT (A) وTPT (B) 30 دقيقة بعد حقن المورفين أو المالحة. يتم التعبير عن البيانات كما يعني ± SEM، ن = 8 الفئران في كل مجموعة. *** P &lt;0.001 قبل الاقتران اختبار t.

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Morphine-induced Hyperalgesia and Analgesic Tolerance in Mice Using Thermal and Mechanical Nociceptive Modalities at JoVE.com

Assessment of Morphine-induced Hyperalgesia and Analgesic Tolerance in Mice Using Thermal and Mechanical Nociceptive Modalities

وصفنا بروتوكول لدراسة تطور فرط التألم الناجم عن المواد الأفيونية والتسامح في الفئران. استنادا إلى قياس الاستجابات مسبب للألم الحرارية والميكانيكية للحيوانات السذاجة والمعالجة المورفين، فإنه يسمح لقياس الزيادة في حساسية الألم (فرط التألم) وانخفاض في تسكين (التسامح) المرتبطة بإدارة الأفيونية المزمن.

تقييم المورفين التي يسببها هبرلجسا ومسكن التسامح في الفئران عن طريق الحرارية والميكانيكية مسبب للألم طرائق

Opioid-induced hyperalgesia and tolerance severely impact the clinical efficacy of opiates as pain relievers in animals and humans. The molecular ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Assessment of Motor Balance and Coordination in Mice using the Balance Beam

تقييم الرصيد موتور والتنسيق في الفئران باستخدام عارضة التوازن

Brain injury, genetic manipulations, and pharmacological treatments can result in alterations of motor skills in mice.  Fine motor coordination and ...

Rapid Determination of the Thermal Nociceptive Threshold in Diabetic Rats

سريع تحديد العتبة Nociceptive الحرارية في الفئران المصابة بمرض السكر

Painful diabetic neuropathy (PDN) is characterized by hyperalgesia i.e., increased sensitivity to noxious stimulus, and allodynia i.e., hypersensitivity ...

Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae

Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae

المحلية والعالمية طرق تقييم Nociception الحرارية في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; يرقات

In this article, we demonstrate assays to study thermal nociception in Drosophila larvae. One assay involves spatially-restricted (local) stimulation of ...

Assessment of Dendritic Arborization in the Dentate Gyrus of the Hippocampal Region in Mice

تقييم شجيري تشجر في التلفيف المسنن من منطقة الحصين في الفئران

Dendritic arborization has been shown to be a reliable marker for examination of structural and functional integrity of neurons. Indeed, the complexity ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

طريقة بسيطة وغير مكلفة لتحديد الباردة الحساسية والتكيف في الفئران

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Assessment of Hippocampal Dendritic Complexity in Aged Mice Using the Golgi-Cox Method

تقييم التعقيد الجذعي الحصين في الفئران المسنين باستخدام طريقة جولجي-كوكس

Dendritic spines are the protuberances from the neuronal dendritic shafts that contain&#160; excitatory synapses. The morphological and branching ...

Assessment of Dopaminergic Homeostasis in Mice by Use of High-performance Liquid Chromatography Analysis and Synaptosomal Dopamine Uptake

تقييم التوازن تتميز في الفئران باستخدام التحليل اللوني السائل عالي الأداء وامتصاص الدوبامين سينابتوسومال

Dopamine (DA) is a modulatory neurotransmitter controlling motor activity, reward processes and cognitive function. Impairment of dopaminergic (DAergic) ...

Visual Evoked Potential Recordings in Mice Using a Dry Non-invasive Multi-channel Scalp EEG Sensor

تسجيلات المحتملة مقولة البصرية في الفئران باستخدام الجاف غير الغازية متعدد القنوات فروة الرأس الاستشعار EEG

For scalp EEG research environments with laboratory mice, we designed a dry-type 16 channel EEG sensor which is non-invasive, deformable, and re-usable ...

Assessment of Sensory Thresholds in Dogs Using Mechanical and Hot Thermal Quantitative Sensory Testing

تقييم العتبات الحسية في الكلاب باستخدام الاختبارات الحسية الكمية الميكانيكية والحرارية الساخنة

Quantitative sensory testing (QST) is used to evaluate the function of the somatosensory system in dogs by assessing the response to applied mechanical ...