Name: profiling of estrogen-regulated micrornas in breast cancer cells
Uploaded: 2014-02-21T14:30:00
Duration: 16 min 24 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Profiling of Estrogen-regulated MicroRNAs in Breast Cancer Cells at JoVE.com

हम उनके miRNA विशेषज्ञता को साझा करने के लिए डा. कैरिन Edvardsson, कारोलिंस्का संस्थान, स्वीडन, और डॉ. Eylem Aydogdu, ह्यूस्टन विश्वविद्यालय, के लिए, नियंत्रण रेखा विज्ञान miRNA माइक्रोएरे मंच करने के लिए सलाह प्रदान करने के लिए, डॉ. Xiaolian गाओ, ह्यूस्टन विश्वविद्यालय के आभारी हैं . इस प्रकाशन में सूचना दी अनुसंधान पुरस्कार संख्या R01CA172437 के तहत राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान के राष्ट्रीय कैंसर संस्थान द्वारा समर्थित किया गया. सामग्री केवल लेखकों की ज़िम्मेदारी है और जरूरी नहीं कि राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान के आधिकारिक विचारों का प्रतिनिधित्व नहीं करता है. यह काम भी समझौते के तहत टेक्सास उभरते प्रौद्योगिकी कोष, कोई से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया. 300-9-1958.

<ol>
	<li>Katchy, A., Edvardsson, K., Aydogdu, E., Williams, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estradiol-activated+estrogen+receptor+alpha+does+not+regulate+mature+microRNAs+in+T47D+breast+cancer+cells.">Estradiol-activated estrogen receptor alpha does not regulate mature microRNAs in T47D breast cancer cells.</a> J. Steroid Biochem. Mol Biol. 128 (3-5), 145-153 (2012).</li><li>Bartel, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs:+genomics,+biogenesis,+mechanism,+and+function.">MicroRNAs: genomics, biogenesis, mechanism, and function.</a> Cell. 116 (2), 281-297 (2004).</li><li>Wickramasinghe, N. S., Manavalan, T. T., Dougherty, S. M., Riggs, K. A., Li, Y., Klinge, C. 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Trans. 40 (4), 752-758 (2012).</li><li>Kao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+profiling+of+breast+cancer+cell+lines+defines+relevant+tumor+models+and+provides+a+resource+for+cancer+gene+discovery.">Molecular profiling of breast cancer cell lines defines relevant tumor models and provides a resource for cancer gene discovery.</a> PLoS One. 4 (7), e6146 (2009).</li><li>Lacroix, M., Leclercq, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relevance+of+breast+cancer+cell+lines+as+models+for+breast+tumours:+an+update.">Relevance of breast cancer cell lines as models for breast tumours: an update.</a> Breast Cancer Res. Treat. 83 (3), 249-289 (2004).</li><li>Ross, D. T., Perou, C. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+collection+of+breast+cancer+cell+lines+for+the+study+of+functionally+distinct+cancer+subtypes.">A collection of breast cancer cell lines for the study of functionally distinct cancer subtypes.</a> Cancer Cell. 10 (6), 515-527 (2006).</li><li>Baker, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA+profiling:+separating+signal+from+noise.">MicroRNA profiling: separating signal from noise.</a> Nat. Methods. 7 (9), 687-692 (2010).</li><li>Ye, J., Coulouris, G., Zaretskaya, I., Cutcutache, I., Rozen, S., Madden, T. 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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genome-wide+study+of+the+repressive+effects+of+estrogen+receptor+beta+on+estrogen+receptor+alpha+signaling+in+breast+cancer+cells.">A genome-wide study of the repressive effects of estrogen receptor beta on estrogen receptor alpha signaling in breast cancer cells.</a> Oncogene. 27 (7), 1019-1032 (2008).</li><li>Yu, Y. T., Maroney, P. A., Darzynkiwicz, E., Nilsen, T. 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C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogenic+activity+of+phenol+red.">Estrogenic activity of phenol red.</a> Mol. Cell. Endocrinol. 57 (3), 169-178 (1988).</li><li>Benes, V., Castoldi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+profiling+of+microRNA+using+real-time+quantitative+PCR,+how+to+use+it+and+what+is+available.">Expression profiling of microRNA using real-time quantitative PCR, how to use it and what is available.</a> Methods. 50 (4), 244-249 (2010).</li><li>Git, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+comparison+of+microarray+profiling,+real-time+PCR,+and+next-generation+sequencing+technologies+for+measuring+differential+microRNA+expression.">Systematic comparison of microarray profiling, real-time PCR, and next-generation sequencing technologies for measuring differential microRNA expression.</a> RNA. 16 (5), 991-1006 (2010).</li><li>Schmittgen, T. D., Jiang, J., Liu, Q., Yang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+method+to+monitor+the+expression+of+microRNA+precursors.">A high-throughput method to monitor the expression of microRNA precursors.</a> Nucleic Acids Res. 32 (4), e43 (2004).</li><li>Setiawan, A. N., Lokman, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+reference+gene+selection+programs+to+study+the+silvering+transformation+in+a+freshwater+eel+Anguilla+australis:+a+cautionary+tale.">The use of reference gene selection programs to study the silvering transformation in a freshwater eel Anguilla australis: a cautionary tale.</a> BMC Mol. Biol. 11, 75 (2010).</li><li>Yuan, J. S., Reed, A., Chen, F., Stewart, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Statistical+analysis+of+real-time+PCR+data.">Statistical analysis of real-time PCR data.</a> BMC Bioinform. 7, 85 (2006).</li></ol>

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

स्तन कैंसर की कोशिकाओं में miRNA के हार्मोनल विनियमन के लिए तंत्र का निर्धारण इस रोग को समझने के लिए एक मंच प्रदान कर सकते हैं और स्तन कैंसर के लिए संभावित उपचार प्रदान कर सकते हैं. हार्मोन कार्रवाई के लिए इष्टतम स्थिति प्रदान करने के लिए इन कोशिकाओं संवर्धन बहुत महत्वपूर्ण है. इधर, E2 के एक इष्टतम खुराक इलाज के दौरान एक उपयुक्त समय के लिए इस्तेमाल किया गया था इलाज से पहले और कहा कि ब्याज (एस्ट्रोजेन) के हार्मोन बाहर रखा गया था कि यह सुनिश्चित करता है कि एक प्रोटोकॉल का वर्णन किया गया है. अन्य हार्मोनल और वृद्धि कारक प्रभाव धीरे - धीरे सीरम का स्तर कम करने और अपने हार्मोन, साइटोकिन्स, और वृद्धि कारकों के अधिकांश के छीन लिया गया है कि FBS है जो डीसीसी-FBS, का उपयोग करके एक न्यूनतम पर रखा गया था. Phenol लाल मुक्त मीडिया आगे फिनोल लाल estrogenic गतिविधि है और सेल लाइनों 20,21 में कुछ कार्यों को प्रभावित करने के लिए सूचित किया गया है, यह देखते हुए अन्य nonhormonal प्रभाव को कम करने के लिए इस्तेमाल किया गया था. हार्मोन के लिए कोशिकाओं के जोखिम के समय बहुत महत्व है. जीन की एस्ट्रोजन जुड़े नियमन के लिए, यह पहले से 24 hrexposure स्तन कैंसर की कोशिकाओं 1,18 में प्रत्यक्ष लक्ष्य जीन की महत्वपूर्ण प्रतिक्रिया है कि उत्पादन दिखाया गया है. MiRNAs शाही सेना पोलीमरेज़ द्वितीय द्वारा लिखित रहे हैं, mRNAs की तरह, यह यह भी miRNAs की प्रत्यक्ष विनियमन पता लगाने के लिए एक उपयुक्त समय मुद्दा यह है कि कल्पना है. यह इन miRNAs स्तन कैंसर की कोशिकाओं में इन ज्ञात ईआर लक्ष्य की अभिव्यक्ति को कैसे प्रभावित करते हैं और अगर अभी तक निर्धारित किया है. miRNA अभिव्यक्ति की रूपरेखा क्योंकि miRNA, परिपक्व miRNA अनुक्रम प्राथमिक miRNA और पूर्व miRNA में भी पाया जा सकता है कि इस तथ्य के रिश्तेदार छोटे आकार का चुनौतीपूर्ण हो सकता है, और क्योंकि उनके जीसी सामग्री 22 में विविधता के कर सकते हैं. कई तकनीकों और chemistries इस कठिनाई को दूर करने के लिए नियोजित किया गया है. इनमें माइक्रोएरे और qPCR विश्लेषण के लिए अलग अलग दृष्टिकोण (चित्रा 2) हैं. माइक्रोएरे व्यापक रूप से पूरे जीनोम गुदा के लिए स्वीकार कर लिया है हालांकिysis, यह झूठी नकारात्मक प्रदान कर सकते हैं और रसायन विज्ञान से मुद्रण प्रौद्योगिकी 23 से लेकर उपलब्ध प्लेटफार्मों के बीच मतभेद मौजूद हैं. MRNA टेप के हजारों की तुलना में हजारों की संख्या में गिने जाते हैं जो अपेक्षाकृत कुछ miRNA जीन, विश्लेषण करते समय भी सामान्य बनाने की प्रक्रिया एक चुनौती प्रस्तुत करता है. qPCR, दूसरी ओर, अधिक संवेदनशील है, और कम जीनों माना जाना हो तो बेहतर लागू किया जाता है. थाली में केवल एक तकनीकी दोहराने के साथ, बड़ी 384 अच्छी तरह प्लेटें में प्रदर्शन किया हालांकि, जब कई प्लेटें विश्लेषण महंगा बना देता है जो प्रत्येक नमूने के लिए विश्लेषण करने की आवश्यकता है. इसके अलावा, हमारे हाथ में, बहुत अधिक गलत नकारात्मक परिणाम माइक्रोएरे की तुलना DLP-LDA विश्लेषण का उपयोग कर प्राप्त किया गया. परिपक्व miRNA अनुक्रम प्राथमिक miRNA और पूर्व miRNA दृश्यों में मौजूद है को देखते हुए, यह पीसीआर तकनीक 24 का उपयोग कर इन टेप के बीच अंतर करने के लिए ब्याज की है. डीएलपी जांच पूर्व miRNAs, और सपा के लिए भी उपलब्ध हैंecific प्राइमरों भी जाती डाई qPCR प्रौद्योगिकी का उपयोग वेरिएंट विभिन्न परिपक्व या अग्रदूत को छोड़ने के लिए तैयार किया जा सकता है. qPCR परिणाम की रूपरेखा से अंतर अभिव्यक्ति की मान्यता के लिए एक सुनहरा मानक है. qPCR की प्रभावशीलता, तथापि, शाही सेना निकासी, आरएनए अखंडता (गुणवत्ता), सीडीएनए संश्लेषण, प्रथम डिजाइन, पहचान पद्धति (रसायन विज्ञान), और डेटा सामान्य बनाने 1,22,25 के लिए संदर्भ जीन सहित कई मापदंडों पर निर्भर करता है. कम miRNA अनुक्रम की लंबाई ज्यादा विकल्प प्राइमर डिजाइन के लिए कमरा नहीं देता है के बाद से miRNA विश्लेषण के लिए प्रथम डिजाइन के लिए विकल्प बहुत सीमित है, और केवल एक प्राइमर इस छोटे से दृश्य में harbored किया जा सकता है. अत: वैकल्पिक जोड़तोड़ के लिए की जरूरत चित्रा 2 में सचित्र के रूप में. तकनीकी replicates प्रवर्धन विधि की मजबूती और नियोजित प्रक्रिया को मान्य करने के लिए महत्वपूर्ण हैं. जैविक प्रतिकृति सामान्य जैविक variatio के एक प्रतिनिधित्व के लिए आवश्यक हैंएन, उपचार ligand के लिए, और एक सेल में देखा प्रभाव प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य हैं दिखाने के लिए कि चर प्रतिक्रिया भी शामिल है. हमारे अनुभव के आधार पर, सेल संस्कृतियों के बीच miRNA अभिव्यक्ति में बदलाव हो सकता है. आमतौर पर इन मतभेदों को 1.3 गुना से कम नहीं हैं, और मूल्यों के औसत और इसी एसडी प्राकृतिक और तकनीकी भिन्नता को पहचानती है. इस बदलाव सेल घनत्व और सेल कार्यों पारित करने के लिए पारित होने से बदल सकता है तथ्य यह है कि, सहित विभिन्न कारकों से परिणाम सकता है. पी मूल्य 0.05 से कम है जब ligand उपचार से उत्पन्न सांख्यिकीय महत्वपूर्ण अभिव्यक्ति की पहचान करने के लिए, एक व्यापक रूप से स्वीकार महत्व है. इधर, दो पूंछ वितरण और दो नमूना असमान विचरण मापदंडों का उपयोग जैविक और तकनीकी replicates पर एक छात्र के टी परीक्षण का इस्तेमाल किया गया है. अन्य T-परीक्षण मापदंडों मौजूद हैं, और चुनाव प्रयोगात्मक सेटअप 26 पर निर्भर करता है. परिपक्व मीर के हार्मोनल नियमों के मूल्यांकन में एक विस्तृत प्रोटोकॉलस्तन कैंसर की कोशिकाओं में एनए प्रदान की गई है. रूपरेखा में और इन miRNA अभिव्यक्ति मान्य के महत्वपूर्ण प्रौद्योगिकियों और रसायन शास्त्र स्पष्ट रूप से समझाया गया है. स्तन कैंसर की कोशिकाओं में miRNA के अध्ययन के लिए चुना प्रौद्योगिकी अंत में वास्तव में जांच की जा रही है पर निर्भर करता है.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1277">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:515px;">DMEM</td>
			<td style="width:364px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:399px;">11885092</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">F12</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11765054</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F0926-500ML</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin Streptomycin</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15140122</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">phenol red-free DMEM&#160;</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11054020</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ultrapure Water</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>Specific equipment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DCC-FBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F6765-500ML</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100X L-glutamine</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>25030081</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PBS tablet</td>
			<td>Medicago, Accurate chemicals</td>
			<td>Accurate (BF092051-100), Medicago (09-9400-100)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">17&#946;-estradiol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E2758</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ICI 182,780&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I4409</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E7023-600ML</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">T47D or MCF7 cells lines</td>
			<td>American Type Culture Collection (ATCC)</td>
			<td>T47D (ATCC HTB-133) and MCF7 (ATCC HTB-22)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">T-75 flask&#160;</td>
			<td>VWR International LLC</td>
			<td>BD353136 (vented cap)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin-EDTA</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>25300062</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Serological pipet</td>
			<td>VWR International LLC</td>
			<td>53300. For 5mL (53300-421)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Countess Cell Counting chamber</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>C10228</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Countess Automated Cell Counter</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>C10227</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">100 mm plates&#160;</td>
			<td>VWR International LLC</td>
			<td>25382-166</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Guanidinium thiocyanate-Phenol solution (TRizol)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15596026</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rubber cell scraper&#160;</td>
			<td>VWR International LLC</td>
			<td>82050-470</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Guanidinium thiocyanate-Phenol-Chloroform method (miRNeasy Mini Kit/Trizol)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>217004</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rnase-Free DNase I&#160; kit (DNA degradation)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79254</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RNase-free water (Nuclease-free water)</td>
			<td>Thermoscientific</td>
			<td>SH30538.02</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nanodrop 1000 Spectrophotometer&#160;</td>
			<td>Thermoscientific</td>
			<td>ND-1000</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agilent RNA 6000 Nano Assay kit</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5067-1512</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agilent 2100 Bioanalyzer</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>G2938C and for software (G2946)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">All primers (except TaqMan primers)</td>
			<td>Integrated DNA Technologies</td>
			<td>Specific per order for each gene/miRNA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">First strand buffer, DTT, dNTPs, superscript III (Superscript III cDNA synthesis kit)&#160;</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>18080085</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MicroAmp Fast 96-Well reaction plate&#160;</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>4346906</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fast Optical Adhesive Covers</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>4311971</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2X SYBR green PCR master mix (Cyanine dye)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>4385612</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">7500 Fast Real-Time PCR System and software</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>4351106</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#956;Paraflo Microfluidic Biochip Technology&#160;</td>
			<td>LCSciences</td>
			<td>MRA-1001 and AS-2001(for result analysis)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DLP-LDA (TLDA) Megaplex Pools Assay (Rt primers/Human pool set)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>4400928</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dual Labeled Probes (TaqMan) miRNA RT kit&#160;</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>4366596</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GeneAmp PCR System 9700 thermocycler</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>4310899</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dual Labeled Probes (TaqMan) 2X Universal PCR Master Mix-No AmpErase UNG</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>4324018</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">7900HT Fast Real-Time PCR system</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>4329001</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SDS and RQ manager softwares</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>4444202</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NCode miRNA First-Strand cDNA Synthesis and qRT-PCR Kit</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>MIRC-50</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10X DPL (TaqMan) RT primers</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>Specific for each miRNA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">20X DPL (TaqMan) real-time assay primer&#160;</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>Specific for each miRNA</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

profiling of estrogen-regulated micrornas in breast cancer cells

एस्ट्रोजन स्तन ग्रंथि विकास और स्तन कैंसर की प्रगति में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है. यह करने के लिए बाध्य है और एस्ट्रोजन रिसेप्टर्स (नेताओं), ERα, और ERβ को सक्रिय करने के द्वारा अपने कार्य मध्यस्थता करता है. ERα अक्सर स्तन कैंसर में upregulated और स्तन कैंसर कोशिकाओं के प्रसार को ड्राइव है. नेताओं प्रतिलेखन कारक के रूप में कार्य और जीन अभिव्यक्ति को विनियमित. प्रोटीन जीन कोडिंग की ERα के नियमन अच्छी तरह से स्थापित है, जबकि microRNA (miRNA) noncoding के अपने विनियमन कम का पता लगाया है. miRNAs उनके अनुवाद बाधा या उनके mRNA अपमानजनक, जीन के बाद transcriptional विनियमन में एक प्रमुख भूमिका निभाते हैं. miRNAs ओंकोजीन या ट्यूमर शामक के रूप में कार्य कर सकते हैं और भी बायोमार्कर का वादा कर रहे हैं. उपलब्ध miRNA assays के अलावा, माइक्रोएरे और मात्रात्मक वास्तविक समय पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (qPCR) बड़े पैमाने पर miRNA के स्तर का पता लगाने और यों इस्तेमाल किया गया है. स्तन कैंसर, वीं में एस्ट्रोजन संकेतन द्वारा विनियमित miRNAs की पहचान करने के लिएERα पॉजिटिव स्तन कैंसर कोशिका लाइनों में EIR अभिव्यक्ति की तुलना में थे पहले और बाद में जांच कम घनत्व सरणियों लेबल μParaflo-microfluidic प्रोटीन और दोहरी दोनों का उपयोग कर एस्ट्रोजन सक्रियण. परिणाम जांच आधारित रसायन शास्त्र लेबल जाती डाई आधारित और दोहरी दोनों को लागू करने, विशिष्ट qPCR assays का उपयोग मान्य किया गया. इसके अलावा, एक समय बिंदु परख समय के साथ नियमों की पहचान करने के लिए इस्तेमाल किया गया था. इस अध्ययन में इस्तेमाल miRNA परख दृष्टिकोण के लाभ यह भी सीमित नमूना मात्रा के साथ, कई नमूनों में परिपक्व miRNA नियमों की एक तेजी से स्क्रीनिंग के लिए सक्षम बनाता है. विशेष सेल संस्कृति के लिए स्थितियां और एस्ट्रोजन उपचार, जैविक और तकनीकी replicates, और बड़े पैमाने पर प्रदर्शन सहित लेआउट, अलग तकनीक का उपयोग कर में गहराई पुष्टियों द्वारा पीछा किया, miRNA नियमों का एक मजबूत पता लगाने सुनिश्चित करता है, और झूठी सकारात्मक और अन्य कलाकृतियों को समाप्त. प्राथमिक और अग्रदूत प्रतिलेख छुट्टी पर हालांकि, उत्परिवर्तित या अज्ञात miRNAs, या विनियमोंएल, पता नहीं होगा. यहाँ प्रस्तुत विधि एस्ट्रोजन की मध्यस्थता miRNA विनियमन की पूरी जांच का प्रतिनिधित्व करता है.

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Profiling of Estrogen-regulated MicroRNAs in Breast Cancer Cells

एस्ट्रोजन और microRNAs दोनों के माध्यम से संकेत आण्विक स्तन कैंसर के विकास और विकास में महत्वपूर्ण हैं. एस्ट्रोजन प्रतिलेखन कारक हैं जो एस्ट्रोजन रिसेप्टर्स को सक्रिय करता है. कई प्रतिलेखन कारक microRNAs की अभिव्यक्ति को नियंत्रित कर सकते हैं, और एस्ट्रोजन विनियमित microRNAs विभिन्न बड़े पैमाने पर तकनीक का उपयोग कर profiled किया जा सकता है.

स्तन कैंसर की कोशिकाओं में एस्ट्रोजन विनियमित microRNAs की रूपरेखा

Estrogen plays vital roles in mammary gland development and breast cancer progression. It mediates its function by binding to and activating the estrogen ...

Research

JoVE Journal

Medicine

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

स्तन कैंसर मस्तिष्क मेटास्टेसिस के ट्यूमर Hypoxia गतिशीलता के vivo bioluminescence इमेजिंग में एक माउस मॉडल में

It is well recognized that tumor hypoxia plays an important role in promoting malignant progression and affecting therapeutic response negatively. There ...

Multi-modal Imaging of Angiogenesis in a Nude Rat Model of Breast Cancer Bone Metastasis Using Magnetic Resonance Imaging, Volumetric Computed Tomography and Ultrasound

स्तन कैंसर अस्थि मेटास्टेसिस की एक नग्न चूहा मॉडल चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग, बड़ा गणना टोमोग्राफी और अल्ट्रासाउंड का उपयोग मल्टी मोडल एंजियोजिनेसिस इमेजिंग

Angiogenesis is an essential feature of cancer growth and metastasis formation. In bone metastasis, angiogenic factors are pivotal for tumor cell ...

Live Imaging of Drug Responses in the Tumor Microenvironment in Mouse Models of Breast Cancer

स्तन कैंसर के माउस मॉडल में ट्यूमर microenvironment में दवा प्रतिक्रियाओं की इमेजिंग जीते

The tumor microenvironment plays a pivotal role in tumor initiation, progression, metastasis, and the response to anti-cancer therapies. Three-dimensional ...

Three Dimensional Cultures: A Tool To Study Normal Acinar Architecture vs. Malignant Transformation Of Breast Cells

तीन आयामी संस्कृति: स्तन कोशिकाओं की घातक परिवर्तन बनाम सामान्य कोष्ठकी संरचना का अध्ययन करने के लिए एक उपकरण

Invasive breast carcinomas are a group of malignant epithelial tumors characterized by the invasion of adjacent tissues and propensity to metastasize. The ...

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional (3D) Model

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional 3D Model

एक तीन आयामी (3 डी) मॉडल का उपयोग कर स्तन कैंसर कोशिका invasiveness की मात्रा

It is now well known that the cellular and tissue microenvironment are critical regulators influencing tumor initiation and progression. Moreover, the ...

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

Molecular Profiling of the Invasive Tumor Microenvironment in a 3-Dimensional Model of Colorectal Cancer Cells and Ex vivo Fibroblasts

आण्विक कोलोरेक्टल कैंसर की कोशिकाओं का एक 3 आयामी मॉडल में आक्रामक ट्यूमर microenvironment की रूपरेखा और<em&gt; पूर्व vivo</em&gt; Fibroblasts

Invading colorectal cancer (CRC) cells have acquired the capacity to break free from their sister cells, infiltrate the stroma, and remodel the ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

चूहे के स्तन वसा पैड में स्तन कैंसर की कोशिकाओं की orthotopic इंजेक्शन ट्यूमर के विकास का अध्ययन करने के लिए।

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

विवो और पूर्व vivo पेरिटोनियल वसा में दूधिया स्पॉट संरचनाएं की डिम्बग्रंथि के कैंसर Metastatic औपनिवेशीकरण अध्ययन के लिए दृष्टिकोण में

High-grade serous ovarian cancer (HGSC), the cause of widespread peritoneal metastases, continues to have an extremely poor prognosis; fewer than 30% of ...

Utilization of the Soft Agar Colony Formation Assay to Identify Inhibitors of Tumorigenicity in Breast Cancer Cells

शीतल अग्रवाल कालोनी गठन परख की उपयोगिता स्तन कैंसर की कोशिकाओं में Tumorigenicity के inhibitors पहचानें

Given the inherent difficulties in investigating the mechanisms of tumor progression in vivo, cell-based assays such as the soft agar colony formation ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

अग्नाशय के कैंसर नई उपचार रणनीतियों के विकास के लिए सेल के लक्षण स्टेम का अध्ययन

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...