Name: protein-protein interactions visualized by bimolecular fluorescence complementation in tobacco protoplasts and leaves
Uploaded: 2014-03-09T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Protein-protein Interactions Visualized by Bimolecular Fluorescence Complementation in Tobacco Protoplasts and Leaves at JoVE.com

Wij willen Jürgen Soll bedanken voor nuttige discussies en Chris Carrie voor kritische lezing van het manuscript. Dit project werd gefinancierd door de DFG en Fonds der Chemischen Industrie (subsidies nummers SFB 1035, project A04 SS en Do 187/22 aan de goede kant).

1. Transformatie van BiFC constructen Agrobacteria <ol><li> Klonen van BiFC constructen <ol><li> Versterken het gen van belang uit een geschikt sjabloon gebruiken oligonucleotiden die flankerende attB-sites. Voer een PCR met behulp van een corrigerend polymerase. Pas de lengte van de uitgloeistap de ontworpen primer combinatie en de lengte van het rek stap volgens de fragmentgrootte. Controleer het PCR-product door agarosegelelektroforese en zuiveren met behulp van een PCR Clean-up Kit. </li><li> Voer de BP reactie me...

<ol>
	<li>Citovsky, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular+localization+of+interacting+proteins+by+bimolecular+fluorescence+complementation+in+planta.">Subcellular localization of interacting proteins by bimolecular fluorescence complementation in planta.</a> J. Mol. Biol. 362, 1120-1131 (2006).</li><li>Schutze, K., Harter, K., Chaban, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bimolecular+fluorescence+complementation+(BiFC)+to+study+protein-protein+interactions+in+living+plant+cells.">Bimolecular fluorescence complementation (BiFC) to study protein-protein interactions in living plant cells.</a> Methods Mol. Biol. 479, 189-202 (2009).</li><li>Weinthal, D., Tzfira, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+protein-protein+interactions+in+plant+cells+by+bimolecular+fluorescence+complementation+assay.">Imaging protein-protein interactions in plant cells by bimolecular fluorescence complementation assay.</a> Trends Plant Sci. 14, 59-63 (2009).</li><li>Ohad, N., Shichrur, K., Yalovsky, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+analysis+of+protein-protein+interactions+in+plants+by+bimolecular+fluorescence+complementation.">The analysis of protein-protein interactions in plants by bimolecular fluorescence complementation.</a> Plant Physiol. 145, 1090-1099 (2007).</li><li>Ohad, N., Yalovsky, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utilizing+bimolecular+fluorescence+complementation+(BiFC)+to+assay+protein-protein+interaction+in+plants.">Utilizing bimolecular fluorescence complementation (BiFC) to assay protein-protein interaction in plants.</a> Methods Mol. Biol. 655, 347-358 (2010).</li><li>Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+green+fluorescent+protein.">The green fluorescent protein.</a> Annu. Rev. Biochem. 67, 509-544 (1998).</li><li>Lee, L. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+a+cDNA+library+for+protein-protein+interactions+directly+in+planta.">Screening a cDNA library for protein-protein interactions directly in planta.</a> Plant Cell. 24, 1746-1759 (2012).</li><li>McFarlane, H. E., Shin, J. J., Bird, D. A., Samuels, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arabidopsis+ABCG+transporters,+which+are+required+for+export+of+diverse+cuticular+lipids,+dimerize+in+different+combinations.">Arabidopsis ABCG transporters, which are required for export of diverse cuticular lipids, dimerize in different combinations.</a> Plant Cell. 22, 3066-3075 (2010).</li><li>Dunschede, B., Bals, T., Funke, S., Schunemann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+studies+between+the+chloroplast+signal+recognition+particle+subunit+cpSRP43+and+the+full-length+translocase+Alb3+reveal+a+membrane-embedded+binding+region+in+Alb3+protein.">Interaction studies between the chloroplast signal recognition particle subunit cpSRP43 and the full-length translocase Alb3 reveal a membrane-embedded binding region in Alb3 protein.</a> J. Biol. Chem. 286, 35187-35195 (2011).</li><li>Gehl, C., Waadt, R., Kudla, J., Mendel, R. R., Hansch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+GATEWAY+vectors+for+high+throughput+analyses+of+protein-protein+interactions+by+bimolecular+fluorescence+complementation.">New GATEWAY vectors for high throughput analyses of protein-protein interactions by bimolecular fluorescence complementation.</a> Mol. Plant. 2, 1051-1058 (2009).</li><li>Qbadou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+chaperone+Hsp90+delivers+precursor+proteins+to+the+chloroplast+import+receptor+Toc64.">The molecular chaperone Hsp90 delivers precursor proteins to the chloroplast import receptor Toc64.</a> EMBO J. 25, 1836-1847 (2006).</li><li>Schweiger, R., Muller, N. C., Schmitt, M. J., Soll, J., Schwenkert, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AtTPR7+is+a+chaperone+docking+protein+of+the+Sec+translocon+in+Arabidopsis.">AtTPR7 is a chaperone docking protein of the Sec translocon in Arabidopsis.</a> J. Cell Sci. , (2012).</li><li>Schweiger, R., S, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AtTPR7+as+part+of+the+Arabidopsis+Sec+post-translocon.">AtTPR7 as part of the Arabidopsis Sec post-translocon.</a> Plant Signal Behav. 8, (2013).</li><li>Nelson, B. K., Cai, X., Nebenfuhr, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multicolored+set+of+in+vivo+organelle+markers+for+co-localization+studies+in+Arabidopsis+and+other+plants.">A multicolored set of in vivo organelle markers for co-localization studies in Arabidopsis and other plants.</a> Plant J. 51, 1126-1136 (2007).</li><li>Kerppola, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bimolecular+fluorescence+complementation+(BiFC)+analysis+as+a+probe+of+protein+interactions+in+living+cells.">Bimolecular fluorescence complementation (BiFC) analysis as a probe of protein interactions in living cells.</a> Annu. Rev. Biophys. 37, 465-487 (2008).</li><li>Koop, H. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+foreign+sequences+into+the+tobacco+plastome+via+polyethylene+glycol-mediated+protoplast+transformation.">Integration of foreign sequences into the tobacco plastome via polyethylene glycol-mediated protoplast transformation.</a> Planta. 199, 193-201 (1996).</li></ol>

Bij het plannen van een BiFC experiment een aantal punten moet worden beschouwd. Hoewel geen structurele informaties eiwitten van belang vereist, de topologie bekend bij het werken met membraan-overspannende eiwitten. De fluorescerende eiwitten moeten zich in dezelfde subcellulair compartiment of staan ​​voor dezelfde zijde van een membraan interactie mogelijk. Natuurlijk, bij het analyseren eiwitten die een N-terminale targeting sequentie nodig, maar alleen een C-terminaal tag kan worden beschouwd. Omdat het mogeli...

Het bestuderen van de vorming van eiwitcomplexen en hun lokalisatie in plantencellen in vivo is essentieel voor cellulaire netwerken onderzoeken, signalering en metabole processen. BiFC maakt visualisatie van eiwit-eiwit interacties in hun natuurlijke milieu zijn in het levende plantencel 1-5. In de BiFC benadering de complementatie van twee niet-fluorescerende N-en C-terminale fragmenten van een fluorescerend eiwit leiden tot een opnieuw fluorescerend eiwit. Fragmenten van verschillende fluorescerende eiwitten zijn gebruikt om eiwit interacties te detecteren, bijvoorbeeld het groen fluorescent eiwit (GFP) de chromofoor waarvan chemisch gevormd door drie verschillende resten 6. Fluorescente eiwitten kunnen worden gehalveerd binnen een lus of ß-streng leiden tot twee niet-fluorescerende fragmenten die kunnen worden gefuseerd aan twee eiwitten van belang. De test kan worden gebruikt om interacties te detecteren in elk subcellulaire compartimnt in elk aëroob kweken organisme of cellen die genetisch kunnen worden gemodificeerd om de fusie-eiwitten tot expressie. Als de twee eiwitten zijn in dichte nabijheid in de cel, wordt fluorescentie gereconstitueerd en kan worden gecontroleerd door microscopisch zonder toevoeging van exogeen fluoroforen of kleurstoffen 3. Tabak (Nicotiana benthamiana) heeft bewezen een geschikte modelorganisme de interactie van eiwithoudende visualiseren, aangezien vormen gemakkelijk door gebruik Agrobacterium-gemedieerde transformatie van tabaksbladeren met de gegenereerde constructen kan worden uitgedrukt. Agrobacterium gebruik een zogenaamde Ti-plasmide (tumor-inducerende) coderen voor enzymen die de transductie van het gen van interesse in plantencellen mediëren. BiFC is goed toepasbaar voor oplosbare en voor membraaneiwitten in cellulaire compartimenten en is met succes gebruikt in de afgelopen jaren identificeren interagerende eiwitten in vivo alsook interactieplaatsen analyserenbinnen de eiwitten 7-9. Bij expressie van de ingebrachte genen, kan de interactie van de fluorescerende eiwitten direct worden gevisualiseerd in bladeren, die geschikt is voor grotere cellulaire structuren, zoals het endoplasmatisch reticulum (ER), de plasmamembraan of chloroplasten. Echter, de lokalisatie in meer verfijnde structuren controleren, bijvoorbeeld de chloroplast envelop, is het raadzaam om de fluorescentie te visualiseren in protoplasten geïsoleerd uit getransformeerde tabaksbladeren. Een reeks BiFC vectoren die ofwel een C-terminal of N-terminale fluorescente label moet worden gebruikt voor de BiFC benadering in planten 10. Het hieronder beschreven protocol werd gebruikt om de interactie van cytosolisch heat shock eiwit 90 (HSP90) bestuderen de tetratricopeptide repeat (TPR) domein bevattende eiwitten docking Toc64 en AtTPR7 die in de chloroplast buitenomhulling en het endoplasmatisch reticulum, respectievelijk 11-13. Hiertoe werd HSP90 gefuseerd aan de Cterminal deel van SCFP (SCFP C). Het label werd N-terminaal gefuseerd aan de chaperon toegankelijkheid van de C-eindstandige MEEVD bindende motief van HSP90 TPR domeinen type klemmen garanderen. Tegelijkertijd werd het N-terminale deel van Venus (Venus N) gefuseerd aan het cytosolische domein van het TPR-domein bevattende eiwitten docking Toc64 en AtTPR7 respectievelijk. Als negatieve controle wij gekloneerd de oplosbare C-terminale deel van SCFP C uitsluitend is onderdeel van het cytosol en daarom een geschikte controle. De fluorescerende tags van de onderzochte eiwitten aan dezelfde cellulaire compartiment oog in nabijheid en daardoor reconstitutie van het fluorescentiesignaal mogelijk. Om de lokalisatie van de gereconstitueerde fluorescentiesignaal markerproteïne gefuseerd aan een ander fluorescerend label kan worden gecotransformeerd de subcellulaire lokalisatie van de interactie demonstreren bepalen. Een ER marker eiwit gefuseerd mCherrry werd gelijktijdig getransformeerd in deBij het ​​ER gelegen AtTPR7 14. De autofluorescentie van chlorofyl diende als chloroplast marker in het geval van Toc64. Door dit niet alleen de in vivo interactie van Toc64 en AtTPR7 respectievelijk de cytosolische HSP90 chaperon kan direct worden gecontroleerd in tabaksbladeren maar ook de subcellulaire lokalisatie van de interactie kan worden onderzocht. BiFC is goed geschikt als aanvullende benadering van andere methoden bestuderen van eiwit-eiwit interacties. Vergeleken met co-immunoprecipitatie of in vitro pull-down experimenten, bijvoorbeeld, geen specifieke antilichamen beschikbaar zijn voor de eiwitten van belang, en de eiwitten niet te recombinant worden uitgedrukt in vitro, die lastig zijn, vooral voor membraaneiwitten. Bovendien ook voorbijgaande interacties worden gevolgd met BiFC, aangezien de eiwitten weergegeven door de interactie van de gefuseerde fluorescente markeringen 15.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="888">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">3&#39;,5&#39;-Dimethoxy-4&#39;-hydroxyacetophenone</td>
			<td style="width:147px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:255px;">D134406</td>
			<td style="width:195px;">Acetosyringone</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Cellulase, Onozuka-R10</td>
			<td style="width:147px;">Serva</td>
			<td style="width:255px;">16419</td>
			<td>from Trichoderma viridae</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">Macerozyme R-10&#160;</td>
			<td style="width:147px;">Serva</td>
			<td style="width:255px;">28302</td>
			<td>from Rhizopus sp</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:293px;">GATEWAY, BP Clonase II, Enzyme Kit</td>
			<td style="width:147px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:255px;">11789-(020)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">GATEWAY, LR Clonase II, Enzyme Kit</td>
			<td style="width:147px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:255px;">11791-(020)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">QIAprep Spin Miniprep Kit</td>
			<td style="width:147px;">Qiagen</td>
			<td style="width:255px;">27106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;">NucleoSpin Gel and PCR Clean-up Kit</td>
			<td style="width:147px;">Macherey-Nagel</td>
			<td style="width:255px;">740609-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:293px;">pDEST-GWVYNE</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td style="width:255px;">Gehl C. et al, 2009, Molecular Plant</td>
			<td>Gateway-cloning (Invitrogen)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:293px;">pDEST-VYNE(R)GW</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td style="width:255px;">Gehl C. et al, 2009, Molecular Plant</td>
			<td>Gateway-cloning (Invitrogen)</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:293px;">pDEST-SCYCE(R)GW</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td style="width:255px;">Gehl C. et al, 2009, Molecular Plant</td>
			<td>Gateway-cloning (Invitrogen)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:293px;"></td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td style="width:255px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protein-protein interactions visualized by bimolecular fluorescence complementation in tobacco protoplasts and leaves

Veel eiwitten interageren tijdelijk met andere eiwitten of geïntegreerd in multi-eiwitcomplexen hun biologische functie. Bimoleculaire fluorescentie complementatie (BiFC) is een in vivo methode om dergelijke interacties in plantencellen te monitoren. In de gepresenteerde protocol de onderzochte kandidaat eiwitten worden gefuseerd aan complementaire helften van fluorescerende eiwitten en de respectievelijke constructen worden geïntroduceerd in planten cellen via door Agrobacterium gemedieerde transformatie. Vervolgens worden de proteïnen tijdelijk tot expressie gebracht in tabaksbladeren en herstelde fluorescente signalen worden gedetecteerd met een confocale laser scanning microscoop in intacte cellen. Dit maakt niet alleen visualisatie van de interactie zelf, maar ook de subcellulaire lokalisatie van het eiwit complexen kan worden bepaald. Hiertoe kan merkergenen die een fluorescerend label worden tezamen tot expressie gebracht met de BiFC constructen, waardoor cellulaire structuren zoals t visualiserenhij endoplasmatisch reticulum, mitochondriën, het Golgi-apparaat of de plasmamembraan. De fluorescerende signaal kan worden bewaakt direct epidermale bladcellen of enkele protoplasten, die gemakkelijk kunnen worden geïsoleerd uit de getransformeerde tabaksbladeren. BiFC is bij uitstek geschikt om eiwit-eiwit interacties te bestuderen in hun natuurlijke omgeving in de levende cel. Er moet echter worden aangenomen dat de expressie moet worden door sterke promoters en de interactiepartners gemodificeerd door fusie van de relatief grote fluorescentie labels, die kunnen interfereren met de interactie mechanisme. Niettemin BiFC een uitstekende complementaire aanpak van andere algemeen toegepaste methoden onderzoeken eiwit-eiwit interacties, zoals co-immunoprecipitatie, in vitro pull-down tests of gist-twee-hybride experimenten.

In dit voorbeeld hebben we het BiFC methode om de interactie van de cytosolische moleculaire chaperon HSP90 met membraan docking eiwitten AtTPR7 en Toc64 controleren. AtTPR7 is onderdeel van de Sec translocon en de wisselwerking met cytosolische chaperones, die eventueel leveren uitscheiding preproteins voor post-translationele translocatie naar het ER membraan. Ook Toc64 bij de chloroplast buitenste omhulling handelt in post-translationele import door het ontvangen van HSP90 geassocieerd chloroplast preproteins. Beide ...

Watch this Scientific Journal Video about Protein-protein Interactions Visualized by Bimolecular Fluorescence Complementation in Tobacco Protoplasts and Leaves at JoVE.com

Protein-protein Interactions Visualized by Bimolecular Fluorescence Complementation in Tobacco Protoplasts and Leaves

Vorming van eiwitcomplexen in vivo kan worden gevisualiseerd door bimoleculaire fluorescentie complementatie. Interactie partners gefuseerd aan complementaire delen van fluorescente labels en tijdelijk tot expressie gebracht in tabaksbladeren, waardoor een opnieuw fluorescentiesignaal op nabijheid van de twee eiwitten.

Eiwit-eiwit interacties gevisualiseerd door Bimoleculaire Fluorescentie Complementatie in Protoplasten en Bladeren Tabak

Many proteins interact transiently with other proteins or are integrated into multi-protein complexes to perform their biological function. Bimolecular ...

Research

JoVE Journal

Biology

Fluorescence Activated Cell Sorting of Plant Protoplasts

Fluorescentie geactiveerde celsortering van plantenprotoplasten

High-resolution, cell type-specific analysis of gene expression greatly enhances understanding of developmental regulation and responses to environmental ...

Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Bimolecular Fluorescence Complementation BiFC Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Bimoleculaire Fluorescentie Complementatie (BiFC) test voor eiwit-eiwit interactie in Onion cellen met behulp van de Helios Gene Gun

Investigation of gene function in diverse organisms relies on knowledge of how the gene products interact with each other in their normal cellular ...

In-vivo Detection of Protein-protein Interactions on Micro-patterned Surfaces

In-vivo Detection of Protein-protein Interactions on Micro-patterned Surfaces

In-vivo detectie van eiwit-eiwit interacties op de Micro-oppervlakken met een patroon

Unraveling the interaction network of molecules in-vivo is key to understanding the mechanisms that regulate cell function and metabolism. A multitude of ...

Cell Electrofusion Visualized with Fluorescence Microscopy

Cel Electrofusion gevisualiseerd met fluorescentiemicroscopie

Cell electrofusion is a safe, non-viral and non-chemical method that can be used for preparing hybrid cells for human therapy. Electrofusion involves ...

Imaging Protein-protein Interactions in vivo

Imaging Protein-protein Interactions in vivo

Imaging eiwit-eiwit interacties In vivo</em

Protein-protein interactions are a hallmark of all essential cellular processes. However, many of these interactions are transient, or energetically weak, ...

Bimolecular Fluorescence Complementation

Bimoleculaire Fluorescentie Complementatie

Defining the subcellular distribution of signaling complexes is imperative to understanding the output from that complex. Conventional methods such as ...

Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) System

Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation BiFC System

Detectie van eiwit interacties in Plant met behulp van een Gateway-compatibele Bimoleculaire Fluorescentie Complementatie (BiFC) Systeem

We have developed a BiFC technique to test the interaction between two proteins in vivo. This is accomplished by splitting a yellow fluorescent protein ...

Flow Cytometric Analysis of Bimolecular Fluorescence Complementation: A High Throughput Quantitative Method to Study Protein-protein Interaction

Flowcytometrische analyse van Bimoleculaire Fluorescentie Complementatie: Een High Throughput kwantitatieve methode om eiwit-eiwit interactie Studie

Among methods to study protein-protein interaction inside cells, Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) is relatively simple and sensitive. BiFC ...

Investigating Protein-protein Interactions in Live Cells Using Bioluminescence Resonance Energy Transfer

Onderzoeken eiwit-eiwit interacties in levende cellen met behulp van bioluminescentie resonantie energieoverbrenging

Assays based on Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET) provide a sensitive and reliable means to monitor protein-protein interactions in live ...

Genome-wide Protein-protein Interaction Screening by Protein-fragment Complementation Assay (PCA) in Living Cells

Genome-wide Protein-protein Interaction Screening by Protein-fragment Complementation Assay PCA in Living Cells

Genoom-brede Eiwit-eiwit Interactie Screening door Eiwit-fragment Complementatie Assay (PCA) in levende cellen

Proteins are the building blocks, effectors and signal mediators of cellular processes. A protein&#8217;s function, regulation and localization often ...