Name: identification of novel genes associated with alginate production in pseudomonas aeruginosa using mini-himar1 mariner transposon-mediated mutagenesis
Uploaded: 2014-03-10T21:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification of Novel Genes Associated with Alginate Production in Pseudomonas aeruginosa Using Mini-himar1 Mariner Transposon-mediated Mutagenesis at JoVE.

Detta arbete stöddes av National Aeronautics and Space Administration West Virginia Space Grant Consortium (NASA WVSGC), cystisk fibros Foundation (CFF-YU11G0) och NIH P20RR016477 och P20GM103434 till West Virginia IDEA Nätverk för biomedicinsk forskning Excellence. Vi tackar Vonya M. Eisinger för teknisk hjälp med detta arbete.

1. Beredning av bakteriestammar och Biparental konjugation <ol><li> Ympa E. coli SM10/λpir/pFAC i 5 ml Luria Broth (LB) supplementerad med 15 pg / ml gentamycin och placera det i en skakinkubator över natten vid 37 ° C. </li><li> Inokulera P. aeruginosa stam PAO1 i 5 ml LB, och lägg i en skakande inkubator över natten vid 42 ° C. </li><li> Mät OD 600 av natten kulturer och blanda lika delar PAO1 och E. coli pFAC så att den slutliga volymen är mellan 1 till 1,4 ml. </li><l...

<ol>
	<li>Govan, J. R., Deretic, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+pathogenesis+in+cystic+fibrosis:+mucoid+Pseudomonas+aeruginosa+and+Burkholderia+cepacia.">Microbial pathogenesis in cystic fibrosis: mucoid Pseudomonas aeruginosa and Burkholderia cepacia.</a> Microbiol. Rev. 60, 539-574 (1996).</li><li>Chitnis, C. E., Ohman, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+analysis+of+the+alginate+biosynthetic+gene+cluster+of+Pseudomonas+aeruginosa+shows+evidence+of+an+operonic+structure.">Genetic analysis of the alginate biosynthetic gene cluster of Pseudomonas aeruginosa shows evidence of an operonic structure.</a> Mol. Microbiol. 8, 583-593 (1993).</li><li>Franklin, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomonas+aeruginosa+AlgG+is+a+polymer+level+alginate+C5-mannuronan+epimerase.">Pseudomonas aeruginosa AlgG is a polymer level alginate C5-mannuronan epimerase.</a> J. Bacteriol. 176, 1821-1830 (1994).</li><li>Franklin, M. J., Ohman, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutant+analysis+and+cellular+localization+of+the+AlgI,+AlgJ,+and+AlgF+proteins+required+for+O+acetylation+of+alginate+in+Pseudomonas+aeruginosa.">Mutant analysis and cellular localization of the AlgI, AlgJ, and AlgF proteins required for O acetylation of alginate in Pseudomonas aeruginosa.</a> J. Bacteriol. 184, 3000-3007 (2002).</li><li>Deretic, V., Gill, J. F., Chakrabarty, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+algD+coding+for+GDPmannose+dehydrogenase+is+transcriptionally+activated+in+mucoid+Pseudomonas+aeruginosa.">Gene algD coding for GDPmannose dehydrogenase is transcriptionally activated in mucoid Pseudomonas aeruginosa.</a> J. Bacteriol. 169, 351-358 (1987).</li><li>Mathee, K., McPherson, C. J., Ohman, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Posttranslational+control+of+the+algT+(algU)-encoded+sigma22+for+expression+of+the+alginate+regulon+in+Pseudomonas+aeruginosa+and+localization+of+its+antagonist+proteins+MucA+and+MucB+(AlgN)..">Posttranslational control of the algT (algU)-encoded sigma22 for expression of the alginate regulon in Pseudomonas aeruginosa and localization of its antagonist proteins MucA and MucB (AlgN)..</a> J. Bacteriol. 179, 3711-3720 (1997).</li><li>Boucher, J. C., Schurr, M. J., Yu, H., Rowen, D. W., Deretic, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomonas+aeruginosa+in+cystic+fibrosis:+role+of+mucC+in+the+regulation+of+alginate+production+and+stress+sensitivity.">Pseudomonas aeruginosa in cystic fibrosis: role of mucC in the regulation of alginate production and stress sensitivity.</a> Microbiology. 143, 3473-3480 (1997).</li><li>Martin, D. W., Holloway, B. W., Deretic, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+locus+determining+the+mucoid+status+of+Pseudomonas+aeruginosa:+AlgU+shows+sequence+similarities+with+a+Bacillus+sigma+factor.">Characterization of a locus determining the mucoid status of Pseudomonas aeruginosa: AlgU shows sequence similarities with a Bacillus sigma factor.</a> J. Bacteriol. 175, 1153-1164 (1993).</li><li>Damron, F. H., Goldberg, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteolytic+regulation+of+alginate+overproduction+in+Pseudomonas+aeruginosa.">Proteolytic regulation of alginate overproduction in Pseudomonas aeruginosa.</a> Mol. Microbiol. 84 (4), 595-607 (2012).</li><li>Browne, P., Barret, M., O'Gara, F., Morrissey, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computational+prediction+of+the+Crc+regulon+identifies+genus-wide+and+species-specific+targets+of+catabolite+repression+control+in+Pseudomonas+bacteria.">Computational prediction of the Crc regulon identifies genus-wide and species-specific targets of catabolite repression control in Pseudomonas bacteria.</a> BMC Microbiol. 10, 300 (2010).</li><li>Damron, F. H., Qiu, D., Yu, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Pseudomonas+aeruginosa+sensor+kinase+KinB+negatively+controls+alginate+production+through+AlgW-dependent+MucA+proteolysis.">The Pseudomonas aeruginosa sensor kinase KinB negatively controls alginate production through AlgW-dependent MucA proteolysis.</a> J. Bacteriol. 191, 2285-2295 (2009).</li><li>Damron, F. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+Pseudomonas+aeruginosa+regulon+controlled+by+the+sensor+kinase+KinB+and+sigma+factor+RpoN.">Analysis of the Pseudomonas aeruginosa regulon controlled by the sensor kinase KinB and sigma factor RpoN.</a> J. Bacteriol. 194, 1317-1330 (2012).</li><li>Qiu, D., Eisinger, V. M., Rowen, D. W., Yu, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulated+proteolysis+controls+mucoid+conversion+in+Pseudomonas+aeruginosa.">Regulated proteolysis controls mucoid conversion in Pseudomonas aeruginosa.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104, 8107-8112 (2007).</li><li>Schurr, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Which+bacterial+biofilm+exopolysaccharide+is+preferred,+Psl+or+alginate.">Which bacterial biofilm exopolysaccharide is preferred, Psl or alginate.</a> J. Bacteriol. 195, 1623-1626 (2013).</li><li>Wong, S. M., Mekalanos, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+footprinting+with+mariner-based+transposition+in+Pseudomonas+aeruginosa.">Genetic footprinting with mariner-based transposition in Pseudomonas aeruginosa.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97, 10191-10196 (2000).</li><li>Lampe, D. J., Akerley, B. J., Rubin, E. J., Mekalanos, J. J., Robertson, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperactive+transposase+mutants+of+the+Himar1+mariner+transposon.">Hyperactive transposase mutants of the Himar1 mariner transposon.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96, 11428-11433 (1999).</li></ol>

Det är viktigt att notera att denna metod kan användas i andra Pseudomonas-arter med dessa ändringar: inkubera P. fluorescens och P. putida vid 30 ° C, och P. stutzeri vid 42 ° C; P. stuzeri bör odlas på LB-plattor med tillsats av 150 | ig / ml gentamycin; på steg 1,11, P. stutzeri celler bör överföras till 500 l av LB istället för 1 ml. Dessutom finns det två viktiga steg för detta protokoll. För det första bör den mottagande stammen odlas vid den ...

Förmågan hos den opportunistiska, gramnegativa patogenen Pseudomonas aeruginosa att överproducera alginat är en viktig faktor för dess förmåga att etablera en biofilm. Överproduktionen av alginat är en fenotyp ofta kallad mucoidy. Isoleringen av mukoida kolonier från sputa av individer som lider av cystisk fibros (CF) är ett tecken på en kronisk infektion, och är direkt förknippad med en allmän nedgång i patientens hälsa 1. För närvarande är det underförstått att regleringen och produktion av alginat i P. aeruginosa sker främst på två operon. Den första är den alginat-biosyntetiska operonet, som innehåller 12 gener (algD - alg8 - alg44 - algK - alge - algG - algX - algL - ALGI - algJ - algF - alg) som är ansvarig för syntesen och export av alginatet Polymeren tvärs periplasman med den extracellulära environmennt 2-5. Den andra operon är ett kluster av gener som börjar med alternativa sigmafaktorn algU / T och fortsätter med Muca, mucB och mucD. AlgU / T är en positiv regulator, medan mucAB-D klassificeras som negativa regulatorer av alginat produktion 6-8. Dessutom transkriptionsregulatorer, såsom AlgB, AlgQ, AlgR och RpoN, samt post-transkriptionell och post-translationell modifiering av katabolitrepression kontroll, kinasaktivitet (KinB) och intramembrane proteolys har också visat sig vara inblandade i alginat reglering 9-14. Mini-himar1 transposonvektor kallas pFAC skapades ursprungligen i Dr Mekalanos lab vid Harvard Medical School 15. Den pFAC plasmid består av ett transposabelt element som flankeras av två inverterade upprepningar om 27 bps och en gentamycin motstånd kassett i mitten (aacC1: 534 bp), en gen som kodar för hyperactive mariner-transposas 16, och en gen som kodar för β-laktamas (bla) (Figur 1). Sekvensinformation för det transponerbara elementet i pFAC är tillgänglig vid GenBank accessionsnummer: DQ366300 13. I pFAC finns ett multipelt kloningsställe (MCS) bakom aacC1 genen som används för identifiering av insättningsstället kromosomala användning av omvänd PCR. En stor fördel med att använda mini himar1 transposon är inga specifika värdfaktorer krävs för införlivande (mutagenes). Dessutom finns det stor förekomst av TA dinukleotid insertionsställen som finns i hela genomet hos P. aeruginosa. Till exempel, TA dinukleotid insticksställen inträffar 94.404 och 100.229 gånger i PAO1 (6.264.404 bps, GenBank tillträdesnummer NC_002516.2) och PA14 (6.537.648 bps, GenBank åtkomstnummer NC_008463) genom, respektive. På grund av överflödet av TA dinukleotid i genomet, mini-himar1 </em&gt; Transposon kan orsaka hög densitet och slumpmässig mutagenes, som är särskilt lämplig för analys av virulensgener och de gener som är mycket reglerade. Teoretiskt kan mini-himar1 transposon infoga i varje icke-essentiell gen i genomet av P. aeruginosa. Detta ger cirka 18 TA ingsplatser per öppen läsram i PAO1 genomet. Här beskriver vi ett protokoll med användning av mini-himar1 transposon mutagenes för att identifiera nya regulatorer av mucoidy i P. aeruginosa. Mer specifikt vi biparentally konjugeras den pFAC vektor som innehåller en mini-himar1 transposon från E. coli SM10/λpir i nonmucoid prototrofa stammen PAO1. Efter transposonen integreras i genomet, är den mottagande stammen odlade på Pseudomonas Isolation Agar (PIA) som innehåller triklosan som hämmar tillväxten av E. coli. Sålunda kan ett bibliotek av mutanter av <em&gt; S. aeruginosa kan selekteras genom tillväxt på PIA plattan kompletterat med gentamycin och närvaron av den mukoid fenotyp. Observera, en sann transposon-medierad kontra ett integrations mutant har en gentamycin resistent och carbenicillin känsliga fenotyp. I denna studie var cirka 80.000 inför mutanter av PAO1 isolerade genom fyra olika konjugationer. Vi screenas sedan för slemmig isolat, och bestäms platsen för införing av restriktionsenzymdigerering, ligering och invers PCR. Vi utförde Southern blot-analys med användning av gentamycin motstånd kassetten som en sond för att se hur många insättnings per genomet. Vi bestämde att mer än 90% av mutanter som erhållits per konjugering använder detta protokoll hade bara ett enda exemplar av himar1 i genomet och visade den gentamycin resistenta och carbenicillin känsliga fenotyp. Sammanlagt 32 slemmig isolat identifierades, 22 av dem var mappas till olika loci av P. aeruginosa PAO1kromosom. Denna andel insättning ger tillräcklig täckning för att identifiera flera nya regulatorer av alginat överproduktion.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="780">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:267px;">Luria Broth</td>
			<td style="width:187px;">Difco</td>
			<td style="width:125px;">240230</td>
			<td style="width:203px;">via Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pseudomonas isolation agar</td>
			<td>Difco</td>
			<td>292710</td>
			<td>via Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Small Plates (100 O.D. x 10 mm)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-757-13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Large Plates (150 O.D. x 15 mm)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-757-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glycerol</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP229-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Benchtop Shaking Incubator</td>
			<td>New Brunswick Scientific</td>
			<td>Innova 4080</td>
			<td>shake at 200 rpm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cabinet Incubator</td>
			<td>VWR</td>
			<td>1540</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Benchtop Microcentrifuge</td>
			<td>Sorvall</td>
			<td>75-003-287</td>
			<td>via Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SmartSpec Plus Spectrophotometer</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>170-2525</td>
			<td>or preferred method/vendor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Diposable Inoculation Loops</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-597</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.5 mL Microcentrifuge Tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-408-129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2.0 mL Cryogenic Vials</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430659</td>
			<td>via Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL Tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-539-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Skim Milk</td>
			<td>Difco</td>
			<td>DF0032-17-3</td>
			<td>via Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DNeasy Blood and Tissue (250)&#160;</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69506</td>
			<td>or preferred method/vendor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">QIAquick PCR Purification Kit (250)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>28106</td>
			<td>or preferred method/vendor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">QIAprep Spin Miniprep Kit (250)&#160;</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>27106</td>
			<td>or preferred method/vendor</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FastLink II DNA Ligation Kit</td>
			<td>Epicentre Technologies</td>
			<td>LK6201H</td>
			<td>via Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Accu block Digital Dry Bath&#160;</td>
			<td>Labnet</td>
			<td>NC0205808</td>
			<td>via Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sal1, restriction endonuclease</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>R0138L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">EasyStart Micro 50</td>
			<td>Molecular BioProducts</td>
			<td>6020</td>
			<td>via Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Taq DNA Polymerase</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>M0267L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">iCycler, Thermocycler</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>170-8740</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LE agarose</td>
			<td>Genemate</td>
			<td>3120-500</td>
			<td>via Fisher Scientific</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gentamycin Sulfate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP918-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">2.0 mL Cryogenic Vials</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430659</td>
			<td>via Fisher Scientific</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification of novel genes associated with alginate production in pseudomonas aeruginosa using mini-himar1 mariner transposon-mediated mutagenesis

Pseudomonas aeruginosa är en gramnegativ, miljö-bakterie med mångsidiga metaboliska kapacitet. P. aeruginosa är en opportunistisk bakteriell patogen som etablerar kroniska lunginfektioner hos patienter med cystisk fibros (CF). Överproduktionen av en kapsulär polysackarid kallas alginat, även känd som mucoidy, främjar bildningen av mukoida biofilmer som är mer motståndskraftiga än planktonceller till antibiotikum kemoterapi och värdförsvar. Dessutom är omvandlingen från nonmucoid till slemmig fenotyp en klinisk markör för uppkomsten av kronisk infektion i CF. Alginat överproduktion av P. aeruginosa är en endergonic process som starkt beskattar cellernas energi. Därför är alginat produktionen starkt reglerad i P. aeruginosa. För att bättre förstå alginat lagstiftning, beskriver vi ett protokoll med hjälp av mini-himar1 transposonmutagenes för identifiering av nya alginat regulatorar i en prototypisk stam PAO1. Förfarandet består av två grundläggande steg. Först överförde vi mini-himar1 transposon (pFAC) från värd E. coli SM10/λpir in mottagaren P. aeruginosa PAO1 via biparental konjugation för att skapa en hög densitet insättning mutant bibliotek, som valdes ut på Pseudomonas isolering agarplattor kompletterade med gentamycin. För det andra, vi avskärmade och isolerade de mukoida kolonierna att kartinsticksstället genom omvänd PCR med hjälp av DNA-primers som pekar utåt från gentamycin kassetten och DNA-sekvensering. Med användning av detta protokoll har vi identifierat två nya alginat regulatorer, mucE (PA4033) och kinB (PA5484), i stammen PAO1 med en vildtyp Muca kodar för anti-sigmafaktor Muca för master alginat regulator AlgU (AlgT, σ 22) . Denna high-throughput mutagenes protokoll kan modifieras för att identifiera andra virulens-relaterade gener som orsakar förändringar i colony morfologi.

Såsom illustreras i figur 1, den mini-himar1 mariner transposon vector, pFAC innehåller två 27 bp inverterade upprepningar med TA insättningsställen flankerar aacC1 gentamycin motstånd kassett, med dess σ 70-beroende promotorn och ett multipelt kloningsställe (MCS). Dessutom innehåller pFAC vektor gener som kodar för den högaktiva himar1 transposas, β-laktamas (bla) och tra överföring operonet. TA insättningsställen möjliggör en e...

Watch this Scientific Journal Video about Identification of Novel Genes Associated with Alginate Production in Pseudomonas aeruginosa Using Mini-himar1 Mariner Transposon-mediated Mutagenesis at JoVE.

Identification of Novel Genes Associated with Alginate Production in Pseudomonas aeruginosa Using Mini-himar1 Mariner Transposon-mediated Mutagenesis

Här beskriver vi ett protokoll med hjälp av mini-himar1 mariner transposon mutagenes för att generera en hög densitet insättning mutant bibliotek till skärmen, isolera och identifiera nya alginat tillsynsmyndigheter i prototypiska Pseudomonas aeruginosa stam PAO1.

Identifiering av nya gener associerade med alginat Produktion i<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Med hjälp av Mini-<em&gt; Himar1</em&gt; Mariner Transposon mutagenes

Pseudomonas aeruginosa is a Gram-negative, environmental bacterium with versatile metabolic capabilities. P. aeruginosa is an opportunistic bacterial ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Identification of Novel Genes Associated with Alginate Production in Pseudomonas aeruginosa Using Mini-himar1 Mariner Transposon-mediated Mutagenesis

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

Co-kultur modeller av Pseudomonas aeruginosa Biofilmer odlas på levande mänskliga Airway Cells

Bacterial biofilms have been associated with a number of different human diseases, but biofilm development has generally been studied on non-living ...

Transfection and Mutagenesis of Target Genes in Mosquito Cells by Locked Nucleic Acid-modified Oligonucleotides

Transfektion och Mutagenes av mål gener i Mosquito celler genom Låst nukleinsyra-modifierade oligonukleotider

Plasmodium parasites, the causative agent of malaria, are transmitted through the bites of infected Anopheles mosquitoes resulting in over 250 million new ...

Pseudomonas aeruginosa and Saccharomyces cerevisiae Biofilm in Flow Cells

Pseudomonas aeruginosa and Saccharomyces cerevisiae Biofilm in Flow Cells

Pseudomonas aeruginosa och Saccharomyces cerevisiae biofilm i Flow Cells

Many microbial cells have the ability to form sessile microbial communities defined as biofilms that have altered physiological and pathological ...

RNA Isolation of Pseudomonas aeruginosa Colonizing the Murine Gastrointestinal Tract

RNA Isolation of Pseudomonas aeruginosa Colonizing the Murine Gastrointestinal Tract

RNA Isolering av Pseudomonas aeruginosa Kolonisera Murine mag-tarmkanalen

Pseudomonas aeruginosa (PA) infections result in significant morbidity and mortality in hosts with compromised immune systems, such as patients with ...

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

Användning av artificiell Sputum Medium för att testa antibiotika effekt mot<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; I villkor som är mer relevanta för cystisk fibros Lung

There  is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial  susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from  cystic ...

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Långsiktig Kronisk<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Airway infektion hos möss

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolering av Salmonella typhimurium-innehållande Phagosomes från makrofager

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

Replication of the Ordered, Nonredundant Library of Pseudomonas aeruginosa strain PA14 Transposon Insertion Mutants

Replication of the Ordered, Nonredundant Library of Pseudomonas aeruginosa strain PA14 Transposon Insertion Mutants

Replikering av beställt, Nonredundant bibliotek av Pseudomonas aeruginosa stam PA14 Transposon införande mutanter

Pseudomonas aeruginosa is a phenotypically and genotypically diverse and adaptable Gram-negative bacterium ubiquitous in human environments. P. aeruginosa ...

Methods for Detecting Cytotoxic Amyloids Following Infection of Pulmonary Endothelial Cells by Pseudomonas aeruginosa

Methods for Detecting Cytotoxic Amyloids Following Infection of Pulmonary Endothelial Cells by Pseudomonas aeruginosa

Metoder för att upptäcka cytotoxiska amyloid följande infektion av pulmonell Endothelial celler av Pseudomonas aeruginosa

Patients who survive pneumonia have elevated death rates in the months following hospital discharge. It has been hypothesized that infection of pulmonary ...