Name: preparation of primary myogenic precursor cell/myoblast cultures from basal vertebrate lineages
Uploaded: 2014-04-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Primary Myogenic Precursor Cell/Myoblast Cultures from Basal Vertebrate Lineages at JoVE.com

De auteurs willen graag veel dank uit te breiden tot Drs. Josep Planas en Juan Castillo voor hun professionele expertise in de ontwikkeling en toepassing van deze cultuur protocol om kleine vissen en amfibieën. Dank ook aan de talloze mensen die onvermoeibaar hebben geholpen met de dissectie en dissociatie van spierweefsel uit veel vis (zowel in soort en aantal), waaronder Matthew opladen, Delci Christensen, Zachary Fowler, Brooke Franzen, Nathan Froehlich, Kira Marshall, Ben Meyer, Ethan Remily en Sinibaldo Romero. Dit werk werd ondersteund door de Universiteit van Alabama in Birmingham Departement Biologie start-up fondsen, Centrum voor protease Onderzoek NIH Grant # 2P20 RR015566, NIH NIAMS Grant # R03AR055350 en NDSU Advance FORWARD NSF Grant # HRD-0811239 om PRB. Ondersteuning werd ook door de UAB Nutrition Obesity Research Center award # P30DK056336, NIH NIDDK. De inhoud ervan is uitsluitend de verantwoordelijkheid van de auteurs en niet noodzakelijkerwijshet officiële standpunt van de NIH.

Ethiek Verklaring: Alle experimenten met gewervelde dieren hierin beschreven werd vooraf goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite van de Universiteit van Alabama in Birmingham en is in overeenstemming met de door het Office of Laboratory Animal Welfare, National Institutes of Health van de richtlijnen van de VS Department of Health and Human Services. 1. Voorbereiding voor Cultuur <ol><li> Bereid de basis medium als volgt: 9 mM NaHCO3 (1,51 g per ...

Het myogene programma, in welke onderzochte species, kan het gemakkelijkst bestudeerd via een in vitro systeem. Inderdaad, na isolatie, myogene voorloper cellen (MTR) in vis of myosatellite cellen (MSC) in zoogdieren voer gemakkelijk deze sterk gereguleerde proces, waarbij de proliferatie, celcyclus terugtrekking, en terminale differentiatie van myoblasts en de fusie van die myoblasts in wording myotubes. Het algemene gebrek aan transgene gen reporter stammen van piscine soorten (met de mogelijke uitzondering v...

Aanzienlijke kennis van zoogdieren myogenesis is verkregen door de reprise van dit proces in zowel primaire muis (Mus musculus) myoblast culturen en de goed beschreven-muis afgeleide cellijn, C2C12 5. Beginnend in 1950 6, hebben deze culturen geleid tot veel vooruitgang in het inzicht in de murinemyogenic programma en daarmee, myogenese in andere vertebraten. Bovendien eencellige myofiber explantaat technieken begrijpen van de interacties tussen satelliet cellen en omliggende myovezels 7-9 verhoogd uit. Celculturen worden bijzonder aantrekkelijk voor onderzoek van myogenese vanwege de korte tijd van precursor gedifferentieerde cel 10, relatieve gemak van transfectie van RNAi 11-14, transgene 15,16 en overexpressie 14,17,18 studies, in vitro expansie, gevolgd door in vivo implantatie 18-20, en zelfs compArison van myogene voorloper cellen en hun regulerende agenten verspreid over taxa 21,22. Hoewel verschillen vanwege de kunstmatige omgeving van het kweeksysteem beschreven 5,23, hebben deze in vitro systemen bewezen onmisbaar onze dissectie van de ingewikkelde programma voor de vorming van meerkernige worden, terminaal gedifferentieerde myofibersfrom mononucleaire proliferatieve progenitorcellen bekend als myosatellite cellen (MSC) van de zoogdieren. Buiten de klasse Mammalia, echter, het behoud en / of de divergentie van mechanismen die de myogenesis zijn slecht begrepen, grotendeels te wijten aan de moeilijkheid in het kweken van myogene voorloper cellen (MTR) en myoblasts uit verschillende taxa. Inderdaad, primaire myoblast alleen culturen beschreven in drie vogels 24-26, een reptiel 27, een paar amfibieën 28-30, en sommige vissen 1,3,4,31-33. Continue myogene cellijnen van veanders dan knaagdieren 34-36 rtebrates zijn nog zeldzamer, met de enige niet-zoogdieren myogene cellijn wordt afgeleid van de Japanse kwartel (Cortunix japonica), QM7 37. Ondanks vele pogingen tot immortalisatie, een teleost myogene cellijn blijft ongrijpbaar en een protocol voor efficiënte transfectie van deze cellen werd pas dit jaar 15 gepubliceerd. Zo helder en goed geoptimaliseerde protocollen voor het kweken van primaire MTR en myoblasten uit een verscheidenheid van gewervelde dieren zijn hard nodig om niet alleen verder onze kennis van de evolutie van het myogene programma uit te breiden, maar om de kracht van vergelijkende fysiologie in dienst om doorbraken te maken in de behandeling van menselijke skeletspier ziekten en aandoeningen. Terwijl de literatuur bevat veel meldingen van MPC / myoblast isolatie 38-49, is het gebruikelijk voor auteurs om de protocollen voor dergelijke isolaties beschrijven in het kort, vaak onvolledig, formaten. Verder is de meest leerzame protocollen reported zijn ontwikkeld voor muizen 50-53, en sommige van deze beroepen op antilichaam selectie 54,55 of fluorescentie transgenen 56,57, waardoor deze protocollen onbruikbaar of onpraktisch binnenste niet-knaagdieren gebruikt door de spieren biologen. Met weinig bekend over piscine, amfibieën en reptielen myogenesis, een gedetailleerde en grondige protocol, beschreven met audiovisuele begeleiding en met bewezen efficiëntie in ver verwante soorten, zouden de meeste die aan de orde zijn. Voor het eerst beschreven door Powell en collega&#39;s in 1989 58, werd de volgende protocol in eerste instantie ontwikkeld om MTR en myoblasts isoleren van zalmachtigen (namelijk, regenboogforel, Oncorhynchus mykiss, en Atlantische zalm, Salmo salar) en enkele grotere karperachtigen (dwz goudvis, Carassiusauratusauratus) . In 2000, Fauconneau en Paboeuf geoptimaliseerd een primaire myoblast cultuur voor regenboogforel 59 en minoroptimizations made dat protocol bruikbaar in meerdere kleinere visjes van de Danioninae clade (zebravis, Danio rerio, en gigantische danio, Devario aequipinnatus) 32 als gevolg van de vele genetische tools beschikbaar voor zebravis werk en dus zijn naaste familieleden. Beenvissen aantrekkelijk organismen studie vanwege hun uiteenlopende groeistrategie (althans in de meeste soorten). Grote zalmachtigen, net als de meeste vissen, groeien van onbepaalde, met groeipotentieel bezitten die een asymptoot op de vervaldag, zelfs op hoge leeftijd 60-62. In tegenstelling tot de zebravis, grote danionins zoals de reus danio 63 en besnorde groei danio weergave mogelijkheden typisch voor beenvissen, het maken van hun directe nevenschikking een ideaal platform voor het begrijpen of MPC cellot keuze speelt een rol in de skeletspier hyperplasie versus hypertrofie. Ook hebben we aangetoond dat dit protocol kan worden gebruikt met muizen en axolotl met relatief hoge cel opbrengst vi quateriliteit indices. Urodele salamanders, zoals de Mexicaanse axolotl (Ambystomamexicanum), beschikken over de opmerkelijke vermogen om weefsels te regenereren, met inbegrip van hele ledematen en staarten 64-66. Deze eigenschap maakt deze amfibieën interessante modellen van de skeletspieren verspillen en veroudering. De hieronder beschreven protocol, kan een soortgelijke benadering worden uitgevoerd zoals is gedaan in vele vissoorten, waardoor een nog grotere vergelijkende context voor deze studies. Zoals velen echt vergelijkende biologen waarderen, de meest betekenisvolle vooruitgang in de fundamentele biologie en translationele medische biologie kan worden gemaakt wanneer de gegevens worden geanalyseerd binnen het breedste spectrum (hier, de gehele gewervelde lineage).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="743">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 1. Detailed Reagent Information</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="42" style="height:43px;width:205px;">Reagent</td>
			<td style="width:217px;">Company (Preferred v. Alternate)</td>
			<td style="width:160px;">Catalog Number (Preferred v. Alternate)</td>
			<td style="width:161px;">Quantity per Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="20" style="height:20px;">&#947;-irradiated poly-L-lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich (MP Biomedicals)</td>
			<td>P5899 (ICN19454405)</td>
			<td>5 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">DMEM (high glucose)</td>
			<td>Sigma-Aldrich (cellgro)</td>
			<td>MT-50-003-PB (D7777)</td>
			<td>2 L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">Laminin</td>
			<td>BD Biosciences (Sigma-Aldrich)</td>
			<td>CB-40232 (L2020)</td>
			<td>1 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="41" style="height:41px;width:205px;">Sodium Bicarbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Fisher Scientific (Sigma-Aldrich)</td>
			<td>BP328-500 (S5761)</td>
			<td>1.51 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">HEPES (C8H18N2O4S)</td>
			<td>Fisher Scientific (Sigma-Aldrich)</td>
			<td>BP310-1 (H6147)</td>
			<td>9.53 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">Antibiotic/Antimycotic</td>
			<td>Thermo Scientific (Sigma-Aldrich)</td>
			<td>SV3007901 (A5955)</td>
			<td>17-20 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">Gentamicin Sulfate</td>
			<td>Lonza (Sigma-Aldrich)</td>
			<td>BW17-519Z (G1397)</td>
			<td>2-3 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">Donor Equine Sera</td>
			<td>Thermo Scientific (Sigma-Aldrich)</td>
			<td>SH3007403 (H1270)</td>
			<td>75 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">Fetal Bovine Sera</td>
			<td>Thermo Scientific (Sigma-Aldrich)</td>
			<td>SH3007103 (F2442)</td>
			<td>25 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">Collagenase (Type IV)</td>
			<td>Worthington (Sigma-Aldrich)</td>
			<td>LS004189 (C9891)</td>
			<td>0.44 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="21" style="height:21px;width:205px;">Trypsin (from Pancreas)</td>
			<td>MP Biomedicals (Sigma-Aldrich)</td>
			<td>ICN15357125 (T5266)</td>
			<td>1 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 2. Consumables, Tools and Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="42" style="height:43px;width:239px;">Consumable</td>
			<td style="width:204px;">Tools</td>
			<td style="width:199px;">Equipment</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="28" style="height:28px;">Cell Culture Plates</td>
			<td>Forceps (Coarse)</td>
			<td>Serological Pipettor</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="28" style="height:28px;width:239px;">Sterile 50 mL Conical Tubes</td>
			<td style="width:204px;">Forceps (Fine)</td>
			<td>pH Meter</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="28" style="height:28px;width:239px;">Laboratory Tape</td>
			<td style="width:204px;">Scalpel Handles</td>
			<td>Chilling Incubator (Echotherm)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="28" style="height:28px;width:239px;">0.2 &#956;m Vacuum Sterilization Systems</td>
			<td style="width:204px;">Scalpel Blades (#10, #11)</td>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="28" style="height:28px;width:239px;">Water-repellant Autoclave Paper</td>
			<td style="width:204px;">Surgical Scissors</td>
			<td>Vacuum Manifold</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="28" style="height:28px;width:239px;">Serological Pipettes</td>
			<td>Glass Petri Dishes</td>
			<td>Microosmolality Meter</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="28" style="height:28px;width:239px;"></td>
			<td>12-16 G Cannulas with Luer Locks</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 3. Optimized Volumes for Coating Cell Culture Plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="24" style="height:24px;width:167px;">Plate Size</td>
			<td style="width:192px;">cm^2 per Well</td>
			<td style="width:132px;">Poly-L-lysine*</td>
			<td style="width:145px;">Laminin**</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="20" style="height:20px;">6 well</td>
			<td>9.5</td>
			<td>1.6 mL</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="21" style="height:21px;width:167px;">24 well</td>
			<td>1.9</td>
			<td>0.32</td>
			<td>0.2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="21" style="height:21px;width:167px;">48 well</td>
			<td>0.95</td>
			<td>0.16</td>
			<td>0.1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="21" style="height:21px;width:167px;">96 well</td>
			<td>0.32</td>
			<td>0.06</td>
			<td>0.03</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="40" style="height:40px;width:167px;">*0.1 mg/mL concentration</td>
			<td colspan="2">** 0.020 mg/mL concentration</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 4. Media for Isolation, Dissociation, and Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="24" style="height:24px;width:163px;">Reagent</td>
			<td style="width:155px;">Isolation</td>
			<td style="width:127px;">Wash</td>
			<td style="width:127px;">Dissociation</td>
			<td>Complete</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="20" style="height:20px;">Base Medium</td>
			<td>419.25 mL</td>
			<td>395.40 mL</td>
			<td>297.00 mL</td>
			<td>178.00 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="20" style="height:20px;width:163px;">PSF*</td>
			<td>5.00 mL</td>
			<td>4.00 mL</td>
			<td>3.00 mL</td>
			<td>2.00 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="40" style="height:40px;width:163px;">Gentamicin Sulfate**</td>
			<td>0.75 mL</td>
			<td>0.60 mL</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="40" style="height:40px;width:163px;">Donor Equine Serum</td>
			<td>75.00 mL</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="40" style="height:40px;width:163px;">Fetal Bovine Serum***</td>
			<td style="width:155px;">-</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>20.00 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4" height="19" style="height:19px;width:660px;">* PSF: penicillin/streptomycin/fungizone cocktail (100x); ** 50 mg/mL concentration; *** Characterized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 5. Recommended Dilutions and Plating Volumes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="24" style="height:24px;width:75px;">Plate Size</td>
			<td style="width:103px;">cm^2 per Well</td>
			<td style="width:145px;">Dilution</td>
			<td style="width:111px;">Plating Volume</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="20" style="height:20px;">6 well</td>
			<td>9.5</td>
			<td>1.5-2.0x10^6 cells/mL</td>
			<td>1 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="20" style="height:20px;width:75px;">24 well</td>
			<td>1.9</td>
			<td>1.5-2.0x10^6 cells/mL</td>
			<td>250 &#956;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="20" style="height:20px;width:75px;">48 well</td>
			<td>0.95</td>
			<td>1.5-2.0x10^6 cells/mL</td>
			<td>150 &#956;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td height="20" style="height:20px;width:75px;">96 well</td>
			<td>0.32</td>
			<td>1.5-2.0x10^6 cells/mL</td>
			<td>50-100 &#956;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 6. Average number of cells per g tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="2" height="24" style="height:24px;width:201px;">Species</td>
			<td colspan="2" style="width:273px;">Average # cells/g tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="2" height="20" style="height:20px;">Danio rerio</td>
			<td colspan="2">6,400,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="2" height="20" style="height:20px;width:201px;">Danio dangila</td>
			<td colspan="2">1,783,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="2" height="20" style="height:20px;width:201px;">Devario aequipinnatus</td>
			<td colspan="2">1,797,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="2" height="20" style="height:20px;">Oncorhynchus mykiss</td>
			<td colspan="2">66,800</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 7. Recommended Incubation Temperatures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="2" height="24" style="height:24px;width:201px;">Species</td>
			<td colspan="2" style="width:273px;">Temperature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="2" height="20" style="height:20px;">Danio/ Devario spp.</td>
			<td colspan="2">26 - 28 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="2" height="20" style="height:20px;width:201px;">Oncorhynchus/Salmo spp.</td>
			<td colspan="2">10* - 18 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="2" height="20" style="height:20px;width:201px;">Ambystoma mexicanum</td>
			<td colspan="2">18&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="3" height="20" style="height:20px;">* Lower temperatures support lower proliferation rates.</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of primary myogenic precursor cell/myoblast cultures from basal vertebrate lineages

Vanwege de inherente moeilijkheden en tijd die met het bestuderen van de myogene programma in vivo primaire kweek toepassen die van een bewoner volwassen stamcellen van skeletspieren, de myogene voorlopercellen (MPL) zijn onmisbaar voor ons begrip van zoogdierlijke skeletspieren ontwikkeling bewezen groei. Vooral onder de basale taxa van Vertebrata echter gegevens zijn beperkt beschrijven van de moleculaire mechanismen die de zelf-vernieuwing, proliferatie en differentiatie van de mediterrane partnerlanden. Van bijzonder belang zijn mogelijke mechanismen die het vermogen van basale gewervelde dieren aanzienlijke postlarval skelet myofiber hyperplasie (dwz beenvissen) en volledige regeneratie ondergaan volgende aanhangsel verlies (dwz urodele amfibieën) ten grondslag liggen. Daarnaast kan het gebruik van gekweekte myoblasts helpen bij het begrijpen van de wedergeboorte en de reprise van het myogene programma en de verschillen tussen hen. AanDaartoe hebben we in detail een robuust en efficiënt protocol (en variaties daarin) voor het isoleren en onderhouden MTR en hun nageslacht, myoblasten en onvolwassen myotubes in celkweek als platform voor het begrijpen van de evolutie van het myogene programma, beginnend met meer basale vertebraten. Voortbouwend op het modelorganisme status van de zebravis (Danio rerio), rapporteren we over de toepassing van dit protocol om kleine vissen van de karperachtigen clade Danioninae. In tandem, kan dit protocol worden gebruikt om een bredere vergelijkende benadering te realiseren door het isoleren van de mediterrane partnerlanden van de Mexicaanse axolotl (Ambystomamexicanum) en zelfs knaagdieren. Dit protocol wordt nu op grote schaal gebruikt in het bestuderen myogenesis in verschillende vissoorten, waaronder regenboogforel, zalm, en zeebrasem 1-4.

Vierentwintig uur na het zaaien, myogene voorloper cellen (MTR) moet zichtbaar bevestigd aan de laminin substraat (zie de figuren 1a en 1d). Na het zaaien, cellen (MTR) stelt een spindel-achtige vorm, wijzen op dit type cel (figuur 1) en zijn MYOD1 + (figuur 2). In Danio soorten, MPCs lijken compacter met kleinere bipolaire processen dan doen MTR van Oncorhynchus en Salmo soorten te zijn. Echter, meer dan vier dagen van cultuu...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Primary Myogenic Precursor Cell/Myoblast Cultures from Basal Vertebrate Lineages at JoVE.com

Preparation of Primary Myogenic Precursor Cell/Myoblast Cultures from Basal Vertebrate Lineages

In vitro cultuur systemen onmisbaar voor ons begrip van gewervelde myogenese bewezen. Er moet echter nog veel te leren over nonmammalian skeletspieren ontwikkeling en groei, met name in de basale taxa. Een efficiënte en robuuste protocol voor isolatie van de volwassen stamcellen van dit weefsel, de myogene voorlopercellen (MTR), en met behoud van hun zelf-vernieuwing, proliferatie en differentiatie in een primaire kweek instelling maakt de identificatie van geconserveerde en afwijkende regelmechanismen gedurende de gewervelde geslachten.

Voorbereiding van de Primaire Myogene Precursor Cell / myoblast Culturen van Basal gewervelde Geslachten

Due to the inherent difficulty and time involved with studying the myogenic program in vivo, primary culture systems derived from the resident adult stem ...

Research

JoVE Journal

Biology

Primary Neuronal Cultures from the Brains of Late Stage Drosophila Pupae

Primaire neuronale culturen uit de hersenen van laat stadium Drosophila Poppen

In this video, we demonstrate the preparation of primary neuronal cultures from the brains of late stage Drosophila pupae. The procedure begins with the ...

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

De voorbereiding van Neuronale Culturen van Midgastrula Stage Drosophila embryo&#39;s

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

Preparation of Dissociated Mouse Cortical Neuron Cultures

De voorbereiding van gescheiden Mouse Cortical Neuron culturen

This video will guide you through the process for generating cortical neuronal cultures from late embryo and early postnatal mouse brain. These cultures ...

Primary Dissociated Midbrain Dopamine Cell Cultures from Rodent Neonates

Primaire los middenhersenen Dopamine celculturen van knaagdieren pasgeborenen

The ability to create primary cell cultures of dopamine neurons allows for the study of the presynaptic characteristics of dopamine neurons in isolation ...

Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures

Bereiding van 2-dGuo behandelde Thymus Organ culturen

In the thymus, interactions between developing T-cell precursors and stromal cells that include cortical and medullary epithelial cells are known to play ...

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

De vervaardiging van primaire hematopoietische cellen culturen uit Murine Bone Marrow voor Elektroporatie

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Fabrication of Myogenic Engineered Tissue Constructs

Fabricage van myogene Engineered Tissue constructen

Despite the fact that electronic pacemakers are life-saving medical devices, their long-term performance in pediatric patients can be problematic owing to ...

Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures

Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures

De voorbereiding van Aplysia Sensory-motor Neuronale Cell Cultures

The nervous system of the marine mollusk Aplysia californica is relatively simple, consisting of approximately 20,000 neurons.  The neurons are large (up ...

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

Tot vaststelling van primaire Adult Fibroblast Culturen van knaagdieren

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Primaire celculturen van Drosophila Gastrula Embryo&#39;s

Here we describe a method for preparing and culturing primary cells dissociated from Drosophila gastrula embryos.   In brief, a large amount of staged ...