Name: preparation of neuronal co-cultures with single cell precision
Uploaded: 2014-05-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Neuronal Co-cultures with Single Cell Precision at JoVE.com

लेखकों SEM इमेजिंग के लिए SU-8 निर्माण और मारिया बेकर (ISAs) के लिए Ulrich Marggraf (ISAs) के लिए आभारी हैं. अनुसंधान आर्थिक रूप से ड्यूश Forschungsgemeinschaft (DFG WE3737/3-1), एक Bundesministerium फर Bildung und Forschung अनुदान (BMBF 0101-31P6541) द्वारा और Ministerium फर अभिनव, Wissenschaft und Forschung डेस लैंडेस Nordrhein-Westfalen द्वारा समर्थित किया गया. Heike Hardelauf धन्यवाद अंतर्राष्ट्रीय लाइबनिट्स ग्रेजुएट स्कूल &quot;सिस्टम्स बायोलॉजी लैब पर एक चिप&quot; वित्तीय सहायता के लिए.

प्रोटोकॉल neuroscientists के लिए इरादा कर रहे हैं, और चित्रा 2 में संक्षेप हैं. जैसे यह व्यावसायिक या संस्थागत सुविधाओं को आउटसोर्स है PDMS प्रतिकृति के लिए इस्तेमाल किया SU-8 स्वामी की उस microfabrication की सलाह देते है. ?...

<ol>
	<li>Campenot, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+control+of+neurite+development+by+nerve+growth+factor.">Local control of neurite development by nerve growth factor.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 74 (10), 4516-4519 (1997).</li><li>Campenot, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+sympathetic+neurons+in+compartmentalized+cultures.+I.+Local+control+of+neurite+growth+by+nerve+growth+factor.">Development of sympathetic neurons in compartmentalized cultures. I. Local control of neurite growth by nerve growth factor.</a> Dev Biol. 93 (1), 1-12 (1982).</li><li>Taylor, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+multicompartment+device+for+neuroscience+research.">Microfluidic multicompartment device for neuroscience research.</a> Langmuir. 19, 1551-1556 (2003).</li><li>Taylor, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+culture+platform+for+CNS+axonal+injury,+regeneration+and+transport.">A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport.</a> Nat Methods. 2 (8), 559-565 (2005).</li><li>Kilinc, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wallerian-like+degeneration+of+central+neurons+after+synchronized+and+geometrically+registered+mass+axotomy+in+a+three-compartmental+microfluidic+chip.">Wallerian-like degeneration of central neurons after synchronized and geometrically registered mass axotomy in a three-compartmental microfluidic chip.</a> Neurotox. Res. 19, 149-161 (2011).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatiotemporally+controlled+and+multifactor+involved+assay+of+neuronal+regeneration+after+chemical+injury+in+an+integrated+microfluidics.">Spatiotemporally controlled and multifactor involved assay of neuronal regeneration after chemical injury in an integrated microfluidics.</a> Anal. Chem. 84 (15), 6444-6453 (2012).</li><li>Kim, Y. T., Karthikeyan, K., Chirvi, S., Dave, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuro-optical+microfluidic+platform+to+study+injury+and+regeneration+of+single+axons.">Neuro-optical microfluidic platform to study injury and regeneration of single axons.</a> Lab Chip. 9, 2576-2581 (2009).</li><li>Hellman, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examination+of+axonal+injury+and+regeneration+in+micropatterned+neuronal+culture+using+pulsed+laser+microbeam+dissection.">Examination of axonal injury and regeneration in micropatterned neuronal culture using pulsed laser microbeam dissection.</a> Lab Chip. 10 (16), 2083-2092 (2010).</li><li>Kunze, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-pathological+connected+primary+neurons+in+a+microfluidic+device+for+Alzheimer+studies.">Co-pathological connected primary neurons in a microfluidic device for Alzheimer studies.</a> Biotechnol. Bioeng. 108 (9), 2241-2245 (2011).</li><li>Liu, W. W., Goodhouse, J., Jeon, N. L., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+chamber+for+analysis+of+neuron-to-cell+spread+and+axonal+transport+of+an+alpha-herpesvirus.">A microfluidic chamber for analysis of neuron-to-cell spread and axonal transport of an alpha-herpesvirus.</a> PLoS One. 3 (6), (2008).</li><li>Markus, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Varicella-Zoster+virus+(VZV)+infection+of+neurons+derived+from+human+embryonic+stem+cells:+Direct+demonstration+of+axonal+infection,+transport+of+VZV,+and+productive+neuronal+infection.">Varicella-Zoster virus (VZV) infection of neurons derived from human embryonic stem cells: Direct demonstration of axonal infection, transport of VZV, and productive neuronal infection.</a> J. Virol. 85 (13), 6220-6233 (2011).</li><li>Dinh, N. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+construction+of+minimalistic+neuronal+co-cultures.">Microfluidic construction of minimalistic neuronal co-cultures.</a> Lab Chip. 13 (7), 1402-1412 (2013).</li><li>Tan, W. H., Takeuchi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+trap-and-release+integrated+microfluidic+system+for+dynamic+microarray+applications.">A trap-and-release integrated microfluidic system for dynamic microarray applications.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 104 (4), 1146-1151 (2007).</li><li>Frimat, J. -. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+array+with+cellular+valving+for+single+cell+co-culture.">A microfluidic array with cellular valving for single cell co-culture.</a> Lab Chip. 11 (2), 231-237 (2011).</li><li>Di Carlo, D., Aghdam, N., Lee, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+enzyme+concentrations,+kinetics,+and+inhibition+analysis+using+high-density+hydrodynamic+cell+isolation+arrays.">Single-cell enzyme concentrations, kinetics, and inhibition analysis using high-density hydrodynamic cell isolation arrays.</a> Anal. Chem. 78 (14), 4925-4930 (2006).</li><li>Frimat, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+network+formation+assay:+A+spatially+standardized+neurite+outgrowth+analytical+display+for+neurotoxicity+screening.">The network formation assay: A spatially standardized neurite outgrowth analytical display for neurotoxicity screening.</a> Lab Chip. 10, 701-709 (2010).</li><li>Hardelauf, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+fidelity+neuronal+networks+formed+by+plasma+masking+with+a+bilayer+membrane:+analysis+of+neurodegenerative+and+neuroprotective+processes.">High fidelity neuronal networks formed by plasma masking with a bilayer membrane: analysis of neurodegenerative and neuroprotective processes.</a> Lab Chip. 11 (16), 2763-2771 (2011).</li><li>Whitesides, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soft+lithography+in+biology+and+biochemistry.">Soft lithography in biology and biochemistry.</a> Annu. Rev. Biomed. Eng. 3, 335-373 (2001).</li><li>Haubert, K., Drier, T., Beebe, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDMS+bonding+by+means+of+a+portable,+low-cost+corona+system.">PDMS bonding by means of a portable, low-cost corona system.</a> Lab Chip. 6, 1548-1549 (2006).</li><li>Frimat, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+stencilling+methods+for+cell+patterning.">Plasma stencilling methods for cell patterning.</a> Anal. Bioanal. Chem. 395 (3), 601-609 (2009).</li><li>Huang, N. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly(L-lysine)-g-poly(ethylene+glycol)+layers+on+metal+oxide+surfaces:+surface-analytical+characterization+and+resistance+to+serum+and+fibrinogen+adsorption.">Poly(L-lysine)-g-poly(ethylene glycol) layers on metal oxide surfaces: surface-analytical characterization and resistance to serum and fibrinogen adsorption.</a> Langmuir. 17, 489-498 (2001).</li><li>Li, N., Folch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integration+of+topographical+and+biochemical+cues+by+axons+during+growth+on+microfabricated+3-D+substrates.">Integration of topographical and biochemical cues by axons during growth on microfabricated 3-D substrates.</a> Exp. Cell Res. 311 (2), 307-316 (2005).</li><li>Huang, L. R., Cox, E. C., Austin, R. H., Sturm, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+particle+separation+through+deterministic+lateral+displacement.">Continuous particle separation through deterministic lateral displacement.</a> Science. 304 (5673), 987-990 (2004).</li><li>Yang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+nanoparticle+functionality+and+toxicity+on+the+central+nervous+system.">A review of nanoparticle functionality and toxicity on the central nervous system.</a> J. R. Soc. Interface. 7, (2010).</li><li>Brenneman, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+olfactory+transport+of+inhaled+manganese+((MnCl2)-Mn-54)+to+the+rat+brain:+Toxicokinetic+investigations+in+a+unilateral+nasal+occlusion+model.">Direct olfactory transport of inhaled manganese ((MnCl2)-Mn-54) to the rat brain: Toxicokinetic investigations in a unilateral nasal occlusion model.</a> Toxicol. Appl. Pharm. 169 (3), 238-248 (2000).</li><li>Magal&#227;es, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uptake+and+neuritic+transport+of+scrapie+prion+protein+coincident+with+infection+of+neuronal+cells.">Uptake and neuritic transport of scrapie prion protein coincident with infection of neuronal cells.</a> J. Neurosci. 25 (21), 5207-5216 (2005).</li><li>Diogenes, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+alpha-synuclein+oligomers+modulate+synaptic+transmission+and+impair+LTP+via+NMDA-receptor+activation.">Extracellular alpha-synuclein oligomers modulate synaptic transmission and impair LTP via NMDA-receptor activation.</a> J Neurosci. 32 (34), 11750-11762 (2012).</li><li>Egger, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+imaging+of+primary+neural+cell+culture+from+Drosophila.">In vitro imaging of primary neural cell culture from Drosophila.</a> Nat. Protoc. 8 (5), 958-965 (2013).</li></ol>

microfluidic arraying तकनीक न्यूनतर संस्कृतियों की स्थापना के लिए सटीक एक न्यूरॉन से निपटने में सक्षम बनाता है कि अपनी तरह का पहला है. Microfluidic संरचनाओं के साथ सेल पैटर्न के लिए पंक्ति में सीटू biomaterial patterning विधि में, ?...

<html> Neuronal ऊतक अत्यधिक जटिल है; स्थानिक सेल संपर्क और विशेष रूप से अक्षतंतु और dendrite outgrowths के माध्यम से के माध्यम से परिभाषित परतों और डिब्बों के भीतर और प्लास्टिक कनेक्टिविटी के साथ आदेश दिया है कि एक विषम सेलुलर मिश्रण. नई तकनीक गहरी अंतर्दृष्टि और रोग, विकास, और स्वस्थ समारोह के लिए केंद्रीय सुलझाना तंत्र हासिल करने के लिए अधिक से अधिक प्रयोगात्मक स्वतंत्रता प्रदान करने के लिए आवश्यक हैं. Campenot कक्ष 1,2 और अधिक हाल ही में microfabricated embodiments 3,4 चुनिंदा विभिन्न दैहिक आबादी उपद्रव और भी उनके neurite outgrowths करने की क्षमता के साथ नेटवर्क neuronal सह संस्कृतियों के पूर्व vivo तैयारी के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. ये microfluidic उपकरणों उदाहरण के लिए रासायनिक 5,6 या लेजर axotomy 6-8, tauopathy 9, वायरल प्रसार 10,11, और axons 4 में mRNA स्थानीयकरण निम्नलिखित अक्षतंतु अध: पतन और उत्थान अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. ईएनटी &quot;&gt; Neurobiologists की पहुंच का विस्तार, तकनीकी विकास न्यूनतर neuronal सह संस्कृतियों तैयार करने के लिए आवश्यक हैं. इस एकल कक्ष और उप सेलुलर परिशुद्धता के साथ प्रणाली की जांच के लिए neuronal नेटवर्क के सुलझाव सक्षम बनाता है. न्यूनतम सेल नंबर के लिए आवश्यकता पार्किंसंस रोग, कान से सर्पिल ganglia, परिधीय न्यूरॉन्स के लिए प्रासंगिक डोपामिनर्जिक substantia nigra कोशिकाओं सहित दुर्लभ प्रकार की कोशिकाओं, विश्लेषण, और स्टेम कोशिकाओं के लिए संभावना को खोलता है. इस के अलावा, सेलुलर अर्थव्यवस्था 3Rs पहल के लिए प्रासंगिक है. इन microfluidic प्लेटफार्मों, बड़े पैमाने पर विषाक्तता स्क्रीन या अन्य उच्च throughput का प्रयोग, पशु न्यूरॉन्स की आवश्यकता डेटा अमीर प्रयोगात्मक श्रृंखला अब माना जा सकता है. इस पत्र में एक microfluidic डिवाइस के निर्माण और उपयोग के लिए प्रोटोकॉल में वर्णित हैं. सीटू biomateri में एक साथ संयोजन में microfluidic arrayingअल patterning विधि न्यूनतम सेल नंबर का उपयोग अत्यधिक परस्पर neuronal सह संस्कृतियों के पंजीकरण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. Microfluidic arraying एक अंतर प्रवाह दृष्टिकोण microstructured जाल एक fluidic सर्किट (चित्र 1 में SEM छवियों के साथ सचित्र) के भीतर तैनात हैं जिससे 12-15, पर आधारित है. neurite परिणाम चैनलों को inlets - पथ 0 → 1 microstructured apertures की एक रैखिक सरणी के लिए न्यूरॉन्स के परिवहन के लिए कम fluidic प्रतिरोध (नि. 2&gt; आर 1) है. एक एकल कोशिका से जाल की रिहाइश स्थानीय स्तर पर पड़ोसी जाल में बाद में कोशिकाओं को फँसाने के लिए सुव्यवस्थित हटाने के प्रवाह में बाधा उत्पन्न करती. सरणी में जाल की पूरी अधिभोग अतिरिक्त न्यूरॉन्स को हटाने के लिए ऑपरेशन का एक बाईपास मोड के उत्पादन के लिए चक्करदार पथ (0 → 2) में सुव्यवस्थित हटाने की fluidic अनुपात (आर 1&gt; आर 2) स्विच. चित्रा 1. Microfluidic सर्किट. Neurite परिणाम चैनलों से जुड़े संस्कृति कक्षों flanking साथ एक न्यूरॉन arraying के लिए ए) अंतर प्रतिरोध fluidic सर्किट,. बी, meniscus लगाए micropillars साथ bilayer बंटे न्यूरॉन सह संस्कृति सरणी के सी) SEM छवियों. इस डिजाइन के साथ, त्रिशूल के आकार का न्यूरॉन फँसाने संरचनाओं neurite outgrowths का स्फुरण बढ़ावा देने के लिए इस्तेमाल किया गया. चित्रा और रसायन विज्ञान की रॉयल सोसायटी (आरएससी) की अनुमति के साथ reproduced कथा 12. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51389/51389fig1highres.jpg" target="_blank">बड़ी छवि को देखने के लिए यहां क्लिक करें.</a> तलीय substrates पर micropatterned neuronal नेटवर्क की तैयारी आसानी exampl के लिए (प्राप्त किया जा सकता है<html> हमारे समूह से तों, Frimat एट अल. 16 और Heike एट अल. 17) देखें. हालांकि, PDMS उपकरणों के भीतर और microfluidic चैनलों के लिए इनमें से सुक्ष्ममापी पैमाने संरेखण की आवश्यकता के साथ bioactive सामग्री पैटर्न encapsulating एक प्रमुख तकनीकी चुनौती बन गया है. खंड 3.1 में के लिए एक प्रोटोकॉल में चिप, या बगल में, biomaterial पैटर्न की तैयारी में प्रस्तुत किया है. इन नमूनों लंबा संस्कृति timescales दौरान न्यूरॉन पंजीकरण सक्षम और डिब्बों के बीच outgrowths को बढ़ावा देने. Meniscus-लगाए microstructures न्यूरॉन साइटों और neurite परिणाम चैनलों arraying साथ एक तथाकथित पानी मुखौटा संरेखित करने के लिए उपयोग किया जाता है. सतहों उजागर biomaterial स्वरूप को परिभाषित करने के लिए विघटित कर रहे हैं, जबकि पानी का मुखौटा, प्लाज्मा उपचार के दौरान आसंजन अणु कोटिंग्स की रक्षा करता है. इसके अलावा, प्रोटोकॉल सेल संस्कृति के लिए और विभिन्न सह संस्कृति डिब्बों के चुनिंदा उपचार के लिए आवश्यक fluidic अलगाव के लिए प्रदान की जाती हैं. ve_content &quot;&gt; प्रोटोकॉल इसी तरह, सीटू biomaterial patterning में वाष्पीकरण और सतह तनाव घटना का शोषण, सीधा है. पाली की प्रतिकृति (dimethylsiloxane) (PDMS) microfluidic उपकरणों 18 के लिए नरम लिथोग्राफी के उपयोगकर्ता के अनुकूल सिद्धांतों का लाभ उठाने के लिए तैयार है, और कर रहे हैं केवल एक सस्ती हाथ से आयोजित प्लाज्मा स्रोत की आवश्यकता होती है. microfluidic सर्किट इन आपरेशनों बनाने को प्रभावी ढंग से कार्यक्रमों सेल लदान और डिब्बे विशिष्ट उपचार बस सही नीचे पोर्ट में सामग्री वितरण और ऊपर से aspirating की बात है. इस तरीके में, यह neurobiologists देने का इरादा है उनकी अपनी प्रयोगशालाओं में microfluidic उपकरणों को तैयार करने और उपयोग करने के लिए स्वतंत्रता.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="857">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">PDMS Sylgard 184</td>
			<td style="width:163px;">Dow Corning</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PDMS Elastosil RT 601</td>
			<td style="width:163px;">Wacker</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Coverslips</td>
			<td style="width:163px;">VWR</td>
			<td>630-1590</td>
			<td>130-160 mm thick</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">3 mm Biopsy Punches</td>
			<td style="width:163px;">Kai Medical</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td>Handle with care - extremely sharp</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tygon Tubing</td>
			<td style="width:163px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:143px;">S-50-HL</td>
			<td>1.65 mm ID; 3.35 mm OD</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 mL Syringe (Inkjekt and Omnifix)</td>
			<td style="width:163px;">Braun</td>
			<td style="width:143px;">6064204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:235px;">4-Way Tubing Connector</td>
			<td style="width:163px;">VWR or Fisher Scientific</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Flow Regulator</td>
			<td style="width:163px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:143px;">722645</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:235px;">0.5 mm Pins</td>
			<td style="width:163px;">Dressmaking Departments</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:235px;">PLL-g-PEG</td>
			<td style="width:163px;">SuSoS</td>
			<td style="width:143px;">PLL(20)-g[3.5]-PEG(5)</td>
			<td>Stability in storage can be an issue</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">poly-D-lysine</td>
			<td style="width:163px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:143px;">P6407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">poly-lysine-FITC</td>
			<td style="width:163px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:143px;">P3069</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">poly-ornithine</td>
			<td style="width:163px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:143px;">P4957</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">fibronectin</td>
			<td style="width:163px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:143px;">F2006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">laminin</td>
			<td style="width:163px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:143px;">L2020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">PBS</td>
			<td style="width:163px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:143px;">P4417</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Inverted Fluorescent Microscope</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:235px;">Example Aspiration Pump</td>
			<td style="width:163px;">KNF Neuberger, Laboport</td>
			<td style="width:143px;">N811KVP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:235px;">Hand Held Corona Discharge Device</td>
			<td style="width:163px;">Leybold-Heraeus, USA</td>
			<td style="width:143px;">VP23</td>
			<td>May not comply with your country&#39;s safety standards</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Femto Plasma Oven</td>
			<td style="width:163px;">Diener Electronic</td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:235px;">Vacuum Dessicator or Centrifuge</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of neuronal co-cultures with single cell precision

Campenot चैंबर के microfluidic embodiments तंत्रिका विज्ञान समुदाय से महान ब्याज को आकर्षित किया है. इन परस्पर सह संस्कृति प्लेटफार्मों संक्रमण और बीमारी प्रचार करने के लिए विकास और कार्यात्मक तंत्रिका जीव विज्ञान फैले, सवालों की एक किस्म की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. हालांकि, पारंपरिक प्रणालियों महत्वपूर्ण सेलुलर ऐसे प्राथमिक डोपामिनर्जिक substantia nigra, सर्पिल ganglia, और Drosophilia मेलानोगास्टर न्यूरॉन्स के रूप में कम बहुतायत कोशिकाओं के अध्ययन के लिए अपर्याप्त आदानों (डिब्बे प्रति कई हजारों),,, और उच्च throughput प्रयोग के लिए अव्यावहारिक आवश्यकता होती है. घने संस्कृतियों भी अत्यधिक स्थानीय स्तर पर दो संस्कृतियों के परस्पर कुछ outgrowths (&lt;10%) के साथ, उलझ रहे हैं. (मैं) एक microfluidic न्यूरॉन विधि arraying, और प्लाज्मा patterning biomaterial कोटिंग्स regi करने के लिए (द्वितीय) एक पानी मास्किंग विधि: इस पत्र में सीधा microfluidic और patterning प्रोटोकॉल इन चुनौतियों से निपटने के जो वर्णन किया गया हैंन्यूरॉन्स ster और डिब्बों के बीच परिणाम को बढ़ावा देने. न्यूनतर neuronal सह संस्कृतियों उच्च स्तर (&gt; 85%) intercompartment कनेक्टिविटी के साथ तैयार थे और एकल कक्ष परिशुद्धता के साथ उच्च throughput तंत्रिका जीव विज्ञान के प्रयोगों के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

जल मास्किंग कारनामे तनाव सतह. हवा तरल इंटरफेस पर दबाव सहिष्णुता वक्रता [की त्रिज्या के साथ inversely तराजू <img fo:content-width="1in" src="files/ftp_upload/51389/51389eq1.jpg" width="113" /> , Microfluidic आयामों पर अत्यधिक स्थिर इंटरफेस का निर्माण किया. micropillars प्रभाव?...

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Preparation of Neuronal Co-cultures with Single Cell Precision

एक न्यूरॉन microfluidic arraying और biomaterial कोटिंग्स में चिप प्लाज्मा patterning के लिए पानी मास्किंग के लिए प्रोटोकॉल में वर्णित हैं. अत्यधिक परस्पर सह संस्कृतियों न्यूनतम सेल आदानों का उपयोग कर तैयार किया जा सकता है.

सिंगल सेल प्रेसिजन साथ Neuronal सह संस्कृति की तैयारी

Microfluidic embodiments of the Campenot chamber have attracted great interest from the neuroscience community. These interconnected co-culture platforms ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Derivation of Enriched Oligodendrocyte Cultures and Oligodendrocyte/Neuron Myelinating Co-cultures from Post-natal Murine Tissues

Oligodendrocyte संस्कृति समृद्ध और Oligodendrocyte न्यूरॉन / डाक प्रसव murine ऊतकों से सह संस्कृतियों Myelinating की व्युत्पत्ति

Identifying the molecular mechanisms underlying OL development is not only critical to furthering our knowledge of OL biology, but also has implications ...

Single Cell Measurement of Dopamine Release with Simultaneous Voltage-clamp and Amperometry

युगपत वोल्टेज दबाना और Amperometry साथ dopamine जारी की एकल कोशिका मापन

After its release into the synaptic cleft, dopamine exerts its biological properties via its pre- and post-synaptic targets1. The dopamine signal is ...

Optical Recording of Suprathreshold Neural Activity with Single-cell and Single-spike Resolution

एकल कोशिका और एकल कील संकल्प के साथ suprathreshold तंत्रिका गतिविधि के ऑप्टिकल रिकॉर्डिंग

Signaling of information in the vertebrate central nervous system is often carried by populations of neurons rather than individual neurons. Also ...

Simultaneous Pre- and Post-synaptic Electrophysiological Recording from Xenopus Nerve-muscle Co-cultures

Simultaneous Pre- and Post-synaptic Electrophysiological Recording from Xenopus Nerve-muscle Co-cultures

एक साथ पूर्व और बाद synaptic electrophysiological रिकॉर्डिंग से<em&gt; Xenopus</em&gt; तंत्रिका पेशी सह संस्कृतियों

Much information about the coupling of  presynaptic ionic currents with the release of neurotransmitter has been obtained  from invertebrate preparations, ...

A Procedure for Implanting Organized Arrays of Microwires for Single-unit Recordings in Awake, Behaving Animals

पशु व्यवहार जाग में एकल इकाई रिकॉर्डिंग के लिए microwires की सरणियों का आयोजन दाखिल के लिए एक प्रक्रिया

In vivo electrophysiological recordings in the awake, behaving animal provide a powerful method for understanding neural signaling at the single-cell ...

Inducing Plasticity of Astrocytic Receptors by Manipulation of Neuronal Firing Rates

Neuronal फायरिंग दरों के हेरफेर से astrocytic रिसेप्टर्स की Plasticity उत्प्रेरण

Close to two decades of research has established that astrocytes in situ and in vivo express numerous G protein-coupled receptors (GPCRs) that can be ...

Investigating Functional Regeneration in Organotypic Spinal Cord Co-cultures Grown on Multi-electrode Arrays

मल्टी इलेक्ट्रोड सारणियों पर हो Organotypic स्पाइनल कॉर्ड सह संस्कृतियों में कार्यात्मक उत्थान की जांच कर

Adult higher vertebrates have a limited potential to recover from spinal cord injury. Recently, evidence emerged that propriospinal connections are a ...

Extracellular Recording of Neuronal Activity Combined with Microiontophoretic Application of Neuroactive Substances in Awake Mice

Neuronal गतिविधि के बाह्य रिकॉर्डिंग जाग चूहों में neuroactive पदार्थों के Microiontophoretic आवेदन के साथ संयुक्त

Differences in the activity of neurotransmitters and neuromodulators, and consequently different neural responses, can be found between anesthetized and ...

In Utero Electroporation Approaches to Study the Excitability of Neuronal Subpopulations and Single-cell Connectivity

In Utero Electroporation Approaches to Study the Excitability of Neuronal Subpopulations and Single-cell Connectivity

गर्भाशय में Electroporation Neuronal उप-जनसंख्या के excitability और एकल कोशिका कनेक्टिविटी अध्ययन के लिए दृष्टिकोण

The nervous system is composed of an enormous range of distinct neuronal types. These neuronal subpopulations are characterized by, among other features, ...

Neuron-Macrophage Co-cultures to Activate Macrophages Secreting Molecular Factors with Neurite Outgrowth Activity

न्यूरॉन-मैक्रोफेज सह संस्कृतियों सक्रिय करने के लिए मैक्रोफेज Neurite के साथ आणविक कारकों स्रावित गतिविधि

There is strong evidence that macrophages can participate in the regeneration or repair of injured nervous system. Here, we describe a protocol in which ...