Name: feeder-free derivation of neural crest progenitor cells from human pluripotent stem cells
Uploaded: 2014-05-22T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

Ve Tri-kurumsal kök hücre girişimi (Starr Vakfı); Bu çalışma İsviçre Ulusal Bilim Vakfı ve NYSTEM (C026447 C026446) hibe yoluyla ileri araştırmacılar için bir burs ile desteklenmiştir.

1.. Kültür Medya, Kaplamalı Yemekleri ve hPSCs ve Bakım hazırlanması 1.1 Medya hazırlık Not: en fazla 2 hafta boyunca karanlıkta 4 ° C&#39;de sterilizasyon ve mağaza için tüm ortamı Filtre. Reaktif isimler, şirket ve katalog numaraları Malzeme tabloda listelenmiştir. <ol><li> DMEM/10% FCS: 885 ml DMEM, 100 ml FBS, 10 ml Pen / Strep ve 5 ml L-Glutamin birleştirin. </li><li> HES-ortamı: 800 ml DMEM/F12, KSR 200 mi, 5 ml L-glutamin...

<ol>
	<li>Lee, G., Studer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cell+technology+for+the+study+of+human+disease.">Induced pluripotent stem cell technology for the study of human disease.</a> Nat Methods. 7, 25-27 (2010).</li><li>Lee, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+pathogenesis+and+treatment+of+familial+dysautonomia+using+patient-specific+iPSCs.">Modelling pathogenesis and treatment of familial dysautonomia using patient-specific iPSCs.</a> Nature. 461, 402-406 (2009).</li><li>Ebert, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induced+pluripotent+stem+cells+from+a+spinal+muscular+atrophy+patient.">Induced pluripotent stem cells from a spinal muscular atrophy patient.</a> Nature. 457, 277-280 (2009).</li><li>Lee, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+screening+using+familial+dysautonomia+induced+pluripotent+stem+cells+identifies+compounds+that+rescue+IKBKAP+expression.">Large-scale screening using familial dysautonomia induced pluripotent stem cells identifies compounds that rescue IKBKAP expression.</a> Nat Biotechnol. 30, 1244-1248 (2012).</li><li>Zimmer, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+developmental+toxicants+and+signaling+pathways+in+a+functional+test+based+on+the+migration+of+human+neural+crest+cells.">Evaluation of developmental toxicants and signaling pathways in a functional test based on the migration of human neural crest cells.</a> Environ Health Perspect. 120, 1116-1122 (2012).</li><li>Dupin, E., Sommer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+crest+progenitors+and+stem+cells:+from+early+development+to+adulthood.">Neural crest progenitors and stem cells: from early development to adulthood.</a> Dev Biol. 366, 83-95 (2012).</li><li>McKeown, S. J., Stamp, L., Hao, M. M., Young, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hirschsprung+disease:+a+developmental+disorder+of+the+enteric+nervous+system.">Hirschsprung disease: a developmental disorder of the enteric nervous system.</a> Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 2, 113-129 (2013).</li><li>Slaugenhaupt, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-specific+expression+of+a+splicing+mutation+in+the+IKBKAP+gene+causes+familial+dysautonomia.">Tissue-specific expression of a splicing mutation in the IKBKAP gene causes familial dysautonomia.</a> Am J Hum Genet. 68, 598-605 (2001).</li><li>Cheung, N. K., Dyer, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroblastoma:+developmental+biology,+cancer+genomics+and+immunotherapy.">Neuroblastoma: developmental biology, cancer genomics and immunotherapy.</a> Nat Rev Cancer. 13, 397-411 (2013).</li><li>Lee, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+directed+differentiation+of+neural+crest+stem+cells+derived+from+human+embryonic+stem+cells.">Isolation and directed differentiation of neural crest stem cells derived from human embryonic stem cells.</a> Nat Biotechnol. 25, 1468-1475 (2007).</li><li>Lee, G., Chambers, S. M., Tomishima, M. J., Studer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+neural+crest+cells+from+human+pluripotent+stem+cells.">Derivation of neural crest cells from human pluripotent stem cells.</a> Nat Protoc. 5, 688-701 (2010).</li><li>Chambers, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+neural+conversion+of+human+ES+and+iPS+cells+by+dual+inhibition+of+SMAD+signaling.">Highly efficient neural conversion of human ES and iPS cells by dual inhibition of SMAD signaling.</a> Nat Biotechnol. 27, 275-280 (2009).</li><li>Itoh, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproducible+establishment+of+hemopoietic+supportive+stromal+cell+lines+from+murine+bone+marrow.">Reproducible establishment of hemopoietic supportive stromal cell lines from murine bone marrow.</a> Exp Hematol. 17, 145-153 (1989).</li><li>Barberi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+subtype+specification+of+fertilization+and+nuclear+transfer+embryonic+stem+cells+and+application+in+parkinsonian+mice.">Neural subtype specification of fertilization and nuclear transfer embryonic stem cells and application in parkinsonian mice.</a> Nat Biotechnol. 21, 1200-1207 (2003).</li><li>Elkabetz, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+ES+cell-derived+neural+rosettes+reveal+a+functionally+distinct+early+neural+stem+cell+stage.">Human ES cell-derived neural rosettes reveal a functionally distinct early neural stem cell stage.</a> Genes Dev. 22, 152-165 (2008).</li><li>Mica, Y., Lee, G., Chambers, S. M., Tomishima, M. J., Studer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+neural+crest+induction,+melanocyte+specification,+and+disease-related+pigmentation+defects+in+hESCs+and+patient-specific+iPSCs.">Modeling neural crest induction, melanocyte specification, and disease-related pigmentation defects in hESCs and patient-specific iPSCs.</a> Cell Rep. 3, 1140-1152 (2013).</li><li>Molofsky, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bmi-1+dependence+distinguishes+neural+stem+cell+self-renewal+from+progenitor+proliferation.">Bmi-1 dependence distinguishes neural stem cell self-renewal from progenitor proliferation.</a> Nature. 425, 962-967 (2003).</li></ol>

HESC / hiPSCs R-NC hücrelerinin başarılı farklılaşması için aşağıdaki noktalar göz önüne alınmalıdır. Bu her zaman steril kültür koşulları altında çalışmak için çok önemlidir. Özellikle, bu kirlenme başarılı engel farklılaşmasını çünkü, düzenli mikoplazma kontaminasyonu için hPSC kültürleri test etmek önemlidir, ancak kolayca hPSC kültürde görsel olarak tespit edilemez. R-NC farklılaşması% 90-100 hücre yoğunluğunda başlanmalıdır; düşük hücre yoğunluğu, hücre...

İnsan embriyonik kök hücreleri (HESC) ve insan uyarılmış pluripotent kök hücreler (hiPSC) iyi hayvan modelleri ne birincil dokular ne mevcut olduğu için insan hastalıkların araştırılması ve gelecekteki tedavisi için özellikle, muazzam bir potansiyel göstermiştir. HESC / hiPSC tekniği Uygulama örnekleri aşağıdaki gibidir: Özellikle ilgi çekici hücreleri sınırsız miktar 1 de rejeneratif tıp için HESC / hiPSCs oluşturulabilir. Hücreler, belirli bir hastalık taşıyan hastaların üretilen ve vitro hastalık modellerinde 2,3 kurmak için kullanılabilir. Bu tür hastalık modelleri daha sonra yeni ilaç bileşikleri 4 arayışı hem de etkinlik ve toksisite 5 için mevcut ilaçların test büyük ölçekli ilaç taraması için kullanılabilecektir. In vitro hastalık modelleri, yeni hastalık mekanizmalarının tanımlanmasına yol açabilir. HESC / iPSC teknolojisinin tüm uygulamalar için spesifik ile çalışmak önemlidir, iyi tanımlamaksöz konusu hastalığın etkilenen d hücre türleri. Bu nedenle, katı ve tekrarlanabilir in vitro farklılaşma protokollerin kullanılabilirliği HESC / hiPSC teknolojisinin tüm uygulamalar için çok önemlidir. Protokoller HESC / hiPSC hatları ve farklı araştırmacılar arasında en az değişkenlik, zaman gider, çaba, zorluk ve maliyet hem de maksimum tekrarlanabilirlik gösteriyor ki arzu edilir. Nöral krest (NC) hücreleri epidermis ve nöral epiteli arasında omurgalı nörülasyon sırasında ortaya çıkar. , Çoğaldıkları ve gelişen embriyonun boyunca göç eder ve yaygın olarak kemik / kıkırdak, kraniofasiyal iskelet, duyu sinirlerinin, Schwann hücreleri, melanositler, düz kas hücreleri, bağırsak, nöronlar, otonomik nöron, kromafin hücreleri de dahil olmak üzere, soy hücre tiplerinin etkileyici bir çeşitliliği doğuran , kalp septum hücreleri, diş ve adrenal / tiroid salgı bezi hücreleri 6. Bu durumda, hücreler, Kuzey Carolina çekici bir hücre alanı için kök hücre tipi ve için önemlidirBu tür Hirschsprung hastalığı 7, Ailevi Disotonomi 8 yanı sıra 9 gibi nöroblastoma kanser gibi hastalıkların, çeşitli modellenmesi. Dahası, in vitro insan embriyonik gelişim yönlerini incelemek için imkanı sunuyoruz. Şu anda mevcut ve yaygın olarak hESC 10,11 NC hücrelerinin türetilmesi için vitro farklılaşma protokolünde uygulanan farklılaşma 35 güne kadar sürer ve bu gibi MS5 stromal hücreleri gibi besleyici hücreleri üzerinde uyarılmasını sinir içerir ve bu nedenle yetersiz tanımlanmış koşullar altında gerçekleştirilir. Bu NC hücreleri büyük miktarlarda üretmek için ölçekli kadar olabilir, yüksek verimlilik gösteren ilaç tarama 4 için gerekli olan, örneğin, bu iş ve maliyet yoğundur. Ayrıca, yeniden zor olabilir sinir rozet, elle pasajlanmasını da içerir ve bu HESC veya hiPSC büyük bir çeşitlilik uygulandığı zaman bu nedenle, özellikle genel olarak değişkenlik, tabidirçizgiler. Burada, besleyici hücre içermeyen bir 18 günlük protokolünde NC hücrelerin aşamalı türetme gösterilmiştir. Bu yöntem, şu anda kullanılan protokol daha kısa ve daha belirgin olduğunu. Ayrıca, farklı hiPSC hatları arasında NC hücreleri üreten çok sağlamdır. Önemlisi, bu iki protokol tarafından vermiştir NC hücreler nöral rozetler (bundan sonra adlandırılan rozet-NC ya da R-NC) sınırında ortaya olduğu gösterilmiştir. Iki protokolden birini kullanarak elde edilen hücreler aynı NC işaretleri ifade ve mikroarray analizi birlikte küme, morfolojik aynı görünüyor. Yeni protokolü (R-NC) kullanılarak elde edilen NC hücreleri göç ve daha fazla nöronların içine ayırt olabilir böyle eski protokolü (MS5-R-NC) kullanılarak elde edilen NC hücrelerine benzer, işlevseldir. Bu yüzden, hücreler, MS5-R-NC hücreleri ile eş zamanlı olarak kullanılabilir. HESC / iPSC NC hücrelerin derivasyon için R-NC hücre protokol NC soy içeren HESC / iPSC teknolojisinin tüm uygulamalar için faydalı olacaktır. &lt;/ P&gt;

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:897px;" width="897">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">Regents</td>
			<td style="width:219px;">company</td>
			<td style="width:160px;">cataloge number</td>
			<td style="width:165px;">comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>11965-092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Atlanta Biologicals</td>
			<td>S11150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DMEM/F12</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>11330-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Knockout Serum Replacement</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>10828-028</td>
			<td>Lot should be tested</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">L-Glutamine</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Penicinlin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">MEM minimum essential amino acids solution&#160;</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">&#946;-Mercaptoethanol&#160;</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>21985-023</td>
			<td>toxic</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Recombinant human FGF basic (FGF2)</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>233-FB-001MG/CF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Knockout DMEM</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>10829-018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">DMEM/F12 powder&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>12500-096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sodium Bicarbonate&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">APO human transferrin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T1147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Human insulin&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A4034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Putriscine dihydrochloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Selenite</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Progesterone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P8783</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Matrigel matrix</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>354234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Poly-L Ornithin hydrobromide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Mouse Laminin-I</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>3400-010-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fibronectin</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>356008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dispase in Hank&#39;s Balanced Salt Solution 5U/ml</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>7013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Trypsin-EDTA&#160;</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>25300-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Y-27632 dihydrochloride</td>
			<td>Tocris-R&#38;D Systems</td>
			<td>1254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">LDN193189</td>
			<td>Stemgent</td>
			<td>04-0074</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">SB431542</td>
			<td>Tocris-R&#38;D Systems</td>
			<td>1614</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Accutase</td>
			<td>Innovative Cell Technologies</td>
			<td>AT104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ascorbic Acid&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A4034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">BDNF</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>248-BD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">FGF8</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>423-F8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Mouse recombinant sonic hedgehog (SHH)</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>464SH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Atlanta Biologicals</td>
			<td>S11150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HBSS</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>14170-112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HEPES</td>
			<td>Gibco-Life Technologies</td>
			<td>1563-080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Human recombinant EGF</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>236EG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">gelatin (PBS without Mg/Ca)</td>
			<td>in house</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Antibodies:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Anti HNK-1/N-Cam (CD57) mIgM</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C6680-100TST</td>
			<td>lot should be tested</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Anti-p75 mIgG1 (Nerve Growth factor receptor)</td>
			<td>Advanced Targeting Systems</td>
			<td>AB-N07</td>
			<td>lot should be tested</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">APC rat anti-mIgM</td>
			<td>BD Parmingen</td>
			<td>550676</td>
			<td>lot should be tested</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">AlexaFluor 488 goat anti-mouse IgG1&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A21121</td>
			<td>lot should be tested</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Anti Oct4 mIgG2b (used at 1:200 dilution)</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-5279</td>
			<td>lot should be tested</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Material/Equipment:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Mouse embryonic fibroblasts (7 million cells/vial)</td>
			<td>GlobalStem</td>
			<td>GSC-6105M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cell culture dishes: 10cm and 15 cm plates, centrifuge tubes, FACS tubes,&#160; pipetts, pipet tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Glass hematocytometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cell culture centrifuge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cell culture incubator (CO2, humidity and temperature controlled)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cell culture laminar flow hood with embedded microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cell culture biosafety hood</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cell sorting machine, i.e. MoFlo</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Inverted microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">1 ml TB syringe 27Gx1/2</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309623</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cell lifter Polyethylene</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>3008</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

feeder-free derivation of neural crest progenitor cells from human pluripotent stem cells

İnsan pluripotent kök hücreler (hPSCs) tabak içinde, insan hastalıklarının modellemek için hastalık veya kaza sonrası uygulamalarda rejeneratif transplante edilebilir hücre kaynağı olarak, insan embriyo gelişimini incelemek için büyük bir potansiyele sahiptir. Sinir tepe (NC)-hücreleri, periferik sinir sistemi ve glia, melanositler ve mezenkimal hücrelerden hücreler gibi yetişkin somatik hücre, büyük bir çeşitlilik için öncülerdir. Bunlar hücre kaderinin şartname ve göç dahil olmak üzere insan embriyonik gelişim, yönlerini incelemek için hücre değerli bir kaynaktır. Terminal olarak farklılaşmış hücre tipleri NC projenitör hücrelerin farklılaşma başka, in vitro olarak insan hastalıklarının Modele hastalık mekanizmalarını incelemek ve rejeneratif hücrelere ilaç üretmek için imkanı sunar. Bu makalede, hPSCs NC hücrelerinin türetilmesi için bir mevcut in vitro farklılaşma protokol adaptasyonu sunar. Bu yeni protokol sorumluluk yönün 18 gün gerektirirrentiation, besleyici-özgür insan embriyonik kök hücre (HESC) hatları gibi insan uyarılmış pluripotent kök hücre (hiPSC) hatları arasında kolayca ölçeklenebilir ve yüksek tekrarlanabilir olduğunu. Hem eski hem de yeni protokoller eşit kimlik NC hücreleri verim.

MS5-R-NC protokolü üzerinde 11 R-NC protokolünün en önemli iki gelişmeler besleyici ücretsiz, tanımlanmış farklılaşma koşulları ve süre şartına genel kısalma vardır. MS5 besleyici hücreler 13 hESC 14 sinir farklılaşmasını desteklemek için gösterilmiştir fare kemik iliği stromal türetilmiş hücrelerdir. HESC böylece erken insan nöral gelişimi taklit eden, Kuzey Carolina hücreler 10 ortaya hangi periferinde, düşük yoğunluklu bir şekilde epi...

Watch this Scientific Journal Video about Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells at JoVE.com

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Insan pluripotent kök hücreleri (hPSC) türetilmiş nöral krest (NC) hücreler, insan gelişimi ve hastalık modelleme ve hücre replasman tedavileri için büyük bir potansiyele sahiptir. Burada, şu anda yaygın olarak kullanılan bir besleyici ücretsiz adaptasyon<em&gt; In vitro</em&gt; HPSCs NC hücrelerin derivasyon için farklılaşma protokolü sunulmuştur.

İnsan Pluripotent dan Sinir Crest Progenitör Hücreler besleyici ücretsiz Derivasyon Kök Hücre

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

Hücre Testi Şekillendirme Sinir-Koloni: Sinir Progenitör Hücreler Bona Fide Sinir Kök Hücreler Ayırım Bir Testi

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Nörobilim

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Bozulmamış Duyu Organ Öncü Hücreler Canlı hücre Görüntüleme Drosophila Pupa

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

İnsan Saç köklerinin arasından Sinir Crest Kök Hücre İzolasyonu ve Kültür

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

Efficient Derivation of Human Neuronal Progenitors and Neurons from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

Küçük Molekül İndüksiyon Pluripotent İnsan Embriyonik Kök Hücreleri İnsan Nöronal atalarıdır ve Nöronlar Verimli türetilmesi

There is a large unfulfilled need for a clinically-suitable human neuronal cell source for repair or regeneration of the damaged central nervous system ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Embriyonik Mürin Nöral Tüp çıkan sinirsel Crest Hücre İzolasyonu ve Kültür

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

The Specification of Telencephalic Glutamatergic Neurons from Human Pluripotent Stem Cells

İnsan Pluripotent Kök Hücreler Telencephalic glutamaterjik Nöron Şartnamesi

Here, a stepwise procedure for efficiently generating telencephalic glutamatergic neurons from human pluripotent stem cells (PSCs) has been described. The ...

A cGMP-applicable Expansion Method for Aggregates of Human Neural Stem and Progenitor Cells Derived From Pluripotent Stem Cells or Fetal Brain Tissue

İnsan Nöral Agregalarının bir cGMP uygulanabilir Açılım Yöntemi kök hücrelerin pluripotent kök hücreleri veya Fetal Beyin dokusundan türetilen

A cell expansion technique to amass large numbers of cells from a single specimen for research experiments and clinical trials would greatly benefit the ...

Directed Dopaminergic Neuron Differentiation from Human Pluripotent Stem Cells

İnsan Pluripotent Kök Hücreleri dopaminerjik Nöron Farklılaşma Yönetmen

Dopaminergic (DA) neurons in the substantia nigra pars compacta  (also known as A9 DA neurons) are the specific cell type that is lost in ...

Derivation of Adult Human Fibroblasts and their Direct Conversion into Expandable Neural Progenitor Cells

Yetişkin İnsan Fibroblastları türetilmesi ve Genişletilebilir Sinir Progenitör Hücreler içine Doğrudan Dönüşüm

Generation of&#160;induced pluripotent stem cell (iPSCs) from adult skin fibroblasts and subsequent differentiation into somatic cells provides ...

Identifying Cell Surface Markers of Primary Neural Stem and Progenitor Cells by Metabolic Labeling of Sialoglycan

Primer Nöral Kök ve Progenitor Hücrelerinin Hücre Yüzey Belirteçlerinin Sialoglycan'ın Metabolik Etiketlemesi ile Belirlenmesi

Neural stem and progenitor cells (NSPCs) are the cellular basis for the complex structures and functions of the brain. They are located in specialized ...