Name: one-channel cell-attached patch-clamp recording
Uploaded: 2014-06-09T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about One-channel Cell-attached Patch-clamp Recording at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av F31NS086765 (KAC), F31NS076235 (MAP), og R01 NS052669 (GKP) og EIA9100012. Forfatterne takker Eileen Kasperek for kompetanse og bistand med molekylærbiologi og vev kultur; og Jason Myers for deling av data innhentet fra tidlig prefrontal kortikale nevroner.

En. Cell Culture and Protein Expression <ol><li> Oppretthold HEK293-celler (ATCC nummer CRL-1573) mellom passasjene 22 og 40, som innbefatter passasjene er utført av ATCC i monolag-kultur i DMEM supplert med 10% kalvefosterserum (FBS) og 1% penicillin / streptomycin blandingen ved 5% CO2 og 37 ° C. Mellom forsøkene passasje celler i T25-kolber ved 5-20 gangers fortynning i et sluttvolum på 10 ml. Merk: Bruk av celler i løpet av disse passasjene garanterer gunstige celle helse som vil gi rom for optimal...

<ol>
	<li>Neher, E., Sakmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-channel+currents+recorded+from+membrane+of+denervated+frog+muscle+fibres.">Single-channel currents recorded from membrane of denervated frog muscle fibres.</a> Nature. 260, 799-802 (1976).</li><li>Hamill, O. P., Marty, A., Neher, E., Sakmann, B., Sigworth, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+patch-clamp+techniques+for+high-resolution+current+recording+from+cells+and+cell-free+membrane+patches.">Improved patch-clamp techniques for high-resolution current recording from cells and cell-free membrane patches.</a> Pflugers Arch. 391, 85-100 (1981).</li><li>Piccolino, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+electricity+and+the+birth+of+electrophysiology:+the+legacy+of+Luigi+Galvani.">Animal electricity and the birth of electrophysiology: the legacy of Luigi Galvani.</a> Brain Research Bulletin. 46, 381-407 (1998).</li><li>Albright, T. D., Jessell, T. M., Kandel, E. R., Posner, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+Science:+A+Century+of+Progress+and+the+Mysteries+that+Remain.">Neural Science: A Century of Progress and the Mysteries that Remain.</a> Neuron. 25, (2000).</li><li>Popescu, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modes+of+glutamate+receptor+gating.">Modes of glutamate receptor gating.</a> The Journal of Physiology. 590, 73-91 (2012).</li><li>Morimoto-Tomita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoinactivation+of+Neuronal+AMPA+Receptors+via+Glutamate-Regulated+TARP+Interaction.">Autoinactivation of Neuronal AMPA Receptors via Glutamate-Regulated TARP Interaction.</a> Neuron. 61, 101-112 (2009).</li><li>Thomas, P., Smart, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HEK293+cell+line:+A+vehicle+for+the+expression+of+recombinant+proteins.">HEK293 cell line: A vehicle for the expression of recombinant proteins.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 51, 187-200 (2005).</li><li>Huang, Z., Li, G., Pei, W., Sosa, L. A., Niu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancing+protein+expression+in+single+HEK+293+cells.">Enhancing protein expression in single HEK 293 cells.</a> Journal of Neuroscience Methods. 142, 159-166 (2005).</li><li>Raymond, L. A., Moshaver, A., Tingley, W. G., Huganir, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glutamate+receptor+ion+channel+properties+predict+vulnerability+to+cytotoxicity+in+a+transfected+nonneuronal+cell+line.">Glutamate receptor ion channel properties predict vulnerability to cytotoxicity in a transfected nonneuronal cell line.</a> Mol Cell Neurosci. 7, 102-115 (1996).</li><li>Suchyna, T. M., Markin, V. S., Sachs, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biophysics+and+Structure+of+the+Patch+and+the+Gigaseal.">Biophysics and Structure of the Patch and the Gigaseal.</a> Biophysical Journal. 97, 738-747 (2009).</li><li>Qin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+single-channel+currents+using+the+segmental+k-means+method+based+on+hidden+Markov+modeling.">Restoration of single-channel currents using the segmental k-means method based on hidden Markov modeling.</a> Biophys J. 86, 1488-1501 (2004).</li><li>Colquhoun, D., Sigworth, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> chapter in Single-channel recording. 2nd edn eds B. Sakmann and E Neher. , (1995).</li><li>Popescu, G., Auerbach, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modal+gating+of+NMDA+receptors+and+the+shape+of+their+synaptic+response.">Modal gating of NMDA receptors and the shape of their synaptic response.</a> Nat Neurosci. 6, 476-483 (2003).</li><li>Colquhoun, D., Hawkes, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stochastic+properties+of+ion+channel+openings+and+bursts+in+a+membrane+patch+that+contains+two+channels:+evidence+concerning+the+number+of+channels+present+when+a+record+containing+only+single+openings+is+observed.">Stochastic properties of ion channel openings and bursts in a membrane patch that contains two channels: evidence concerning the number of channels present when a record containing only single openings is observed.</a> Proc R Soc Lond B Biol Sci. 240, 453-477 (1990).</li><li>Kussius, C. L., Kaur, N., Popescu, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregnanolone+Sulfate+Promotes+Desensitization+of+Activated+NMDA+Receptors.">Pregnanolone Sulfate Promotes Desensitization of Activated NMDA Receptors.</a> J. Neurosci. 29, 6819-6827 (2009).</li><li>Amico-Ruvio, S., Popescu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stationary+gating+of+GluN1/GluN2B+receptors+in+intact+membrane+patches.">Stationary gating of GluN1/GluN2B receptors in intact membrane patches.</a> Biophysical Journal. 98, 1160-1169 (2010).</li><li>Borschel, W. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gating+reaction+mechanism+of+neuronal+NMDA+receptors.">Gating reaction mechanism of neuronal NMDA receptors.</a> J Neurophysiol. 108, 3105-3115 (2012).</li><li>Colquhoun, D., Hatton, C. J., Hawkes, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+quality+of+maximum+likelihood+estimates+of+ion+channel+rate+constants.">The quality of maximum likelihood estimates of ion channel rate constants.</a> The Journal of Physiology. 547, 699-728 (2003).</li><li>Kussius, C. L., Kaur, N., Popescu, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregnanolone+Sulfate+Promotes+Desensitization+of+Activated+NMDA+Receptors.">Pregnanolone Sulfate Promotes Desensitization of Activated NMDA Receptors.</a> The Journal of Neuroscience. 29, 6819-6827 (2009).</li><li>Popescu, G., Auerbach, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modal+gating+of+NMDA+receptors+and+the+shape+of+their+synaptic+response.">Modal gating of NMDA receptors and the shape of their synaptic response.</a> Nat Neurosci. 6, 476-483 (2003).</li><li>Popescu, G., Robert, A., Howe, J. R., Auerbach, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reaction+mechanism+determines+NMDA+receptor+response+to+repetitive+stimulation.">Reaction mechanism determines NMDA receptor response to repetitive stimulation.</a> Nature. 430, 790-793 (2004).</li><li>Prieto, M. L., Wollmuth, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gating+Modes+in+AMPA+Receptors.">Gating Modes in AMPA Receptors.</a> The Journal of Neuroscience. 30, 4449-4459 (2010).</li><li>Poon, K., Nowak, L. M., Oswald, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+Single-Channel+Behavior+of+GluA3+Receptors.">Characterizing Single-Channel Behavior of GluA3 Receptors.</a> Biophysical Journal. 99, 1437-1446 (2010).</li><li>Smith, T. C., Wang, L. -. Y., Howe, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneous+Conductance+Levels+of+Native+AMPA+Receptors.">Heterogeneous Conductance Levels of Native AMPA Receptors.</a> The Journal of Neuroscience. 20, 2073-2085 (2000).</li><li>Coste, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Piezo1+and+Piezo2+Are+Essential+Components+of+Distinct+Mechanically+Activated+Cation+Channels.">Piezo1 and Piezo2 Are Essential Components of Distinct Mechanically Activated Cation Channels.</a> Science. 330, 55-60 (2010).</li><li>Coste, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Piezo+proteins+are+pore-forming+subunits+of+mechanically+activated+channels.">Piezo proteins are pore-forming subunits of mechanically activated channels.</a> Nature. 483, 176-181 (2012).</li><li>Benndorf, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> chapter in Single-channel recording. 2nd edn eds B. Sakmann and E Neher. , (1995).</li></ol>

I ionekanal-feltet, er et viktig forskningsområde dedikert til å forstå hendelsesforløpet som fører til kanal åpning eller kanalens gating mekanisme. For de fleste kanaler, denne prosessen er kompleks og involverer flere kinetiske fremgangsmåten som ikke kan utledes fra en makroskopisk flerkanalsignal. I motsetning til dette kan være utformet eksperimenter hvor observere sekvensen av åpne / lukkede hendelser enkelt kanal posten kan produsere mer detaljert informasjon om gating mekanismer. I metodene som er besk...

Rask kommunikasjon på tvers av biologiske membraner er avhengig nesten utelukkende på oligomeriske pore forming membran proteiner, ofte referert til som kanaler. Disse proteinene er stor forskjell i aktiveringssignaler, gating mekanismer, og konduktans egenskaper. Kanal proteiner som porene er selektiv for ioner er klassifisert som ionekanaler; aktivering deres produserer ioniske strømmer gjennom membranen, og deres svar kan tas opp med høy oppløsning i sanntid ved hjelp av elektrofysiologiske teknikker. Aktiveringssignaler spenner over et bredt spekter av kjemiske og fysiske innganger, inkludert konsentrasjons graderinger, mekaniske og elektriske krefter, og temperatur; derfor videre klassifisere ionekanaler inn ligand gated, mechanosensitive, spenning gated, eller varme sensitive typer. I denne artikkelen er protokoller som er beskrevet for å ta opp en-kanal-aktivitet fra en ligand gated kanal, NMDA-reseptor, og en mechanosensitive kanal, PIEZO1, ved hjelp av patch clamp-teknikk.0; Patch-clamp elektrofysiologi er den første og mest brukte eksperimentelle metoden tilstrekkelig følsom til å tillate observasjon av enkle molekyler 1, 2. I tillegg til dette utsøkte følsomhet, har det vesentlig utvidet de biologiske preparater mottakelig for elektrofysiologiske opptak og også har gjort observasjon av ionekanaler i intakte membraner. Først, fordi begge spenningsklem og strøm-opptak er oppnådd med den samme elektrode, kan den brukes til å registrere signalene over, små celler eller membraner lapper. Teknikken avdekket at ionekanaler ikke er begrenset til hissige membraner av frosk muskler, ål electroplaques, eller blekksprut gigantiske axons 3, 4, men heller at de representerer stedsnærværende inventar av transmembrane signalmekanismer og er iboende i alle mobiltelefontyper membran av uni-eller flercellede organismer, og også til intracellulære membraner. Importantly, evnen til å ta opp transmembrane strømninger ved å feste et glass pipette til en intakt celle gitt enestående mulighet til å registrere aktivitet fra ionekanaler i sine opprinnelige uforstyrret membraner. Således cellen festet patch-clamp teknikk, som er beskrevet i denne protokollen, tillater overvåking av aktiviteten av ionekanaler kontinuerlig i flere titalls min eller lengre i sitt opprinnelige miljø. Under normale termiske svingninger, alle proteiner, inkludert ionekanal proteiner, gjennomgå strukturelle endringer over en bred tidsskala, med de raskeste og mest hyppige rearrangementer representert mest sannsynlig ved side-kjeden bevegelser og mye langsommere, mindre hyppige endringer representert ved reposisjonering av hele domener eller underenhetene, eller i noen tilfeller via post translasjonsforskning endringer eller protein-protein interaksjoner 5, 6. Observasjon av lange perioder med aktivitet som genereres av et molekyl kan hjelpe til å forstå den funknale dynamikken i ionekanaler i intakte fysiologiske membraner og gir verdifull informasjon om den operative mekanismen av molekylet observert. I motsetning til den økende forståelse for mangfoldet av ionekanaler tvers celletyper og utviklingsstadier, kunnskap om den molekylære sammensetningen av ionekanaler i innfødte membraner er fortsatt begrenset. Alle ionekanaler er multimere proteiner og de fleste innfødte ionekanaler montere fra flere typer underenheter som produserer proteiner av bred molekylær mangfold, som ofte ledsaget med ulike konduktans og gating egenskaper. Av denne grunn er ionekanaler av definerte molekyl sammensetning undersøkt ved ekspresjon i heterologe systemer. Spesielt HEK293 celler, som er en klonal linje av udødeliggjorte humane embryonale nyreceller 7, fått bred aksept som den foretrukne system for heterolog ekspresjon av rekombinante ionekanaler. Blant manneny fordeler som forhøyet HEK293 celler som valget system for ionekanal elektrofysiologi er den enkle og kostnader i dyrking og forvalte langvarige stabile kulturer, deres evne til å utføre post-translasjonell folding, foredling og handel av pattedyrproteiner, og i mange tilfeller , deres lave nivå eller fravær av endogen ekspresjon for kanalen i området 7, 8. Uttrykke rekombinante ionekanaler og studere deres funksjonelle egenskaper i HEK293 celler fortsetter å være en verdifull tilnærming for å innhente informasjon om struktur-funksjon egenskaper ionekanaler samt spesifikke egenskaper ionekanal isoformer og deres roller i innfødte vev. De protokoller som er beskrevet i denne artikkelen, kan anvendes like godt for rekombinante ionekanaler uttrykt i HEK293-celler og til å opprinnelige ionekanaler. I sammendrag, med patch-clamp teknikk, gjennom sin enestående kapasitet løse signals fra ett molekyl er fortsatt, til dags dato, den mest direkte metoden for å observere atferden til enkle molekyler. I sin celle-tilknyttet-modus, tillater patch-clamp-opptak lange observasjonsperioder som, når den gjøres i ett molekyl, kan gi utmerket innsikt i driften av ionekanaler. Nedenfor presenteres en protokoll for å oppnå høy oppløsning løpende opptak fra celle festet patcher som inneholder en ionekanal proteiner.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="695">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:189px;">Chemicals</td>
			<td style="width:173px;">Sigma</td>
			<td style="width:128px;">Various</td>
			<td style="width:205px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Borosillicate Glass</td>
			<td>Sutter</td>
			<td>BF-150-86-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bright field inverted microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>1x51</td>
			<td>Nikon also has similar microscopes</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Fluroescent box</td>
			<td>X-cite</td>
			<td>Series 120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Liquid Light Guide</td>
			<td>X-cite</td>
			<td>OEX-LG15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Micromanipulator</td>
			<td>Sutter Instruments</td>
			<td>MP-225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Oscilloscope</td>
			<td>Tektronix</td>
			<td>TDS1001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Amplifier</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td colspan="2">Axon Axopatch 200B&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Table</td>
			<td>TMC</td>
			<td align="right">63561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">NIDAQ card</td>
			<td>National Instruments</td>
			<td>776844-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Puller</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>PC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Polisher</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>Microforge MF-830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Faraday Cage</td>
			<td>TMC</td>
			<td align="right">8133306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">High Speed Pressure Clamp</td>
			<td>ALA Scientific Instruments</td>
			<td>ALA HSPC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Pressue/Vaccuum Pump</td>
			<td>ALA Scientific Instruments</td>
			<td>ALA PV-PUMP</td>
			<td>For HSPC-1</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

one-channel cell-attached patch-clamp recording

Ionekanal proteiner er universelle enheter for rask kommunikasjon på tvers av biologiske membraner. Den temporale signaturen til det ioniske flussmiddel de genererer avhenger egenskaper iboende i hver kanal protein så vel som den mekanismen som er den genererte og kontrollert og er et viktig område for dagens forskning. Informasjon om operasjons dynamikken i ionekanal proteiner kan bli oppnådd ved å observere lange strekninger av strøm som er produsert av et enkelt molekyl. Beskrevet her er en protokoll for å skaffe en-kanals celle-festet patch-clamp dagens opptak for en ligand gated ionekanal, NMDA-reseptoren, uttrykt heterologt i HEK293 celler eller direkte i kortikale nevroner. Også gitt er instruksjoner om hvordan du kan tilpasse metoden til andre ionekanaler av interesse ved å presentere eksempel på mekano-sensitive kanal PIEZO1. Denne metoden kan gi data om kanalens konduktans egenskaper og det timelige sekvens av open lukkede konformasjoner som utgjør kanalens aktiveringsmekanismen, og dermed bidra til å forstå deres funksjon i helse og sykdom.

Rekombinant NMDA reseptorer NMDA reseptorer binde og svare på samtidig handling av to co-agonister: glutamat og glysin. De monterer som heterotetramers av to glycin bindende GluN1 subenheter og to glutamat bindende GluN2 subenheter. GluN2 subenheter er kodet av fire gener (AD) og av disse de mest transkriberte skjemaer i hjernen er GluN2A hos voksne og GluN2B hos unge dyr. På grunn av mangfoldet av NMDA-reseptor-undertyper i native stoffblandinger, som uttrykker reseptorer...

Watch this Scientific Journal Video about One-channel Cell-attached Patch-clamp Recording at JoVE.com

One-channel Cell-attached Patch-clamp Recording

En kanal Cell-festet Patch-clamp opptak

Beskrevet her er en prosedyre for å få lange strekninger av dagens opptak fra en ionekanal med celle-festet patch-clamp teknikken. Denne metoden gjør det mulig for å observere, i sanntid, mønsteret av open-nære kanal konformasjoner som ligger til grunn for biologisk signal. Disse dataene informere om kanal eiendommer i uforstyrrede biologiske membraner.

Ion channel proteins are universal devices for fast communication across biological membranes. The temporal signature of the ionic flux they generate ...

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for Patch Clamp Capacitance Recordings from the Calyx

We demonstrate the basic techniques for presynaptic patch clamp recording at the calyx of Held, a mammalian central nervous system nerve terminal. ...

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

Pressure-polishing is a method for shaping glass pipettes for patch-clamp recording.  We first developed this method for fabricating pipettes suitable for ...

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

Drosophila is a premier genetic model for the study of both embryonic development and functional neuroscience. Traditionally, these fields are quite ...

Ambulatory ECG Recording in Mice

Telemetric ECG recording in mice is essential to understanding the mechanisms behind arrhythmias, conduction disorders, and sudden cardiac death. Although ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

Exploring Arterial Smooth Muscle Kv7 Potassium Channel Function using Patch Clamp Electrophysiology and Pressure Myography

Exploring Arteriell glatt muskulatur KV7 Kalium Channel funksjon ved hjelp Patch Clamp Elektrofysiologi og trykk Myography

Contraction  or relaxation of smooth muscle cells within the walls of resistance arteries  determines the artery diameter and thereby controls flow of ...

Giant Liposome Preparation for Imaging and Patch-Clamp Electrophysiology

Giant Liposome Forberedelse til Imaging and Patch-Clamp Electrophysiology

The reconstitution of ion channels into chemically defined lipid membranes for electrophysiological recording has been a powerful technique to identify ...

Reconstitution of a Transmembrane Protein, the Voltage-gated Ion Channel, KvAP, into Giant Unilamellar Vesicles for Microscopy and Patch Clamp Studies

Tilberedning av et trans Protein, den Spenning ionekanal, KvAP, inn Giant unilamellær Blemmer for Mikros og Patch Clamp Studier

Giant Unilamellar Vesicles (GUVs) are a popular biomimetic system for studying membrane associated phenomena. However, commonly used protocols to grow ...

Implementing Patch Clamp and Live Fluorescence Microscopy to Monitor Functional Properties of Freshly Isolated PKD Epithelium

Implementering Patch Clamp og Live Fluorescensmikroskopi til Monitor funksjonelle egenskaper nyisolerte PKD Epitel

Cyst initiation and expansion during polycystic kidney disease is a complex process characterized by abnormalities in tubular cell proliferation, luminal ...