Name: stab wound injury of the zebrafish adult telencephalon: a method to investigate vertebrate brain neurogenesis and regeneration
Uploaded: 2014-08-04T23:00:00
Duration: 9 min 16 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Stab Wound Injury of the Zebrafish Adult Telencephalon: A Method to Investigate Vertebrate Brain Neurogenesis and Regeneration at JoVE.com

We thank N. Borel and her fish house team, M. Rastegar for help with microscopy, and T. Dickmeis for comments on the manuscript. We are grateful for support by the EU IP ZF-Health, FP7-HEALTH-2007-B2, NeuroXsys, the Interreg Network for Synthetic Biology in the Upper Rhine valley (NSB-Upper Rhine) and the BMBF funded network EraSysBio.

<ol>
	<li>Ming, G. L., Song, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+neurogenesis+in+the+mammalian+brain:+significant+answers+and+significant+questions.">Adult neurogenesis in the mammalian brain: significant answers and significant questions.</a> Neuron. 70, 687-702 (2011).</li><li>Kizil, C., Kaslin, J., Kroehne, V., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+neurogenesis+and+brain+regeneration+in+zebrafish.">Adult neurogenesis and brain regeneration in zebrafish.</a> Dev Neurobiol. 72, 429-461 (2012).</li><li>Robel, S., Berninger, B., Gotz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stem+cell+potential+of+glia:+lessons+from+reactive+gliosis.">The stem cell potential of glia: lessons from reactive gliosis.</a> Nat Rev Neurosci. 12, 88-104 (2011).</li><li>Sofroniew, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+dissection+of+reactive+astrogliosis+and+glial+scar+formation.">Molecular dissection of reactive astrogliosis and glial scar formation.</a> Trends Neurosci. 32, 638-647 (2009).</li><li>Schmidt, R., Strahle, U., Scholpp, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis+in+zebrafish+-+from+embryo+to+adult.">Neurogenesis in zebrafish - from embryo to adult.</a> Neural Dev. 8, 3 (2013).</li><li>Zupanc, G. K., Sirbulescu, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+neurogenesis+and+neuronal+regeneration+in+the+central+nervous+system+of+teleost+fish.">Adult neurogenesis and neuronal regeneration in the central nervous system of teleost fish.</a> Eur J Neurosci. 34, 917-929 (2011).</li><li>Zupanc, G. K., Sirbulescu, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Teleost+fish+as+a+model+system+to+study+successful+regeneration+of+the+central+nervous+system.">Teleost fish as a model system to study successful regeneration of the central nervous system.</a> Curr Top Microbiol Immunol. 367, 193-233 (2013).</li><li>Adolf, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+and+acquired+features+of+adult+neurogenesis+in+the+zebrafish+telencephalon.">Conserved and acquired features of adult neurogenesis in the zebrafish telencephalon.</a> Dev Biol. 295, 278-293 (2006).</li><li>Grandel, H., Kaslin, J., Ganz, J., Wenzel, I., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+and+neurogenesis+in+the+adult+zebrafish+brain:+origin,+proliferation+dynamics,+migration+and+cell+fate.">Neural stem cells and neurogenesis in the adult zebrafish brain: origin, proliferation dynamics, migration and cell fate.</a> Dev Biol. 295, 263-277 (2006).</li><li>Zupanc, G. K., Hinsch, K., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation,+migration,+neuronal+differentiation,+and+long-term+survival+of+new+cells+in+the+adult+zebrafish+brain.">Proliferation, migration, neuronal differentiation, and long-term survival of new cells in the adult zebrafish brain.</a> J Comp Neurol. 488, 290-319 (2005).</li><li>Chapouton, P., Jagasia, R., Bally-Cuif, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+neurogenesis+in+non-mammalian+vertebrates.">Adult neurogenesis in non-mammalian vertebrates.</a> Bioessays. 29, 745-757 (2007).</li><li>Hinsch, K., Zupanc, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+and+long-term+persistence+of+new+neurons+in+the+adult+zebrafish+brain:+a+quantitative+analysis.">Generation and long-term persistence of new neurons in the adult zebrafish brain: a quantitative analysis.</a> Neuroscience. 146, 679-696 (2007).</li><li>Lindsey, B. W., Darabie, A., Tropepe, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cellular+composition+of+neurogenic+periventricular+zones+in+the+adult+zebrafish+forebrain.">The cellular composition of neurogenic periventricular zones in the adult zebrafish forebrain.</a> J Comp Neurol. 520, 2275-2316 (2012).</li><li>Marz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+in+progenitor+cell+subtypes+in+the+ventricular+zone+of+the+zebrafish+adult+telencephalon.">Heterogeneity in progenitor cell subtypes in the ventricular zone of the zebrafish adult telencephalon.</a> Glia. 58, 870-888 (2010).</li><li>Marz, M., Schmidt, R., Rastegar, S., Strahle, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+response+following+stab+injury+in+the+adult+zebrafish+telencephalon.">Regenerative response following stab injury in the adult zebrafish telencephalon.</a> Dev Dyn. 240, 2221-2231 (2011).</li><li>Grandel, H., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+aspects+of+adult+neural+stem+cell+activity+in+vertebrates.">Comparative aspects of adult neural stem cell activity in vertebrates.</a> Dev Genes Evol. 223, 131-147 (2013).</li><li>Ayari, B., El Hachimi, K. H., Yanicostas, C., Landoulsi, A., Soussi-Yanicostas, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prokineticin+2+expression+is+associated+with+neural+repair+of+injured+adult+zebrafish+telencephalon.">Prokineticin 2 expression is associated with neural repair of injured adult zebrafish telencephalon.</a> J Neurotrauma. 27, 959-972 (2010).</li><li>Baumgart, E. V., Barbosa, J. S., Bally-Cuif, L., Gotz, M., Ninkovic, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stab+wound+injury+of+the+zebrafish+telencephalon:+a+model+for+comparative+analysis+of+reactive+gliosis.">Stab wound injury of the zebrafish telencephalon: a model for comparative analysis of reactive gliosis.</a> Glia. 60, 343-357 (2011).</li><li>Kishimoto, N., Shimizu, K., Sawamoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+regeneration+in+a+zebrafish+model+of+adult+brain+injury.">Neuronal regeneration in a zebrafish model of adult brain injury.</a> Dis Model Mech. 5, 200-209 (2012).</li><li>Kizil, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+neurogenesis+from+neural+progenitor+cells+requires+injury-induced+expression+of+Gata3.">Regenerative neurogenesis from neural progenitor cells requires injury-induced expression of Gata3.</a> Dev Cell. 23, 1230-1237 (2012).</li><li>Kroehne, V., Freudenreich, D., Hans, S., Kaslin, J., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+the+adult+zebrafish+brain+from+neurogenic+radial+glia-type+progenitors.">Regeneration of the adult zebrafish brain from neurogenic radial glia-type progenitors.</a> Development. 138, 4831-4841 (2011).</li><li>Kyritsis, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+inflammation+initiates+the+regenerative+response+in+the+adult+zebrafish+brain.">Acute inflammation initiates the regenerative response in the adult zebrafish brain.</a> Science. 338, 1353-1356 (2012).</li><li>Gupta, T., Mullins, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+organs+from+the+adult+zebrafish.">Dissection of organs from the adult zebrafish.</a> J Vis Exp. (37), (2010).</li><li>Shin, J., Park, H. C., Topczewska, J. M., Mawdsley, D. J., Appel, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+cell+fate+analysis+in+zebrafish+using+olig2+BAC+transgenics.">Neural cell fate analysis in zebrafish using olig2 BAC transgenics.</a> Methods Cell Sci. 25, 7-14 (2003).</li><li>Armant, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide,+whole+mount+in+situ+analysis+of+transcriptional+regulators+in+zebrafish+embryos.">Genome-wide, whole mount in situ analysis of transcriptional regulators in zebrafish embryos.</a> Dev Biol. 380, 351-362 (2013).</li></ol>

والكتاب ليس لديهم ما يكشف.

نحن هنا وصف الأسلوب للحث على إصابة الدماغ الانتهائي عن طريق دفع الإبرة من خلال الجمجمة من الزرد الكبار، وتحليل رد فعل الخلوية والجزيئية لهذه الإصابة من قبل المناعية والتهجين في الموقع. الميزة الرئيسية لهذه التقنية على النهج القائمة الأخرى هو بساطته والسرعة والكفاءة من حيث التكلفة. لذلك، هذه التقنية، والذي يسمح إنتاج العديد من أدمغة المصابين في وقت قصير، ويمكن الجمع بسهولة مع نطاق واسع في الموضع الشاشة التهجين لتحديد الجينات التي لها دور في تجديد وتكوين الخلايا العصبية. عمر الزرد الكبار التي تتم الإصابة أمر بالغ الأهمية. إذا كان السمك تكون أقدم من 1.5 سنوات، والجمجمة من الصعب جدا وأنه من الممكن أن يتم دفع الجمجمة أو كسر أسفل بدلا من مثقب نظيفة. في المقابل، في الأسماك الأصغر سنا (أصغر من 4 أشهر)، لا يزال هناك الكثير من الخلايا العصبية مستمرة، والتي قد لياد إلى نتائج إيجابية كاذبة بشأن تكوين الخلايا العصبية على رد الفعل. آخر خطوة حاسمة في هذا النهج هو للتحقق من كفاءة الجرح طعنة واستبعاد أن كلا نصفي الكرة الأرضية والجرحى. هذا يمكن رصدها من قبل تلطيخ المقاطع مع الأجسام المضادة لمكافحة PCNA. في آفة قدم بشكل صحيح، يجب أن يكون بكنا بشكل ملحوظ التنظيم في واحدة فقط من نصفي الكرة الأرضية. من المهم أن نضع في اعتبارنا أن الإصابة الميكانيكية الناجمة سيكون لها العديد من الآثار الجانبية مثل الاجتثاث غير محددة الخلايا، وزيادة موت الخلايا بسبب انحطاط الثانوية، والتهاب وتدمير حاجز الدم في الدماغ، والضرر من منطقة البطين وكما ممكن نتيجة لتدفق السائل النخاعي في الدماغ حمة. ومع ذلك، يبدو أن الأسماك الجرحى يعانون القليل جدا من الإصابات. في غضون 2 دقيقة هم السباحة الحرة مرة أخرى ويتم استعادة سلوك التغذية الطبيعية في غضون 4 ساعة. بعد 3 أسابيع طnjury هو شكليا غير مرئية بعد الآن. في أيدينا، من عدة مئات العمليات الجراحية أننا لم نفقد سمكة واحدة على الرغم من أن كان لدينا معدل الإصابة بنسبة 100٪ وفقا لتقييم الأنسجة في 5 أيام آخر الآفة. في السنوات الأخيرة تم تطوير تقنيات أخرى مثل النهج المعدلة وراثيا في الزرد لإنتاج أنسجة أو نوع من الخلايا الاجتثاث محددة 2. على الرغم من أن هذه التقنيات هي أنيقة جدا والحد الأدنى الغازية لأنها تستند إلى توليد بنيات الحمض النووي معقد وإنشاء العديد من خطوط المعدلة وراثيا الزرد مستقرة والتي يمكن أن تكون شاقة للغاية وتستغرق وقتا طويلا. وبالتالي، نهج الميكانيكية البسيطة مثل الفحص الموصوفة في هذا البروتوكول تظل أداة مهمة لدراسة الخلايا العصبية في الدماغ الكبار والتجدد.

الثدييات لديها قدرة محدودة للغاية لتوليد خلايا عصبية جديدة خلال حياة البالغين، والخلايا العصبية في الدماغ الكبار ويقتصر في الغالب إلى منطقتين الدماغ الانتهائي تقع في منطقة subventricular (SVZ) من البطينين الوحشي، والمنطقة جزئي التحبب (SGZ) من المسنن التلفيف في الحصين 1. الثدييات أيضا لا يمكن إصلاح الضرر في الدماغ الناجم عن الأمراض العصبية والسكتة الدماغية، أو إصابات، بكفاءة. لا يتم استبدال الخلايا العصبية المفقودة وبدلا انتشار أنواع مختلفة من الخلايا الدبقية، بما في ذلك الخلايا النجمية، الخلايا الدبقية الصغيرة، و oligodendrocytes، ويلاحظ. نتيجة لهذه العملية التكاثري دعا دباق رد الفعل، وختم أنسجة المخ أصيب قبالة عن طريق تشكيل ندبة الدبقية، الذي يثبط الخلايا العصبية وتجدد المحاور 2-4. وعلى النقيض من الثدييات والأسماك مكتملة العظام مثل الزرد تشكيل الخلايا العصبية الجديدة بوفرة في مراحل الكبار ولها التجدد العالية وتتكاثرإيف المحتملة لإصلاح آفات الجهاز العصبي المركزي 2،5-7. الدماغ الكبار الزرد يحتوي على 16 منافذ متميزة العصبية الخلايا الجذعية التي تولد عدد كبير من الخلايا العصبية الجديدة أثناء الحياة بأكملها 8-11. الخلايا العصبية ولدت في هذه المناطق انتشار محددة من الدماغ الزرد الكبار الهجرة إلى المناطق المستهدفة، حيث أنها سوف تنضج والاندماج في الشبكات العصبية القائمة 8،10،12-15. بين مناطق السلف المحددة في الزرد الكبار، ومنطقة البطين الدماغ الانتهائي هي واحدة من الخلايا العصبية محاريب الخلايا الجذعية الأكثر دراسة. ويمكن تصنيف الخلايا المتخصصة في هذا السلف إلى ثلاثة أنواع متميزة فيما يتعلق التشكل، ومعدل الانقسام والتعبير عن الدبقية مختلفة أو علامات العصبية. النوع الأول والنوع الثاني هي الخلايا الدبقية شعاعي مثل الخلايا التي لها عمليات طويلة. يعبرون عن علامات الخلايا الجذعية بما في ذلك GFAP، nestin، وS100β. النوع الأول الخلايا لا تتكاثر بينما النوع الثاني الخلايا تتكاثره ببطء، كما يتضح من التعبير عنها من علامات انتشار مثل تكاثر الخلايا مستضد النووي (PCNA) وإدماج نظائرها desoxythymidine. نوع الخلايا سريعة الانقسام الثالث والخلايا التي ملتزمون تصبح الأسلاف العصبية والتعبير عن الجينات علامة العصبية، مثل PSA-NCAM 5،16. على الرغم من أن قدرات التجدد من الأسماك مكتملة العظام موثقة توثيقا جيدا، وقد وصفت سوى عدد قليل المطبوعات والتحقيق في تفاصيل الآليات الخلوية والجزيئية المشاركة في تجديد الخلايا العصبية في الدماغ الانتهائي الكبار في استجابة لإصابة 15،17-22. فك آليات الكبار المتورطين في الزرد تجديد الجهاز العصبي المركزي وإصلاح وفهم أوجه الشبه والاختلاف بين الخلايا العصبية التأسيسية والتجدد، وضعنا نموذجا الزرد من إصابة الدماغ الانتهائي الكبار. هنا، فإننا سوف تصف بصريا كيفية توليد اصابة في واحدة من hemisph الدماغ الانتهائيإزدان العقارية بمساعدة إبرة حقنة، مع الحفاظ على الجانب المقابل unlesioned باعتبارها الرقابة الداخلية. ونحن سوف تظهر أيضا كيفية رصد التغيرات على إصابة في تكاثر الخلايا والتعبير الجيني من قبل المناعية والمقايسات في الموقع التهجين.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="782">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:163px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tricaine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td align="right">335.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10x DPBS (-/-)</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>14200-083</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">30 G syringe (Omnican 40)</td>
			<td>B.Braun Melsungen</td>
			<td align="right">916162</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene molding cup tray&#160;</td>
			<td>Polysciences, Inc</td>
			<td>17177C-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PeqGOLD Universal Agarose&#160;</td>
			<td>Peqlab</td>
			<td>35-1020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bovine serum albumin</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>W 2835919108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Aqua Poly/Mount</td>
			<td>Polysciences, Inc</td>
			<td>18606-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween 20</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td align="right">9127.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMSO</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>A994.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissection needle</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>KX93.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td align="right">335.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Loctite 414</td>
			<td>Sch&#246;ffler und W&#246;rner</td>
			<td><a href="http://62.157.117.162/BP2NAV500/ItemDetail_NAV.aspx?ItemID=06%201362%200020">06 1362 0020</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass slides</td>
			<td>Labonord</td>
			<td align="right">5305103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cover slips 24 x 60 mm</td>
			<td style="width:163px;">Labonord</td>
			<td align="right">5305060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dishes 94 mm</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td align="right">632180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Falcons 15 ml</td>
			<td style="width:163px;">Greiner bio-one</td>
			<td align="right">188261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">24-well plate</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td align="right">662160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-S100 (1:500)</td>
			<td>Dako</td>
			<td>Z031101-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-PCNA (1:400)</td>
			<td>Dako</td>
			<td>M087901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-GFP (1&#160;:1000)</td>
			<td>Aves Labs</td>
			<td>GFP-1020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">anti-Dig AP-coupled antibody&#160;</td>
			<td>Roche Diagnostics</td>
			<td align="right">11093274910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5-Bromo-4-chloro-3-indolyl-phosphate (BCIP)&#160;</td>
			<td>Roche Diagnostics</td>
			<td align="right">1383221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4-Nitroblue tetrazolium chloride (NBT)&#160;</td>
			<td>Roche Diagnostics</td>
			<td align="right">1383213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Proteinase K</td>
			<td>Roche Diagnostics</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1092766</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene molding cup tray&#160;</td>
			<td style="width:163px;">Polysciences</td>
			<td style="width:119px;">17177C-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vibratome VT1000S</td>
			<td>Leica</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Confocal microscope Sp5 DM6000</td>
			<td>Leica</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissecting microscope Nikon SMZ 645</td>
			<td>Nikon</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">24-well flat bottomed tissue culture plates&#160;</td>
			<td>Falcon catalog&#160;</td>
			<td align="right">353226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Student Dumont #5 Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91150-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91460-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Danio rerio Tg(olig2:EGFP)</td>
			<td align="right">24</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Danio rerio WT strains (e.g. AB2O2)</td>
			<td style="width:163px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stab wound injury of the zebrafish adult telencephalon: a method to investigate vertebrate brain neurogenesis and regeneration

الزرد الكبار لديهم قدرة مذهلة على تجديد الجهاز العصبي المركزي على بعد الاصابة. للتحقيق في استجابة الخلايا والآليات الجزيئية المشاركة في الزرد الكبار الجهاز العصبي المركزي (CNS) تجديد وإصلاح، وضعنا نموذجا الزرد من إصابة الدماغ الانتهائي الكبار. في هذا النهج، ونحن يدويا توليد إصابة عن طريق دفع إبرة حقنة الأنسولين في الدماغ الانتهائي الكبار الزرد. في أيام مختلفة إصابة آخر، يتم التضحية الأسماك، يتم تشريح أدمغتهم وملطخة بواسطة المناعية و / أو الموقع التهجين (ISH) في مع علامات المناسبة لمراقبة تكاثر الخلايا، gliogenesis، وتكوين الخلايا العصبية. يخدم نصف الكرة unlesioned المقابل باعتبارها الرقابة الداخلية. هذا الأسلوب مجتمعة على سبيل المثال مع الحمض النووي الريبي التسلسل العميق يمكن أن تساعد على الشاشة لجينات جديدة مع دورا في تكوين الخلايا العصبية الدماغ الانتهائي الزرد الكبار، وتجديد، وإصلاح.

باستخدام سير العمل الموضحة في هذه المقالة، وقدم آفة في النصف الأيمن من الدماغ الانتهائي على الزرد الكبار (أرقام 1A-1B). وجرح الصحيح يؤدي إلى قناة الآفة التي تمتد من ظهري لبطني من خلال درع التثبيت كاملة من لل telencephalon (الشكل 3C). وينبغي أن يقتصر الآفة إلى واحدة من نصفي الكرة الأرضية، وينبغي ألا عبور البطين وسطي. قناة الآفة مرئيا مع المجهر حقل مشرق (الشكل 3C) وسوف تلتئم بعد حوالي 35 يوما 15. سبق ان عرضه أنه بعد اصابة في التنظيم تتكون من الخلية المتكاثرة مستضد النووي (PCNA؛ الشكل 3A) وS100β (الشكل 3B) في 3-7 قرض سياسات التنمية هو كشفها بواسطة المناعية 15. تلطيخ من بكنا وS100β هو التداخل، مشيرا الى انتشار الخلايا الدبقية شعاعي. Furthermore، من أجل تصور خلايا دبقية قليلة التغصن السلائف (يجد OPCs)، تم إجراء فحص طعنة الجرح على تيراغرام (olig2: EGFP) الأسماك 24. على تلطيخ مع الأضداد المضادة للGFP، وتراكم يجد OPCs على مقربة من القناة الآفة قابلا للاكتشاف (الشكل 3D). هذا التراكم هو عابر، وليس لوحظ مجموعات OPC بعد الآن في 35 DPL 15. إذا لم يتم عرض الآفة بشكل صحيح، فإن القناة الآفة لا تكون مرئية، وسوف يصل تنظيم بكنا وS100β أو تراكم يجد OPCs لا تكون قابلة للكشف. بكنا هو علامة الأكثر حساسية للإصابة الدماغ. من أجل التحقق من كفاءة الجرح طعنة واستبعاد أن كلا نصفي الكرة الأرضية والجرحى، فمن المستحسن دائما لصبغ المقاطع مع الأجسام المضادة لمكافحة PCNA. في آفة قدم بشكل صحيح، يجب أن يكون بكنا بشكل كبير (يصل إلى 4 أضعاف 15) في واحدة فقط من نصفي الكرة الأرضية التنظيم الأعلى. رغم أنه في معظم الحالات، هويكفي فقط استخدام الجانب المقابل unlesioned باعتبارها الرقابة الداخلية لرصد التغيرات في التعبير الجيني، فإنه يوصى بشدة مقارنة التعبير الجيني في نصف الكرة التحكم مع التعبير في نصفي الكرة الدماغ الانتهائي من العقول النوع البري. بهذه الطريقة، يمكن أن يتم الكشف عن أية تأثيرات جهازية الآفة على التعبير الجيني التي من شأنها أن تؤثر على كل من نصفي الكرة الأرضية. طعنة الجرح فحص بالاشتراك مع شاشة منهجية التعبير عن المنظمين النسخ (TRS) (25 وشميت وآخرون، غير منشورة) يمكن أن تستخدم أيضا لتحديد الجينات TR مع دور محتمل في تكوين الخلايا العصبية والتجديد (أرقام 4A-4C). وقد حدد هذا النهج عدد من العوامل التي يتم التعبير عنها في الدماغ الانتهائي والذي هو التعبير خصيصا التنظيم ردا على إصابة (الشكل 4A-C). <imgبديل = &quot;الشكل 1&quot; لل: محتوى العرض = &quot;5IN&quot; سرك = &quot;/ files/ftp_upload/51753/51753fig1highres.jpg&quot; العرض = &quot;500&quot; /&gt; الشكل 1. تمثيل تخطيطي من الكبار الزرد الدماغ الانتهائي طعنة جرح. أ) يتم دفع إبرة الأنسولين حقنة من خلال الجمجمة من الزرد الكبار لتوليد اصابة في الدماغ الانتهائي. الأبيض متقطع يمثل خط الحدود بين نصفي الدماغ الانتهائي والصليب الأخضر يشير إلى موقف طعنة الجرح. B) عرض الظهرية من الدماغ الزرد الكبار. يشار إلى مناطق الدماغ الرئيسية. الصليب الأخضر يبين الموقف من الاصابة. C) التي يسببها غيض من الإبرة، والذي يعمل على إحداث إصابة الدماغ الانتهائي، يقيس 2 مم. البصلة الشمية (OB)، الدماغ الانتهائي (الهاتف) والسقف البصري (بعد التمديد). <img alt="الرقم 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51753/51753fig2highres.jpg" width="500" /> الشكل 2. Sالتمثيل chematic من الدماغ الزرد الكبار في كتلة الاغاروز قلص قبل باجتزاء vibratome. الأمامي متروك. البصلة الشمية (OB)، الدماغ الانتهائي (الهاتف)، السقف البصري (بعد التمديد)، المخيخ (CB) والنخاع (م). شريط مقياس: 500 ميكرون. <img alt="الرقم 3" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51753/51753fig3highres.jpg" width="500" /> الرقم 3. ردود التجديدي طعن إصابة الجرح. الدماغ الزرد م) الكبار في 5 أيام بعد الآفة (قرض سياسات التنمية). AB) وبكنا التكاثري علامة (A) وعلامة الدبقية شعاعي S100β (B) ما يصل التنظيم في منطقة البطين (السهام) عند جرح طعنة. (C) وقناة الآفة مرئيا تحت إضاءة حقل مشرق (السهام). يشار إلى منطقة البطين من الخط الأخضر. (D) خلايا دبقية قليلة التغصن السلائف (olig2: EGFP +) تتراكم في موقع الآفة (السهام). شريط مقياس: 200 ميكرون. في جميع لوحات، النصف الأيمن هو نصف الكرة lesioned. الظهرية متروك. خط متقطع في ألف إلى دال يشير إلى الحدود بين طيلسان البابا أو الأسقف وsubpallium. <img alt="الرقم 4" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51753/51753fig4highres.jpg" width="600" /> الشكل 4. مثال على الجينات تصل التنظيم ردا على طعن الاصابة. لاحظ يصل التنظيم القوي (الأسهم) من eomesa (A، B) وsox4a (C) التعبير مرنا في نصف الكرة الدماغ الانتهائي الحق (نصف الكرة طعن) كما رصدت بواسطة الموقع التهجين في 5 قرض سياسات التنمية في. نصف الكرة المخية الأيسر هو لم يصب وبمثابة السيطرة. (ب) المعارض التكبير أعلى من المنطقة الظهرية من الدماغ الانتهائي A. الظهرية متروك. شريط مقياس: 200 ميكرون لA و C و 55 ميكرومتر لب.خط متقطع في A و C يشير إلى الفصل بين طيلسان البابا أو الأسقف وsubpallium. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51753/51753fig4highres.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <table style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td colspan="2"> المختصرات </td></tr><tr><td> AP </td><td> الفوسفاتيز القلوية </td></tr><tr><td> BCIP </td><td> 5-برومو-4-كلورو 3&#39;-indolyphosphate </td></tr><tr><td> BSA </td><td> ألبومين المصل البقري </td></tr><tr><td> CNS </td><td> الجهاز العصبي المركزي </td></tr><tr><td> حفر </td><td> Digoxygenin </td></tr><tr><td> DMSO </td><td> ثنائي ميثيل سلفوكسيد </td></tr><tr><td> قرض سياسات التنمية </td><td> آخر أيام الآفة </td></tr><tr><td> eomesa </td><td> Eomesodermin homolog ل </td></tr><tr><td> GFAP </td><td> ييفي الدبقية البروتين الحمضية </td></tr><tr><td> ساعة </td><td> ساعة </td></tr><tr><td> HYBالعازلة </td><td> العازلة التهجين </td></tr><tr><td> ISH </td><td> التهجين في الموقع </td></tr><tr><td> MeOH </td><td> الميثانول </td></tr><tr><td> NBT </td><td> نتروبلو نيترو الأزرق </td></tr><tr><td> يجد OPCs </td><td> خلايا دبقية قليلة التغصن السلائف </td></tr><tr><td> برنامج تلفزيوني </td><td> الفوسفات مخزنة المالحة </td></tr><tr><td> بكنا </td><td> تنتشر الخلايا مستضد النووية </td></tr><tr><td> PFA </td><td> بارافورمالدهيد </td></tr><tr><td> ProtK </td><td> بروتين K </td></tr><tr><td> PSA-NCAM </td><td> Polysialylated العصبية جزيء التصاق الخلية </td></tr><tr><td> PTW </td><td> PBS، 0.1٪ توين 20 </td></tr><tr><td> RNA </td><td> حمض النووي الريبي </td></tr><tr><td> RT </td><td> درجة حرارة الغرفة </td></tr><tr><td> SGZ </td><td> منطقة جزئي التحبب </td></tr><tr><td> sox4a </td><td> SRY مربع تحتوي على الجين 4A</td></tr><tr><td> SSC </td><td> سيترات الصوديوم المالحة </td></tr><tr><td> SVZ </td><td> منطقة Subventricular </td></tr><tr><td> TRS </td><td> المنظمين النسخ </td></tr></tbody></table>

Watch this Scientific Journal Video about Stab Wound Injury of the Zebrafish Adult Telencephalon: A Method to Investigate Vertebrate Brain Neurogenesis and Regeneration at JoVE.com

Stab Wound Injury of the Zebrafish Adult Telencephalon: A Method to Investigate Vertebrate Brain Neurogenesis and Regeneration

To shed light on the cellular and molecular mechanisms of zebrafish adult neurogenesis and regeneration, we developed a protocol for invasive surgery causing mechanical injuries in the zebrafish adult telencephalon and subsequent monitoring of changes in the stabbed hemisphere by immunohistochemistry or in situ hybridization.

طعنة الإصابة بالجروح من اسماك الزرد الكبار الدماغ الانتهائي: طريقة المعنية بالتحقيق في تكوين الخلايا العصبية والدماغ الفقارية التجديد

Adult zebrafish have an amazing capacity to regenerate their central nervous system after injury. To investigate the cellular response and the molecular ...

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Anatomy and Physiology

Neuroscience

Unit 1

The Nervous System and Nervous Tissue

SCIENTISTS IN ACTION

Micromanipulation of Gene Expression in the Adult Zebrafish Brain Using Cerebroventricular Microinjection of Morpholino Oligonucleotides

المجهرية من التعبير الجيني في الدماغ اسماك الزرد الكبار عن طريق حقن مكروي Cerebroventricular [أليغنوكليوتيد] Morpholino

Manipulation of gene expression in tissues is  required to perform functional studies. In this paper, we demonstrate the  cerebroventricular ...

Functional Interrogation of Adult Hypothalamic Neurogenesis with Focal Radiological Inhibition

الاستجواب وظيفية من الكبار طائية تكوين الخلايا العصبية مع البؤري الإشعاعية تثبيط

The functional characterization of adult-born neurons remains a significant challenge. Approaches to inhibit adult neurogenesis via invasive viral ...

Heat-Induced Antigen Retrieval: An Effective Method to Detect and Identify Progenitor Cell Types during Adult Hippocampal Neurogenesis

Traditional  methods of immunohistochemistry (IHC) following tissue fixation allow visualization  of various cell types. These typically proceed with the ...

Methods for the Modulation and Analysis of NF-&#954;B-dependent Adult Neurogenesis

طرق لتعديل وتحليل NF كيلوبايت التي تعتمد على تكوين الخلايا العصبية الكبار

The hippocampus plays a pivotal role in the formation and consolidation of episodic memories, and in spatial orientation. Historically, the adult ...

A Novel Light Damage Paradigm for Use in Retinal Regeneration Studies in Adult Zebrafish

رواية ضوء بارادايم ضرر للاستخدام في دراسات التجديد الشبكية في اسماك الزرد الكبار

Light-induced retinal degeneration (LIRD) is commonly used in both rodents and zebrafish to damage rod and cone photoreceptors. In adult zebrafish, ...

Electrophysiological Recording in the Brain of Intact Adult Zebrafish

تسجيل الكهربية في الدماغ سليمة من اسماك الزرد الكبار

Previously, electrophysiological studies in adult zebrafish have been limited to slice preparations or to eye cup preparations and electrorentinogram ...

Immunohistochemistry and Multiple Labeling with Antibodies from the Same Host Species to Study Adult Hippocampal Neurogenesis

المناعية وصفها متعددة مع الأجسام المضادة من نوع المضيف نفسه لدراسة الكبار الحصين تكوين الخلايا العصبية

Adult neurogenesis is a highly regulated, multi-stage process in which new neurons are generated from an activated neural stem cell via increasingly ...

A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

طريقة لإلحاق رئيس مقفلة إصابات الدماغ في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

Traumatic brain injury (TBI) affects millions of people each year, causing impairment of physical, cognitive, and behavioral functions and death. Studies ...

Dorsal Root Ganglion Injection and Dorsal Root Crush Injury as a Model for Sensory Axon Regeneration

الظهرية جذر حقن العقدة وظهري الجذر سحق إصابة نموذجا لالحسية أكسون التجديد

Achieving axon regeneration after nervous system injury is a challenging task. As different parts of the central nervous system (CNS) differ from each ...