Name: preparation of synaptic plasma membrane and postsynaptic density proteins using a discontinuous sucrose gradient
Uploaded: 2014-09-03T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Synaptic Plasma Membrane and Postsynaptic Density Proteins Using a Discontinuous Sucrose Gradient at JoVE.com

The authors thank Dr. Mike Ehlers and his laboratory members for originally demonstrating the protocol for subcellular fractionation of synaptic plasma membranes. We also thank Wendy Horsfall for management of the mouse colonies. This work was supported by operating grants from CIHR (AJR and AS).

निम्नलिखित प्रोटोकॉल पशु की देखभाल के कनाडाई परिषद के दिशा निर्देशों के अनुरूप है और टोरंटो विश्वविद्यालय में चिकित्सा और फार्मेसी पशु की देखभाल समिति के संकाय द्वारा अनुमोदित किया गया है. <p class="jove_title...

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	<li>Delint-Ramirez, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+composition+of+NMDA+receptor+signaling+complexes+differs+between+membrane+subdomains+and+is+modulated+by+PSD-95+and+PSD-93.">In vivo composition of NMDA receptor signaling complexes differs between membrane subdomains and is modulated by PSD-95 and PSD-93.</a> The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience. 30, 8162-8170 (2010).</li><li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+psychiatric+disease+risk+factors+DISC1+and+TNIK+interact+to+regulate+synapse+composition+and+function.">The psychiatric disease risk factors DISC1 and TNIK interact to regulate synapse composition and function.</a> Mol Psychiatry. 16, (2010).</li><li>Ehlers, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reinsertion+or+degradation+of+AMPA+receptors+determined+by+activity-dependent+endocytic+sorting.">Reinsertion or degradation of AMPA receptors determined by activity-dependent endocytic sorting.</a> Neuron. 28, 511-525 (2000).</li><li>Tomita, S., Fukata, M., Nicoll, R. A., Bredt, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+interaction+of+stargazin-like+TARPs+with+cycling+AMPA+receptors+at+synapses.">Dynamic interaction of stargazin-like TARPs with cycling AMPA receptors at synapses.</a> Science. 303, 1508-1511 (2004).</li><li>Ehlers, M. D., Heine, M., Groc, L., Lee, M. C., Choquet, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diffusional+trapping+of+GluR1+AMPA+receptors+by+input-specific+synaptic+activity.">Diffusional trapping of GluR1 AMPA receptors by input-specific synaptic activity.</a> Neuron. 54, 447-460 (2007).</li><li>Bats, C., Groc, L., Choquet, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+interaction+between+Stargazin+and+PSD-95+regulates+AMPA+receptor+surface+trafficking.">The interaction between Stargazin and PSD-95 regulates AMPA receptor surface trafficking.</a> Neuron. 53, 719-734 (2007).</li><li>Ehlers, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity+level+controls+postsynaptic+composition+and+signaling+via+the+ubiquitin-proteasome+system.">Activity level controls postsynaptic composition and signaling via the ubiquitin-proteasome system.</a> Nat Neurosci. 6, 231-242 (2003).</li><li>Cartier, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+biochemical+and+functional+protein+complex+involving+dopamine+synthesis+and+transport+into+synaptic+vesicles.">A biochemical and functional protein complex involving dopamine synthesis and transport into synaptic vesicles.</a> J Biol Chem. 285, 1957-1966 (2010).</li><li>Rodriguez de Lores, A., Alberici, M., De Robertis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructural+and+enzymic+studies+of+cholinergic+and+non-cholinergic+synaptic+membranes+isolated+from+brain+cortex.">Ultrastructural and enzymic studies of cholinergic and non-cholinergic synaptic membranes isolated from brain cortex.</a> Journal of Neurochemistry. 14, 215-225 (1967).</li><li>Gray, E. G., Whittaker, V. 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G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+localization+and+cytosolic+overexpression+of+LASP-1+correlates+with+tumor+size+and+nodal-positivity+of+human+breast+carcinoma.">Nuclear localization and cytosolic overexpression of LASP-1 correlates with tumor size and nodal-positivity of human breast carcinoma.</a> BMC Cancer. 7, 198 (2007).</li><li>Heimann, K., Percival, J. M., Weinberger, R., Gunning, P., Stow, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+isoforms+of+actin-binding+proteins+on+distinct+populations+of+Golgi-derived+vesicles.">Specific isoforms of actin-binding proteins on distinct populations of Golgi-derived vesicles.</a> J Biol Chem. 274, 10743-10750 (1999).</li><li>Neff, R. A., Gomez-Varela, D., Fernandes, C. C., Berg, D. 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E., Chammas, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+lysosomal-associated+membrane+protein+LAMP-1+is+a+novel+differentiation+marker+for+HC11+mouse+mammary+epithelial+cells.">The lysosomal-associated membrane protein LAMP-1 is a novel differentiation marker for HC11 mouse mammary epithelial cells.</a> Differentiation. 61, 113-120 (1996).</li><li>Otera, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peroxisomal+targeting+signal+receptor+Pex5p+interacts+with+cargoes+and+import+machinery+components+in+a+spatiotemporally+differentiated+manner:+conserved+Pex5p+WXXXF/Y+motifs+are+critical+for+matrix+protein+import.">Peroxisomal targeting signal receptor Pex5p interacts with cargoes and import machinery components in a spatiotemporally differentiated manner: conserved Pex5p WXXXF/Y motifs are critical for matrix protein import.</a> Mol Cell Biol. 22, 1639-1655 (2002).</li><li>Goubaeva, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+mitochondrial+connexin+43+regulates+apoptosis.">Cardiac mitochondrial connexin 43 regulates apoptosis.</a> Biochem Biophys Res Commun. 352, 97-103 (2007).</li><li>Lamers, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+S-100B,+neuron-specific+enolase+(NSE),+myelin+basic+protein+(MBP)+and+glial+fibrillary+acidic+protein+(GFAP)+in+cerebrospinal+fluid+(CSF)+and+blood+of+neurological+patients.">Protein S-100B, neuron-specific enolase (NSE), myelin basic protein (MBP) and glial fibrillary acidic protein (GFAP) in cerebrospinal fluid (CSF) and blood of neurological patients.</a> Brain Res Bull. 61, 261-264 (2003).</li><li>Arunachalam, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Munc18-1+is+critical+for+plasma+membrane+localization+of+syntaxin1+but+not+of+SNAP-25+in+PC12+cells.">Munc18-1 is critical for plasma membrane localization of syntaxin1 but not of SNAP-25 in PC12 cells.</a> Mol Biol Cell. 19, 722-734 (2008).</li><li>Brandstatter, J. H., Fletcher, E. L., Garner, C. C., Gundelfinger, E. D., Wassle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+the+presynaptic+cytomatrix+protein+bassoon+among+ribbon+synapses+in+the+mammalian+retina.">Differential expression of the presynaptic cytomatrix protein bassoon among ribbon synapses in the mammalian retina.</a> Eur J Neurosci. 11, 3683-3693 (1999).</li></ol>

एक सफल परिणाम के लिए महत्वपूर्ण हैं कि प्रक्रिया में कई कदम उठाए हैं. चरण 3 में, यह homogenization के अनुरूप एक डिग्री प्रत्येक नमूने के लिए हासिल की है कि महत्वपूर्ण है. मोटर चालित homogenizer साथ ऊतक homogenizing, जब एक स्थिर गति...

न्यूरॉन्स synapses के माध्यम से संवाद, और इस संचार की गुणवत्ता अन्तर्ग्रथन में प्रोटीन की संरचना में परिवर्तन से काफी हद तक नियंत्रित किया जाता है. विशेष रूप से, बाद synaptic घनत्व में स्थित प्रोटीन उनके संकेत पारगमन प्रणाली 1 के साथ परिचित मचान स्नायुसंचारी रिसेप्टर्स द्वारा न्यूरोनल संचार में भाग लेते हैं. इसके अलावा, synaptic प्रभावकारिता की ताकत में स्थायी परिवर्तन के बाद synaptic घनत्व 1-6 पर अतिरिक्त या रिसेप्टर्स को हटाने के द्वारा नियंत्रित कर रहे हैं. इसलिए, synaptic प्रोटीन का अलगाव और मात्रा का ठहराव न्यूरॉन्स उत्तेजनाओं और synaptic प्रभावकारिता 7 में परिवर्तन करने के लिए जवाब है कि मायनों में जानकारी हासिल करने के लिए एक आवश्यक और उपयोगी तकनीक है. यह लेख टूटनेवाला सूक्रोज ढ़ाल पर ultracentrifugation द्वारा कृंतक मस्तिष्क के ऊतकों से synaptic प्रोटीन को अलग करने के लिए एक आम तकनीक का वर्णन है. अन्तर्ग्रथनी प्लाज्मा झिल्ली अंश को समृद्ध किया जा सकता है और पर आधारित पृथकअनुभव से 1.2 एम sucrose के लिए समान होने के लिए निर्धारित किया गया है जो सुक्रोज में इसकी घनत्व,. जैविक सवाल पर निर्भर करता है, subcellular भिन्न सूक्रोज या Percoll या तो सतत या टूटनेवाला ढ़ाल के द्वारा अलग किया जा सकता है. सतत ढ़ाल कई भागों में प्रोटीन की जुदाई के लिए अनुमति देते हैं; इसमें दिए गए अंश 8 के भीतर प्रोटीन की सह स्थानीयकरण प्रदर्शित करने के लिए विशेष रूप से उपयोगी हो सकता है. हालांकि, निरंतर ढ़ाल की तैयारी अधिक श्रमसाध्य है और कई अनुप्रयोगों के लिए अनावश्यक है. टूटनेवाला ढ़ाल तैयार करने के लिए अपेक्षाकृत आसान कर रहे हैं और कुछ ही, आम तौर पर परिभाषित भागों में प्रोटीन को अलग करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. बढ़ती molarity के तीन सूक्रोज परतों से बना रहे हैं कि टूटनेवाला ढ़ाल व्यापक रूप से synaptic प्लाज्मा झिल्ली (एसपीएम) के साथ जुड़े प्रोटीन को अलग करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. इस synaptic प्लाज्मा झिल्ली अंश आगे बाद synaptic घनत्व fractio के लिए कार्रवाई की जा सकतीडिटर्जेंट अघुलनशील अंश का डिटर्जेंट उपचार और अलगाव से n (PSD). इस प्रक्रिया पहले 1960 9,10 में वर्णित किया गया था, इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी मोटे तौर पर synaptic प्लाज्मा झिल्ली और बाद synaptic घनत्व भिन्न 9-14 परिभाषित कि organelles और झिल्ली प्रदर्शित करने के लिए इस्तेमाल किया गया था. इन अध्ययनों से पूर्व और बाद अन्तर्ग्रथनी झिल्ली और एसपीएम अंश में synaptic पुटिका के शामिल किए जाने का प्रदर्शन किया; डिटर्जेंट उपचार मुख्यतः इलेक्ट्रॉन घने बाद, बाद synaptic घनत्व दिखाई दे रहे थे. प्रक्रिया में, एक hypotonic झटका सेल शरीर में 10 से synaptic प्रक्रियाओं चुटकी बंद किया जाता है. यह कदम माइटोकॉन्ड्रिया आसमाटिक सदमे के लिए प्रतिरोधी होते हैं और बरकरार रहेगा, और इसलिए वे sucrose ढाल (चित्रा 1) के तल पर तलछट कि तथ्य का लाभ लेता है. यह वही संवर्धन तकनीक का उपयोग करना, एसपीएम और PSD भिन्न biochemically पहले थेpolyacrylamide जेल वैद्युतकणसंचलन और प्रमुख प्रोटीन घटक 15-17 का अनुक्रमण से परिभाषित किया. इसके बाद पश्चिमी धब्बा विश्लेषण (चित्रा 2) इन अंशों को परिभाषित आगे का पता लगाने और synaptic प्रोटीन के स्तर यों और करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. हम Slc6a3 ठिकाना चूहों 18 में दोहराया गया है कि हो जब डोपामिन ट्रांसपोर्टर की synaptic स्तर में परिवर्तन यों हमारी प्रयोगशालाओं में इस तकनीक का इस्तेमाल किया है. हम भी DISC1 interactome 19 का हिस्सा हैं कि प्रोटीन में synapse विशेष कटौती को उजागर करने NMDA रिसेप्टर कमी चूहों में इस तकनीक का इस्तेमाल किया है. यह एसपीएम भिन्न synaptic पुटिका झिल्ली प्रोटीन, endosome मार्कर, mitochondrial प्रोटीन, झिल्ली जुड़े सिंथेटिक एंजाइम और संकेत पारगमन अणु है, साथ ही बाद synaptic घनत्व का अभिन्न घटकों और synaptic प्लाज्मा झिल्ली 20-23 होते हैं कि पश्चिमी धब्बा विश्लेषण से स्पष्ट है. ईउपक्रम PSD भिन्न प्रचुर mitochondrial प्रोटीन के साथ संदूषण हो सकता है और यह उनके 13 को निकालने के लिए एक दूसरे की ढाल अवसादन या अतिरिक्त शुद्धि चरणों को पूरा करने के लिए आवश्यक हो सकता है. हाल ही में, मात्रात्मक मास स्पेक्ट्रोमेट्री अकेले बाद synaptic घनत्व में 100 से अधिक प्रोटीन की एक सूची है, साथ ही इन घटकों 24,25 के रिश्तेदार बहुतायत का एक संकेत प्रदान की गई है.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="589">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">1M HEPES, pH 7.4</td>
			<td style="width:129px;">BioShop</td>
			<td style="width:111px;">HEP003.100</td>
			<td style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">HEPES</td>
			<td style="width:129px;">BioShop</td>
			<td style="width:111px;">HEP001.500&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Sucrose&#160;</td>
			<td style="width:129px;">BioShop</td>
			<td style="width:111px;">SUC507.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">EDTA</td>
			<td style="width:129px;">BioBasic</td>
			<td style="width:111px;">EB0185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">PMSF</td>
			<td style="width:129px;">BioShop</td>
			<td style="width:111px;">PMS123.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Aprotinin</td>
			<td style="width:129px;">BioShop</td>
			<td style="width:111px;">APR600.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Leupeptin</td>
			<td style="width:129px;">BioShop</td>
			<td style="width:111px;">LEU001.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Pepstatin</td>
			<td style="width:129px;">BioShop</td>
			<td style="width:111px;">PEP605.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Benzamidine</td>
			<td style="width:129px;">BioShop</td>
			<td style="width:111px;">BEN601.25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Sodium fluoride</td>
			<td style="width:129px;">BioShop</td>
			<td style="width:111px;">SFL001.100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Sodium pyrophosphate</td>
			<td style="width:129px;">BioShop</td>
			<td style="width:111px;">SPP310.100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:261px;">Sodium orthovanadate</td>
			<td style="width:129px;">BioShop</td>
			<td style="width:111px;">SOV664.10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">&#946;-glycerophosphate</td>
			<td style="width:129px;">BioShop</td>
			<td style="width:111px;">GYP001.10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Triton X-100</td>
			<td style="width:129px;">BioShop</td>
			<td style="width:111px;">TRX506.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">18G x 1 &#189;&#8221; needle</td>
			<td style="width:129px;">BD</td>
			<td style="width:111px;">305196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:261px;">1cc syringe</td>
			<td style="width:129px;">BD</td>
			<td style="width:111px;">309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:261px;"></td>
			<td style="width:129px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Name of Equipment</td>
			<td style="width:129px;">Company</td>
			<td>Catalog number</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:261px;">Glass Teflon homogenizer Kontes Duall 23</td>
			<td style="width:129px;">VWR</td>
			<td style="width:111px;">KT885450-0023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">IKA Model RW 16 Basic Stirrer</td>
			<td style="width:129px;">IKA Works</td>
			<td style="width:111px;">2572100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Sorvall SM-24 Fixed Angle Rotor</td>
			<td style="width:129px;">ThermoScientific</td>
			<td style="width:111px;">29017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Sorvall RC 6 Plus Centrifuge</td>
			<td style="width:129px;">ThermoScientific</td>
			<td style="width:111px;">46910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Thinwall Polyallomer Tubes (13.2mL)</td>
			<td style="width:129px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:111px;">331372</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">SW 41 Ti Rotor Swinging Bucket</td>
			<td style="width:129px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:111px;">331362</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Beckman L-80 Floor Ultracentrifuge</td>
			<td style="width:129px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Thickwall Polycarbonate Tubes (3.5mL)</td>
			<td style="width:129px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:111px;">349622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">TLA-100.3 Fixed Angle Rotor</td>
			<td style="width:129px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:111px;">349481</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:261px;">Beckman TL-100 Tabletop Ultracentrifuge</td>
			<td style="width:129px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of synaptic plasma membrane and postsynaptic density proteins using a discontinuous sucrose gradient

Neuronal subcellular fractionation तकनीक को और अन्तर्ग्रथन से तस्करी कर रहे हैं कि प्रोटीन की मात्रा का ठहराव अनुमति देते हैं. मूल रूप से 1960 देर में वर्णित है, synaptic प्लाज्मा झिल्ली के साथ जुड़े प्रोटीन एक sucrose के घनत्व ढाल पर ultracentrifugation द्वारा अलग किया जा सकता है. अन्तर्ग्रथनी झिल्ली अलग कर रहे हैं एक बार, बाद synaptic घनत्व के रूप में जाना macromolecular परिसर बाद में इसकी वजह से डिटर्जेंट जटिलता को अलग किया जा सकता है. अन्तर्ग्रथनी प्लाज्मा झिल्ली और बाद synaptic घनत्व प्रोटीन को अलग करने के लिए इस्तेमाल की तकनीक अनिवार्य रूप से 40 साल के बाद ही रहते हैं, और व्यापक रूप से वर्तमान तंत्रिका विज्ञान अनुसंधान में इस्तेमाल किया जाता है. यह लेख synaptic प्लाज्मा झिल्ली और बाद synaptic घनत्व एक टूटनेवाला sucrose के ढाल का प्रयोग से जुड़े प्रोटीन का विभाजन विवरण. परिणामस्वरूप प्रोटीन तैयारी पश्चिमी सोख्ता या 2 डी DIGE विश्लेषण के लिए उपयुक्त हैं.

सुक्रोज घनत्व ढाल की तैयारी सुक्रोज (0.8, 1.0, और 1.2 एम sucrose) की तीन दाढ़ के समाधान का एक स्पष्ट विभाजन में परिणाम चाहिए. प्रोटीन नमूना जोड़ा जाता है पहले ढाल का एक उदाहरण के लिए चित्रा 3A देखें. ढाल अग्रिम म?...

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Preparation of Synaptic Plasma Membrane and Postsynaptic Density Proteins Using a Discontinuous Sucrose Gradient

यह लेख एक टूटनेवाला sucrose के ढाल पर ultracentrifugation द्वारा synaptic प्लाज्मा झिल्ली के साथ जुड़े प्रोटीन का संवर्धन का विवरण. बाद synaptic घनत्व प्रोटीन के बाद तैयारी भी वर्णन किया गया है. प्रोटीन की तैयारी पश्चिमी सोख्ता या 2 डी DIGE विश्लेषण के लिए उपयुक्त हैं.

एक असंतत सुक्रोज ढाल का उपयोग Synaptic प्लाज्मा झिल्ली और postsynaptic घनत्व प्रोटीन की तैयारी

Neuronal subcellular fractionation techniques allow the quantification of proteins that are trafficked to and from the synapse. As originally described in ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Studying Synaptic Vesicle Pools using Photoconversion of Styryl Dyes

Synaptic पुटिका Styryl रंगों की Photoconversion का उपयोग ताल का अध्ययन

The fusion of synaptic vesicles with the plasma membrane (exocytosis) is a required step in neurotransmitter release and neuronal communication. The ...

Membrane Potentials, Synaptic Responses, Neuronal Circuitry, Neuromodulation and Muscle Histology Using the Crayfish: Student Laboratory Exercises

झिल्ली क्षमता, Synaptic प्रतिक्रियाएँ Neuronal Circuitry, Neuromodulation और बलवान क्रेफ़िश प्रोटोकॉल का उपयोग: छात्र प्रयोगशाला व्यायाम

The purpose of this report is to help develop an understanding of the effects caused by ion gradients across a biological membrane. Two aspects that ...

Quantitative Analysis of Synaptic Vesicle Pool Replenishment in Cultured Cerebellar Granule Neurons using FM Dyes

संवर्धित अनुमस्तिष्क ग्रेन्युल न्यूरॉन्स एफएम रंगों का उपयोग करने में Synaptic पुटिका पूल पुनःपूर्ति के मात्रात्मक विश्लेषण

After neurotransmitter release in central nerve terminals, SVs are rapidly retrieved by endocytosis.  Retrieved SVs are then refilled with ...

Preparation of Synaptoneurosomes from Mouse Cortex using a Discontinuous Percoll-Sucrose Density Gradient

माउस प्रांतस्था से Synaptoneurosomes असंतत घनत्व Percoll Sucrose ढाल का उपयोग कर की तैयारी

Synaptoneurosomes (SNs) are obtained after homogenization and fractionation of mouse brain cortex. They are resealed vesicles or isolated terminals that ...

A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats

चूहे में Sucrose तरस के ऊष्मायन का मूल्यांकन करने के लिए एक सामान्य विधि

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and ...

Lateral Diffusion and Exocytosis of Membrane Proteins in Cultured Neurons Assessed using Fluorescence Recovery and Fluorescence-loss Photobleaching

के लेटरल और सभ्य न्यूरॉन्स में झिल्ली प्रोटीन का प्रसार exocytosis प्रतिदीप्ति रिकवरी और प्रतिदीप्ति नुकसान Photobleaching का उपयोग मूल्यांकन

Membrane proteins such as receptors and ion channels undergo active trafficking in neurons, which are highly polarised and morphologically complex. This ...

Post-embedding Immunogold Labeling of Synaptic Proteins in Hippocampal Slice Cultures

Hippocampal टुकड़ा संस्कृतियों में पोस्ट-embedding Synaptic प्रोटीन Immunogold लेबल

Immunoelectron microscopy is a powerful tool to study biological molecules at the subcellular level. Antibodies coupled to electron-dense markers such as ...

Deriving the Time Course of Glutamate Clearance with a Deconvolution Analysis of Astrocytic Transporter Currents

Astrocytic ट्रांसपोर्टर धाराओं के एक Deconvolution विश्लेषण के साथ ग्लूटामेट क्लीयरेंस का टाइम कोर्स पाने

The highest density of glutamate transporters in the brain is found in astrocytes. Glutamate transporters couple the movement of glutamate across the ...

The Neuromuscular Junction: Measuring Synapse Size, Fragmentation and Changes in Synaptic Protein Density Using Confocal Fluorescence Microscopy

Neuromuscular जंक्शन: माप Synapse आकार, confocal प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग Synaptic प्रोटीन घनत्व में विखंडन और परिवर्तन

The neuromuscular junction (NMJ) is the large, cholinergic relay synapse through which mammalian motor neurons control voluntary muscle contraction. ...