Name: real-time cytotoxicity assays in human whole blood
Uploaded: 2014-11-07T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-time Cytotoxicity Assays in Human Whole Blood at JoVE.com

نشكر برنامج IMAT المعهد الوطني للسرطان من المعاهد الوطنية للصحة تمويل هذا العمل [R33 CA174616-01A1].

1. الهدف خلية التحضير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المحافظة (خلايا سرطان الغدد الليمفاوية على سبيل المثال. راجي) الخلايا المستهدفة في وسائط النمو (1640 RPMI مستنبت، مع 10٪ الحرارة المعطل مصل بقري جنيني (FBS)، 4nM L-الجلوتامين، و 500 وحدة دولية / مل البنسل...

<ol>
	<li>Hutchinson, L., Kirk, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+drug+attrition+rates--where+are+we+going+wrong.">High drug attrition rates--where are we going wrong.</a> Nat Rev Clin Oncol. 8, 189-1890 (2011).</li><li>Moreno, L., Pearson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attrition+rates+be+reduced+in+cancer+drug+discovery.">Attrition rates be reduced in cancer drug discovery.</a> Informa healthcare. 8, 363-368 (2013).</li><li>Seok, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+Host+Response+to+Injury,+Large+Scale+Collaborative+Research+Program.+Genomic+responses+in+mouse+models+poorly+mimic+human+inflammatory+diseases.">Inflammation and Host Response to Injury, Large Scale Collaborative Research Program. Genomic responses in mouse models poorly mimic human inflammatory diseases.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110, 3507-3512 (2013).</li><li>Suntharalingam, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine+storm+in+a+phase+1+trial+of+the+anti-CD28+monoclonal+antibody+TGN1412.">Cytokine storm in a phase 1 trial of the anti-CD28 monoclonal antibody TGN1412.</a> N Engl J Med. 355, 1018-1028 (2006).</li><li>Eastwood, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibody+TGN1412+trial+failure+explained+by+species+differences+in+CD28+expression+on+CD4++effector+memory+T-cells.">Monoclonal antibody TGN1412 trial failure explained by species differences in CD28 expression on CD4+ effector memory T-cells.</a> Br J Pharmacol. 161, 512-526 (2010).</li><li>Hsiao, S. C., Liu, H., Holstlaw, T. A., Liu, C., Francis, C. Y., Francis, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real+time+assays+for+quantifying+cytotoxicity+with+single+cell+resolution.">Real time assays for quantifying cytotoxicity with single cell resolution.</a> PLoS One. 8, 10-1371 (2013).</li><li>Wang, S. Y., Weiner, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rituximab:+a+review+of+its+use+in+non-Hodgkin&#8217;s+lymphoma+and+chronic+lymphocytic+leukemia.">Rituximab: a review of its use in non-Hodgkin&#8217;s lymphoma and chronic lymphocytic leukemia.</a> Expert Opin Biol Ther. 8, (2008).</li><li>Dalle, S., Thieblemont, C., Thomas, L., Dumontet, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibodies+in+clinical+oncology.">Monoclonal antibodies in clinical oncology.</a> Anticancer Agents Med Chem. 8, 523-532 (2008).</li><li>Brunner, K. T., Mauel, J., Cerottini, J. C., Chapuis, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assay+of+the+lytic+action+of+immune+lymphoid+cells+on+51-Cr-labelled+allogeneic+target+cells+in+vitro;+inhibition+by+isoantibody+and+by+drugs.">Quantitative assay of the lytic action of immune lymphoid cells on 51-Cr-labelled allogeneic target cells in vitro; inhibition by isoantibody and by drugs.</a> Immunology. 14, 181-196 (1968).</li><li>Korzeniewski, C., Callewaert, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+enzyme-release+assay+for+natural+cytotoxicity.">An enzyme-release assay for natural cytotoxicity.</a> J Immunol Methods. 64, (1983).</li><li>Gerlier, D., Thomasset, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+MTT+colorimetric+assay+to+measure+cell+activation.">Use of MTT colorimetric assay to measure cell activation.</a> Immunol Methods. 94, 57-63 (1986).</li><li>Toriello, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrated+microfluidic+bioprocessor+for+single-cell+gene+expression+analysis.">Integrated microfluidic bioprocessor for single-cell gene expression analysis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105, (2008).</li><li>Douglas, E. S., Hsiao, S. C., Onoe, H., Bertozzi, C. R., Francis, M. B., Mathies, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA-barcode+directed+capture+and+electrochemical+metabolic+analysis+of+single+mammalian+cells+on+a+microelectrode+array.">DNA-barcode directed capture and electrochemical metabolic analysis of single mammalian cells on a microelectrode array.</a> Lab on a Chip. 9, 2010-2015 (2008).</li><li>Mayr, L. M., Bojanic, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+trends+in+high-throughput+screening.">Novel trends in high-throughput screening.</a> Current opinion in pharmacology. 9, 580 (2009).</li><li>Zanella, F., Lorens, J. B., Link, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+content+screening:+seeing+is+believing.">High content screening: seeing is believing.</a> Trends in Biotechnology. 28, 237-245 (2010).</li><li>Coelho, J., P, L., Quinn, S., Murphy, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+image+analysis+for+high-content+screening+and+analysis.">Automated image analysis for high-content screening and analysis.</a> J Biomol Screen. 15, 726-734 (2010).</li><li>Sundberg, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+and+ultra-high-throughput+screening:+solution-+and+cell-based+approaches.">High-throughput and ultra-high-throughput screening: solution- and cell-based approaches.</a> Current Opinion in Biotechnology. 11, 47 (2000).</li><li>Simmons, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Personalized+medicine+is+more+than+genomic+medicine:+confusion+over+terminology+impedes+progress+towards+personalized+healthcare.">Personalized medicine is more than genomic medicine: confusion over terminology impedes progress towards personalized healthcare.</a> PERS MED. 9, 85 (2012).</li></ol>

التعداد الزراعي العالمي هو حاسم في المختبر المضادة للسرطان أداة فحص مع قرار خلية واحدة 12-16، الاستفادة بشكل مثالي بعد الهدف العروض التقليدية مثل CDC والمقايسات ADCC 9-11، وقبل الاختبارات قبل السريرية الحيوانية. حاليا، الهدف الأساسي فحوصات مثل فحص CDC أو ال?...

وقد أدت التطورات الحديثة في الصناعة الدوائية لزيادة الاهتمام في تحقيق هويات معينة من الأجسام المضادة الخلايا السرطانية وعلاج السرطان شخصية. ومع ذلك، واجه عدة عقبات في هذه العملية. مرخصة 5٪ فقط من العوامل التي لها نشاط مضاد للسرطان في التنمية قبل السريرية بعد تبين فعالية كافية في المرحلة II-III 1،2 الاختبار. الاستراتيجيات قبل السريرية (سواء في التجارب المختبرية والحية) غير كافية كما أظهرت العديد من الأمثلة التي المخدرات انتيتومور تتصرف بشكل مختلف في البشر والحيوانات في المختبر يرجع ذلك أساسا إلى مكوناتها الدم المختلفة 3-5. لمعالجة ضرورة منصة فحص المخدرات انتيتومور وتوفير نقطة تفتيش قبل التجارب على الحيوانات مكلفة والتجارب السريرية، يقترح كله فحص السمية الخلوية الدم البشري (التعداد الزراعي العالمي) لتقييم فعالية الدواء المضاد للورم في بيئة أكثر البيولوجية ذات الصلة. الفحص الدم كله سمية الخلايا يمكن استخدامها لتقييم مدى استجابة الخلايا الفردية إلى الأجسام المضادة ومرشحين آخرين في المخدرات الدم البشري كله. يتم تطوير التعداد الزراعي العالمي من خلال دمج التكنولوجيا العالية الإنتاجية تحديد المواقع المحمولة مع الإنتاجية العالية وارتفاع محتوى التصوير 6. من خلال الاستفادة من نظام التصوير الآلي، ويمكن تحديد عدد الخلايا الحية والميتة على حد سواء مع وجود درجة عالية من الدقة. يرجع ذلك إلى حقيقة أن الخلايا المستهدفة وثبتوا على نفس المستوى البؤري، التعداد الزراعي العالمي قادر على تقديم تحليل السمية الخلوية الكمي في الوقت الحقيقي دون ازالة خلايا الدم الحمراء. وعلاوة على ذلك، فإن نظام التصوير التلقائي يوفر العديد من المزايا مثل أن الخلايا المستهدفة الوحيدة التي وصلت إلى معايير محددة (على سبيل المثال، خلايا fluorescently المسمى، ومورفولوجيا الخلية) هي بوابات ومعالجتها. أيضا، فإنه يتيح إنتاج 144 لوحات في اليوم الواحد. وبالتالي، هذه القدرة الإنتاجية التصوير وتتيح تشغيل عالية ج-ontent والتجارب الإنتاجية العالية في وقت واحد. من خلال الجمع بين التعداد الزراعي العالمي ونظام التصوير الآلي، ويمكن تحقيق إنتاجية عالية السمية لخلايا التحليل الكمي في بيئة أكثر البيولوجية ذات الصلة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="761">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:336px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:172px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:135px;">Name/Discription</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:336px;">Cell attachment 96 well plate kits&#160;</td>
			<td style="width:172px;">Adheren</td>
			<td style="width:119px;">AP9601</td>
			<td style="width:135px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:336px;">Suspension Single cell array 8 well chamber slide</td>
			<td style="width:172px;">Adheren</td>
			<td style="width:119px;">SS0801</td>
			<td style="width:135px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:336px;">Adherent Single cell array 8 well chamber slide</td>
			<td style="width:172px;">Adheren</td>
			<td style="width:119px;">SS0802</td>
			<td style="width:135px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:336px;">Lymphoma cell line CD20+</td>
			<td style="width:172px;">ATCC</td>
			<td style="width:119px;">CCL-86</td>
			<td style="width:135px;">Raji cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:336px;">Lymphoma cell line CD20-</td>
			<td style="width:172px;">ATCC</td>
			<td style="width:119px;">CRL-8083</td>
			<td style="width:135px;">MC/CAR</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:336px;">RPMI 1640 with L-glutamine</td>
			<td style="width:172px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">11875-119</td>
			<td style="width:135px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:336px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:172px;">Thermo</td>
			<td style="width:119px;">SH30070.01HI</td>
			<td style="width:135px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:336px;">Peni/Strep</td>
			<td style="width:172px;">Life Technologies</td>
			<td align="right" style="width:119px;">15070063</td>
			<td style="width:135px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:336px;">Cytosolic dye</td>
			<td style="width:172px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">C7025</td>
			<td style="width:135px;">Cell Tracker Green</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:336px;">Rituxan (Biosimilar)&#160;</td>
			<td style="width:172px;">Eureka Therapeutics</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:135px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:336px;">Human whole blood</td>
			<td style="width:172px;">Allcells</td>
			<td style="width:119px;">WB001</td>
			<td style="width:135px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:336px;">Propidium Iodide</td>
			<td style="width:172px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P4170-10MG</td>
			<td style="width:135px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:336px;">Automatic imaging system</td>
			<td style="width:172px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:119px;">Contact Vendor</td>
			<td style="width:135px;">Cell Reporter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:336px;">Cell counting program</td>
			<td style="width:172px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:119px;">Contact Vendor</td>
			<td style="width:135px;">Cell Reporter</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time cytotoxicity assays in human whole blood

ووضعت على أساس الخلايا الحية فحص الدم الكامل السمية الخلوية (التعداد الزراعي العالمي) التي تتيح الوصول إلى المعلومات الزمنية من السمية لخلايا الكلية مع الإنتاجية العالية تكنولوجيا تحديد المواقع الخلية. ومبرمجة السكان الخلايا السرطانية المستهدفة أول من الشلل في شكل مجموعة، وصفت مع الأخضر الأصباغ الفلورية عصاري خلوي. بعد تشكيل مجموعة خلايا، يتم إضافة أدوية الأجسام المضادة في تركيبة مع الدم البشري كله. ثم يضاف يوديد propidium (PI) لتقييم موت الخلايا. ويتم تحليل مجموعة الخلايا مع نظام التصوير التلقائي. بينما الصبغة عصاري خلوي تسميات السكان الخلايا السرطانية المستهدفة، PI تصف السكان الخلايا السرطانية الميتة. وبالتالي، فإن النسبة المئوية للقتل الخلايا السرطانية المستهدفة يمكن كميا عن طريق حساب عدد الخلايا المستهدفة على قيد الحياة إلى عدد من الخلايا الميتة المستهدفة. مع هذا الأسلوب، والباحثين قادرون على الوصول تعتمد على الوقت والمعلومات السمية لخلايا تعتمد على الجرعة. بشكل ملحوظ، لا راديو الخطرةوتستخدم المواد الكيميائية. في التعداد الزراعي العالمي المعروضة هنا تم اختبارها مع سرطان الغدد الليمفاوية وسرطان الدم، وخطوط الخلايا السرطانية الصلبة. لذا، WCA يسمح للباحثين لتقييم نجاعة الأدوية في حالة شديدة الصلة خارج الحي.

وقد تم اختيار الأجسام المضادة وخلايا سرطان الغدد الليمفاوية (خلايا راجي وMC / CAR) مكافحة CD20 كنظام نموذج للتدليل على كامل فحص السمية الخلوية الدم (التعداد الزراعي العالمي) 7،8. وكان عدد خلايا راجي نسخة عالية من CD20 على سطح الخلية، في حين أن خلايا MC / CAR انخفاض عدد نسخة ?...

Watch this Scientific Journal Video about Real-time Cytotoxicity Assays in Human Whole Blood at JoVE.com

Real-time Cytotoxicity Assays in Human Whole Blood

كامل فحص السمية الخلوية الدم (التعداد الزراعي العالمي) هو فحص السمية الخلوية المتقدمة من خلال دمج الإنتاجية العالية تكنولوجيا تحديد المواقع المحمولة مع المجهري مضان ومعالجة الصور الآلي. هنا، نحن تصف كيفية التعامل مع خلايا سرطان الغدد الليمفاوية الأجسام المضادة مكافحة CD20 يمكن تحليلها في الوقت الحقيقي في الدم البشري كله لتوفير التحليل الكمي السمسة الخلوية.

في الوقت الحقيقي السمسة فحوصات في الدم الكامل بالبشر

A live cell-based whole blood cytotoxicity assay (WCA) that allows access to temporal information of the overall cell cytotoxicity is developed with ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

تقييم امتصاص الجسيمات النانوية في الأورام في الوقت الحقيقي باستخدام التصوير Intravital

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

Real-time fMRI Biofeedback Targeting the Orbitofrontal Cortex for Contamination Anxiety

في الوقت الحقيقي بيوفيدباك الرنين المغناطيسي الوظيفي استهداف القشرة الأمامية المدارية للقلق التلوث

We present a method for training subjects to control activity in a region of their orbitofrontal cortex associated with contamination anxiety using ...

Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

السريع في نقاط الفحص من كفاءة الرعاية تخثر الدم الكامل في Enoxaparin

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the ...

MicroRNA Detection in Prostate Tumors by Quantitative Real-time PCR (qPCR)

MicroRNA Detection in Prostate Tumors by Quantitative Real-time PCR qPCR

الكشف microRNA في أورام البروستات بواسطة PCR الوقت الحقيقي الكمية (qPCR)

MicroRNAs (miRNAs) are single-stranded, 18&#x2013;24 nucleotide long, non-coding RNA molecules. They are involved in virtually every cellular process ...

Movement Retraining using Real-time Feedback of Performance

حركة إعادة التدريب في الوقت الحقيقي باستخدام ملاحظات من الأداء

Any modification of movement - especially movement patterns that have been honed over a number of years - requires re-organization of the neuromuscular ...

Cerebrospinal Fluid MicroRNA Profiling Using Quantitative Real Time PCR

النخاعي السوائل عن طريق الرنا الميكروي التنميط الكمي في الوقت الحقيقي PCR

MicroRNAs (miRNAs) constitute a potent layer of gene regulation by guiding RISC to target sites located on mRNAs and, consequently, by modulating their ...

Chemotherapy-induced Vascular Toxicity - Real-time In vivo Imaging of Vessel Impairment

Chemotherapy-induced Vascular Toxicity - Real-time In vivo Imaging of Vessel Impairment

الناجم عن العلاج الكيميائي الأوعية الدموية سمية - في الوقت الحقيقي<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; التصوير من سفينة انخفاض

Certain classes of chemotherapies may exert acute vascular changes that may progress into long-term conditions that may predispose the patient to an ...

Assessment of Ovarian Cancer Spheroid Attachment and Invasion of Mesothelial Cells in Real Time

تقييم سرطان المبيض كروي مرفق وغزو الخلايا الظهارية في الوقت الحقيقي

Ovarian cancers metastasize by shedding into the peritoneal fluid and dispersing to distal sites within the peritoneum. Monolayer cultures do not ...

Real-time X-ray Imaging of Lung Fluid Volumes in Neonatal Mouse Lung

في الوقت الحقيقي الأشعة السينية التصوير من الرئة أحجام السوائل في الأطفال حديثي الولادة الرئة ماوس

At birth, the lung undergoes a profound phenotypic switch from secretion to absorption, which allows for adaptation to breathing independently. Promoting ...

Evaluation of Lung Metastasis in Mouse Mammary Tumor Models by Quantitative Real-time PCR

تقييم الرئة الانبثاث في ماوس الثديية ورم المجموعات بواسطة الكمي في الوقت الحقيقي PCR

Metastatic disease is the spread of malignant tumor cells from the primary cancer site to a distant organ and is the primary cause of cancer associated ...