Name: preparation of a blood culture pellet for rapid bacterial identification and antibiotic susceptibility testing
Uploaded: 2014-10-15T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of a Blood Culture Pellet for Rapid Bacterial Identification and Antibiotic Susceptibility Testing at JoVE.com

Wij danken de technici van de bacteriologie laboratorium van het Universitair Ziekenhuis Centrum van Lausanne voor hun hulp om de technieken in het laboratorium uit te voeren.

Dit protocol is ontwikkeld en gevalideerd na het onderzoek en de ontwikkeling van processen en ethische regels van onze instelling voor een routine-instrument wordt geïmplementeerd. 1 Voorbereiding van een Blood Culture bacteriepellet door Ammonium Chloride Erythrocyte-lyseren Procedure <ol><li> Bereiding van een positieve bloedkweek voor daaropvolgende centrifugatie. <ol><li> Steriliseer de bloedkweek dop. Voeg 70% ethanol op de dop van de fles en het branden. OPMERKING: Voer deze...

<ol>
	<li>Alberti, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+sepsis+and+infection+in+ICU+patients+from+an+international+multicentre+cohort+study.">Epidemiology of sepsis and infection in ICU patients from an international multicentre cohort study.</a> Intensive care medicine. 28, 108-121 (2002).</li><li>Angus, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+severe+sepsis+in+the+United+States:+analysis+of+incidence,+outcome,+and+associated+costs+of+care.">Epidemiology of severe sepsis in the United States: analysis of incidence, outcome, and associated costs of care.</a> Critical care medicine. 29, 1303-1310 (2001).</li><li>Vincent, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sepsis+in+European+intensive+care+units+results+of+the+SOAP+study.">Sepsis in European intensive care units results of the SOAP study.</a> Critical care medicine. 34, 344-353 (2006).</li><li>Micek, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Empiric+combination+antibiotic+therapy+is+associated+with+improved+outcome+against+sepsis+due+to+Gram-negative+bacteria+a+retrospective+analysis.">Empiric combination antibiotic therapy is associated with improved outcome against sepsis due to Gram-negative bacteria a retrospective analysis.</a> Antimicrob Agents Chemother. 54, 1742-1748 (2010).</li><li>Seifert, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+importance+of+microbiological+findings+in+the+diagnosis+and+management+of+bloodstream+infections.">The clinical importance of microbiological findings in the diagnosis and management of bloodstream infections.</a> Clin Infect Dis. 48, S238-S245 (2009).</li><li>Barenfanger, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+mortality+associated+with+prompt+Gram+staining+of+blood+cultures.">Decreased mortality associated with prompt Gram staining of blood cultures.</a> American journal of clinical pathology. 130, 870-876 (2008).</li><li>Munson, E. L., Diekema, D. J., Beekmann, S. E., Chapin, K. C., Doern, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+and+treatment+of+bloodstream+infection:+laboratory+reporting+and+antimicrobial+management.">Detection and treatment of bloodstream infection: laboratory reporting and antimicrobial management.</a> J Clin Microbiol. 41, 495-497 (2003).</li><li>Clerc, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+matrix-assisted+laser+desorption+ionization+time-of-flight+mass+spectrometry+on+the+clinical+management+of+patients+with+Gram-negative+bacteremia+a+prospective+observational+study.">Impact of matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry on the clinical management of patients with Gram-negative bacteremia a prospective observational study.</a> Clin Infect Dis. 56, 1101-1107 (2013).</li><li>Meex, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+identification+of+bacteria+from+BacT/ALERT+anaerobic+positive+blood+cultures+by+MALDI-TOF+MS+MALDI+Sepsityper+kit+versus+an+in-house+saponin+method+for+bacterial+extraction.">Direct identification of bacteria from BacT/ALERT anaerobic positive blood cultures by MALDI-TOF MS MALDI Sepsityper kit versus an in-house saponin method for bacterial extraction.</a> Journal of medical microbiology. 61, 1511-1516 (2012).</li><li>Moussaoui, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix-assisted+laser+desorption+ionization+time-of-flight+mass+spectrometry+identifies+90%+of+bacteria+directly+from+blood+culture+vials.">Matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry identifies 90% of bacteria directly from blood culture vials.</a> Clin Microbiol Infect. 16, 1631-1638 (2010).</li><li>Seng, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ongoing+revolution+in+bacteriology+routine+identification+of+bacteria+by+matrix-assisted+laser+desorption+ionization+time-of-flight+mass+spectrometry.">Ongoing revolution in bacteriology routine identification of bacteria by matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry.</a> Clin Infect Dis. 49, 543-551 (2009).</li><li>Stevenson, L. G., Drake, S. K., Murray, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+identification+of+bacteria+in+positive+blood+culture+broths+by+matrix-assisted+laser+desorption+ionization-time+of+flight+mass+spectrometry.">Rapid identification of bacteria in positive blood culture broths by matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry.</a> J Clin Microbiol. 48, 444-447 (2010).</li><li>Croxatto, A., Prod&amp;34hom, G., Greub, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+MALDI-TOF+mass+spectrometry+in+clinical+diagnostic+microbiology.">Applications of MALDI-TOF mass spectrometry in clinical diagnostic microbiology.</a> FEMS Microbiol Rev. 36, 380-407 (2012).</li><li>Chen, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+bacterial+identification+in+positive+blood+cultures+by+use+of+two+commercial+matrix-assisted+laser+desorption+ionization-time+of+flight+mass+spectrometry+systems.">Direct bacterial identification in positive blood cultures by use of two commercial matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry systems.</a> J Clin Microbiol. 51, 1733-1739 (2013).</li><li>Prod&amp;34hom, G., Bizzini, A., Durussel, C., Bille, J., Greub, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix-assisted+laser+desorption+ionization-time+of+flight+mass+spectrometry+for+direct+bacterial+identification+from+positive+blood+culture+pellets.">Matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry for direct bacterial identification from positive blood culture pellets.</a> J Clin Microbiol. 48, 1481-1483 (2010).</li><li>Prod&amp;34hom, G., Durussel, C., Greub, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+blood-culture+bacterial+pellet+preparation+for+faster+accurate+direct+bacterial+identification+and+antibiotic+susceptibility+testing+with+the+VITEK+2+system.">A simple blood-culture bacterial pellet preparation for faster accurate direct bacterial identification and antibiotic susceptibility testing with the VITEK 2 system.</a> Journal of medical microbiology. 62, 773-777 (2013).</li><li>Clerc, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix-assisted+laser+desorption+ionization+time-of-flight+mass+spectrometry+and+PCR-based+rapid+diagnosis+of+Staphylococcus+aureus+bacteraemia.">Matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry and PCR-based rapid diagnosis of Staphylococcus aureus bacteraemia.</a> Clin Microbiol Infect. , (2013).</li><li>Martiny, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+rapid+microbial+identification+directly+from+positive+blood+cultures+using+matrix-assisted+laser+desorption/ionization+time-of-flight+mass+spectrometry+on+patient+management.">Impact of rapid microbial identification directly from positive blood cultures using matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry on patient management.</a> Clin Microbiol Infect. 19, E568-E581 (2013).</li><li>Stoneking, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Would+earlier+microbe+identification+alter+antibiotic+therapy+in+bacteremic+emergency+department+patients.">Would earlier microbe identification alter antibiotic therapy in bacteremic emergency department patients.</a> The Journal of emergency medicine. 44, 1-8 (2013).</li><li>Nordmann, P., Dortet, L., Poirel, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+detection+of+extended-spectrum-beta-lactamase-producing+Enterobacteriaceae.">Rapid detection of extended-spectrum-beta-lactamase-producing Enterobacteriaceae.</a> J Clin Microbiol. 50, 3016-3022 (2012).</li></ol>

Vergeleken met conventionele positieve bloedkweek diagnostische benaderingen snelle verwerving van een bacteriële pellet met de ammoniumchloride lysis centrifugatie benadering verminderen de tijd tot identificatie rapporteren door 16 tot 24 uur en de tijd AST door 24 rapporteren aan 48 uur (Figuren 1 en 3). Snelle invoering van geschikte antibiotica therapie is van cruciaal belang voor de uitkomst van patiënten die lijden aan infecties in het bloed te verbeteren. Aldus vro...

Bloedbaan infecties en sepsis bij gehospitaliseerde patiënten een belangrijke oorzaak van morbiditeit en mortaliteit. Zo is de sterfte gerelateerd aan infecties bloedbaan waargenomen bij ongeveer 14% tot 37% van de gehospitaliseerde patiënt en kan op de intensive care-patiënten 1-3 te verhogen tot 35%. De snelle identificatie van de ziekteverwekker is cruciaal voor een optimale antimicrobiële behandeling te begeleiden en om de goede afloop van de antimicrobiële therapie 4,5 te verhogen. De snelle analyse van Gramkleuringen van positieve bloedkweek reeds een aanzienlijke invloed op de aanpassing van antimicrobiële therapie 6,7 maar nauwkeurige identificatie van het infectueuze agens moet de meest geschikte antibiotica om de patiënt te voorzien. Bijvoorbeeld, verschillende antibiotica behandelingen moeten worden uitgevoerd na bacteriëmie met enterokokken en streptokokken die moeilijk te onderscheiden door Gram-kleuring zijn. Ook de identificatie van de soort Level moet Gram negatieve enterobacteriën detecteren codeert AmpC een chromosomaal gen dat een verhoogde resistentie tegen 8-lactamen β. Met een positieve bloedkweek, conventionele diagnostische benadering is de ziekteverwekker van verschillende agarplaten, die verscheidene uren extra incubatie voorafgaande identificatie met verschillende benaderingen zoals biochemische tests groei van verschillende selectieve media en geautomatiseerde microbiële identificatiesystemen vereist subcultuur. De tijd om resultaten van een conventionele diagnostische benadering is van ongeveer 1 tot 3 dagen. De opkomst van de matrix-geassisteerde laser desorptie / ionisatie time-of-flight massaspectrometrie (MALDI-TOF) techniek voor snelle identificatie van micro-organismen is een nieuw hulpmiddel om snel micro-organismen kolonies gekweekt op agarplaten ook direct identificeren van positieve bloed ontvangen kweken (figuur 1) 9-12. The gebruik van MALDI-TOF om een ​​infectueus agens te identificeren van bloedkweken is aanzienlijk verminderd de tijd om de resultaten om een ​​paar minuten in plaats van de uren en dagen die door de traditionele methoden. Zoals besproken door Croxatto e.a.. 13, de efficiëntie van MALDI-TOF identificatie berust op verschillende parameters zoals zuiverheid en hoeveelheid van de micro-organisme. Deze twee criteria worden gemakkelijk verkregen uit afzonderlijke kolonies gekweekt op agarplaten maar vereist een pre-analytische behandeling van bacteriële verrijking en zuivering uit complexe monsters zoals bloed cultuur, die meerdere cellulaire en eiwit componenten die kunnen interfereren met MALDI-TOF identificatie bevatten. Isolatiemethoden van bloedkweek Verschillende micro-organismen &quot;zijn gebruikt in een aantal studies waaronder saponine of andere milde detergentia vormen voor bacteriële extractie 9,14, serumscheidingsbuisjes methode 10, lysis centrifugatiewerkwijzen 12 </sup&gt; en commercieel oplossingen zoals het sepsityper kit. Onze bacteriologie diagnostisch laboratorium heeft een eenvoudige bloed-kweek bacteriële pellet bereiding op basis van ammoniumchloride erytrocyt-lysis dat snelle identificatie van bacteriën en gist door MALDI-TOF en automatische identificatiesystemen (figuur 2) 15 toe ontwikkeld. Dit bloed-kweek pellet preparaat ook een voorbeeld voor andere directe verdere toepassingen zoals Gram kleuring, geautomatiseerde PCR-gebaseerde diagnostische testen zoals POCT-PCRs voor de snelle detectie van methicilline-resistente Staphylococcus aureus (MRSA) en antibioticum gevoeligheidstests met AST geautomatiseerde systemen en / of disk diffusie assays op agarplaten (figuur 3). In dit werk beschrijven we de verschillende stappen voor de bereiding van de bloed-kweek bacteriële pellet zoals door Prod&#39;hom e.a.. 15 (figuur 4). We zullen ook Deschrijver de protocollen voor drie van de belangrijkste toepassingen die worden uitgevoerd op de bloedkweek pellet: Identificatie met MALDI-TOF 15, identificatie (ID) en antibiotica gevoeligheidstests (AST) met geautomatiseerde systemen 16 voor Enterobacteriaceae en stafylokokken en geautomatiseerde PCR gebaseerde diagnostische test voor de detectie van MRSA 17.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1130">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:268px;">20 needle gauge&#160;</td>
			<td style="width:268px;">Terumo, Leuven, Belgium</td>
			<td style="width:239px;">NN-2038R</td>
			<td style="width:355px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">50 ml Falcon tube</td>
			<td>BD, Franklin Lakes, NJ, USA</td>
			<td>352070</td>
			<td>50 ml centrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Ammonium chlorure</td>
			<td>Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>101145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Potassium hydrogen carbonate</td>
			<td>Fluka, St. Louis, MO, USA&#160;</td>
			<td>60340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Formic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA&#160;</td>
			<td>F0507</td>
			<td>Flammable, corrosive</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">a-Cyano-4-hydroxycinnamic acid</td>
			<td>Fluka, St. Louis, MO, USA&#160;</td>
			<td>70990</td>
			<td>Acute toxicity</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA&#160;</td>
			<td>271004</td>
			<td>Flammable, acute toxicity</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Trifluoroacetic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA&#160;</td>
			<td>T6508</td>
			<td>Corrosive, acute toxicity</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Vitek 2 60 instrument</td>
			<td>Biom&#233;rieux, Marcy-l&#39;Etoile, France</td>
			<td>27202</td>
			<td>automated microbial system instrument</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Vitek 2 Gram-positive (GP) card</td>
			<td>Biom&#233;rieux, Marcy-l&#39;Etoile, France</td>
			<td>21342</td>
			<td>automated GP&#160; identification card</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Vitek 2 AST-P580 card</td>
			<td>Biom&#233;rieux, Marcy-l&#39;Etoile, France</td>
			<td>22233</td>
			<td>automated microbial AST system</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Vitek 2 Gram-negative (GN) card</td>
			<td>Biom&#233;rieux, Marcy-l&#39;Etoile, France</td>
			<td>21341</td>
			<td>automated GN&#160; identification card</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Vitek 2 AST-N242 card</td>
			<td>Biom&#233;rieux, Marcy-l&#39;Etoile, France</td>
			<td>413391</td>
			<td>automated microbial AST system</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Xpert MRSA</td>
			<td>Cepheid, Sunnyvale, Ca, USA</td>
			<td>&#160;GXMRSA-100N-10</td>
			<td>nucleic acid amplification technology MRSA</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">GeneXpert IV instrument</td>
			<td>Cepheid, Sunnyvale, Ca, USA</td>
			<td>GXIV-4-D</td>
			<td>nucleic acid amplification technology instrument</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Microflex LT MALDI-TOF MS instrument</td>
			<td>Bruker Daltonics, Bremen, Germany</td>
			<td>BDAL microflex LT/SH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">MSP 96 target&#160; steel BC</td>
			<td>Bruker Daltonics, Bremen, Germany</td>
			<td>280799</td>
			<td>MALDI target plate</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Densitometer Densicheck instrument</td>
			<td>Biom&#233;rieux, Marcy-l&#39;Etoile, France</td>
			<td>27208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">MALDI Sepsityper kit 50</td>
			<td>Bruker Daltonics, Bremen, Germany</td>
			<td>8270170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Mac Conkey agar</td>
			<td>Biolife, Milano, Italy</td>
			<td>4016702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Mueller-Hinton agar</td>
			<td>Oxoid, Hampshire, England</td>
			<td>CM0337</td>
			<td>Mueller-Hinton agar (MH)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">MHF agar</td>
			<td>Biom&#233;rieux, Marcy-l&#39;Etoile, France</td>
			<td>43901</td>
			<td>Mueller-Hinton agar-fastidious organisms agar (MHF)</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">BD columbia III agar</td>
			<td>BD, Franklin Lakes, NJ, USA</td>
			<td>254071</td>
			<td>blood agar</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">BD chocolate agar</td>
			<td>BD, Franklin Lakes, NJ, USA</td>
			<td>254089</td>
			<td>chocolate agar</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">BD schaedler agar</td>
			<td>BD, Franklin Lakes, NJ, USA</td>
			<td>254084</td>
			<td>Schaedler agar</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of a blood culture pellet for rapid bacterial identification and antibiotic susceptibility testing

Bloedbaan infecties en sepsis zijn een belangrijke oorzaak van morbiditeit en mortaliteit. De succesvolle uitkomst van patiënten met bacteriëmie, hangt af van een snelle identificatie van de ziekteverwekker om een ​​optimale behandeling met antibiotica te begeleiden. De analyse van Gramkleuringen van positieve bloedkweek kan snel worden uitgevoerd en reeds een aanzienlijke invloed hebben op de antibiotica kuur. Echter, is de nauwkeurige identificatie van het infectueuze agens nog steeds vereist om de optimale gerichte behandeling stellen. We presenteren hier een eenvoudige en snelle bacteriële pellet bereiding van een positieve bloedkweek die kan worden gebruikt als een monster voor meerdere essentiële verdere toepassingen zoals identificatie door MALDI-TOF MS, antibiotica gevoeligheidstest (AST) door disc diffusie assay of geautomatiseerde systemen AST en geautomatiseerde PCR-gebaseerde diagnostische test. De uitvoering van deze verschillende identificatie en AST die rechtstreeks aangebracht op de bloedkweek bacteriële pellets zeer siMilar de prestaties gewoonlijk verkregen uit geïsoleerde kolonies gekweekt op agarplaten. Vergeleken met conventionele benaderingen, de snelle verwerving van een bacteriële pellet vermindert de tijd zowel identificatie en AST rapporteren. Zo kan na bloedkweek positiviteit, identificatie door MALDI-TOF worden gemeld binnen minder dan 1 uur, terwijl de resultaten van AST door geautomatiseerde AST systemen of disc diffusie testen binnen 8 tot 18 uur, respectievelijk. Evenzo kunnen de resultaten van een snelle PCR gebaseerde bepaling de clinici worden meegedeeld minder dan 2 uur na het verslag van een bacteremia. Samen tonen deze resultaten aan dat de snelle voorbereiding van een bloedkweek bacteriële pellet heeft een belangrijke invloed op de identificatie en de AST doorlooptijd en dus op de goede afloop van de patiënten die lijden aan infecties in het bloed.

In de studie van Prod&#39;hom e.a.. 15, werden bacteriële pellets verkregen door ammoniumchloride lysis centrifugering van 122 positieve bloedkweek van 78 patiënten geanalyseerd met MALDI-TOF MS. Van de 122 positieve bloedkweek, 95 (77,9%) werden correct geïdentificeerd op het niveau van soorten en een (0,8%) op het genus-niveau. De overige 26 (21,3%) bloedkweek pellets gaven geen betrouwbare identificatie door MALDI-TOF. Van deze 21 waren gram-positieve bacteriën, waaronder 13 streptokokken en 5...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of a Blood Culture Pellet for Rapid Bacterial Identification and Antibiotic Susceptibility Testing at JoVE.com

Preparation of a Blood Culture Pellet for Rapid Bacterial Identification and Antibiotic Susceptibility Testing

Een snelle bacteriële pellet bereiding van een positieve bloedkweek kan worden gebruikt als een monster voor toepassingen zoals identificatie door MALDI-TOF, Gram-kleuring, antibiotica gevoeligheidstesten en PCR-gebaseerde test. De resultaten kunnen snel worden meegedeeld aan artsen om de uitkomst van patiënten die lijden aan infecties in het bloed te verbeteren.

Voorbereiding van een Bloed Cultuur Pellet voor snelle identificatie van bacteriën en antibiotica gevoeligheid testen

Bloodstream infections and sepsis are a major cause of morbidity and mortality. The successful outcome of patients suffering from bacteremia depends on a ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

Een 96 Goed microtiterplaat-gebaseerde methode voor de controle Formation en schimmelwerende gevoeligheid testen van Candida albicans Biofilms

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third ...

Protocol for Recombinant RBD-based SARS Vaccines: Protein Preparation, Animal Vaccination and Neutralization Detection

Protocol voor Recombinant RBD-based SARS Vaccins: Eiwit Voorbereiding, vaccinatie van dieren en het onschadelijk maken Detectie

Based on their safety profile and ability to induce potent immune responses against infections, subunit vaccines have been used as candidates for a wide ...

A 1.5 Hour Procedure for Identification of Enterococcus Species Directly from Blood Cultures

A 1.5 Hour Procedure for Identification of Enterococcus Species Directly from Blood Cultures

Een 1,5 uur Procedure voor de identificatie van Enterococcus Soorten Rechtstreeks van bloedkweken

Enterococci are a common cause of bacteremia with E. faecalis being the predominant species followed by E. faecium.  Because resistance to ampicillin and ...

Antimicrobial Susceptibility Testing of Mycobacterium Tuberculosis Complex for First and Second Line Drugs by Broth Dilution in a Microtiter Plate Format

Antimicrobiële gevoeligheid testen van Mycobacterium tuberculosis-complex voor de eerste en tweede lijn drugs door de bouillon verdund in een microtiterplaat Format

The rapid detection of antimicrobial resistance is important in the effort to control the increase in resistant Mycobacterium 
tuberculosis (Mtb). ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

Introductie van Shear Stress in de studie van bacteriële hechting

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

One-day Workflow Scheme for Bacterial Pathogen Detection and Antimicrobial Resistance Testing from Blood Cultures

Eendaagse Workflow Regeling bacteriële pathogenen detectie en antimicrobiële resistentie testen van Blood Cultures

Bloodstream infections are associated with high mortality rates because of the probable manifestation of sepsis, severe sepsis and septic shock1. ...

Rapid Identification of Gram Negative Bacteria from Blood Culture Broth Using MALDI-TOF Mass Spectrometry

Snelle identificatie van Gram-negatieve bacteriën van Blood Culture Bouillon Met behulp van MALDI-TOF massaspectrometrie

An important role of the clinical microbiology laboratory is to provide rapid identification of bacteria causing bloodstream infection. Traditional ...

A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

Referentie Bouillon microverdunningsplaten Methode voor dalbavancin<em&gt; In Vitro</em&gt; Gevoeligheid testen van Bacteriën die aNBAO Grow

Antimicrobial susceptibility testing (AST) is performed to assess the in vitro activity of antimicrobial agents against various bacteria. The AST results, ...

A RAPID Method for Blood Processing to Increase the Yield of Plasma Peptide Levels in Human Blood

Een snelle methode voor bloedverwerkende de opbrengst aan plasma peptide niveaus in bloed verhogen

Research in the field of food intake regulation is gaining importance. This often includes the measurement of peptides regulating food intake. For the ...

Culture of Macrophage Colony-stimulating Factor Differentiated Human Monocyte-derived Macrophages

Cultuur van macrofaag kolonie-stimulerende factor Gedifferentieerde Human monocyt-afgeleide macrofagen

A protocol is presented for cell culture of macrophage colony-stimulating factor (M-CSF) differentiated human monocyte-derived macrophages. For initiation ...