Name: preparation of a blood culture pellet for rapid bacterial identification and antibiotic susceptibility testing
Uploaded: 2014-10-15T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of a Blood Culture Pellet for Rapid Bacterial Identification and Antibiotic Susceptibility Testing at JoVE.com

Ringraziamo i tecnici del laboratorio di batteriologia del Centro Ospedaliero Universitario di Losanna per il loro aiuto per attuare le tecniche in laboratorio.

Questo protocollo è stato sviluppato e validato seguendo i processi di ricerca e sviluppo e le regole etiche della nostra istituzione, prima di essere implementato come strumento di routine. 1 Preparazione di una cultura Sangue batterica pellet da Ammonio Cloruro Procedura eritrociti-lisi <ol><li> Preparazione di una coltura ematica positiva per la successiva centrifugazione. <ol><li> Sterilizzare il tappo cultura del sangue. Aggiungere etanolo al 70% sul tappo della bottiglia e bruciarlo...

<ol>
	<li>Alberti, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+sepsis+and+infection+in+ICU+patients+from+an+international+multicentre+cohort+study.">Epidemiology of sepsis and infection in ICU patients from an international multicentre cohort study.</a> Intensive care medicine. 28, 108-121 (2002).</li><li>Angus, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+severe+sepsis+in+the+United+States:+analysis+of+incidence,+outcome,+and+associated+costs+of+care.">Epidemiology of severe sepsis in the United States: analysis of incidence, outcome, and associated costs of care.</a> Critical care medicine. 29, 1303-1310 (2001).</li><li>Vincent, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sepsis+in+European+intensive+care+units+results+of+the+SOAP+study.">Sepsis in European intensive care units results of the SOAP study.</a> Critical care medicine. 34, 344-353 (2006).</li><li>Micek, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Empiric+combination+antibiotic+therapy+is+associated+with+improved+outcome+against+sepsis+due+to+Gram-negative+bacteria+a+retrospective+analysis.">Empiric combination antibiotic therapy is associated with improved outcome against sepsis due to Gram-negative bacteria a retrospective analysis.</a> Antimicrob Agents Chemother. 54, 1742-1748 (2010).</li><li>Seifert, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+importance+of+microbiological+findings+in+the+diagnosis+and+management+of+bloodstream+infections.">The clinical importance of microbiological findings in the diagnosis and management of bloodstream infections.</a> Clin Infect Dis. 48, S238-S245 (2009).</li><li>Barenfanger, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+mortality+associated+with+prompt+Gram+staining+of+blood+cultures.">Decreased mortality associated with prompt Gram staining of blood cultures.</a> American journal of clinical pathology. 130, 870-876 (2008).</li><li>Munson, E. L., Diekema, D. J., Beekmann, S. E., Chapin, K. C., Doern, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+and+treatment+of+bloodstream+infection:+laboratory+reporting+and+antimicrobial+management.">Detection and treatment of bloodstream infection: laboratory reporting and antimicrobial management.</a> J Clin Microbiol. 41, 495-497 (2003).</li><li>Clerc, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+matrix-assisted+laser+desorption+ionization+time-of-flight+mass+spectrometry+on+the+clinical+management+of+patients+with+Gram-negative+bacteremia+a+prospective+observational+study.">Impact of matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry on the clinical management of patients with Gram-negative bacteremia a prospective observational study.</a> Clin Infect Dis. 56, 1101-1107 (2013).</li><li>Meex, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+identification+of+bacteria+from+BacT/ALERT+anaerobic+positive+blood+cultures+by+MALDI-TOF+MS+MALDI+Sepsityper+kit+versus+an+in-house+saponin+method+for+bacterial+extraction.">Direct identification of bacteria from BacT/ALERT anaerobic positive blood cultures by MALDI-TOF MS MALDI Sepsityper kit versus an in-house saponin method for bacterial extraction.</a> Journal of medical microbiology. 61, 1511-1516 (2012).</li><li>Moussaoui, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix-assisted+laser+desorption+ionization+time-of-flight+mass+spectrometry+identifies+90%+of+bacteria+directly+from+blood+culture+vials.">Matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry identifies 90% of bacteria directly from blood culture vials.</a> Clin Microbiol Infect. 16, 1631-1638 (2010).</li><li>Seng, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ongoing+revolution+in+bacteriology+routine+identification+of+bacteria+by+matrix-assisted+laser+desorption+ionization+time-of-flight+mass+spectrometry.">Ongoing revolution in bacteriology routine identification of bacteria by matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry.</a> Clin Infect Dis. 49, 543-551 (2009).</li><li>Stevenson, L. G., Drake, S. K., Murray, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+identification+of+bacteria+in+positive+blood+culture+broths+by+matrix-assisted+laser+desorption+ionization-time+of+flight+mass+spectrometry.">Rapid identification of bacteria in positive blood culture broths by matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry.</a> J Clin Microbiol. 48, 444-447 (2010).</li><li>Croxatto, A., Prod&amp;34hom, G., Greub, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+MALDI-TOF+mass+spectrometry+in+clinical+diagnostic+microbiology.">Applications of MALDI-TOF mass spectrometry in clinical diagnostic microbiology.</a> FEMS Microbiol Rev. 36, 380-407 (2012).</li><li>Chen, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+bacterial+identification+in+positive+blood+cultures+by+use+of+two+commercial+matrix-assisted+laser+desorption+ionization-time+of+flight+mass+spectrometry+systems.">Direct bacterial identification in positive blood cultures by use of two commercial matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry systems.</a> J Clin Microbiol. 51, 1733-1739 (2013).</li><li>Prod&amp;34hom, G., Bizzini, A., Durussel, C., Bille, J., Greub, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix-assisted+laser+desorption+ionization-time+of+flight+mass+spectrometry+for+direct+bacterial+identification+from+positive+blood+culture+pellets.">Matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry for direct bacterial identification from positive blood culture pellets.</a> J Clin Microbiol. 48, 1481-1483 (2010).</li><li>Prod&amp;34hom, G., Durussel, C., Greub, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+blood-culture+bacterial+pellet+preparation+for+faster+accurate+direct+bacterial+identification+and+antibiotic+susceptibility+testing+with+the+VITEK+2+system.">A simple blood-culture bacterial pellet preparation for faster accurate direct bacterial identification and antibiotic susceptibility testing with the VITEK 2 system.</a> Journal of medical microbiology. 62, 773-777 (2013).</li><li>Clerc, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix-assisted+laser+desorption+ionization+time-of-flight+mass+spectrometry+and+PCR-based+rapid+diagnosis+of+Staphylococcus+aureus+bacteraemia.">Matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry and PCR-based rapid diagnosis of Staphylococcus aureus bacteraemia.</a> Clin Microbiol Infect. , (2013).</li><li>Martiny, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+rapid+microbial+identification+directly+from+positive+blood+cultures+using+matrix-assisted+laser+desorption/ionization+time-of-flight+mass+spectrometry+on+patient+management.">Impact of rapid microbial identification directly from positive blood cultures using matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry on patient management.</a> Clin Microbiol Infect. 19, E568-E581 (2013).</li><li>Stoneking, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Would+earlier+microbe+identification+alter+antibiotic+therapy+in+bacteremic+emergency+department+patients.">Would earlier microbe identification alter antibiotic therapy in bacteremic emergency department patients.</a> The Journal of emergency medicine. 44, 1-8 (2013).</li><li>Nordmann, P., Dortet, L., Poirel, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+detection+of+extended-spectrum-beta-lactamase-producing+Enterobacteriaceae.">Rapid detection of extended-spectrum-beta-lactamase-producing Enterobacteriaceae.</a> J Clin Microbiol. 50, 3016-3022 (2012).</li></ol>

Rispetto a emocoltura positiva approcci diagnostici convenzionali, la rapida acquisizione di un pellet batterico utilizzando il cloruro di lisi approccio centrifugazione ammonio ridurre il tempo di segnalare l&#39;identificazione da 16 a 24 ore e il tempo di riferire AST per 24 per 48 ore (figure 1 e 3). Rapida introduzione di un&#39;appropriata terapia antibiotica è fondamentale per migliorare la prognosi dei pazienti affetti da infezioni del sangue. Così, l&#39;identific...

Infezioni del sangue e sepsi nei pazienti ospedalizzati sono una delle principali cause di morbilità e mortalità. Così, la mortalità correlata al flusso sanguigno infezioni si osserva in circa il 14% al 37% dei pazienti ricoverati in ospedale e può aumentare fino al 35% in unità di terapia intensiva dei pazienti 1-3. La rapida identificazione dell&#39;agente infettivo è fondamentale per guidare il trattamento antimicrobico ottimale e di aumentare il buon esito della terapia antimicrobica 4,5. La rapida analisi delle macchie di Gram da emocoltura positiva ha già un impatto significativo sull&#39;adattamento della terapia antimicrobica 6,7 ma accurata identificazione dell&#39;agente infettivo è tenuto a fornire il trattamento antibiotico più adatto ai pazienti. Per esempio, diversi regimi di trattamento antibiotico deve essere attuato a seguito batteriemia con enterococchi e streptococchi che sono difficili da distinguere da colorazione di Gram. Allo stesso modo, l&#39;identificazione alle specie Level è tenuto a rilevare enterobatteri Gram negativi che codifica per una cromosomico AMPC gene che conferisce una maggiore resistenza ai β-lattamici 8. Con una emocoltura positiva, l&#39;approccio diagnostico convenzionale è di sottocultura l&#39;agente infettivo su diverse piastre di agar, che richiede diverse ore di incubazione supplementare prima identificazione con vari metodi tra cui i test biochimici, la crescita su diversi terreni selettivi e di sistemi di identificazione microbica automatizzati. Il tempo per i risultati di un approccio diagnostico convenzionale è di circa 1 a 3 giorni. L&#39;emergere della tecnologia matrix-assisted laser desorbimento / spettrometria di massa a ionizzazione a tempo di volo (MALDI-TOF) per una rapida identificazione dei microrganismi ha fornito un nuovo strumento per identificare rapidamente microrganismi da colonie cresciute su piastre di agar, ma anche direttamente dal sangue positivo culture (Figura 1) 9-12. The l&#39;uso di MALDI-TOF per identificare un agente infettivo da colture di sangue ha ridotto significativamente il tempo di risultati per alcuni minuti invece delle ore e dei giorni richiesti dai metodi tradizionali. Come discusso da Croxatto et al. 13, l&#39;efficienza di identificazione MALDI-TOF si basa su diversi parametri compresa la purezza e la quantità del microrganismo. Questi due criteri sono facilmente ottenuti da colonie discrete cresciute su piastre di agar, ma richiedevano un trattamento pre-analitico per l&#39;arricchimento batterica e purificazione da campioni complessi come la cultura del sangue, che contengono più componenti cellulari e proteine ​​che possono interferire con l&#39;identificazione MALDI-TOF. Metodi di isolamento vari microrganismi &#39;di coltura sangue sono stati utilizzati in un certo numero di studi inclusi saponina o altro metodo detergenti delicati per l&#39;estrazione batterica 9,14, siero metodo separatore 10, lisi metodi di centrifugazione 12 </sup&gt; e soluzioni commercialmente, come il kit sepsityper. Il nostro laboratorio diagnostico batteriologico ha sviluppato un semplice sangue-coltura preparazione pellet batterico base di cloruro di ammonio eritrociti-lisi che consentono rapida identificazione di batteri e lieviti mediante MALDI-TOF e sistemi di identificazione automatizzati (Figura 2) 15. Questa preparazione sangue-cultura pellet anche fornire un campione per altre applicazioni a valle diretti come colorazione di Gram, test automatizzati basati sulla PCR diagnostici come POCT-PCR per il rilevamento rapido di meticillino-resistente Staphyloccocus aureus (MRSA), e test di sensibilità agli antibiotici con sistemi automatizzati di AST e / o mediante saggi di diffusione del disco su piastre di agar (Figura 3). In questo lavoro, descriviamo le fasi per la preparazione del pellet batterico sangue-cultura come spiegato da Prod&#39;hom et al. 15 (Figura 4). Ci sarà anche descrivano i protocolli per tre delle principali applicazioni che possono essere eseguite sul pellet cultura del sangue: Identificazione mediante MALDI-TOF 15, di identificazione (ID) e test di sensibilità agli antibiotici (AST) con i sistemi automatizzati 16 per Enterobacteriaceae e stafilococchi e PCR-automatizzato test diagnostico basato per la rilevazione di MRSA 17.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1130">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:268px;">20 needle gauge&#160;</td>
			<td style="width:268px;">Terumo, Leuven, Belgium</td>
			<td style="width:239px;">NN-2038R</td>
			<td style="width:355px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">50 ml Falcon tube</td>
			<td>BD, Franklin Lakes, NJ, USA</td>
			<td>352070</td>
			<td>50 ml centrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Ammonium chlorure</td>
			<td>Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>101145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Potassium hydrogen carbonate</td>
			<td>Fluka, St. Louis, MO, USA&#160;</td>
			<td>60340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Formic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA&#160;</td>
			<td>F0507</td>
			<td>Flammable, corrosive</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">a-Cyano-4-hydroxycinnamic acid</td>
			<td>Fluka, St. Louis, MO, USA&#160;</td>
			<td>70990</td>
			<td>Acute toxicity</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA&#160;</td>
			<td>271004</td>
			<td>Flammable, acute toxicity</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Trifluoroacetic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA&#160;</td>
			<td>T6508</td>
			<td>Corrosive, acute toxicity</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Vitek 2 60 instrument</td>
			<td>Biom&#233;rieux, Marcy-l&#39;Etoile, France</td>
			<td>27202</td>
			<td>automated microbial system instrument</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Vitek 2 Gram-positive (GP) card</td>
			<td>Biom&#233;rieux, Marcy-l&#39;Etoile, France</td>
			<td>21342</td>
			<td>automated GP&#160; identification card</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Vitek 2 AST-P580 card</td>
			<td>Biom&#233;rieux, Marcy-l&#39;Etoile, France</td>
			<td>22233</td>
			<td>automated microbial AST system</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Vitek 2 Gram-negative (GN) card</td>
			<td>Biom&#233;rieux, Marcy-l&#39;Etoile, France</td>
			<td>21341</td>
			<td>automated GN&#160; identification card</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Vitek 2 AST-N242 card</td>
			<td>Biom&#233;rieux, Marcy-l&#39;Etoile, France</td>
			<td>413391</td>
			<td>automated microbial AST system</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Xpert MRSA</td>
			<td>Cepheid, Sunnyvale, Ca, USA</td>
			<td>&#160;GXMRSA-100N-10</td>
			<td>nucleic acid amplification technology MRSA</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">GeneXpert IV instrument</td>
			<td>Cepheid, Sunnyvale, Ca, USA</td>
			<td>GXIV-4-D</td>
			<td>nucleic acid amplification technology instrument</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Microflex LT MALDI-TOF MS instrument</td>
			<td>Bruker Daltonics, Bremen, Germany</td>
			<td>BDAL microflex LT/SH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">MSP 96 target&#160; steel BC</td>
			<td>Bruker Daltonics, Bremen, Germany</td>
			<td>280799</td>
			<td>MALDI target plate</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Densitometer Densicheck instrument</td>
			<td>Biom&#233;rieux, Marcy-l&#39;Etoile, France</td>
			<td>27208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">MALDI Sepsityper kit 50</td>
			<td>Bruker Daltonics, Bremen, Germany</td>
			<td>8270170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Mac Conkey agar</td>
			<td>Biolife, Milano, Italy</td>
			<td>4016702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Mueller-Hinton agar</td>
			<td>Oxoid, Hampshire, England</td>
			<td>CM0337</td>
			<td>Mueller-Hinton agar (MH)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">MHF agar</td>
			<td>Biom&#233;rieux, Marcy-l&#39;Etoile, France</td>
			<td>43901</td>
			<td>Mueller-Hinton agar-fastidious organisms agar (MHF)</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">BD columbia III agar</td>
			<td>BD, Franklin Lakes, NJ, USA</td>
			<td>254071</td>
			<td>blood agar</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">BD chocolate agar</td>
			<td>BD, Franklin Lakes, NJ, USA</td>
			<td>254089</td>
			<td>chocolate agar</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">BD schaedler agar</td>
			<td>BD, Franklin Lakes, NJ, USA</td>
			<td>254084</td>
			<td>Schaedler agar</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of a blood culture pellet for rapid bacterial identification and antibiotic susceptibility testing

Infezioni del sangue e sepsi sono una delle principali cause di morbilità e mortalità. Il buon esito dei pazienti affetti da batteriemia dipende da una rapida identificazione dell&#39;agente infettivo per guidare il trattamento antibiotico ottimale. L&#39;analisi delle macchie di Gram da emocoltura positiva può essere rapidamente condotto e già un impatto significativamente il regime antibiotico. Tuttavia, l&#39;accurata identificazione dell&#39;agente infettivo è ancora necessaria per stabilire il trattamento ottimale mirato. Presentiamo qui una preparazione pellet batterico semplice e veloce da una cultura del sangue positivo che può essere utilizzato come campione per diverse applicazioni a valle essenziali quali l&#39;identificazione mediante MALDI-TOF MS, test di sensibilità agli antibiotici (AST) mediante saggio di diffusione del disco o sistemi automatizzati AST e automatizzato PCR-based test diagnostici. Le prestazioni di questi diversi sistemi di identificazione e AST applicati direttamente sulle emocolture pellet batterico è molto SImilar alla performance, normalmente ottenuto da colonie isolate cresciute su piastre di agar. Rispetto ai metodi tradizionali, la rapida acquisizione di un pellet batterico riduce notevolmente il tempo di segnalare sia l&#39;identificazione e AST. Così, seguendo la cultura positività del sangue, l&#39;identificazione mediante MALDI-TOF può essere segnalato in meno di 1 ora, mentre i risultati di AST da sistemi automatizzati o AST test di diffusione del disco entro 8 a 18 ore, rispettivamente. Allo stesso modo, i risultati di un test rapido basato su PCR possono essere comunicati ai medici meno di 2 ore a seguito della relazione di una batteriemia. Insieme, questi risultati dimostrano che la rapida preparazione di un pellet batterico cultura del sangue ha un impatto significativo sulla identificazione e AST turnaround tempo e quindi sul buon esito dei pazienti affetti da infezioni del sangue.

Nello studio effettuato da Prod&#39;hom et al. 15, pellet batterici ottenuti da cloruro di ammonio lisi centrifugazione di 122 emocoltura positiva da 78 pazienti sono stati analizzati mediante MALDI-TOF MS. Su 122 emocoltura positiva, 95 (77,9%) sono stati correttamente identificati a livello di specie e uno (0,8%) a livello di genere. I restanti 26 (21,3%) Pellets emocoltura non hanno dato un&#39;identificazione affidabile mediante MALDI-TOF. Tra questi, 21 sono stati i batteri Gram-positivi, tra cu...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of a Blood Culture Pellet for Rapid Bacterial Identification and Antibiotic Susceptibility Testing at JoVE.com

Preparation of a Blood Culture Pellet for Rapid Bacterial Identification and Antibiotic Susceptibility Testing

Una rapida preparazione pellet batterico da una emocoltura positiva può essere utilizzato come campione per le applicazioni quali l&#39;identificazione mediante MALDI-TOF, colorazione di Gram, test di sensibilità agli antibiotici e test di PCR-based. I risultati possono essere tempestivamente ai medici di migliorare la prognosi dei pazienti affetti da infezioni del sangue.

Preparazione di un Sangue cultura pellet per il Rapid batterica identificazione e test di sensibilità agli antibiotici

Bloodstream infections and sepsis are a major cause of morbidity and mortality. The successful outcome of patients suffering from bacteremia depends on a ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

A 96 Beh microtest piastra a base di Metodo per la Formazione di monitoraggio e test di suscettibilità antifungini Candida albicans Biofilm

Candida albicans remains the most frequent cause of fungal infections in an expanding population of compromised patients and candidiasis is now the third ...

Ricerca

Immunologia e infezioni

Protocol for Recombinant RBD-based SARS Vaccines: Protein Preparation, Animal Vaccination and Neutralization Detection

Protocollo per ricombinante RBD-based Vaccines SARS: Preparazione di proteine, vaccinazione degli animali e la rivelazione di neutralizzazione

Based on their safety profile and ability to induce potent immune responses against infections, subunit vaccines have been used as candidates for a wide ...

A 1.5 Hour Procedure for Identification of Enterococcus Species Directly from Blood Cultures

A 1.5 Hour Procedure for Identification of Enterococcus Species Directly from Blood Cultures

Una procedura 1,5 ore per l&#39;identificazione di Enterococcus Specie Direttamente da emocolture

Enterococci are a common cause of bacteremia with E. faecalis being the predominant species followed by E. faecium.  Because resistance to ampicillin and ...

Antimicrobial Susceptibility Testing of Mycobacterium Tuberculosis Complex for First and Second Line Drugs by Broth Dilution in a Microtiter Plate Format

Test di suscettibilità antimicrobica del complesso Mycobacterium tuberculosis delle droghe prima e seconda linea per diluizione brodo in un formato micropiastra

The rapid detection of antimicrobial resistance is important in the effort to control the increase in resistant Mycobacterium 
tuberculosis (Mtb). ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

L&#39;introduzione di shear stress nello studio di adesione batterica

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

One-day Workflow Scheme for Bacterial Pathogen Detection and Antimicrobial Resistance Testing from Blood Cultures

Un giorno Scheme flusso di lavoro per batterica Rilevazione dei patogeni e test di resistenza antimicrobica dalle emocolture

Bloodstream infections are associated with high mortality rates because of the probable manifestation of sepsis, severe sepsis and septic shock1. ...

Rapid Identification of Gram Negative Bacteria from Blood Culture Broth Using MALDI-TOF Mass Spectrometry

Rapida identificazione dei batteri Gram-negativi dal sangue brodo di coltura Uso MALDI-TOF

An important role of the clinical microbiology laboratory is to provide rapid identification of bacteria causing bloodstream infection. Traditional ...

A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

A Reference Broth Microdilution Method for Dalbavancin In Vitro Susceptibility Testing of Bacteria that Grow Aerobically

Un riferimento brodo di microdiluizione per Dalbavancina<em&gt; In Vitro</em&gt; Test della Sensibilità di batteri che crescono aerobico

Antimicrobial susceptibility testing (AST) is performed to assess the in vitro activity of antimicrobial agents against various bacteria. The AST results, ...

A RAPID Method for Blood Processing to Increase the Yield of Plasma Peptide Levels in Human Blood

Un metodo rapido per la lavorazione del sangue per aumentare la resa dei livelli plasmatici del peptide nel sangue umano

Research in the field of food intake regulation is gaining importance. This often includes the measurement of peptides regulating food intake. For the ...

Culture of Macrophage Colony-stimulating Factor Differentiated Human Monocyte-derived Macrophages

Cultura dei macrofagi macrofagi colony-stimulating factor differenziata umana derivate da monociti

A protocol is presented for cell culture of macrophage colony-stimulating factor (M-CSF) differentiated human monocyte-derived macrophages. For initiation ...