Name: measuring local anaphylaxis in mice
Uploaded: 2014-10-14T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Local Anaphylaxis in Mice at JoVE.com

The authors would like to acknowledge Dr. Ellen M. Fox for her work regarding this model of local anaphylaxis. This work was supported by the Uniformed Services University of the Health Sciences grant number R073UE.

1. duyarlı Fareler <ol><li> 20 mg / ml &#39;lik nihai bir konsantrasyona kadar 1x PBS OVA seyreltilmesi ile bir OVA stok çözelti hazırlayın. Gelecekte kullanılmak üzere -80 ° C&#39;de cryovials ve mağaza alikotları aşağı dondurun. </li><li> Oda sıcaklığında 20 mg / mL OVA stoklar bir veya daha fazla alikotları getir. Bir kapağa sahip olan bir 5 ml polistiren yuvarlak tabanlı tüpü içinde, 1 mg / ml &#39;lik bir son konsantrasyona PBS içinde 1x OVA seyreltin. Vortex kısaca karıştırın. </li><...

<ol>
	<li>Kojima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mast+cells+and+Bbasophils+are+selectively+activated+in+vitro+and+in+vivo+through+CD200R3+in+an+IgE-independent+manner.">Mast cells and Bbasophils are selectively activated in vitro and in vivo through CD200R3 in an IgE-independent manner.</a> The Journal of Immunology. 179 (10), 7093-7100 (2007).</li><li>Parikh, S. A., Cho, S. H., Oh, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preformed+enzymes+in+mast+cell+granules+and+their+potential+role+in+allergic+rhinitis.">Preformed enzymes in mast cell granules and their potential role in allergic rhinitis.</a> Current Allergy and Asthma Reports. 3 (3), 266-272 (2003).</li><li>Amin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+mast+cells+in+allergic+inflammation.">The role of mast cells in allergic inflammation.</a> Respiratory Medicine. 106 (1), 9-14 (2012).</li><li>Nakaya, M., Takeuchi, N., Kondo, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+localization+of+histamine+receptor+subtypes+in+human+inferior+turbinates.">Immunohistochemical localization of histamine receptor subtypes in human inferior turbinates.</a> Annals of Otology, Rhinology &amp; Laryngology. 113 (7), 552-557 (2004).</li><li>Ramsdell, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+Trypan+Blue+to+demonstrate+the+immediate+skin+reaction+in+rabbits+and+guinea+pigs.">The use of Trypan Blue to demonstrate the immediate skin reaction in rabbits and guinea pigs.</a> The Journal of Immunology. 15 (4), 305-311 (1928).</li><li>Chase, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+sensitization+of+animals+with+simple+chemical+compounds:+X.+Antibodies+inducing+immediate-type+skin+reactions.">Studies on the sensitization of animals with simple chemical compounds: X. Antibodies inducing immediate-type skin reactions.</a> The Journal of Experimental Medicine. 86 (6), 489-514 (1947).</li><li>Goose, J., Blair, A. M. J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passive+cutaneous+anaphylaxis+in+the+rat,+induced+with+two+homologous+reagin-like+antibodies+and+its+specific+inhibition+with+disodium+cromoglycate.">Passive cutaneous anaphylaxis in the rat, induced with two homologous reagin-like antibodies and its specific inhibition with disodium cromoglycate.</a> Immunology. 16, 749-760 (1969).</li><li>Ovary, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passive+cutaneous+anaphylaxis+in+the+mouse.">Passive cutaneous anaphylaxis in the mouse.</a> The Journal of Immunology. 81 (4), 355-357 (1958).</li><li>Ovary, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immediate+reactions+in+the+skin+of+experimental+animals+provoked+by+antibody-antigen+interactoin.">Immediate reactions in the skin of experimental animals provoked by antibody-antigen interactoin.</a> Progress in Allergy. 5, 459-508 (1958).</li><li>Akiyama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitiative+evaluation+of+passive+cutaneous+anaphylaxis+(PCA)+using+a+hand-held+spectrophotometer.">Quantitiative evaluation of passive cutaneous anaphylaxis (PCA) using a hand-held spectrophotometer.</a> Biological &amp; Pharmaceutical Bulletin. 19 (8), 1112-1114 (1996).</li><li>Teshima, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+spectrophotometric+analysis+of+passive+and+active+ear+cutaneous+anaphylaxis+in+the+mouse.">Simple spectrophotometric analysis of passive and active ear cutaneous anaphylaxis in the mouse.</a> Toxicology Letters. 95 (2), 109-115 (1998).</li></ol>

Alerjik hastalıkların sayıda belirteçleri havayolu meydan ortamda bronkoalveolar sıvı dolaşması histamin Th2 sitokin üretimi ve hücre işe seviyelerindeki değişiklikler dahil olmak üzere, alerji yapıcının aşağıdaki alerjik cevaplar, gücünü değerlendirmek için kullanılır. Bu parametrelerdeki değişiklikleri izleme alerjik reaksiyonlara eğitim için önemli olmakla birlikte, biyolojik belirteçlerin her zaman klinik alerjik hastalığı ile ilişkili değildir. Bu protokol açıklanan yerel ana...

Tip I hipersensitivite, mast hücrelerinin ve bazofillerin yüzeyi üzerindeki IgE, antijen ile indüklenen çapraz-bağlanma ile aracılık eder. Bu hücre degranülasyonunu ve histamin, triptaz ve trombosit aktive edici faktör gibi vazoaktif 2 ve proenflamatuvar medyatörlerin salınmasına yolaçar. Degranülasyonunun sırasında önceden oluşturulmuş aracıların yayımlanmasının ardından, mast hücreleri sentez ve daha fazla damar geçirgenliği 3 artış sağlayan prostaglandin ve lökotrienler bırakın. İlk klinik yanıt hızlı bir şekilde oluşur ve &quot;acil reaksiyonu&quot; olarak adlandırılır. Deride, bir pervaz ve şişlik tepki antijenin dakika içinde kolayca görülebilir olduğu anlamındadır. Meydan dozuna bağlı olarak, bir &quot;geç faz tepkisi&quot; bir kaç saat sonra görmek mümkündür. Geç faz şişlik dokulara 2 içine lokalize ödem ve lökosit işe kaynaklanmaktadır. Histamin, genellikle katılan önemli arabulucu olarak kabulani alerjik tepkiler, 1 (HR1) kaplar ve histamin reseptörü 2 (HR2) düz kasında eksprese ifade histamin reseptörü üzerine etki eder. Kombine etki, inflamasyon 4 bölgesinde kan akışını ve damar geçirgenliğini artırır. Alerji hayvan modellerinde çeşitli alerjik astım, sistemik anafilaksi ve yerel anafilaksi modelleri dahil alerjik iltihabı dahil mekanizmaları, incelemek amacıyla geliştirilmiştir. Intravenöz boya uygulama yayınlar 1920&#39;lerde 5 geri Bu teknik Bayan açıklayan, neredeyse bir yüzyıl için hayvan modellerinde lokalize alerjik tepkileri ölçmek için kullanılır olmuştur. Tavşanlar ve kobay ani hipersensitivite reaksiyonları test etmek için kullanılan ilk hayvan modelleri vardı ve en hassas yanıtlar genellikle kulakta 5,6 bulundu. Tahlil daha sonra sıçanlarda 7 ve farelerde 8 kullanılmak üzere onaylandı. Tarihsel olarak,Deney çeşitli yöntemler önceki boya enjeksiyon, boya enjeksiyondan önce antijen enjeksiyonundan antijen enjeksiyonu ve boya ve antijenin eş zamanlı olarak enjeksiyonu da dahil olmak üzere, kullanılmıştır. Alerjik yanıtların ölçülmesi için bir vasıta olarak intravenöz uygulama boya pasif ve aktif ölçmek için ikinci ve pasif reaksiyonlar 5,9 ters edilebilir çok yönlü bir deneyidir. Sayısız boyalar Tripan Blue, Pontamine Sky Blue, Evans Blue, Geigy Mavi 536 ve Hindistan Mürekkep 5,6,9 dahil alerjik yanıtları, değerlendirmek için kullanılmıştır. % 0.5 Evans mavisi çözeltisi halen deri alerjik yanıtı ölçmek için kullanılan standart bir boyadır. Meydan anafilaktik cevap kısa süreli olduğu; maksimum yoğunluğu, 10 içinde ulaşılır - boya enjeksiyonunun 15 dakika ve boya ne olursa olsun, kullanılan 9 hayvan türlerinin, cebine fazla 30 dakika tatbik edilirse, herhangi bir tepki görülebilir. Boya ekstravazasyon Kantitasyonu özgünıy mavi boya 7-9 ile gösterildiği gibi kabarıklık büyüklüğü ölçülerek elde edilmiştir. Buna ek olarak, granüle mast hücre sayımları, reaksiyon ortamının cilt dokusunun kesilmesi ve 7 mavi toluidin ile lekeleme ile tayin edilebilir. Mast hücreleri, yüksek afinite IgE reseptörü eksprese FcεRI ana yerel hücre popülasyonu olarak mast hücre degranülasyonu, genellikle, deri altı, IgE aracılı alerjik karşılıkları için bir işaretleyici olarak kullanılmaktadır. Doku içine boya ekstravazasyonunu ölçmek için spektrofotometrik teknikler 1990 yılında sıçan 10 ve fare 11 pasif deri anafilaksi (PCA) için geliştirilmiştir. Aşağıda yerel anafilaksi Deney protokolü. Kojima ve bunlar 1 ila uyarlanmış ve allerjik tepkileri ortaya çıkarmak için antijen olarak tavuk yumurtası (OVA) kullanır edildi. Bununla birlikte, istenirse OVA başka antijenler de kullanılabilir. Tahlil sonra vasküler Geçirgenlik değişiklikleri izlemek için Evans Mavi boya kullanırHücre IgE çapraz bağlanması ve histamin salgısını mast nedeniyle meydana y.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="796">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:167px;">Company</td>
			<td style="width:135px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:225px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">BALB/c Mice</td>
			<td style="width:167px;">The Jackson Laboratory</td>
			<td style="width:135px;">651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">PBS pH 7.4</td>
			<td style="width:167px;">Quality Biologic</td>
			<td style="width:135px;">114-058-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">Ovalbumin</td>
			<td style="width:167px;">Sigma</td>
			<td style="width:135px;">A5503-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">Imject Alum</td>
			<td style="width:167px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:135px;">77161</td>
			<td style="width:225px;">Mix thoroughly before use</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">Evans Blue Dye</td>
			<td style="width:167px;">Sigma</td>
			<td style="width:135px;">E2129</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">Formamide</td>
			<td style="width:167px;">Sigma</td>
			<td style="width:135px;">295876</td>
			<td style="width:225px;">99%+ Spectrophotometric grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">Isoflurane, USP</td>
			<td style="width:167px;">Phoenix</td>
			<td style="width:135px;">NDC 57319-474-06</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">1cc Insulin syringes</td>
			<td style="width:167px;">BD</td>
			<td style="width:135px;">329654</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">3/10 cc Insulin syringe with 31G needle</td>
			<td style="width:167px;">Terumo</td>
			<td style="width:135px;">NDC 100861</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">27G Needles</td>
			<td style="width:167px;">BD</td>
			<td style="width:135px;">305109</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">Forceps</td>
			<td style="width:167px;">F.S.T.</td>
			<td style="width:135px;">11000-12</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">Surgical scissors</td>
			<td style="width:167px;">F.S.T.</td>
			<td style="width:135px;">14070-12</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">5ml Polystyrene round-bottom tubes</td>
			<td style="width:167px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:135px;">352058</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">1.5ml Microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:167px;">Medical Supply Partners</td>
			<td style="width:135px;">15-1151</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">15ml Conical tubes</td>
			<td style="width:167px;">BD Falcon</td>
			<td style="width:135px;">352097</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">Flat-bottom 96 well plate</td>
			<td style="width:167px;">Costar</td>
			<td style="width:135px;">3590</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">Scotch tape</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:271px;">RC2 Rodent Anesthesia System</td>
			<td style="width:167px;">VetEquip</td>
			<td style="width:135px;">922100</td>
			<td style="width:225px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:271px;">Vortex Genie 2</td>
			<td style="width:167px;">Scientific Industries</td>
			<td style="width:135px;">SI-0236</td>
			<td style="width:225px;">Model G560 with 3 inch platform</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring local anaphylaxis in mice

Alerjik tepkiler, mast hücreleri ve bazofiller ve vazoaktif ve proenflamatuvar medyatörlerin, bunu takiben de aktivasyonu sonucudur. Bir hassaslaşmış bireyde bir alerjene maruz kalma küçük eritemden hayatı tehdit eden anafilaksi farklılık klinik semptomlara neden olabilirler. Laboratuvarda, çeşitli hayvan modelleri alerjik yanıtları sürüş mekanizmalarını anlamak için geliştirilmiştir. Bu yazıda, lokalize alerjik yanıtları ölçmek için damar geçirgenliği değişiklikleri ölçmek için ayrıntılı bir yöntem açıklanmaktadır. Yerel anafilaksi tahlil, ilk 1920&#39;lerde bildirildi ve Kojima ve arkadaşları tarafından yayınlanan tekniği adapte edilmiştir. 2007 yılında 1. Bu testte, OVA duyarlı farenin araç ile sol kulak ve OVA ile sağ kulakta zorlanmaktadır. Bu Evans Mavisi damardan enjeksiyonu ile takip edilir. On dakika sonra enjekte Evans mavisi, hayvanda damar dışına olan boya ötenazi yapılmış ve birkulaklara formamidde gecede ekstre edilir. Ekstre boyanın absorbans daha sonra bir spektrofotometre ile ölçülür. Bu yöntem güvenilir bir lokal allerjik yanıtın görsel ve ölçülebilir tezahürü sonuçlanır.

Başarıyla tahlil geçirmiş hayvanların deri ve mavi görünür gözleri vardır. PBS duyarlı hayvanlar bu nedenle hem kulaklar beyaz (Şekil 1A) kalmalıdır, PBS veya OVA da tepki olmamalıdır. OVA hassas hayvanlarda PBS meydan alan kulak (sol) tamamen beyaz veya enjeksiyon bölgesinde lokal bir şekilde hafifçe mavi olarak olmalıdır. OVA alan kulak (sağ) bir boya uygulama için (Şekil 1B) sonra 10 dakika boyunca aşamalı olarak koyu mavi olmalıdır. <p class="jove_con...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Local Anaphylaxis in Mice at JoVE.com

Measuring Local Anaphylaxis in Mice

Mast hücreleri ve bazofillerin aktivasyonuyla karakterize alerjik tepkiler, IgE çapraz bağlanması ve proenflamatuar aracıların salınması ile tahrik edilmektedir. Alerjik tepkilerin bir kantitatif olarak değerlendirilmesi allerjen vasküler geçirgenlikte değişiklikleri izlemek için Evans mavisinin kullanılması sureti ile elde edilebilir.

Farelerde Yerel Anafilaksi Ölçme

Allergic responses are the result of the activation of mast cells and basophils, and the subsequent release of vasoactive and proinflammatory mediators. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measuring Calpain Activity in Fixed and Living Cells by Flow Cytometry

Sabit ve Yaşam Hücreler Sitometrisi ile Calpain Aktivitesi Ölçme

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Ile Enfekte Fare Bakteriyel Yük ve Bağışıklık Yanıtları Ölçüm Listeria monocytogenes</em

Listeria monocytogenes (Listeria) is a Gram-positive facultative intracellular pathogen1. Mouse studies typically employ intravenous injection of ...

Measurement of &#947;HV68 Infection in Mice

Farelerde γHV68 Enfeksiyon ölçümü

&gamma;-Herpesviruses (&gamma;-HVs) are notable for their ability to establish latent infections of lymphoid cells1. The narrow host range of human ...

Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice

Fare intralenfatik immünoterapi ve Aşılama

Vaccines are typically injected subcutaneously or intramuscularly for stimulation of immune responses. The success of this requires efficient drainage of ...

Measuring Deformability and Red Cell Heterogeneity in Blood by Ektacytometry

Deformasyon ve kan Ektacytometry tarafından kırmızı hücre heterojenite ölçme

Decreased red cell deformability is characteristic of several disorders. In some cases, the extent of defective deformability can predict severity of ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Timus bağlı ve timus bağımsız immünglobulin izotip yanıt Immunosorbent Assay enzim bağlı kullanarak farelerde karakterizasyonu

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Mouse Body Temperature Measurement Using Infrared Thermometer During Passive Systemic Anaphylaxis and Food Allergy Evaluation

Kızılötesi termometre pasif sistemik anafilaksi ve gıda Anti değerlendirme sırasında kullanarak fare vücut sıcaklık ölçümü

Mouse body temperature measurement is of paramount importance for investigating allergies and anaphylactic symptoms. Rectal probes for temperature ...

Quantification of Atherosclerosis in Mice

Fareler içinde ateroskleroz ölçümü

Cardiovascular disease is the main cause of death in the world. The underlying cause in most cases is atherosclerosis, which is in part a chronic ...

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

Glukoz-6-Fosfat İzomazlarında (G6PI)-Indüklenen RA Farelerde iNKT Hücrelerinin Benimseyici İmmünoterapisi

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

Measuring Phagocytosis of Aspergillus fumigatus Conidia by Human Leukocytes using Flow Cytometry

Measuring Phagocytosis of Aspergillus fumigatus Conidia by Human Leukocytes using Flow Cytometry

Akış Sitometrisi Kullanılarak İnsan Lökositler tarafından Aspergillus fumigatus Conidia Fagositozunun ölçülmesi

Invasive pulmonary infection by the mold Aspergillus fumigatus poses a great threat to immunocompromised patients. Inhaled fungal conidia (spores) are ...