Name: method for the assessment of effects of a range of wavelengths and intensities of red/near-infrared light therapy on oxidative stress in vitro
Uploaded: 2015-03-21T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro at JoVE.com

This work was supported by the Neurotrauma Research Program (Western Australia). This project is funded through the Road Trauma Trust Account, but does not reflect views or recommendations of the Road Safety Council.

1. Оптический Калибровка: Измерение светового выхода <ol><li> Чтобы подготовить световой аппаратурой доставки, подключения широкополосного источника света (например, ксенон или вольфрамовая лампа) к соответствующему источнику питания. Установите коллимирующей линзы перед источни?...

<ol>
	<li>Gutterman, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+and+reactive+oxygen+species+an+evolution+in+function.">Mitochondria and reactive oxygen species an evolution in function.</a> Circulation research. 97, 302-304 (2005).</li><li>Camello-Almaraz, C., Gomez-Pinilla, P. J., Pozo, M. J., Camello, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+reactive+oxygen+species+and+Ca2++signaling.">Mitochondrial reactive oxygen species and Ca2+ signaling.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 291, C1082-C1088 (2006).</li><li>Kowaltowski, A. J., de Souza-Pinto, N. C., Castilho, R. F., Vercesi, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondria+and+reactive+oxygen+species.">Mitochondria and reactive oxygen species.</a> Free Radical Biology and Medicine. 47, 333-343 (2009).</li><li>Coyle, J. T., Puttfarcken, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress,+glutamate,+and+neurodegenerative+disorders.">Oxidative stress, glutamate, and neurodegenerative disorders.</a> Science. 262, 689-695 (1993).</li><li>Doble, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+excitotoxicity+in+neurodegenerative+disease:+implications+for+therapy.">The role of excitotoxicity in neurodegenerative disease: implications for therapy.</a> Pharmacology &amp; therapeutics. 81, 163-221 (1999).</li><li>Hall, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antioxidant+therapies+for+acute+spinal+cord+injury.">Antioxidant therapies for acute spinal cord injury.</a> Neurotherapeutics. 8, 152-167 (2011).</li><li>Jia, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+in+spinal+cord+injury+and+antioxidant-based+intervention.">Oxidative stress in spinal cord injury and antioxidant-based intervention.</a> Spinal Cord. 50, 264-274 (2012).</li><li>Fitzgerald, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Red/near-infrared+irradiation+therapy+for+treatment+of+central+nervous+system+injuries+and+disorders.">Red/near-infrared irradiation therapy for treatment of central nervous system injuries and disorders.</a> Reviews in the Neurosciences. 24, 205-226 (2013).</li><li>Rutar, M., Natoli, R., Albarracin, R., Valter, K., Provis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=670-nm+light+treatment+reduces+complement+propagation+following+retinal+degeneration.">670-nm light treatment reduces complement propagation following retinal degeneration.</a> J Neuroinflammation. 9, 257 (2012).</li><li>Eells, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+photobiomodulation+for+methanol-induced+retinal+toxicity.">Therapeutic photobiomodulation for methanol-induced retinal toxicity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 100, 3439-3444 (2003).</li><li>Begum, R., Powner, M. B., Hudson, N., Hogg, C., Jeffery, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+with+670+nm+light+up+regulates+cytochrome+C+oxidase+expression+and+reduces+inflammation+in+an+age-related+macular+degeneration+model.">Treatment with 670 nm light up regulates cytochrome C oxidase expression and reduces inflammation in an age-related macular degeneration model.</a> PloS one. 8, e57828 (2013).</li><li>Byrnes, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+promotes+regeneration+and+functional+recovery+and+alters+the+immune+response+after+spinal+cord+injury.">Light promotes regeneration and functional recovery and alters the immune response after spinal cord injury.</a> Lasers in surgery and medicine. 36, 171-185 (2005).</li><li>Liang, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photobiomodulation+partially+rescues+visual+cortical+neurons+from+cyanide-induced+apoptosis.">Photobiomodulation partially rescues visual cortical neurons from cyanide-induced apoptosis.</a> Neuroscience. 139, 639-649 (2006).</li><li>Zivin, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+and+safety+of+transcranial+laser+therapy+for+acute+ischemic+stroke.">Effectiveness and safety of transcranial laser therapy for acute ischemic stroke.</a> Stroke. 40, 1359-1364 (2009).</li><li>Lapchak, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcranial+near-infrared+laser+therapy+applied+to+promote+clinical+recovery+in+acute+and+chronic+neurodegenerative+diseases.">Transcranial near-infrared laser therapy applied to promote clinical recovery in acute and chronic neurodegenerative diseases.</a> Expert review of medical devices. 9, 71-83 (2012).</li><li>Chung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nuts+and+bolts+of+low-level+laser+(light)+therapy.">The nuts and bolts of low-level laser (light) therapy.</a> Annals of biomedical engineering. 40, 516-533 (2012).</li><li>Wu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-Level+Laser+Therapy+for+Closed-Head+Traumatic+Brain+Injury+in+Mice:+Effect+of+Different+Wavelengths.">Low-Level Laser Therapy for Closed-Head Traumatic Brain Injury in Mice: Effect of Different Wavelengths.</a> Lasers in surgery and medicine. 44, 218-226 (2012).</li><li>Hashmi, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+low-level+laser+therapy+in+neurorehabilitation.">Role of low-level laser therapy in neurorehabilitation.</a> PM&amp;R. 2, S292-S305 (2010).</li><li>Fitzgerald, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metallothionein-IIA+promotes+neurite+growth+via+the+megalin+receptor.">Metallothionein-IIA promotes neurite growth via the megalin receptor.</a> Experimental Brain Research. 183, 171-180 (2007).</li><li>Fitzgerald, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Near+infrared+light+reduces+oxidative+stress+and+preserves+function+in+CNS+tissue+vulnerable+to+secondary+degeneration+following+partial+transection+of+the+optic+nerve.">Near infrared light reduces oxidative stress and preserves function in CNS tissue vulnerable to secondary degeneration following partial transection of the optic nerve.</a> Journal of neurotrauma. 27, 2107-2119 (2010).</li><li>Ando, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-level+laser+therapy+for+spinal+cord+injury+in+rats:+effects+of+polarization.">Low-level laser therapy for spinal cord injury in rats: effects of polarization.</a> Journal of biomedical. 18, 098002 (2013).</li><li>Lanzafame, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocity+of+exposure+time+and+irradiance+on+energy+density+during+photoradiation+on+wound+healing+in+a+murine+pressure+ulcer+model.">Reciprocity of exposure time and irradiance on energy density during photoradiation on wound healing in a murine pressure ulcer model.</a> Lasers in surgery and medicine. 39, 534-542 (2007).</li><li>Castano, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-level+laser+therapy+for+zymosan+induced+arthritis+in+rats:+Importance+of+illumination+time.">Low-level laser therapy for zymosan induced arthritis in rats: Importance of illumination time.</a> Lasers in surgery and medicine. 39, 543-550 (2007).</li></ol>

Мы успешно приспособлены точное и калиброванного системы доставки света, чтобы обеспечить механизм для изучения оптимизации R / NIR-LT в пробирке. Длина волны и интенсивность параметры R / NIR-LT могут манипулировать точно и эффективно использовать эту систему. Мы установили, что светол?...

Активные формы кислорода (АФК) требуется для ряда сигнальных путей трансдукции и нормальных реакций клеточного метаболизма, в том числе нейропротекции 1. Однако, когда эндогенный антиоксидант механизм не в состоянии контролировать производство АФК, клетки могут поддаваться окислительным стрессом 2,3. После травмы ЦНС, что приводит к повышению в присутствии АФК и окислительного стресса, как полагают, играют существенную роль в прогрессировании повреждения 4,5. Несмотря на широкое ряда стратегий для ослабления окислительного стресса, которые были оценены, не существует в настоящее время нет полностью эффективных, клинически значимые стратегии антиоксидантные для ослабления АФК и связанного с окислительного стресса в клинической практике следующие нейротравме 6. Поэтому ослабление окислительного стресса остается важной целью для терапевтического вмешательства 7. Улучшения следоватьчисле R / NIR-LT были зарегистрированы в широком диапазоне повреждений и заболеваний, включая сокращение размера инфаркта сердечной, почечной и печеночной осложнений во время диабета, дегенерации сетчатки, травмы ЦНС и инсульта 8, возможно, снижая окислительный стресс. Что касается непосредственно повреждения ЦНС, доклинические исследования эффективности 670 нм света показали хорошие эффекты в моделях дегенерации сетчатки 9-11, повреждение спинного мозга 12, гибели нейронов 13. Клинические испытания были проведены для сухой возрастной макулярной дегенерации и в настоящее время инсульта 14, однако результаты этих исследований не выглядят многообещающими, возможно, из-за сбоя использовать эффективное лечение параметров 15. Таким образом, R / NIR-LT не были широко приняты как часть обычной клинической практике в нейротравме, несмотря на то, легка в управлении, неинвазивный и относительно недорогое лечение. Барьеры на пути к клинической перевода включают в себя отсутствие в клраннего понимать механизм действия и отсутствие стандартизованной эффективного 16,17 протокол лечения. Текущий литература о световой терапии показывает множество вариаций в параметрах лечения по отношению к источникам облучения (LED или лазером), длины волны (например, 630, 670, 780, 810, 830, 880, 904nm), общая доза (Дж облучения / на единицу площади), продолжительность (время экспозиции), сроки (до или после оскорблять), частота лечения и способ родоразрешения (импульсный или непрерывный) 8. Изменчивость параметров обработки между исследованиями делает сравнение трудным и внесла свой ​​вклад в скептицизм в отношении эффективности 16. Таким образом, оптимизация R / NIR-LT Очевидно, что необходимо, с систем клеточных культур, способных обеспечивать механизм высокопроизводительного скрининга необходимо сравнить несколько переменных. Однако есть несколько коммерчески доступных осветительные системы, которые могут обеспечить достаточную гибкость и контроль над ваvelength и интенсивность выполнять такие эксперименты по оптимизации. Коммерчески доступные устройства СИД, как правило, не способны доставить несколько длин волн или интенсивности, в результате чего исследователей, использующих несколько светодиодных устройств от разных производителей, которые могут меняться не только в интенсивности, но и спектр волны излучаемого света. Мы решили эту проблему путем использования широкополосного ксеноновые источник света фильтруют через узкополосный интерференционных фильтров, тем самым создавая диапазоне длин волн и флюенсах света, что позволяет близко, точный контроль параметров R / NIR-LT. Важно отметить, что терапевтическая доза лечения определяется число фотонов, взаимодействующих с photoacceptor (хромофора), который, в случае R / NIR-LT является предполагаемым быть цитохром с оксидазы (COX) 18. Энергия фотона доставлен изменяется с длиной волны; это означает, равные дозы энергии на различных длинах волн будет комценится из различного числа фотонов. Таким образом, свет, испускаемый из устройства калибруют, чтобы излучать одинаковое количество фотонов для каждого из выбранных длин волн для тестирования. Мы разработали систему, которая может быть использована для доставки R / NIR-LT в диапазоне длин волн и интенсивностей в клетки в пробирке и продемонстрировал способность измерять воздействие при поставке R / NIR-LT на продукции АФК в клетках, подвергнутых глутамат стресс.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>OxiSelect Intracellular ROS Assay Kit (Green Fluorescence)</td>
			<td>Cell Biolabs</td>
			<td>STA-342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amplex UltraRed Reagent</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>A36006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>300 Watt Xenon Arc Lamp</td>
			<td>Newport Corporation</td>
			<td>6258</td>
			<td>Very intense light source, do not look directly into the lamp. Ensure there is sufficient cooling to the lamp whilst it is switched on</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USB4000-FL Fluorescence Spectrometer</td>
			<td>Ocean Optics</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CC-3-UV Cosine Corrector for Emission Collection</td>
			<td>Ocean Optics</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200&#956;m diameter quartz fibre optic</td>
			<td>Ocean Optics</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SpectraSuite Spectroscopy Platform</td>
			<td>Ocean Optics</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2300 EnSpire Multimode Plate Reader</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce BCA Protein Assay Kit</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>23225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td>Acute toxicity, wear gloves when handling.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamic acid monosodium salt hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>142-47-2 (anhydrous)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pheochromocytoma rat adrenal medulla (PC12) cells</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>CRL-2522</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI1640) Media</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875-119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, certified, heat inactivated, US origin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10082-147</td>
			<td>Warm to 37&#176;C in water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse Serum, New Zealand origin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16050-122</td>
			<td>Warm to 37&#176;C in water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX Supplement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050-061</td>
			<td>Warm to 37&#176;C in water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mM Sodium Pyruvate</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11360-070</td>
			<td>Warm to 37&#176;C in water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Warm to 37&#176;C in water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100X MEM Non-Essential Amino Acids Solution</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140-050</td>
			<td>Warm to 37&#176;C in water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retinal Muller (rMC1) cells</td>
			<td>University of California, San Diego</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965-118</td>
			<td>Warm to 37&#176;C in water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75cm2 Flasks</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>B4-BE-353136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine hydrobromide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>25988-63-0</td>
			<td>Aliquot and store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s Balanced Salt Solution (HBSS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14025-134</td>
			<td>Warm to 37&#176;C in water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-049</td>
			<td>Warm to 37&#176;C in water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin Mouse Protein, Natural</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>23017-015</td>
			<td>Aliquot and store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X Neurobasal Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21103-049</td>
			<td>Warm to 37&#176;C in water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Solution, 0.4%</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>165U Papain</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cysteine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>W326305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 96 well plates, clear bottom, black</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS3603-48EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar Clear Polystyrene 96-Well Plates Untreated; Well shape: Round; Sterile.</td>
			<td>Costar</td>
			<td>07-200-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seesaw Rocker</td>
			<td>Standard lab epuipment</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Standard lab epuipment</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral Density Filter Paper (0.3)</td>
			<td>THORLABS</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>442nm Bandpass Filter</td>
			<td>THORLABS</td>
			<td>FL441.6-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>550nm Bandpass Filter</td>
			<td>THORLABS</td>
			<td>FB550-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>670nm Bandpass Filter</td>
			<td>THORLABS</td>
			<td>FB670-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>810nm Bandpass Filter</td>
			<td>THORLABS</td>
			<td>FB810-10e</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unmounted &#216;25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.1)</td>
			<td>THORLABS</td>
			<td>NE01B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unmounted &#216;25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.2)</td>
			<td>THORLABS</td>
			<td>NE02B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unmounted &#216;25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.3)</td>
			<td>THORLABS</td>
			<td>NE03B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unmounted &#216;25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.5)</td>
			<td>THORLABS</td>
			<td>NE05B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unmounted &#216;25 mm Absorptive Neutral Density Filters (0.6)</td>
			<td>THORLABS</td>
			<td>NE06B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unmounted &#216;25 mm Absorptive Neutral Density Filters (1.0)</td>
			<td>THORLABS</td>
			<td>NE10B</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

method for the assessment of effects of a range of wavelengths and intensities of red/near-infrared light therapy on oxidative stress in vitro

Красный / около инфракрасный свет терапия (R / NIR-LT), с которым выступил лазерном или светоизлучающий диод (LED), улучшает функциональные и морфологические результаты в диапазоне центральная система повреждений нервной в естественных условиях, возможно, за счет снижения окислительного стресса. Тем не менее, влияние R / NIR-LT на окислительный стресс, как было показано варьироваться в зависимости от длины волны и интенсивности облучения. Исследования, сравнивающие параметры лечения не хватает, из-за отсутствия коммерчески доступных устройств, которые обеспечивают несколько длин волн или интенсивности, подходящие для высокой пропускной положить в пробирке исследования оптимизации. Этот протокол описан способ доставки света в диапазоне длин волн и интенсивности для оптимизации терапевтических доз, необходимых для данной модели травмы. Мы предположили, что метод доставки света, в которых могут быть легко изменены длины волны и интенсивности параметры, может облегчить определение оптимального дозы R / NIR-LT для снижения реактивных форм кислорода(ROS) в пробирке. Некогерентное ксеноновые фары фильтруют через узкополосных интерференционных фильтров, чтобы доставить различные длины волн (в центре длины волн 440, 550, 670 и 810nm) и флюенсы (8,5 × 10 -3 до 3,8 × 10 -1 Дж / ​​см 2) света в культивируемых клетках. Светоотдача из устройства калибруют, чтобы излучать соответствующие терапевтически, равные квантовых дозы света на каждой длине волны. Активные формы были обнаружены в глутамат подчеркнул клетки, обработанные с учетом, используя DCFH-DA и H 2 O 2 чувствительных флуоресцентных красителей. Мы успешно доставлено свет в диапазоне физиологически и терапевтически соответствующих длин волн и интенсивностей, в культивируемых клетках, подвергшихся воздействию глутамата в качестве модели повреждения ЦНС. В то время как флюенсами R / NIR-LT, используемых в данном исследовании не оказывают влияния на ROS, генерируемого культивируемых клеток, способ доставки света применимо к другим систEMS включая изолированные митохондрии или более физиологически соответствующие органотипической модели ломтик культура, и может быть использован для оценки воздействия на целый ряд критериев исхода окислительного метаболизма.

Выход света доставлен на длине волны 670 нм была откалибрована с помощью фильтры нейтральной плотности, чтобы облучать клетки с диапазоном плотности энергии, охватывающих дозу 670 нм света было показано ранее, полезными в естественных условиях (0,3 Дж / ​​см 2) 20. По мере увеличен...

Watch this Scientific Journal Video about Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro at JoVE.com

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Non-coherent Xenon light was passed through narrow-band interference and neutral density filters to deliver light of varying wavelength and intensity to cultured cells. This protocol was used to assess the effects of red/near-infrared light therapy on production of reactive species in vitro: no effects were observed using the tested parameters.

Метод оценки воздействия диапазоне длин волн и интенсивностей красный / ближней инфракрасной световой терапии на окислительного стресса<em&gt; In Vitro</em

Red/near-infrared light therapy (R/NIR-LT), delivered by laser or light emitting diode (LED), improves functional and morphological outcomes in a range of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

A Behavioral Assay to Measure Responsiveness of Zebrafish to Changes in Light Intensities 

Поведенческие Пробирной для измерения Отзывчивость данио рерио на изменения в интенсивности света

The optokinetic reflex (OKR) is a basic visual reflex exhibited by most vertebrates and plays an important role in stabilizing the eye relative to the ...

Biochemical Titration of Glycogen In vitro

Biochemical Titration of Glycogen In vitro

Биохимический Титрование гликогена<em&gt; В пробирке</em

Glycogen is the main energetic polymer of glucose in vertebrate animals and plays a crucial role in whole body metabolism as well as in cellular ...

Analysis of Oxidative Stress in Zebrafish Embryos

Анализ окислительного стресса у эмбрионов данио рерио

High levels of reactive oxygen species (ROS) may cause a change of cellular redox state towards oxidative stress condition. This situation causes ...

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

Количественное эндотелиальных клеток адгезивностью<em&gt; In Vitro</em

One of the cardinal processes of inflammation is the infiltration of immune cells from the lumen of the blood vessel to the surrounding tissue. This ...

Gap Junctional Intercellular Communication: A Functional Biomarker to Assess Adverse Effects of Toxicants and Toxins, and Health Benefits of Natural Products

Gap Junctional межклеточной коммуникации: Функциональная биомаркеров для оценки неблагоприятного воздействия токсикантов и токсинами, и Польза для здоровья натуральных продуктов

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction ...

Filtration Isolation of Nucleic Acids:  A Simple and Rapid DNA Extraction Method

Фильтрация Выделение нуклеиновых кислот: Простой и быстрый ДНК Метод экстракции

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad ...

Analysis of the Gap Junction-dependent Transfer of miRNA with 3D-FRAP Microscopy

Анализ зависимой от разрыва связи переноса miRNA с помощью 3D-FRAP-микроскопии

Small antisense RNAs, like miRNA and siRNA, play an important role in cellular physiology and pathology and, moreover, can be used as therapeutic agents ...

A Method to Assess Bacteriocin Effects on the Gut Microbiota of Mice

Метод оценки бактериоциновых эффектов на кишечную микробиоту мышей

Very intriguing questions arise with our advancing knowledge on gut microbiota composition and the relationship with health, particularly relating to the ...

Investigating the Detrimental Effects of Low Pressure Plasma Sterilization on the Survival of Bacillus subtilis Spores Using Live Cell Microscopy

Investigating the Detrimental Effects of Low Pressure Plasma Sterilization on the Survival of Bacillus subtilis Spores Using Live Cell Microscopy

Расследование пагубные последствия низкого давления плазмы стерилизации на выживание Bacillus subtilis споры с помощью Live клеток микроскопии

Plasma sterilization is a promising alternative to conventional sterilization methods for industrial, clinical, and spaceflight purposes. Low pressure ...

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Средне-пропускная способность, отбор проб для оценки воздействия на Ca2 +-сигнализации и Акросома реакции в человеческой спермы

Ca2+-signaling is essential to normal sperm cell function and male fertility. Similarly, the acrosome reaction is vital for the ability of a human sperm ...