Name: primer for immunohistochemistry on cryosectioned rat brain tissue: example staining for microglia and neurons
Uploaded: 2015-05-12T13:00:00
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The authors would like to thank Mr. Ryan Hart and Mr. Arriz Lucas for their invaluable feedback on this communication. This work was supported by NIH NINDS R01 NS065052 and Phoenix Children&#8217;s Hospital Mission Support Funds.

नोट: सभी प्रक्रियाओं एरिजोना विश्वविद्यालय की संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) के अनुपालन में किए गए। की सिफारिश की सामग्री और उपकरणों की एक सूची तालिका 1 में पाया जा सकता है। 1....

<ol>
	<li>Marrack, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemistry+of+antigens+and+antibodies.">Chemistry of antigens and antibodies.</a> Nature. 134, 468-469 (1934).</li><li>Coons, A. H., Creech, H. J., Jones, R. N., Berliner, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+demonstration+of+pneumococcal+antigen+in+tissues+by+the+use+of+fluorescent+antibody.">The demonstration of pneumococcal antigen in tissues by the use of fluorescent antibody.</a> J Immunol. 45, 159-170 (1942).</li><li>Marshall, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+adrenocorticotropic+hormone+by+histochemical+and+immunochemical+methods.">Localization of adrenocorticotropic hormone by histochemical and immunochemical methods.</a> The Journal of experimental medicine. 94, 21-30 (1951).</li><li>Mellors, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histochemical+demonstration+of+the+in+vivo+localization+of+antibodies:+antigenic+components+of+the+kidney+and+the+pathogenesis+of+glomerulonephritis.">Histochemical demonstration of the in vivo localization of antibodies: antigenic components of the kidney and the pathogenesis of glomerulonephritis.</a> The journal of histochemistry and cytochemistry : official journal of the Histochemistry Society. 3, 284-289 (1955).</li><li>Nakane, P. K., Pierce, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enzyme-labeled+antibodies:+preparation+and+application+for+the+localization+of+antigens.">Enzyme-labeled antibodies: preparation and application for the localization of antigens.</a> The journal of histochemistry and cytochemistry : official journal of the Histochemistry Society. 14, 929-931 (1966).</li><li>Avrameas, S., Uriel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+of+antigen+and+antibody+labelling+with+enzymes+and+its+immunodiffusion+application.">Method of antigen and antibody labelling with enzymes and its immunodiffusion application.</a> Comptes rendus hebdomadaires des seances de l'Academie des sciences. Serie D: Sciences naturelles. 262, 2543-2545 (1966).</li><li>Cuello, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Immunohistochemistry. , (1983).</li><li>Junqueira, L. C. U., Mescher, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Junqueira's basic histology : text and atlas. , (2013).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents.">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2012).</li><li>Christensen, N. K., Winther, L., Kumar, G. L., Rudbeck, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Education Guide: Immunohistochemical (IHC) staining methods. , 103-108 (2009).</li><li>Wang, G., Achim, C. L., Hamilton, R. L., Wiley, C. A., Soontornniyomkij, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tyramide+signal+amplification+method+in+multiple-label+immunofluorescence+confocal+microscopy).">Tyramide signal amplification method in multiple-label immunofluorescence confocal microscopy).</a> Methods. 18, 459-464 (1999).</li><li>Feldengut, S., Del Tredici, K., Braak, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paraffin+sections+of+70-100+mum:+a+novel+technique+and+its+benefits+for+studying+the+nervous+system.">Paraffin sections of 70-100 mum: a novel technique and its benefits for studying the nervous system.</a> Journal of neuroscience methods. 215, 241-244 (2013).</li></ol>

इस संचार के समग्र लक्ष्य पाठक को immunohistochemistry के प्रक्रियाओं को शुरू करने की थी। इस के लिए, Iba1 और अखिल neuronal एंटीजन के साथ डबल लेबलिंग का उदाहरण microglia और perfused paraformaldehyde में न्यूरॉन्स निरीक्षण करने के लिए, सूक्रोज cryoprotected, c...

<html> Immunohistochemistry ब्याज की एंटीजन को विशेष रूप से जो बाँध प्राथमिक एंटीबॉडी का उपयोग करके ऊतक वर्गों में एंटीजन (यानी प्रोटीन) का पता लगाने के लिए एक प्रक्रिया है। वह एंटीबॉडी महान विशिष्टता 1 के साथ एंटीजन स्थानीय बनाना सकता है कि निर्धारित जब Immunohistochemistry 1934 में जे आर Marrack ने बीड़ा उठाया था। शुरू में 1942, immunohistochemistry कल्पना करने के लिए फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी का उपयोग पढ़ाई के लिए इन विट्रो में पहले से कुछ विवो histochemical अध्ययन में पहली बार 4 प्रकाशित किया गया था, जिसके बाद 2,3, प्रकाशित किए गए थे। 1960 के दौरान, तीन दशकों immunohistochemical विधियों की स्थापना के बाद, एंजाइम संयुग्मित एंटीबॉडी माध्यमिक अभिकर्मकों के रूप में इस्तेमाल किया जाने लगा। इन तरीकों को एक साथ और स्वतंत्र रूप से फ्रांस और अमेरिका 5,6 में विकसित किए गए। आज, एंटीबॉडी की एक विस्तृत सरणी immunohistochemistry के अध्ययनों से 7 के लिए अनंत संभावनाओं प्रदान करता है। &quot;&gt; इस पत्राचार के समग्र लक्ष्य immunohistochemical धुंधला में एक संक्षिप्त परिचय प्रदान करने के लिए है, यह इस तकनीक के लिए एक व्यापक और विस्तृत समीक्षा के होने का मतलब नहीं है उल्लिखित विधि में, दो एंटीजन के लिए immunohistochemical तकनीक microglia के लिए (मार्कर प्रस्तुत किया है और कर रहे हैं। perfused paraformaldehyde के धुंधला के लिए न्यूरॉन्स), सूक्रोज cryoprotected, cryosectioned चूहे के मस्तिष्क। immunohistochemical धुंधला पृष्ठभूमि धुंधला को कम करने के लिए बाध्य अविशिष्ट प्रतिजन रोकने के साथ शुरू होता है। इसके बाद, प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन के ऊतकों में एक विशिष्ट प्रतिजन के लिए बाध्य करने के लिए अनुमति देता है। प्राथमिक एंटीबॉडी के बाद, एक और एंटीबॉडी, माध्यमिक एंटीबॉडी में कहा, एक संयुग्मित दृश्य संकेत से 8 प्राथमिक एंटीबॉडी लिंक करने के लिए लागू किया जाता है। माध्यमिक एंटीबॉडी प्राथमिक एंटीबॉडी उठाया गया था जिसमें प्रजातियों के लिए विशिष्ट इम्युनोग्लोबुलिन जी (आईजीजी) डोमेन लक्ष्य। माध्यमिक एंटीबॉडी संकेत amplifies प्राथमिक एंटीबॉडी के टी के फैब क्षेत्रों के बाद सेप्राथमिक एंटीबॉडी के आईजीजी डोमेन पर कई साइटों के लिए वह माध्यमिक एंटीबॉडी बाँध। या तो माध्यमिक एंटीबॉडी के एफ सी क्षेत्रों संयुग्मित एंजाइम या फ्लोरोसेंट अणु दृश्य सक्षम। उदाहरण के लिए, एक खरगोश विरोधी Iba1 प्राथमिक एंटीबॉडी Iba1 के लिए विशिष्ट एक खरगोश आईजीजी अणु है। गधा विरोधी खरगोश आईजीजी एक माध्यमिक एंटीबॉडी के रूप में लागू किया जाता है, यह पहचान और खरगोश विरोधी Iba1 आईजीजी के कई क्षेत्रों (चित्रा 1 देखें) के लिए बाध्य होगा। गधा एंटीबॉडी विभिन्न तरीकों से देखे जा सकते हैं। इस पत्राचार फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी द्वारा दृश्य के लिए, प्राथमिक एंटीबॉडी पहचानता है जो माध्यमिक एंटीबॉडी, संयुग्मित एक फ्लोरोफोरे का पता लगाने पर केंद्रित है। फ्लोरोसेंट immunohistochemistry के अलावा, इस तरह हेक्स्ट या DAPI के रूप में एक परमाणु दाग ​​सभी नाभिक कल्पना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। <img alt="चित्र 1" src="/files/ftp_upload/52293/52293fig1highres.jpg" /> चित्रा 1: SCHप्रत्यक्ष बनाम अप्रत्यक्ष एंटीबॉडी लेबलिंग तकनीकों का ematic प्रतिनिधित्व। एंटीबॉडी ब्याज की प्रतिजन करने के लिए बाध्य है और प्राथमिक एंटीबॉडी की प्रजातियों के खिलाफ उठाया माध्यमिक एंटीबॉडी से परिलक्षित किया जा सकता है। इस तकनीक दृश्य (ए) के लिए प्रवर्धन और थपका के लिए avidin बायोटिन परिसर (एबीसी) का उपयोग किया जा सकता है या एक सीधे संयुग्मित फ्लोरोसेंट माध्यमिक एंटीबॉडी (बी)। वैकल्पिक रूप से, प्राथमिक एंटीबॉडी सीधे बायोटिन या एक फ्लोरोफोरे (सी) सहित कई अलग अलग टैग, साथ संयुग्मित किया जा सकता है। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52293/52293fig1large.jpg" target="_blank">इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।</a> (थपका; आंकड़े 1 और देखना 2) immunohistochemical धुंधला के दृश्य के लिए एक वैकल्पिक तरीका 3,3&#39;-diaminobenzidine tetrahydrochloride का उपयोग करता है। यह एक biotinylated का उपयोग करके प्रतिदीप्ति से अलग है याउज्ज्वल क्षेत्र माइक्रोस्कोपी के तहत दिख रहा है कि एक वेग थपका कन्वर्ट करने के लिए एक एंजाइम प्रदान करता है जो घोड़े-मूली peroxidase (एचआरपी) संयुग्मित माध्यमिक एंटीबॉडी,। एक एकल प्रतिजन ब्याज की है या धुंधला लंबे समय तक चलने होना आवश्यक है जहां उदाहरणों में, थपका फ्लोरोसेंट धुंधला की तुलना में अधिक उपयुक्त हो सकता है। हालांकि, थपका धुंधला दो परमाणु एंटीजन ब्याज की हैं, खासकर अगर एक से अधिक मार्करों के बीच भेदभाव के लिए अच्छी तरह से अनुकूल नहीं है। थपका माल और प्रोटोकॉल संशोधनों के बारे में जानकारी के लिए, 1 टेबल से परामर्श करें। वैकल्पिक रूप से, नाइट्रो नीले tetrazolium क्लोराइड / 5-ब्रोमो-4-क्लोरो-3-indolyl फॉस्फेट (एनबीटी / BCIP) माध्यमिक संयुग्मित एक alkaline फॉस्फेट (एपी) कल्पना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है एंटीबॉडी। <img alt="चित्र 2" src="/files/ftp_upload/52293/52293fig2highres.jpg" /> चित्रा 2:। निकल बढ़ाया थपका एकल लेबल चूहे के मस्तिष्क ऊतक वर्गों के प्रतिनिधि छवियों चूहा मस्तिष्क seअकेले microglia या न्यूरॉन्स के लंबे समय तक चलने के विश्लेषण के लिए अनुमति देते हैं Iba1 (ए) और अखिल neuronal (बी) के लिए निकल बढ़ाया थपका के साथ चिह्नित कर रहे हैं जो ctions। स्केल बार 20 माइक्रोन। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52293/52293fig2large.jpg" target="_blank">इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।</a> एक ऊतक के भीतर ब्याज की प्रतिजन की अनुमानित बहुतायत विश्लेषण किया जा रहा विचार करना चाहिए। अप्रत्यक्ष तरीकों (ऊपर वर्णित है) कम बहुतायत के साथ लक्ष्य के लिए उपयोगी होते हैं। ब्याज की प्रतिजन उच्च बहुतायत में होता है, तो सीधे तरीके से लागू किया जा सकता है। सीधे तरीके सीधे एक दृश्य संकेत करने के लिए संयुग्मित है कि एक प्राथमिक एंटीबॉडी शामिल है, और इस तरह कोई माध्यमिक एंटीबॉडी की आवश्यकता है। इस विधि को धुंधला प्रक्रिया को सरल है, लेकिन अप्रत्यक्ष तरीकों से हासिल की प्रवर्धन समाप्त। एक सीधे संयुग्मित प्राथमिक एंटीबॉडी का उपयोग भी माध्यमिक एंटीबॉडी के पार जेट समाप्तजब डबल लेबलिंग। यह संचार Iba1 और अखिल neuronal (1 टेबल में विवरण) के साथ डबल लेबलिंग के लिए प्रोटोकॉल का विवरण है। Iba1 डालियां फैला हुआ, अति डालियां फैला हुआ, सक्रिय, अमीबीय, और रॉड सहित कई सक्रियण राज्यों में microglia दाग। अखिल neuronal दाग न्यूरोनल एक्सोन, डेन्ड्राइट, और सोमा। Iba1 सबसे microglia और अखिल neuronal लक्ष्य न्यूरॉन के धब्बे के बाद से, दाग के इस संयोजन microglia-न्यूरॉन बातचीत की एक व्यापक समझ पाने में उपयोगी है। संक्षेप में, immunohistochemical धुंधला एंटीबॉडी का चयन सावधानी पर निर्भर करता है। अनुसंधान प्रश्न अधिक विशिष्ट हो जाता है, वैकल्पिक एंटीजन को उठाया एंटीबॉडी वांछित हो सकता है। एक विशिष्ट microglial सक्रियण राज्य लक्षित करने के लिए, एक नहीं बल्कि Iba1 की तुलना में, CD45 या CD68 एंटीबॉडी का उपयोग करने के लिए चुन सकते हैं। इसके अलावा, चूहों के साथ काम करने में, F4 / 80 आवश्यक परिणाम प्रदान कर सकते हैं। इसी तरह, न्यूरोनल तत्व विशेष रूप से एंटीबॉडी आरए के साथ लक्षित किया जा सकतानाभिक के खिलाफ ised, Synapse (पूर्व या बाद), अक्षतंतु, और विकास शंकु। इसके अतिरिक्त, न्यूरॉन (डबल cortin, NeuN) वर्ष की आयु में अंतर है, जो अन्य मार्कर, और neuronal उत्थान (जीएपी-43) हैं।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1171">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:399px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:132px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:523px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fisherbrand Superfrost Plus Glass Slides&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-034-979</td>
			<td>Used for tissue mounting (1.2.2)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:399px;">Oven</td>
			<td style="width:132px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">51028112</td>
			<td>Used for tissue drying (2.1.1)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:399px;">Mini Pap pen</td>
			<td style="width:132px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">00-8877</td>
			<td>Used in step 2.2.2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:399px;">Andwin Scientific Tissue-tek Slide Staining Dish</td>
			<td style="width:132px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">22-149-429</td>
			<td>Used for all washes during staining (2.2), as well as the Hoechst step (2.2.8)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:399px;">Kimwipes</td>
			<td style="width:132px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">06-666-A</td>
			<td>Used for drying slides (2.2)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:399px;">Black Staining Box</td>
			<td style="width:132px;">Ted Pella</td>
			<td style="width:119px;">21050</td>
			<td>Used for blocking and staining steps (2.2)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:399px;">Normal Donkey Serum</td>
			<td style="width:132px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">50-413-253</td>
			<td>Used for block and antibody incubation (2.2)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:399px;">Mouse &#945;-Pan-neuronal</td>
			<td style="width:132px;">Millipore</td>
			<td style="width:119px;">MAB2300</td>
			<td>Used for primary antibody (2.2.4)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:399px;">Rabbit &#945;-Iba1</td>
			<td style="width:132px;">Wako Chemical</td>
			<td style="width:119px;">019-19741</td>
			<td>Used for primary antibody (2.2.4)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:399px;">Donkey &#945;-Rabbit 594</td>
			<td style="width:132px;">Jackson ImmunoResearch</td>
			<td style="width:119px;">711-585-152</td>
			<td>Used for secondary antibody (2.2.6)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:399px;">Donkey &#945;-mouse 488</td>
			<td style="width:132px;">Jackson ImmunoResearch</td>
			<td style="width:119px;">715-545-150</td>
			<td>Used for secondary antibody (2.2.6)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:399px;">Caterer&#39;s foil</td>
			<td style="width:132px;">Any</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td>Used in steps 1.2.2 and 2.3.2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:399px;">Fluoromount-G</td>
			<td style="width:132px;">Southern Biotech</td>
			<td style="width:119px;">0100-01</td>
			<td>Used for coverslipping (2.2.8)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:399px;">Coverslips</td>
			<td style="width:132px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">12544E</td>
			<td>Used for coverslipping (2.2.8)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:399px;">Clear Nail Polish&#160;</td>
			<td style="width:132px;">Any</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td>Used for coverslipping (2.2.8)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:399px;">Axio Observer.Z1 and LSM 710 (laser scanning, confocal)</td>
			<td style="width:132px;">Carl Zeiss</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td>Used for imaging (3)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:399px;">Axioskop A2</td>
			<td style="width:132px;">Carl Zeiss</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td>Used for imaging (3)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:399px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CitriSolv&#160;</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td></td>
			<td>For DAB protocol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ABC</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>PK-6100</td>
			<td>For DAB protocol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DAB Peroxidase kit</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>SK-4100</td>
			<td>For DAB protocol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Biotinylated horse &#945;-rabbit IgG</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>BA-1100</td>
			<td>For DAB protocol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Biotinylated horse &#945;-mouse IgG</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>BA-2001</td>
			<td>For DAB protocol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">30% Hydrogen Peroxide</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>H325-500</td>
			<td>For DAB protocol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:399px;">Wheaton slide racks and staining dishes</td>
			<td style="width:132px;">TedPella</td>
			<td style="width:119px;">21043</td>
			<td>For DAB protocol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:399px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Masterflex perfusion pump and tubing</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td></td>
			<td>Used for perfusion (1.1.1 and 1.1.2)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Andwin scientific tissue-tek CRYO-OCT compound (case of 12)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-373-65</td>
			<td>Used for tissue freezing (1.2.1)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:399px;">Thermometer (-50 to 50 C)&#160;</td>
			<td style="width:132px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">15-059-228</td>
			<td>Used for tissue freezing (1.2.1)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cryostat</td>
			<td>Leica&#160;</td>
			<td>CM3500S</td>
			<td>Used for tissue sectioning (1.2.2)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:399px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Staining Dish, Plastic with 2 Lids</td>
			<td>Grale Scientific</td>
			<td>353</td>
			<td>For antigen retrival</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">20 Place Staining Rack, Slides Horizontal</td>
			<td>Grale Scientific</td>
			<td>354</td>
			<td>For antigen retrival</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microwave</td>
			<td>Any</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For antigen retrival</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

primer for immunohistochemistry on cryosectioned rat brain tissue: example staining for microglia and neurons

Immunohistochemistry बगल में एंटीजन की उपस्थिति, स्थान, और रिश्तेदार बहुतायत का पता लगाने के लिए एक व्यापक रूप से इस्तेमाल की तकनीक है। इस प्रारंभिक स्तर प्रोटोकॉल microglia और एक उदाहरण के रूप में न्यूरोनल तत्वों के लिए मार्कर का उपयोग, अभिकर्मकों, उपकरण, और कृंतक मस्तिष्क के ऊतकों की immunohistochemical धुंधला पूरा करने के लिए आवश्यक तकनीक का वर्णन है। विशेष रूप से, इस अखबार क्रमशः Iba1 और अखिल neuronal, के लिए immunohistochemistry के माध्यम से microglia और न्यूरॉन्स की फ्लोरोसेंट दृश्य के लिए एक कदम दर कदम प्रोटोकॉल है। प्रतिदीप्ति डबल लेबलिंग सही-सही प्रकार की कोशिकाओं, रिसेप्टर्स, ligands के बीच बातचीत का निरीक्षण करने के अवसर प्रदान करने, एक ही नमूना के भीतर अनेक प्रोटीन का स्थानीयकरण के लिए विशेष रूप से उपयोगी है, और / या एक दूसरे के साथ ही प्रोटीन सह के संबंध में बाह्य मैट्रिक्स एक एकल कोशिका के भीतर स्थानीयकरण। अन्य दृश्य तकनीकों के विपरीत, प्रतिदीप्ति immunohistochemistry के धुंधला तीव्रता में कमी आ सकती हैउचित सावधानियों लिया जाता है, जब तक धुंधला निम्नलिखित महीने के लिए सप्ताह। प्रतिदीप्ति अधिक समय कुशल है और दो या अधिक के बीच और अधिक सटीक भेदभाव के लिए अनुमति देता है के रूप में इस सीमा के बावजूद, कई अनुप्रयोगों में प्रतिदीप्ति डबल लेबलिंग, ऐसे 3,3&#39;-diaminobenzidine tetrahydrochloride (थपका) या alkaline फॉस्फेट (एपी) के रूप में विकल्प से अधिक पसंद है मार्करों। चर्चा समस्या निवारण युक्तियों और सफलता को बढ़ावा देने के लिए सलाह भी शामिल है।

यह धुंधला प्रोटोकॉल microglia fluorescently 594 चैनल (लाल) में लेबल है कि चूहे के मस्तिष्क ऊतक वर्गों में परिणाम और 488 चैनल में लेबल न्यूरॉन्स (हरा, चित्रा 4 देखें)। एक परमाणु दाग ​​किया गया है, तो यह 405 चैनल (नीला) में द?...

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Primer for Immunohistochemistry on Cryosectioned Rat Brain Tissue: Example Staining for Microglia and Neurons

Microglia और न्यूरॉन्स के लिए उदाहरण धुंधला: Cryosectioned चूहे के मस्तिष्क के ऊतकों पर immunohistochemistry के लिए प्राइमर

This introductory level protocol describes the reagents, equipment, and techniques required to complete immunohistochemical staining of rodent brains, using markers for microglia and neuronal elements as an example.

Immunohistochemistry is a widely used technique for detecting the presence, location, and relative abundance of antigens in situ. This introductory level ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

DiOLISTIC Labeling of Neurons from Rodent and Non-human Primate Brain Slices

कृंतक से न्यूरॉन्स और गैर मानव प्राइमेट मस्तिष्क स्लाइसें के DiOLISTIC लेबल

DiOLISTIC staining uses the gene gun to introduce fluorescent dyes, such as DiI, into neurons of brain slices (Gan et al., 2009; O'Brien and Lummis, 2007; ...

Vibrodissociation of Neurons from Rodent Brain Slices to Study Synaptic Transmission and Image Presynaptic Terminals

कृंतक मस्तिष्क स्लाइसें से न्यूरॉन्स की Vibrodissociation Synaptic पारेषण और छवि presynaptic टर्मिनल अध्ययन करने के लिए

Mechanical dissociation of neurons from the central nervous system has the advantage that presynaptic boutons remain attached to the isolated neuron of ...

Wholemount Immunohistochemistry for Revealing Complex Brain Topography

खुलासा परिसर मस्तिष्क टोपोग्राफी के लिए wholemount immunohistochemistry

The repeated and well-understood cellular architecture of the cerebellum make it an ideal model system for exploring brain topography. Underlying its ...

Immunohistochemical Analysis in the Rat Central Nervous System and Peripheral Lymph Node Tissue Sections

चूहा केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में Immunohistochemical विश्लेषण और परिधीय लिम्फ नोड ऊतक वर्गों

Immunohistochemistry (IHC) provides highly specific, reliable and attractive protein visualization. Correct performance and interpretation of an IHC-based ...

Simultaneous Electrophysiological Recording and Calcium Imaging of Suprachiasmatic Nucleus Neurons

Simultaneous electrophysiological and fluorescent imaging recording methods were used to study the role of changes of membrane potential or current in ...

Preparation of Non-human Primate Brain Tissue for Pre-embedding Immunohistochemistry and Electron Microscopy

पूर्व embedding Immunohistochemistry और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए गैर मानव प्राइमेट मस्तिष्क के ऊतकों की तैयारी

Despite all the technological advances at the light microscopy&#160;level, electron microscopy remains the only tool in neuroscience to examine and ...

Isolation and RNA Extraction of Neurons, Macrophages and Microglia from Larval Zebrafish Brains

अलगाव और आरएनए लार्वा Zebrafish दिमाग से न्यूरॉन्स, मैक्रोफेज और Microglia का निष्कर्षण

To gain a detailed understanding of the role of different CNS cells during development or the establishment and progression of brain pathologies, it is ...

Quantifying Microglia Morphology from Photomicrographs of Immunohistochemistry Prepared Tissue Using ImageJ

ImageJ का उपयोग Immunohistochemistry तैयार ऊतक के Photomicrographs से Microglia आकृति विज्ञान बढ़ाता

Microglia are brain phagocytes that participate in brain homeostasis and continuously survey their environment for dysfunction, injury, and disease. As ...

Obtaining Human Microglia from Adult Human Brain Tissue

वयस्क मानव मस्तिष्क ऊतक से मानव माइक्रोग्लिया प्राप्त करना

Microglia are resident innate immune cells of the central nervous system (CNS). Microglia play a critical role during development, in maintaining ...

A Hydrophobic Tissue Clearing Method for Rat Brain Tissue

चूहा मस्तिष्क ऊतक के लिए एक हाइड्रोफोबिक ऊतक समाशोधन विधि

Hydrophobic tissue clearing methods are easily adjustable, fast, and low-cost procedures that allows for the study of a molecule of interest in unaltered ...