Name: measurement of smooth muscle function in the isolated tissue bath-applications to pharmacology research
Uploaded: 2015-01-19T14:00:00
Duration: 9 min 5 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Smooth Muscle Function in the Isolated Tissue Bath-applications to Pharmacology Research at JoVE.com

The Watts Laboratory through the years, and Dr. Marlene Cohen and Kathy Schenck for teaching us this assay over two decades ago. NIGMS R25GM074119 supported development of this teaching module for a Short Course in Integrative and Systems Pharmacology held on the campus of MSU from 2005 to 2013.

<ol>
	<li>Kenakin, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+classification+of+drugs+and+drug+receptors+in+isolated+tissues.">The classification of drugs and drug receptors in isolated tissues.</a> Pharmacol. Rev. 36, 165-222 (1984).</li><li>Scheindlin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+brief+history+of+modern+pharmacology.">A brief history of modern pharmacology.</a> Modern Drug Discovery. 4, 87-88 (2001).</li><li>Christopoulos, A., El-Fakahany, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Qualitative+and+quantitative+assessment+of+relative+agonist+efficacy.">Qualitative and quantitative assessment of relative agonist efficacy.</a> Biochem. Pharmacol. 58, 735-748 (1999).</li><li>Arunlakshana, O., Schild, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+quantitative+uses+of+drug+antagonists.">Some quantitative uses of drug antagonists.</a> Br. J. Pharmacol. Chemother. 14, 48-58 (1959).</li><li>Christopoulos, A., Kenakin, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=protein-coupled+receptor+allosterism+and+complexing.">protein-coupled receptor allosterism and complexing.</a> Pharmacol. Rev. 54, 323-374 (2002).</li><li>Braverman, A. S., Kohn, I. J., Luthin, G. R., Ruggieri, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prejunctional+M1+facilitory+and+M2+inhibitory+muscarinic+receptors+mediate+rat+bladder+contractility.">Prejunctional M1 facilitory and M2 inhibitory muscarinic receptors mediate rat bladder contractility.</a> Am. J. Physiol. 274, R517-523 (1998).</li><li>Singh, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoglobulins+from+scleroderma+patients+inhibit+the+muscarinic+receptor+activation+in+internal+anal+sphincter+smooth+muscle+cells.">Immunoglobulins from scleroderma patients inhibit the muscarinic receptor activation in internal anal sphincter smooth muscle cells.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 297, G1206-1213 (2009).</li><li>Goadsby, P. J., Adner, M., Edvinsson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+endothelin+receptors+in+the+cerebral+vasculature+and+their+lack+of+effect+on+spreading+depression.">Characterization of endothelin receptors in the cerebral vasculature and their lack of effect on spreading depression.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 16, 698-704 (1996).</li><li>Colquhoun, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agonist-activated+ion+channels.">Agonist-activated ion channels.</a> Br. J. Pharmacol. 147, S17-26 (2006).</li><li>Wyllie, D. J., Chen, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taking+the+time+to+study+competitive+antagonism.">Taking the time to study competitive antagonism.</a> Br. J. Pharmacol. 150, 541-551 (2007).</li><li>Schild, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pA,+a+new+scale+for+the+measurement+of+drug+antagonism.+1947.">pA, a new scale for the measurement of drug antagonism. 1947.</a> Br. J. Pharmacol. 120 (4), 29-46 (1997).</li><li>Oshita, M., Kigoshi, S., Muramatsu, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+characterization+of+two+distinct+alpha+1-adrenoceptor+subtypes+in+rabbit+thoracic+aorta.">Pharmacological characterization of two distinct alpha 1-adrenoceptor subtypes in rabbit thoracic aorta.</a> Br. J. Pharmacol. 108, 1071-1076 (1993).</li><li>Hiraoka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+and+functional+characterization+of+alpha1-adrenoceptor+subtypes+in+the+rat+prostate.">Binding and functional characterization of alpha1-adrenoceptor subtypes in the rat prostate.</a> Eur. J. Pharmacol. 366, 119-126 (1999).</li><li>Cooke, P. H., Fay, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+fiber+length,+ultrastructure,+and+the+length-tension+relationship+of+mammalian+smooth+muscle.">Correlation between fiber length, ultrastructure, and the length-tension relationship of mammalian smooth muscle.</a> J. Cell Biol. 52, 105-116 (1972).</li><li>Davis, M. J., Gore, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Length-tension+relationship+of+vascular+smooth+muscle+in+single+arterioles.">Length-tension relationship of vascular smooth muscle in single arterioles.</a> Am. J. Physiol. 256, H630-H640 (1989).</li><li>Davis, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One-month+serotonin+infusion+results+in+a+prolonged+fall+in+blood+pressure+in+the+deoxycorticosterone+acetate+(DOCA)+salt+hypertensive+rat.">One-month serotonin infusion results in a prolonged fall in blood pressure in the deoxycorticosterone acetate (DOCA) salt hypertensive rat.</a> ACS Chem. Neurosci. 4, 141-148 (2013).</li><li>Heppner, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve-evoked+purinergic+signalling+suppresses+action+potentials,+Ca2++flashes+and+contractility+evoked+by+muscarinic+receptor+activation+in+mouse+urinary+bladder+smooth+muscle.">Nerve-evoked purinergic signalling suppresses action potentials, Ca2+ flashes and contractility evoked by muscarinic receptor activation in mouse urinary bladder smooth muscle.</a> J. Physiol. 587, 5275-5288 (2009).</li><li>Burdyga, T. V., Wray, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+mechanisms+whereby+temperature+affects+excitation-contraction+coupling+in+smooth+muscle.">On the mechanisms whereby temperature affects excitation-contraction coupling in smooth muscle.</a> J. Gen. Physiol. 119, 93-104 (2002).</li><li>Hyvelin, J. M., O'Connor, C., McLoughlin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+changes+in+pH+on+wall+tension+in+isolated+rat+pulmonary+artery:+role+of+the+RhoA/Rho-kinase+pathway.">Effect of changes in pH on wall tension in isolated rat pulmonary artery: role of the RhoA/Rho-kinase pathway.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 287, L673-L684 (2004).</li><li>Tykocki, N. R., Thompson, J. M., Jackson, W. F., Watts, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ryanodine+receptors+are+uncoupled+from+contraction+in+rat+vena+cava.">Ryanodine receptors are uncoupled from contraction in rat vena cava.</a> Cell Calcium. 53, 112-119 (2013).</li></ol>

Authors have nothing to disclose.

מדידה של כוח איזומטרי ככלי מחקר היא בן למעלה מ -150 שנים, אבל היא ממשיכה להיות הטכניקה הטיפוסית לאפיון רצפטור ברקמות התכווצות 2. כוחה של טכניקה זו הוא בפשטות וברבגוניות שלו: על ידי הקלטת תגובות שהושרו על ידי הגדלת ריכוזים של אגוניסט בנוכחותו או היעדריו של יריבו, מספר עצום של מידע ניתן לגזור על המאפיינים תרופתיים של כל תרופה והקולט ש הוא נקשר 3-5. ניסויים מסוג זה גם לגייס מידע על התחרותי מול הטבע הלא תחרותי של היריבים משמשים, כמו גם ההטרוגניות קולט והשפעות תרופה שאינן ספציפיות 6-8. לפיכך, עם תמורות פשוטות לניסוי אמבטיה רקמה מבודד זה, פרופיל תרופתי יחסית מלא של קולטנים אשר מתווכים התכווצות שרירים הנגרם אגוניסט יכול להיות שנוצר. במונחים של agonism, הניתן לחשב דואר יעילות היחסית (E MAX) ועצמה (50 EC) של אגוניסט ברקמות נתון ובהשוואה לתגובות של אגוניסטים אחרים באותו הרקמה 1. בניסוי שלנו, אב העורקים החזי העכברוש הודגרה גם עם רכב או prazosin α אדרנרגיים 1 אנטגוניסט לרצפטור (5 ננומטר) במשך שעה אחת לפני הוספת phenylephrine אגוניסט אדרנרגי 1 α לאמבטיה הרקמה ויצירת התכווצות. איור 2 מתנות שונה תוצאות של איור 1. התגובות הירוקות סומנו בהתכווצות המרבית מושגת על ידי PE סומנו כמקסימום, ההתכווצות המרבית ½ מסומן ככאלה ולאחר מכן קשור עם ריכוז PE שגרמה שתגובה. זיהוי ערכים אלה הוא זיהוי הריכוז היעיל של אגוניסט שמשיג תגובת מחצית מקסימום (50%) או ערך EC 50. למרבה הצער, שימוש בפרמטר אגוניסט תלויזה לבד כדי לקבוע יכול להיות מסובכים מאפיינים מחייבים קולט 9. באופן אידיאלי, ניסויים נוספים באמצעות יריבים הקולטן לאפשר החישוב של שני פרמטרים חשובים, כי הם מפתח להגדרת האינטראקציה בין תרופה וקולט: 10 -log של דיסוציאציה אנטגוניסט הקבועה (PK B) ו-log 10 של היריב טוחנת ריכוז דרוש כדי לעורר שינוי הכפול ימינה בעקומת ריכוז התגובה (PA 2) 10. שני K B והרשות פלסטיני 2 רווח התועלת שלהם מהעובדה שהם ערכי אגוניסט-עצמאי, ויישארו קבוע גם בין רקמות שונות 11. מהנתונים בתרשים 2, PK B יכול להיות מחושב באמצעות המשוואה הבאה ומבוסס על EC 50 ערכים מחושבים במקום אחר: EC 50 בהעדר prazosin = 2 x 10 -8 M EC 50 במראשהיגיון של prazosin = 7 x 10 -6 M לפתור עבור K B במשוואה הבאה: יומן (dr-1) = להיכנס [B] - יומן K B איפה: [B] = ריכוז antagonist, או 5 x 10 מ &#39;-9 יומן (5 x 10 -9 M) = -8.3 dr = יחס מינון של ערך EC 50 בנוכחות של אנטגוניסט / 50 EC בהעדר. אם יש תזוזה ימינה, ערך זה יהיה גדול יותר מפעם אחת. כך: dr = 7 x 10 -6 M / 2 x 10 -8 M או 700 x 10 -8 M / 2 x 10 -8 M = 700/2 = 350 מחליף [B] וdr: יומן (350-1) = -8 - יומן K B 2.54 = -8 - להיכנס KB PK B = 10.54 ערך זה לprazosin עולה בקנה אחד עם הערכים שהתקבלו כאשר prazosin אינטראקציה עם recept adrenergic 1 αאו 12,13, דבר המצביע על כך שהקולטן adrenergic תיווך התכווצות לphenylephrine הוא קולטן adrenergic α 1. כמה צעדים הם קריטיים להצלחה של ניסויים אלה. רקמות חייבת להישאר בPSS לאחר נתיחה כדי למנוע אובדן של כדאיות רקמות. יש כל הכנת השרירים איזומטרי יחסי אורך-מתח אופטימלי שיוצר כוח מקסימאלי נגד מתח פסיבי 14,15. לניסוי המתואר בפרוטוקול זה, מתח פסיבי אופטימלי נקבע בעבר על ידי מרווחי הוספה בקצרה של 0.5 גרם של מתח פסיבי לרקמות. הרקמה צריכה להתחיל בלי טון ואז אחרי 30 דקות של איזון, הרקמה אותגרה עם ריכוז מקסימאלי של KCl (80 מ&quot;מ), שנוצר צליל פעיל. לאחר מכן, הרקמות נשטפו והורשו לחזור לטון בתחילת מחקר. אחרי 15 דקות בתחילת המחקר, 0.5 גר &#39;נוסף של מתח פסיבי הוצב והתהליך הזה שוב ושוב עד לרמה שלמתח פעיל הושג עם מתח פסיבי נוסף. בניסויים ראשוניים, 4 סך גרם של מתח הפסיבי היה נחוש להשיג דור מתח פעיל מקסימאלי בטבעות אב העורקים, ובכך סכום כולל זו של מתח מושם על הטבעות לפני האיזון. פרוצדורלית, עדיף להתמקד יישום מתח פסיבי לפני, אבל ניתן לעשות זאת בכל עת לפני הניסוי. המשתרע על פני-רקמות, בכל נקודה בניסוי או לנתיחה, תשפיע לרעה על כדאיות רקמות ותוצאות ניסוי. זה הכרחי ביותר בעת ביצוע רקמות באמבטיה, כצעד זה יש הסבירות הגבוהה ביותר של מתיחה מוגזמת. שטיפה נאותה, במספר ומשך נדרשת לאפקטים לשחזור. אתגר שני מוקדם מדי אחרי אתגר ראשוני, או לפני הרקמות חזרו למתח בסיסי, יגרום לתגובות חריגות. אם לומדים יריבים / מעכבים הפיכים, לא צריכים לשטוף רקמות לפני אגוניסט בנוסף, כinhibiריכוז טור יהיה ירידה. ישנם יתרונות וחסרונות בולטים למבחני אמבטיה רקמות המבודדים. חסרונות: רקמות עלולות להיתקל בדרגות שונות של נזק במהלך ניתוח להסרת או מיקום של טבעות על ווים. מאז התא האנדותל הוא הציפוי הפנימי של טבעת אב העורקים, יש להקפיד על המיקום של הטבעת על ווים, כדי שלא לפגוע בשכבת תאים זו. רקמות יכולות להיות גם באורכים שונים במובהק מהזמן שבו הם קיימא באמבטיה הרקמות, ואת זה יש שייקבע; לא כל הרקמות זהות. לאורך שורות אלה, רקמות עשויות להשתנות בהיענות שלהם לאורך כל היום כך שהבקרה בזמן הפכה לשליטה הנדרשת עבור כל ניסוי. דוגמא טובה לכך היא קנה הנשימה חזיר גינאה שמשפרת במקסימום התכווצות ב -100% במהלך ניסוי 8 שעות טיפוסיות. תרופות שהן מסיסים היטב במים עלולות לעורר בPSS. לבסוף, מצטברnd תוספות שאינן מצטברות של תרופה שהיא אגוניסט עלול לגרום לתוצאות שונות אם הפחתת רגישות הקולטן לאגוניסט מתרחשת; אנגיוטנסין II הוא תרופה אחת כזו שמראה tachyphylaxis המהיר. יתרונות: אחד היתרונות העיקריים של ניסויי אמבטיה רקמה הוא שזה בזמן אמת; ניתן לראות את ניסוי עת התרחשותה ומהירות יכולה לעשות את המסקנות ולתכנן את הצעדים הבאים, כמו גם פתרון בעיות במהלך ניסוי. ניסוי לוקח יום לעשות. בדרך כלל ניתן להכין רקמות מרובות מחיה אחת כזאת שחיה יכולה לשמש כשליטה שלו, וזה מוסיף כוח לניסוי. אפשר גם לבודד את הרקמה מגורמים אחרים כדי לבחון את התגובה טהורה יחסית של הרקמה לתרופה. בניסויים במבחנה, כגון מערכת האמבטיה הרקמות מאפשרים גם שימוש בכמות קטנה של תרופה בהשוואה לניסוי in vivo. עיצוב ניסיוני הבסיסי שתואר במסמך זה יכול להיותשינוי נרחב כדי לאפשר הקלטה של ​​פרמטרים נוספים או ההקדמה של גירויים חיצוניים אחרים. לדוגמא, תוספת של אלקטרודות לאפשר לגירוי שדה חשמלי של עצבי innervating 16,17. עם התוספת של בדיקות תרמית או pH, ניתן גם למדוד את ההשפעות של טמפרטורה ו- pH על תגובות התכווצות 18,19. באופן דומה, חמצן ניתן להחליף באופן חלקי או במלואו עם N 2 כדי לבדוק את ההשפעות מושרה היפוקסיה. יתר על כן, אותם העקרונות הבסיסיים של מדידת התכווצות איזומטרי בשימוש בוידאו זה יכול לשמש לפיתוח מערכות המאפשרות מדידה במקביל לפיתוח מתח איזומטרי ושינויים בסידן תוך תאי 20. התמרה אות היא גם למדה בקלות, שכן מערכות קיימות שיכול במהירות להקפיא דגימת רקמה בתגובה, כך שהפעילות של מערכת מסלול העברת אותות ניתן לאמת ביוכימית. הווריאציה של סוסיםipment שיכול לשמש כדי לעשות את זה הוא עצום. מערכת זו כולה, כל היד שנבנתה או אוטומטית, ניתן לרכוש מחברות שונות מרובות. אמבטיות הרקמה ובעלי רקמת שימוש בפרוטוקול זה היו מנופח ביד (אמבטיות רקמה) ויד שנבנתה (בעלים) על ידי מכונה חנויות אוניברסיטת מישיגן בבית.

המשמעת של פרמקולוגיה השתמשה במערכת האמבטיה רקמה המבודדת למעלה מ -150 שנה. צדדיות של מערכת זו אפשרה למדענים ברחבי העולם כדי לאפיין קולטנים והעברת אותות קולט, עם הידע הזה עומד בבסיס הטיפולים שטופלו מיליוני אנשים עם מחלות או הפרעות כגון יתר לחץ דם, אי ספיקת לב, סוכרת, מחלות במערכת העיכול, שלפוחית ​​השתן הפרעות בתפקוד, אסטמה, ובליעה, לשם רק כמה. עד עצם היום הזה, האמבטיה הרקמה המבודדת נשארה פן חשוב של פיתוח תרופות ומחקר בסיסי, שכן היא מאפשרת לרקמות לתפקד כרקמה. בשיעור זה יופיטר, פרוטוקול רשמי משותף להפגין ניסוי חזותי ווירטואלי ניצול נתונים מניסוי מבודד רקמת אמבטיה המודד כיווץ איזומטרי, המאפשר אפיון רצפטור. היתרון העיקרי של שיטה זו הוא שרקמת חייםפונקציות nd בכללותה רקמה, עם תוצאה פיזיולוגית (כיווץ או הרפיה) שהוא רלוונטי לגוף. זה הוא סינתזה של צעדים (אינטראקציה תרופה-קולטן, הולכים אותות, דור שליח שני, שינוי ברגישות שריר חלק, ושינוי בתפקוד רקמות). בעוד שיטות אחרות מאפשרות לימוד של כל אחד משלבים הבאים (לדוגמא radioligand מחייב לזיקת סמים, מדידה של שליחים שני), טכניקת האמבטיה רקמה המבודדת מאפשרת אינטגרציה של כל 1 את הפעולות הבאות. יתרון נוסף הוא ששמירה על תפקוד רקמות מאפשרת חישוב של משתנים תרופתיים חשובים, כי הם יותר משמעותיים ברקמה לעומת הגדרה סלולרית; מדובר קרוב יותר לאופן שבו התרופות שנבדקו היו עובדות בגוף כולו.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="863">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:375px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:203px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:167px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LabChart Software</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td></td>
			<td>7.2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PowerLab (4 channel)&#160;</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML760</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">QuadBridge (4 channel)</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>ML112</td>
			<td>ML112</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Grass Adapter Cable</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>MLAC11</td>
			<td>MLAC11</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Grass Force-Displacement Transducer</td>
			<td>Grass Instrument Co</td>
			<td>FT03</td>
			<td>FT03</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Grass Transducer Cable</td>
			<td>Grass Instrument Co</td>
			<td>TAC-7 REV-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BNC to BNC Cable</td>
			<td>ADInstruments</td>
			<td>MLAC01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IsoTemp 2100</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>IC-2100</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tissue Bath</td>
			<td>Multiple Sources&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Physiological Salt Solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>PSS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Braided Silk Suture</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>51-7615</td>
			<td>SP104</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ring Stand</td>
			<td>Humboldt MFG Co</td>
			<td>H-2122 7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dissecting Dishes</td>
			<td>Handmade with Silicone</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tygon Tubing</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td>63010-100</td>
			<td>R-3603</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hose Clamps</td>
			<td>Cole-Parmer Instrument Co</td>
			<td>06832-08</td>
			<td>SNP-8</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50ml Muscle Bath</td>
			<td>Eberhartglass Blowing</td>
			<td>Custom</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">250ml Warming Chambers</td>
			<td>Eberhartglass Blowing</td>
			<td>Custom</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gas Dispersion Tube</td>
			<td>Ace Glass</td>
			<td>7202-06</td>
			<td>7202-02</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micrometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Custom Stands</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Three-Prong Clamps</td>
			<td>VWR International</td>
			<td></td>
			<td>Talon</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">S-Connector</td>
			<td>VWR International</td>
			<td></td>
			<td>Talon</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tissue Hooks</td>
			<td>Hand Made in House</td>
			<td>Custom</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tissue Dissection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leica Stereomicroscope MZ6</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td>10447254</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stereomaster Microscope Fiber-Optic Light Source</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12562-36</td>
			<td>12562-36</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Culture Petri Dish</td>
			<td>Pyrex</td>
			<td></td>
			<td>7740 Glass</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sylgard Silicone Elastomer</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td></td>
			<td>Sylgard 170 Kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vannas Scissors</td>
			<td>George Tiemann &#38; Co</td>
			<td>160-150</td>
			<td>160-150</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Splinter &#38; Fixation Forceps</td>
			<td>George Tiemann &#38; Co</td>
			<td>160-55</td>
			<td>160-55</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measurement of smooth muscle function in the isolated tissue bath-applications to pharmacology research

Isolated tissue bath assays are a classical pharmacological tool for evaluating concentration-response relationships in a myriad of contractile tissues. While this technique has been implemented for over 100 years, the versatility, simplicity and reproducibility of this assay helps it to remain an indispensable tool for pharmacologists and physiologists alike. Tissue bath systems are available in a wide array of shapes and sizes, allowing a scientist to evaluate samples as small as murine mesenteric arteries and as large as porcine ileum &#8211; if not larger. Central to the isolated tissue bath assay is the ability to measure concentration-dependent changes to isometric contraction, and how the efficacy and potency of contractile agonists can be manipulated by increasing concentrations of antagonists or inhibitors. Even though the general principles remain relatively similar, recent technological advances allow even more versatility to the tissue bath assay by incorporating computer-based data recording and analysis software. This video will demonstrate the function of the isolated tissue bath to measure the isometric contraction of an isolated smooth muscle (in this case rat thoracic aorta rings), and share the types of knowledge that can be created with this technique. Included are detailed descriptions of aortic tissue dissection and preparation, placement of aortic rings in the tissue bath and proper tissue equilibration prior to experimentation, tests of tissue viability, experimental design and implementation, and data quantitation. Aorta will be connected to isometric force transducers, the data from which will be captured using a commercially available analog-to-digital converter and bridge amplifier specifically designed for use in these experiments. The accompanying software to this system will be used to visualize the experiment and analyze captured data.

במונחים של agonism, היעילות היחסית (E MAX) והעצמה (50 EC) של אגוניסט ברקמות נתון יכולות להיות מחושבת ובהשוואה לתגובות של אגוניסטים אחרים באותו הרקמה 1. בניסוי שלנו, אב העורקים החזי העכברוש הודגרה גם עם רכב או prazosin α 1 adrenergic אנטגוניסט לרצפטור (5 ננומטר) לשעה אחת לפני הוספת phenylephrine אגוניסט אדרנרגי α 1 לאמבטיה הרקמה ויצירת התכווצות (איור 1). 2 מתנות איור שונה תוצאות של איור 1. התגובות הירוקות סימנו ההתכווצות המרבית מושגת על ידי PE סומנה כמקסימום, ההתכווצות המרבית ½ המסומן ככאלה ולאחר מכן קשורים עם ריכוז PE שגרם שתגובה. זיהוי ערכים אלה הוא זיהוי הריכוז היעיל של אגוניסט שמשיג תגובת מחצית מקסימום (50%) או EC <sUB&gt; 50 ערך. זה היה donegraphically בתוכנת example.Computer זה שמשתמש בפונקציות לוגיסטי לעקומות sigmoidal יכולים לשמש לעקומה ראויה וחישוב EC 50 ערכים. ביצירה ופירוש התוצאות הללו, חשוב להשתמש בשני ריכוזים נמוכים וגבוהים של אגוניסט ליצור עקומת ריכוז התגובה. בלי מספיק נקודות כדי להראות בסיס יציב ורמה המרבית, ניתן להעריך EC 50 ו- E MAX בלבד. זה נעשה בצורה גרפית בדוגמא זו. תוכנת מחשב שמשתמשת בפונקציות לוגיסטי לעקומות sigmoidal יכולה לשמש לעקומה ראויה וחישוב EC 50 ערכים. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/52324/52324fig1highres.jpg" /> איור 1:, ba רקמת מים במעייל רקמות אמבט סכמטי Cartoon מייצג טבעת של רקמה ממוקמת בקיר דו-.<html> ה. זרימת החיץ ויצוא מוסדרים על ידי ברזלים זכוכית 3-בדרך שולבו בבסיס של החדר. O 2 / CO 2 הוא מבעבע בבאמצעות aerator שהוא חתום עם אטם כדי למנוע דליפה של PSS או גז. קלט מחזור נמוך מהתפוקה כדי לשמור על מחזור תקין ולמנוע היווצרות של כיסי אוויר שיגרמו disregulation טמפרטורה. <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/52324/52324fig2highres.jpg" /> איור 2:. עכברוש בית החזה אב העורקים + האנדותל איור לעיל מתאר ארבעה ניסויים נפרדים (בעלי חיים שונים ועל ידי חוקרים שונים על עליות להגדיר שונות כפי שהוא מיוצג על ידי צבעים שונים) כדי לבדוק את היכולת של prazosin להעביר התכווצות מושרה PE. Prazosin (5 ננומטר) באופן ברור העביר ימינה עקומת התכווצות מושרה PE באופן מקביל. &gt; <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/52324/52324fig3highres.jpg" /> איור 3: עכברוש בית חזה אב העורקים + האנדותל הערכה גרפית של EC 50 ערכים לPE בהעדר (הרכב) ונוכחות (prazosin) של אנטגוניסט.. קו ירוק (C קבוצה) רק מסומן. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" fo:keep-together.within-page="always" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מלח </td><td> MW (ז / שומה) </td><td> 5 ליטר </td><td> מ&quot;מ FINAL </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> (גרם) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 58.45 </td><td> 37.99 </td><td> 130 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 74.56 </td><td> 1.75 </td><td> 4.7 </td></tr><tr><td> KH2PO4 </td><td> 136.1 </td><td> 0.8 </td><td> 1.18 </td></tr><tr><td> MgSO4• 7H20 </td><td> 246.5 </td><td> 1.45 </td><td> 1.17 </td></tr><tr><td> NaHCO3 </td><td> 84.21 </td><td> 6.25 </td><td> 14.9 </td></tr><tr><td> דקסטרוז </td><td> 180.16 </td><td> 5 </td><td> 5.5 </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> 380 </td><td> 0.05 </td><td> 0.03 </td></tr></tbody></table> מתכון רגיל פיזיולוגית תמיסת מלח (PSS) תוכן של PSS-נאגר ביקרבונט השתמש בניסוי זה: טבלה 1.. נכללים המשקל המולקולרי של כל המלחים והסכום נוסף ל5 L של DH 2 O כדי להשיג את הריכוז הרצוי. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> ריכוז באמבטיה </td><td> תוספת של אגוניסט עשתה לאמבטיה </td></tr><tr><td> 1 x 10 -9 M </td><td> 50 מיליליטר 1 x 10 -6 M </td></tr><tr><td> 3 x 10 -9 M </td><td> 100 מיליליטר 1 x 10-6 M </td></tr><tr><td> 1 x 10 -8 M </td><td> 35 מיליליטר 1 x 10 -5 M </td></tr><tr><td> 3 x 10 -8 M </td><td> 100 מיליליטר 1 x 10 -5 </td></tr><tr><td> 1 x 10 -7 M </td><td> 35 מיליליטר 1 x 10 -4 M </td></tr><tr><td> 3 x 10 -7 M </td><td> 100 מיליליטר 1 x 10 -4 M </td></tr><tr><td> 1 x 10 -6 M </td><td> 35 מיליליטר 1 x 10 -3 M </td></tr><tr><td> 3 x 10 -6 M </td><td> 100 מיליליטר 1 x 10 -3 M </td></tr><tr><td> 1 x 10 -5 M </td><td> 35 מיליליטר 1 x 10 -2 M </td></tr><tr><td> 3 x 10 -5 M </td><td> 100 מיליליטר 1 x 10 -2 M </td></tr><tr><td> 1 x 10 -4 M </td><td> 35 מיליליטר 1 x 10 -1 M </td></tr></tbody></table> טבלה 2:. רקמות אמבט תוסף אגוניסט ריכוזי הסכום של אגוניסט שיש להוסיף לכל אמבט לפרוperly לבנות עקומות ריכוז תגובה מצטברות. ריכוז האמבטיה הרצויה מושגת באמצעות תוספת הסכומים רציפים של ריכוזים גוברים של אגוניסט. כל תוספת לוקחת בחשבון את הריכוז של אגוניסט כבר מקיים באמבטיה. הדבר נעשה כדי למזער את הגידול בהיקף באמבטיה הרקמות שכתוצאת משימוש כרכים הולכים וגדל של ריכוז יחיד של אגוניסט.

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Smooth Muscle Function in the Isolated Tissue Bath-applications to Pharmacology Research at JoVE.com

Measurement of Smooth Muscle Function in the Isolated Tissue Bath-applications to Pharmacology Research

This protocol describes the measurement of isometric contraction in an isolated smooth muscle preparation, using an isolated tissue bath system and computer-based data acquisition.

מדידה של תפקוד של שריר חלק ברקמות מבודדות אמבט-היישומים למחקר פרמקולוגיה

Isolated tissue bath assays are a classical pharmacological tool for evaluating concentration-response relationships in a myriad of contractile tissues.  ...

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Biology

Unit 1

Drugs Acting on Autonomic Nervous System: Adrenergic Agonists and Antagonists Agents

SCIENTISTS IN ACTION

Focal Ca2+ Transient Detection in Smooth Muscle

Focal Ca2+ Transient Detection in Smooth Muscle

מיקוד Ca 2 + איתור חלוף של שריר חלק

Ca2+ imaging of smooth muscle provides insight into cellular mechanisms that may not result in changes of membrane potential, such as the release of Ca2+ ...

The Mouse Cremaster Muscle Preparation for Intravital Imaging of the Microcirculation

Cremaster עכבר הכנה שריר עבור הדמיה של Intravital microcirculation

Throughout the body, the maintenance of homeostasis requires the constant supply of oxygen and nutrients concomitant with removal of metabolic ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

הקרינה מבוסס מדידה הכניסה חנות המופעל הסידן בתאים חיים: מתא הסרטן תרבותי כדי סיב שריר שלד

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

הערכת Vivo לשעבר של התכווצות, ועיפנות Alternans בשרירי שלד מבודדים

 
Described here is a method to measure contractility of isolated skeletal muscles. Parameters such as muscle force, muscle power, contractile kinetics, ...

Exploring Arterial Smooth Muscle Kv7 Potassium Channel Function using Patch Clamp Electrophysiology and Pressure Myography

היכרות עם פונקצית עורקי שריר חלק Kv7 אשלגן ערוץ באמצעות אלקטרופיזיולוגיה קלאמפ תיקון וMyography לחץ

Contraction  or relaxation of smooth muscle cells within the walls of resistance arteries  determines the artery diameter and thereby controls flow of ...

Force Measurement During Contraction to Assess Muscle Function in Zebrafish Larvae

מדידת כוח במהלך התכווצות כדי להעריך את תפקוד שריר בזחלי דג הזברה

Zebrafish larvae provide models of muscle development, muscle disease and muscle-related chemical toxicity, but related studies often lack functional ...

Two-photon Imaging of Intracellular Ca2+ Handling and Nitric Oxide Production in Endothelial and Smooth Muscle Cells of an Isolated Rat Aorta

Two-photon Imaging of Intracellular Ca2+ Handling and Nitric Oxide Production in Endothelial and Smooth Muscle Cells of an Isolated Rat Aorta

הדמיה שני פוטונים של תאיים Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; תאי טיפול ותחמוצת חנקן ייצור בהאנדותל ושריר חלק של עכברוש אב העורקים מבודדים

Calcium is a very important regulator of many physiological processes in vascular tissues. Most endothelial and smooth muscle functions highly depend on ...

Measurement of Calcium Fluctuations Within the Sarcoplasmic Reticulum of Cultured Smooth Muscle Cells Using FRET-based Confocal Imaging

מדידת תנודות סידן בתוך הרטיקולום sarcoplasmic של בתאי שריר חלק בתרבית באמצעות מבוססי סריג הדמיה Confocal

Maintenance of steady-state calcium (Ca2+) levels in the sarcoplasmic reticulum (SR) of vascular smooth muscle cells (VSMCs) is vital to their overall ...

Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

בידוד של תאי שריר חלק Murine כלילית דם

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs ...

The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

טכניקת כלית עכבר המבודדת perfused

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a ...