Name: laser capture microdissection - a demonstration of the isolation of individual dopamine neurons and the entire ventral tegmental area
Uploaded: 2015-02-06T13:00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Laser Capture Microdissection - A Demonstration of the Isolation of Individual Dopamine Neurons and the Entire Ventral Tegmental Area at JoVE.com

This work was funded by the National Institute of Mental Health (1R15MH084209 - 01A1), National Institute of Neurological Disorders and Stroke (R21NS058375-01A2) and the National Science Foundation (DBI0723080 07070646).

<ol>
	<li>Emmert-Buck, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser+capture+microdissection.">Laser capture microdissection.</a> Science. 274, 998-1001 (1996).</li><li>Schutze, K., Lahr, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+expressed+genes+by+laser-mediated+manipulation+of+single+cells.">Identification of expressed genes by laser-mediated manipulation of single cells.</a> Nature biotechnology. 16, 737-742 (1998).</li><li>Schutze, K., Posl, H., Lahr, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser+micromanipulation+systems+as+universal+tools+in+cellular+and+molecular+biology+and+in+medicine.">Laser micromanipulation systems as universal tools in cellular and molecular biology and in medicine.</a> Cellular and Molecular Biology. 44, 735-746 (1998).</li><li>Vandewoestyne, M., Van Nieuwerburgh, F., Van Hoofstat, D., Deforce, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+three+DNA+extraction+protocols+for+forensic+STR+typing+after+laser+capture+microdissection.">Evaluation of three DNA extraction protocols for forensic STR typing after laser capture microdissection.</a> Forensic Science International Genetics. 6, 258-262 (2012).</li><li>Eells, J. B., Wilcots, J., Sisk, S., Guo-Ross, S. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NR4A+gene+expression+is+dynamically+regulated+in+the+ventral+tegmental+area+dopamine+neurons+and+is+related+to+expression+of+dopamine+neurotransmission+genes.">NR4A gene expression is dynamically regulated in the ventral tegmental area dopamine neurons and is related to expression of dopamine neurotransmission genes.</a> Journal of Molecular Neuroscience. 46, 545-553 (2012).</li><li>Seelan, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+analysis+of+laser+capture+microdissected+fetal+epithelia.">Epigenetic analysis of laser capture microdissected fetal epithelia.</a> Analytical Biochemistry. 442, 68-74 (2013).</li><li>Kim, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-126+contributes+to+Parkinson's+disease+by+dysregulating+the+insulin-like+growth+factor/phosphoinositide+3-kinase+signaling.">miR-126 contributes to Parkinson's disease by dysregulating the insulin-like growth factor/phosphoinositide 3-kinase signaling.</a> Neurobiology of Aging. 35, 1712-1721 (2014).</li><li>Bohm, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+antidepressant+treatment+on+gene+expression+profile+in+mouse+brain:+cell+type-specific+transcription+profiling+using+laser+microdissection+and+microarray+analysis.">Effects of antidepressant treatment on gene expression profile in mouse brain: cell type-specific transcription profiling using laser microdissection and microarray analysis.</a> Journal of Neurochemistry. 97, 44-49 (2006).</li><li>Kadkhodaei, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcription+factor+Nurr1+maintains+fiber+integrity+and+nuclear-encoded+mitochondrial+gene+expression+in+dopamine+neurons.">Transcription factor Nurr1 maintains fiber integrity and nuclear-encoded mitochondrial gene expression in dopamine neurons.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, 2360-2365 (2013).</li><li>Miller, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Proteomics+in+Laser+Capture+Microdissected+Sleep+Nuclei+From+Rat+Brain.">Quantitative Proteomics in Laser Capture Microdissected Sleep Nuclei From Rat Brain.</a> Journal of Neurogenetics. , (2014).</li><li>Roberts, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+laser+capture+microdissection+and+protein+microarray+technologies+in+the+molecular+analysis+of+airway+injury+following+pollution+particle+exposure.">Application of laser capture microdissection and protein microarray technologies in the molecular analysis of airway injury following pollution particle exposure.</a> Journal of Toxicology and Environmental Health. A. 67, 851-861 (2004).</li><li>Yuferov, V., Nielsen, D., Butelman, E., Kreek, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microarray+studies+of+psychostimulant-induced+changes+in+gene+expression.">Microarray studies of psychostimulant-induced changes in gene expression.</a> Addiction Biology. 10, 101-118 (2005).</li><li>Brown, A. L., Smith, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+RNA+preservation+for+immunolabeling+and+laser+microdissection.">Improved RNA preservation for immunolabeling and laser microdissection.</a> RNA. 15, 2364-2374 (2009).</li><li>Curran, S., McKay, J. A., McLeod, H. L., Murray, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser+capture+microscopy.">Laser capture microscopy.</a> Molecular Pathology. 53, 64-68 (2000).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

LCM هي تقنية قوية لتشريح للسكان منفصلة من الخلايا أو الأنسجة من مناطق أقسام الأنسجة على شريحة المجهر والعزلة لاحقة من الحمض النووي الريبي، الرنا الميكروي، DNA والبروتينات. استخدام LCM في تركيبة مع التحليل باستخدام تقنيات عالية الإنتاجية مثل ميكروأري، الجيل القادم RNA تسلسل، وتحليل جينية من الحمض النووي والبروتينات أصبحت أكثر وأكثر شيوعا مثل حساسية هذه التقنيات يحسن ويتم خفض كمية المواد بدءا حاجة 8-12. مع LCM، يتم التوصل إلى قرار أفضل التشريحي للعينة، وتعزيز التفاهم من التدابير المصب من هذه العينات إلى حد كبير. التحذير واحدة مع LCM هو أنه يوفر عينة مركزة من الخلايا من الفائدة ولكن ليس بالضرورة أن يكون السكان نقية من الخلايا. حدود الدقة يعني أنه سيكون هناك بعض التلوث من الأنسجة المجاورة. ومع ذلك، هذه التقنية يفعل تركيز خلايا الفائدةلتقليل الآثار المرتبطة الأنسجة المحيطة والخلايا وتعظيم الآثار التجريبية على الخلايا من الفائدة. مباشرة مقابل غير المباشرة المناعية منذ يستخدم LCM حاليا في المقام الأول لعزل وقياس RNA، RNA حفظ سليمة هو معيار مهم جدا. الحفاظ على سلامة الحمض النووي الريبي هو المبرر الرئيسي وراء استخدام المناعية غير المباشرة لتوجيه تشريح الأنسجة الذي يزيل ضرورة وصمة عار على النسيج مباشرة والتي يمكن أن تتحلل الحمض النووي الريبي (الشكل 10). عند السؤال التجريبي، ومع ذلك، يتطلب عزل مجموعة سكانية محددة من الخلايا، مثل الخلايا العصبية الدوبامين، مطلوب المناعية الفلورية مباشرة. ويمكن استخدام بروتوكول وضع العلامات المناعية السريع لحد من تدهور RNA أثناء العملية. الأوقات حضانة قصيرة هي نتيجة لاستخدام تركيزات عالية من الابتدائية والثانوية المضادةالهيئات، وتركيزات التي هي حوالي 10-20 أضعاف أعلى من ما هو ضروري لالمناعية التقليدية مع 2 ح الحضانة. ولكن إذا، هناك حاجة مرات حضانة أطول، وتستخدم براون وسميث مخازن عالية الملح لمنع تدهور RNA والحصول على جيد RNA الجودة مع أوقات حضانة طويلة (تصل إلى 20 ساعة) 13. ويمكن أيضا أن تستخدم هذا النهج إذا كان هناك وقت كبير المطلوب بين وضع العلامات من الأنسجة والحصول على إمكانية الوصول إلى نظام LCM. اختيار الشرائح - غشاء PEN، سيلاني الإعدادية والشرائح الزجاجية غير المصقول تم الإبلاغ عن استخدام الشرائح الزجاجية غير المصقول لLCM 14. في مختبرنا، تم العثور على الشرائح-سيلاني الإعدادية ليكون الخيار الأمثل، وهذا الطلاء تعلق بما فيه الكفاية الأنسجة إلى الشريحة لالمناعية دون فقدان الأنسجة ولكن لا يزال يسمح لمرفق من الأنسجة إلى القبعات LCM والعزل من الشريحة . الشرائح الزجاجية غير المصقول لهاأظهرت بعض فقدان الأنسجة مع الإجراء المناعية. إذا تم استخدام المناعية غير المباشرة، ومع ذلك، يصبح الاحتفاظ الأنسجة أقل من قضية. مع الجفاف السليم، والخلايا أو الأنسجة التقاط الخروج من الشرائح سيلاني-برب لم يكن قضية. كل واحد من الطرق المختلفة لعزل الخلايا العصبية أو مناطق الدماغ وصفها في هذه الورقة ديه مزايا وعيوب. لعزل الخلايا العصبية الدوبامين الفردية، واستخدام الشرائح-سيلاني الإعدادية لديه ميزة البصريات أفضل وأقل تكلفة من الشرائح غشاء PEN. والعيب هو أن الخلايا التقاط بعض الأحيان يمكن أن يكون من الصعب إذا كان هناك عدم كفاية الجفاف (انظر أدناه)، وبعض الأنسجة قد يكون غادر على الشريحة. ميزة من PEN الأغشية الشرائح هي أن استخدام مزيج من الليزر والأشعة فوق البنفسجية ليزر الأشعة تحت الحمراء يضمن أن الخلايا العصبية الدوبامين سيتم جمعها. الفشل في جمع الخلايا من PEN الشرائح الغشاء أبدا تقريبا يحدث، كما هو الحال أقل اعتمادا على الجفاف من الشرائح الزجاجية. ل<html> ميزة إضافية هي أن ليزر الأشعة فوق البنفسجية يمكن أن تستخدم لتقريب أكثر عن كثب شكل الخلايا العصبية من الفائدة، بالمقارنة إلى دائرة لالتقاط الخلايا العصبية الخروج من الشرائح الزجاجية مع ليزر الأشعة تحت الحمراء. لعزل مناطق من الأنسجة، والشرائح غشاء PEN هي أعلى بكثير وتبرر التكاليف المضافة. هذه النتائج النهج في إزالة كاملة من جميع الأنسجة قطع على الغشاء، هو أسرع بكثير من الاستيلاء على مساحة كبيرة من الأنسجة باستخدام الليزر تحت الحمراء وحدها وأقسام الأنسجة سمكا يمكن جمعها. فقط باستخدام ليزر الأشعة تحت الحمراء يتطلب أن غشاء سقف LCM ذاب تماما على المنطقة بأسرها الأنسجة. بالإضافة إلى ذلك، جمع ناقصة من النسيج هو نموذجي، وعادة ما يتطلب عدة محاولات. على الرغم من أن هذا يستغرق وقتا أطول من عزل الأنسجة من الشريحة غشاء PEN، إذا كانت الأنسجة المتاحة بالفعل على شريحة زجاجية أو ليزر الأشعة فوق البنفسجية غير متوفرة، وهذا هو خيارا قابلا للتطبيق لأن معظم الأنسجة يمكن جمعها (الشكل 8J). &quot;&gt; خطوات حاسمة ove_content حضانات الإيثانول بنسبة 100٪ هي واحدة من أهم الخطوات. من أجل جمع الخلايا من الشرائح سيلاني الإعدادية مطلوب الجفاف الكامل للأنسجة. ولذلك، فإن أي ماء لا إزالتها، والذي يرتبط في الغالب مع الإيثانول بنسبة 100٪ الحضانة، وتؤثر على القدرة على التقاط الخلايا من الشرائح. من أجل معالجة هذه المسألة، كثيرا ما تتغير 100٪ الحلول الايثانول كما امتصاص الماء من الجو أو نقل من الخطوات السابقة الغسيل يمكن أن يؤثر على الجفاف. بالإضافة إلى ذلك، يتم استخدام المناخل الجزيئية لاستيعاب أي تلوث المياه. ينبغي من الناحية المثالية أن يوجد فيه نظام LCM في غرفة صغيرة مع مزيل الرطوبة للحفاظ على ظروف الرطوبة منخفضة. أقسام ناظم البرد الجيدة هي حاسمة لLCM المناسب. أقسام تحتاج إلى أن تكون شقة مع طيات في نسيج التقليل. يحمل في طيات النسيج سوف تزيد من المسافة بين الغطاء LCM ومنعه من الاتصال رانه الأنسجة. ثم يصبح من الصعب بما فيه الكفاية تذوب الغطاء غشاء على الأنسجة. لالشرائح الزجاجية، وعادة سمك الباب يحتاج إلى ما بين 6 و 12 ميكرومتر. أقسام سمكا يمكن التقاط مع الشرائح غشاء PEN. تقدم LCM القدرة التقنية لجعل تشريح دقيقة جدا من الأنسجة والخلايا من شرائح المجهر. هذا يزيد بشكل كبير من حل المزيد من التحليل بالمقارنة مع تشريح الإجمالي من قطع الأنسجة. وعلى الرغم من LCM يمكن أن يكون الوقت والعمل المكثف، أنها لا تتطلب تدريبا مكثفا أو الخبرة، وعندما يقترن مع تقنيات عالية الإنتاجية الأخرى، يمكن أن يعزز إلى حد كبير في فهم عملية بيولوجية عندما تستخدم خلايا منفصلة أو المناطق التشريحية.

<html> وتتكون جميع الأنسجة من السكان متخالف من الخلايا. وينطبق ذلك بشكل خاص لأنسجة المخ، ويتألف من مختلف الخلايا العصبية متميزة شكليا و / أو neurochemically تحيط بها أنواع مختلفة من الخلايا الدبقية (قليلة التغصن، الخلايا الدبقية الصغيرة والخلايا النجمية). بالإضافة إلى ذلك، مناطق مختلفة في الدماغ، مثل المناطق من القشرة أو جذع الدماغ نوى، لها وظائف محددة. ولذلك، فإن القدرة على عزل مجموعات سكانية محددة من الخلايا أو مناطق صغيرة جدا مميزة تشريحيا، وعندما يقترن التقنيات التحليلية (أي Q-PCR، ميكروأرس، RNA-التسلسل، والبروتينات)، يمكن أن تعزز بشكل ملحوظ فهم العمليات البيولوجية المختلفة. LCM هي التكنولوجيا التي توفر القدرة على عزل المناطق التشريحية المنفصلة جدا أو خلايا معينة من الأنسجة على شريحة المجهر توفير مصدر أكثر تجانسا من ذلك بكثير لمزيد من التحليل لمختلف الجزيئات، مثل RNA، الرنا الميكروي، DNA والبروتينات. ر &quot;&gt; ومنذ إطلاق LCM أولا، وقد استخدمت عدة أساليب مختلفة لmicrodissect الخلايا من الأنسجة 1-3. وتضمنت أقرب النهج مرفق المباشر من الأنسجة على شريحة باستخدام الأشعة تحت الحمراء (IR) ليزر وفيلم بالحرارة وعدم طريقة الاتصال باستخدام الأشعة فوق البنفسجية (UV) قطع الليزر لفصل الخلايا او الانسجة وجمع في أنبوب. وفي وقت لاحق، وقد استخدم LCM بنجاح على مجموعة متنوعة من الأنسجة وأنواع الخلايا، وأظهرت لتكون متوافقة مع العزلة من مختلف الجزيئات لتحليل المصب بما في ذلك RNA، الرنا الميكروي، DNA، والبروتينات، بما في ذلك النشاط الأنزيمي 1،4-7. LCM هنا يتجلى باستخدام نظام LCM الذي يستخدم ليزر قطع الأشعة فوق البنفسجية والأشعة تحت الحمراء ليزر القبض على لقطع حول الخلايا أو الأنسجة وإرفاقها إلى غطاء LCM، على التوالي. ويستخدم هذا النظام LCM كل من التقاط الأشعة تحت الحمراء الليزر لإذابة فيلم من البلاستيك على غطاء فوق الخلية أو الأنسجة من الاهتمام التي يوليها الخلايا إلى فيلم من البلاستيك ويزيل من رانه الأنسجة مع إزالة الغطاء (الشكل 1). بالإضافة إلى ذلك، في تركيبة مع ليزر الأشعة تحت الحمراء، ليزر الأشعة فوق البنفسجية متاح للخفض التدريجي الأنسجة أو الخلايا من الاهتمام من الأنسجة التي شنت على الشرائح مع غشاء ثم عزل عن طريق ربط الأنسجة إلى الحد الأقصى LCM باستخدام الليزر IR (الشكل 2). تم العثور على لمحة موجزة عن هذه التقنيات في أرقام 1 و 2. ووصف العديد من الاختلافات على هذه التقنية إما عزل خلايا محددة باستخدام المناعية الفلورسنت المباشرة وتقنية موجهة المناعية غير المباشرة التي يتم استخدامها لعزل منطقة من الأنسجة على أساس التعبير عن بروتين معين. على وجه التحديد، وتظهر عزل الخلايا العصبية الدوبامين من المادة السوداء وعزل منطقة السقيفية البطنية والعزلة لاحقة من الحمض النووي الريبي من الطازجة والمجمدة أنسجة المخ. كما RNA هو الأكثر عطوب من الجزيئات قياس (بالمقارنة مع الحمض النووي أو البروتين)، الحادي والعشرينوشملت العائد على السهم للمساعدة في الحفاظ على سلامة RNA وبيانات أظهرت على كمية ونوعية RNA التي تم الحصول عليها.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="597">
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:159px;">Name of the Material/Equipment</td>
			<td style="width:191px;">Company</td>
			<td style="width:121px;">Catalog Numer&#160;</td>
			<td style="width:127px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:159px;">Veritas Laser Capture Microdissection System</td>
			<td style="width:191px;">Life Technologies, Grand Island, NY</td>
			<td style="width:121px;">Newer model is now sold</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:159px;">CapSure Macro LCM Caps</td>
			<td style="width:191px;">Life Technologies, Grand Island, NY</td>
			<td>LCM0211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:159px;">CapSure HS LCM Caps</td>
			<td style="width:191px;">Life Technologies, Grand Island, NY</td>
			<td>LCM0213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:159px;">PEN Membrane slides</td>
			<td style="width:191px;">Life Technologies, Grand Island, NY</td>
			<td>s4651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:159px;">Silane prep-slides</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>S4651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:159px;">95% Ethanol-RNase Free</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>E7148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:159px;">100% Ethanol-RNase Free</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>E7023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:159px;">Rnase Free Triton</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:159px;">Molecular Sieve</td>
			<td style="width:191px;">EDM Millipore, Billerica, MA</td>
			<td>MX1583D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:159px;">Anti-Tyrosine hydroxyase antibody</td>
			<td style="width:191px;">EDM Millipore, Billerica, MA</td>
			<td>Ab152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:159px;">Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit IgG</td>
			<td style="width:191px;">Life Technologies, Grand Island, NY</td>
			<td>A-11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:159px;">2100 Bioanalyzer</td>
			<td style="width:191px;">Agilent Technologies, Santa Clara, CA</td>
			<td>G2939AA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:159px;">Stratagene MX 3005P</td>
			<td style="width:191px;">Agilent Technologies, Santa Clara, CA</td>
			<td>401513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:159px;">Nanodrop 3300 fluorospectrometer</td>
			<td style="width:191px;">Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:159px;">Quant-iT RiboGreen</td>
			<td style="width:191px;">Life Technologies, Grand Island, NY</td>
			<td>R11490</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:159px;">RNaseZap</td>
			<td style="width:191px;">Life Technologies, Grand Island, NY</td>
			<td>AM9780</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

laser capture microdissection - a demonstration of the isolation of individual dopamine neurons and the entire ventral tegmental area

ويستخدم ملقط ليزر (LCM) لعزل السكان مركزة من الخلايا الفردية أو المناطق التشريحية الدقيقة للأنسجة من أقسام الأنسجة على شريحة المجهر. عندما يقترن المناعية، LCM يمكن استخدامها لعزل أنواع الخلايا الفردية على أساس البروتين علامة معينة. هنا، يتم وصف هذه التقنية LCM لجمع مجموعة سكانية محددة من الخلايا العصبية الدوبامين وصفت مباشرة مع التيروزين هيدروكسيلاز المناعية ولعزل الخلايا العصبية الدوبامين التي تحتوي على منطقة للمنطقة الجوفية السقيفية باستخدام غير المباشرة المناعية التيروزين هيدروكسيلاز على القسم المجاور لتلك المستخدمة لLCM. يتم استخدام الأشعة تحت الحمراء (IR) القبض على الليزر لكلا تشريح الخلايا العصبية الفردية وكذلك منطقة السقيفية البطنية من الشرائح الزجاجية وعلى غطاء LCM للتحليل. الجفاف الكامل للالأنسجة مع 100٪ من الإيثانول والزيلين أمر بالغ الأهمية. مزيج من التقاط الأشعة تحت الحمراء الليزر والأشعة فوق البنفسجية (UV) cuttiيستخدم الليزر نانوغرام لعزل الخلايا العصبية الدوبامين الفردية أو المنطقة السقيفية البطنية عند استخدام PEN الشرائح الغشاء. شريحة الغشاء PEN ديها مزايا هامة على شريحة زجاجية، حيث أنها توفر أفضل الاتساق في التقاط وجمع الخلايا، وأسرع جمع قطع كبيرة من الأنسجة، هي أقل اعتمادا على الجفاف والنتائج في إزالة كاملة من الأنسجة من الشريحة. وعلى الرغم من إزالة مساحات واسعة من الأنسجة من شريحة زجاجية مجدية، فمن حد كبير أكثر استهلاكا للوقت، وكثيرا ما يترك بعض الأنسجة المتبقية خلف. وتظهر البيانات المعروضة هنا التي RNA من كمية ونوعية كافية يمكن الحصول عليها باستخدام هذه الإجراءات لقياسات PCR الكمي. على الرغم من أن RNA والحمض النووي هي جزيئات معزولة الأكثر شيوعا من الأنسجة والخلايا التي تم جمعها مع LCM والعزلة وقياس الرنا الميكروي، والبروتين والتغيرات جينية في الحمض النووي يمكن أن تستفيد أيضا من تعزيز قرار التشريحية والخلوية التي تم الحصول عليها باستخدام LCM.

Watch this Scientific Journal Video about Laser Capture Microdissection - A Demonstration of the Isolation of Individual Dopamine Neurons and the Entire Ventral Tegmental Area at JoVE.com

Laser Capture Microdissection - A Demonstration of the Isolation of Individual Dopamine Neurons and the Entire Ventral Tegmental Area

ويتجلى في عزل الخلايا العصبية الدوبامين الفردية أو المنطقة الجوفية السقيفية مع المناعية مباشرة أو غير مباشرة باستخدام ملقط ليزر. وتناقش المعلمات لعزل الأنسجة من شريحة زجاجية باستخدام الليزر تحت الحمراء والشرائح من الغشاء باستخدام مزيج من ليزر الأشعة تحت الحمراء وفوق البنفسجية.

الليزر التقاط تسليخ مجهري - تظاهرة لعزل الخلايا العصبية الدوبامين الفردية ومنطقة بطني السقيفية بكل

Laser capture microdissection (LCM) is used to isolate a concentrated population of individual cells or precise anatomical regions of tissue from tissue ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Laser Capture Microdissection of Drosophila Peripheral Neurons

Laser Capture Microdissection of Drosophila Peripheral Neurons

القبض على الليزر Microdissection ذبابة الفاكهة الخلايا العصبية المحيطية

The dendritic arborization (da) neurons of the Drosophila peripheral nervous system (PNS) provide an excellent model system in which to investigate the ...

Non-Laser Capture Microscopy Approach for the Microdissection of Discrete Mouse Brain Regions for Total RNA Isolation and Downstream Next-Generation Sequencing and Gene Expression Profiling

Non-Laser Capture Microscopy Approach for the Microdissection of Discrete Mouse Brain Regions for Total RNA Isolation and Downstream Next-Generation Sequencing and Gene Expression Profiling  |

غير النهج ليزر مجهرية لالتقاط Microdissection المتقطعة من مناطق الدماغ فأرة للعزل الحمض النووي الريبي توتال والتكرير والتسويق الجيل التالي من التسلسل الجيني التنميط والتعبير

As technological platforms, approaches such as next-generation sequencing, microarray, and qRT-PCR have great promise for expanding our understanding of ...

Comprehensive Profiling of Dopamine Regulation in Substantia Nigra and Ventral Tegmental Area

شامل التنميط من لائحة الدوبامين في المادة السوداء والمنطقة الجوفية السقيفية

Dopamine is a vigorously studied neurotransmitter in the CNS. Indeed, its involvement in locomotor activity and reward-related behaviour has fostered five ...

Laser Capture Microdissection of Enriched Populations of Neurons or Single Neurons for Gene Expression Analysis After Traumatic Brain Injury

تسليخ مجهري ليزر لقطة من السكان المخصب من الخلايا العصبية أو الخلايا العصبية واحدة لتحليل التعبير الجيني بعد إصابات في الدماغ

Long-term cognitive disability after TBI is associated with injury-induced neurodegeneration in the hippocampus-a region in the medial temporal lobe that ...

Laser Capture Microdissection of Neurons from Differentiated Human Neuroprogenitor Cells in Culture

لقطة ليزر تسليخ مجهري من الخلايا العصبية من الخلايا المتمايزة Neuroprogenitor الإنسان في الثقافة

Neuroprogenitor cells (NPCs) isolated from the human fetal brain were expanded under proliferative conditions in the presence of epidermal growth factor ...

Production of RNA for Transcriptomic Analysis from Mouse Spinal Cord Motor Neuron Cell Bodies by Laser Capture Microdissection

إنتاج الحمض النووي الريبي لتحليل النسخ من الماوس النخاع الشوكي خلية الخلايا العصبية الحركية الهيئات بواسطة الليزر التقاط الالتصاع الدقيق

Preparation of high-quality RNA from cells of interest is critical to precise and meaningful analysis of transcriptional differences among cell types or ...

A Method to Make a Craniotomy on the Ventral Skull of Neonate Rodents

وهناك طريقة لجعل حج القحف على بطني من الجمجمة الوليد القوارض

The use of a craniotomy for in vivo experiments provides an opportunity to investigate the dynamics of diverse cellular processes in the mammalian brain ...

Olfactory Neurons Obtained through Nasal Biopsy Combined with Laser-Capture Microdissection: A Potential Approach to Study Treatment Response in Mental Disorders

الخلايا العصبية الشمية التي يتم الحصول عليها من خلال الأنف خزعة جنبا إلى جنب مع الليزر والتقاط تسليخ مجهري: نهج المحتملين لدراسة الاستجابة للعلاج في اضطرابات العقلية

Bipolar disorder (BD) is a severe neuropsychiatric disorder with poorly understood pathophysiology and typically treated with the mood stabilizer, lithium ...

Environmental Modulations of the Number of Midbrain Dopamine Neurons in Adult Mice

التحويرات البيئية لعدد من الدماغ المتوسط ​​الدوبامين العصبية في الفئران الكبار

Long-lasting changes in the brain or &#8216;brain plasticity&#8217; underlie adaptive behavior and brain repair following disease or injury. Furthermore, ...