Name: techniques for processing eyes implanted with a retinal prosthesis for localized histopathological analysis: part 2 epiretinal implants with retinal tacks
Uploaded: 2015-02-14T14:00:00
Duration: 10 min
Description: Watch this Scientific Journal Video about Techniques for Processing Eyes Implanted with a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis: Part 2 Epiretinal Implants with Retinal Tacks at

Nicole Vella (Macquarie University) for providing reagents; Alexia Saunder (Bionics Institute; BI), Michelle McPhedran (BI), Chris Williams (BI) for experimental support; the Royal Victorian Eye and Ear Hospital (RVEEH) Biological Research Centre staff for animal care; Sue Pierce (RVEEH) for veterinary advice; Anthony Burkitt (Bionic Vision Australia; BVA), Tamara Brawn (BVA) and the BVA staff for administrative support. 
This research was supported by the Australian Research Council (ARC) through its Special Research Initiative (SRI) in Bionic Vision Science and Technology grant to Bionic Vision Australia (BVA). The Bionics Institute receives Operational Infrastructure Support from the Victorian Government and also acknowledges support from the Bertalli Family Trust and the J T Reid Charitable Trust. The funders had no role in study design, data collection and analysis, decision to publish, or preparation of the manuscript.
The Bionic Vision Australia Consortia authors for this manuscript are (a-z): 
Penelope J. Allen, Owen Burns, Kate E. Fox, Kumaravelu Ganesan, David J. Garret, Hamish Meffin, Joel Villalobos, and Jonathan Yeoh.

NOT: Tüm işlemler Royal Victorian Göz ve Kulak Hastanesi Hayvancılık Araştırma ve Etik Kurulu tarafından onaylandı (RVEEH AEC; # 10-199AB). konular Ulusal Sağlık ve (2013) ve &quot;Hayvanları Önleme Yasası&quot; Tıbbi Araştırma Konseyi &quot;Bakım ve Bilimsel Amaçlı Hayvan Kullanım Uygulama Avustralya Kanunu&quot; na göre tedavi edildi (ve değişiklikler 1986). Tüm cerrahi, klinik değerlendirme ve elektrofizyolojik işlemler anestezi altında gerçekleştirildi ve tüm çabaları acı en aza indirmek için yapılmıştır. 1. Enükleasyon ve Fiksasyon NOT: Varsa, cihaz kabloları veya vitrektomi liman çevresinde ekstra özen, arkadaşı yazının 16 ayrıntılı olarak açıklanmıştır enükleasyon ve tespit prosedürü uygulayın. Kısaca, bu içerir: <ol><li> Transcardially soğuk nötr Buffe ardından ılık tuzlu su ile konuyu serpmekKırmızı formalin. </li><li> Görülecek şekilde hizmet etmek için göz küresi dikişlerle bağlayın. </li><li> Cihaz kabloları ve herhangi bir ek yamaları / sekmeler muhafaza, göz 16 enükleasyonu. </li><li> 36 saat - 18 Davidson&#39;un çözeltide göz Post-düzeltmek. </li><li> 8 saat - 6 için% 50 etanol transfer. </li><li> Diseksiyon kadar% 70 etanol ve buzdolabında (4 ° C) aktarın. </li></ol> 2. Elektrot Kaldırma ve Diseksiyon. NOT: Tüm epiretina implantları aynı form faktörüne sahip olacak, ama genel olarak bir elektrot dizisi ve esnek ve uyumlu taşıyıcı malzeme çeşit olacaktır. Retina kopçalanmaktadır cihazlar, metal çakmak bunları bir arada tutan, dizi ve gözün arka nüfuz yapışma delik bulunmaktadır. <ol><li> Implant ve retina tutturulur noktayı tahayyül edin. <ol><li> 15 derecelik bıçak kullanarak çevresel trans-kornea kesi yapmak ve exp kornea kapağı çıkarınaltta yatan iris ve lens ose. </li><li> 15 derecelik bıçak kullanarak, epiretinal implant ve yerinde metal tack ile arka odasını açığa lensin zonüler lifleri disinsert ve toto lensi çıkarın. </li></ol></li><li> İmplant ve çalışma yapılmaktadır bağlı olarak, daha önce diseksiyonu yabancı bileşenlerini kaldırmak. NOT: Bu örnekte, değerlendirilmekte olan Epiretinal dizi bir konformal silikon taşıyıcı içine yerleştirilmiş bir prototip hermetik elmas elektrot ve elektronik paketin oluşuyordu (evde üretilen, 20 bakınız). <ol><li> Burada, dikkatli bir neşter ile ince diseksiyon ile elmas elektrot paketi ayıklayın. Retina yapışma ve platin kablo kalıntıları (Şekil 2) ile birlikte implantın silikon gövdesini bırakın. Gömülü bir dizi / konut soruşturma kapsamında cihaz tasarımının bir parçası değilse, o zaman bu adımı (2.2) ihmal. </li></ol></li><li> Dikkatliceİstenilen yönde yapışma ve çevresindeki doku içeren bir örnek teşrih. Sklera, koroid ve retina olmak üzere gözün arka, tam kalınlıkta şeritler kesmek için ince diseksiyon makas kullanın. Yapışma bitişik tüm retina tabakaları gösteren, bir yapışkanlık uzunlamasına kesitini verir, bir örneği ele alalım (Şekil 2) NOT: numune için istenen oryantasyon istenen belirli sonuç bağlı olarak değişebilir. Örneğin, eğer bir sonra optik diski numune dahil edilmelidir optik diske çakmak hasar yakınlığı incelemek istemektedir. </li></ol> 3. Dehidrasyon, Gömme, Montaj, Taşlama, Boyama ve Görüntüleme <ol><li> Ilerleyen etanol aşamalarında üç gün boyunca örnek kurutmak: <ol><li> Iki kez 2 saat boyunca% 70 etanol içinde örnek dihidrat. </li><li> O / N sonra iki kez 2 saat boyunca% 80 etanol içinde örnek kurutmak ve. </li><li> 2 saat TWIC için% 90 etanol içinde örnek kurutmakör. </li><li> O / N sonra iki kez 2 saat süre ile% 100 etanol içinde örnek kurutmak ve. </li></ol></li><li> Iki kez 2 saat süre ile% 100 aseton içinde örnek dihidrat. <ol><li> Aseton numuneyi çıkarın ve oda sıcaklığında hava-kurudukça bir ışık mikroskobu altında gözlemlemek. Epoksi örnek aktarın o / çöküşü kıvırmak başlar hemen önce (3.4 adıma bakın). NOT: çökmüş hücreleri ve büzülme yumuşak dokular sonuçlarından sıvı çıkarılması. Doku kıvırma / çöküşü oluştuğunda bir takdir tecrübesi ile geliştirilmiştir. </li></ol></li><li> Üreticinin talimatlarına göre bir tıbbi dereceli epoksi reçine hazırlanması. Reçinenin sertleştirilmesi için, 1 saat ya da oda sıcaklığında 24 saat boyunca ya da 55 ° C kullanın. Hava kabarcıklarının bertaraf edilmesi için 50 mbar&#39;da ° &#39;de ~ 5 dakika boyunca bir vakum odasına koyun. Kaynatın epoksi karışımı neden olur aşırı vakum gibi manuel vakum düzenler ve gaz alma etkili bir meydana gelmeyeceği NOT: Adım 3.2 ile eş zamanlı olarak adım 3.3 gerçekleştirin. </li><li> Samp gömnet epoksi reçine le. Uygun bir yapışmalı kapta gazı alınmış epoksi göz dokusunu daldırın ve O bırakın / N RT&#39;de tedavi. </li><li> Yeniden boyutlandırma ve terbiyeli epoksi blok yeniden gömerek istenen yönde (Şekil 2) numune embed özen gösterin. (- Şekil 3A sarı fincan) tiramolanın uzun eksen kalıp altına paralel odaklı olacak şekilde göz dokusunu içeren resized blok-embed yeniden. </li><li> Bir taşlama numune tutucu reçine monte ve öğütülmesine - silisyum karbür kağıdı kullanarak (230 manuel taşlama, su ile 250 rpm) (800 ızgara ile başlayan, Şekil 3C ve 3E). </li><li> Boyama için, 3 toluidin mavisi boyası zemin yüzeyi daldırma - 5 dakika, ya da leke gelişene kadar (Şekil 3F). </li><li> Musluk suyu (Şekil 3G) ile durulayın. </li><li> Görüntü bir yüksek güç diseksiyon kapsamında numune zemin yüzeyi hücresel katmanları görselleştirmek içinRetina (Şekil 3H). Hava-epoksi arayüzünde kırınım pürüzsüz numune üzerinde epoksi üst yüzeyi üzerinde damıtılmış bir damla su uygulanır. Örnek aydınlatmak için bir optik fiber &#39;boyun&#39; ışık kaynağı kullanın. </li><li> Bir numunenin önceden ayarlanmış kalınlığı uzak taşlama her zaman (numune tutucu minimum hassas ve tekrarlanabilir taşlama artış 20 mikron), 3.9 - 3.6 tekrarlayın adımları. </li></ol>

<ol>
	<li>Shepherd, R. K., Shivdasani, M. N., Nayagam, D. A., Williams, C. E., Blamey, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+prostheses+for+the+blind.">Visual prostheses for the blind.</a> Trends Biotechnol. 31, 562-571 (2013).</li><li>Santos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preservation+of+the+inner+retina+in+retinitis+pigmentosa.">Preservation of the inner retina in retinitis pigmentosa.</a> Arch Ophthalmol. 115, 511-515 (1997).</li><li>Humayun, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+perception+in+a+blind+subject+with+a+chronic+microelectronic+retinal+prosthesis.">Visual perception in a blind subject with a chronic microelectronic retinal prosthesis.</a> Vision Res. 43, 2573-2581 (2003).</li><li>Roessler, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiographic+findings+folowing+tack+fixation+of+a+wireless+epiretinal+retina+implant+device+in+blind+RP+patients.">Angiographic findings folowing tack fixation of a wireless epiretinal retina implant device in blind RP patients.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 249, 1281-1286 (2011).</li><li>Chow, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+artificial+silicon+retina+microchip+for+the+treatment+of+vision+loss+from+retinitis+pigmentosa.">The artificial silicon retina microchip for the treatment of vision loss from retinitis pigmentosa.</a> Arch Ophthalmol. 122, 460-469 (2004).</li><li>Zrenner, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+electronic+chips+allow+blind+patients+to+read+letters+and+combine+them+to+words.">Subretinal electronic chips allow blind patients to read letters and combine them to words.</a> Proc Biol Sci. 278, 1489-1497 (2011).</li><li>Fujikado, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+of+semichronically+implanted+retinal+prosthesis+by+suprachoroidal-transretinal+stimulation+in+patients+with+retinitis+pigmentosa.">Testing of semichronically implanted retinal prosthesis by suprachoroidal-transretinal stimulation in patients with retinitis pigmentosa.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52, 4726-4733 (2011).</li><li>Saunders, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+surgical+procedure+for+implantation+of+a+prototype+suprachoroidal+retinal+prosthesis.">Development of a surgical procedure for implantation of a prototype suprachoroidal retinal prosthesis.</a> Clin Experiment Ophthalmol. , (2013).</li><li>Lee, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+microelectrode+arrays+for+artificial+retinal+implants+using+liquid+crystal+polymers.">Development of microelectrode arrays for artificial retinal implants using liquid crystal polymers.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 50, 5859-5866 (2009).</li><li>Sakaguchi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transretinal+electrical+stimulation+with+a+suprachoroidal+multichannel+electrode+in+rabbit+eyes.">Transretinal electrical stimulation with a suprachoroidal multichannel electrode in rabbit eyes.</a> Jpn J Ophthalmol. 48, 256-261 (2004).</li><li>Majji, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+histological+and+electrophysiological+results+of+an+inactive+epiretinal+electrode+array+implantation+in+dogs.">Long-term histological and electrophysiological results of an inactive epiretinal electrode array implantation in dogs.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 40, 2073-2081 (1999).</li><li>Walter, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+long-term+implantation+of+electrically+inactive+epiretinal+microelectrode+arrays+in+rabbits.">Successful long-term implantation of electrically inactive epiretinal microelectrode arrays in rabbits.</a> Retina. 19, 546-552 (1999).</li><li>Ray, A., Chan, L., Thomas, B., Weiland, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+prolonged+stimulation+at+the+electrode-retina+interface.">Effects of prolonged stimulation at the electrode-retina interface.</a> Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. 1, 1285-1287 (2006).</li><li>Colodetti, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+of+damaging+electrical+stimulation+in+the+retina.">Pathology of damaging electrical stimulation in the retina.</a> Experimental eye research. 85, 23-33 (2007).</li><li>Nayagam, D. A. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+Electrical+Stimulation+with+a+Suprachoroidal+Retinal+Prosthesis:+A+Preclinical+Safety+and+Efficacy+Study.">Chronic Electrical Stimulation with a Suprachoroidal Retinal Prosthesis: A Preclinical Safety and Efficacy Study.</a> PLoS One. 9, e97182 (2014).</li><li>Nayagam, D. A. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+Processing+Eyes+Implanted+With+a+Retinal+Prosthesis+for+Localized+Histopathological+Analysis.">Techniques for Processing Eyes Implanted With a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e50411 (2013).</li><li>Laube, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+surgical+techniques+for+implantation+of+a+wireless+intraocular+epiretinal+retina+implant+in+Gottingen+minipigs.">Development of surgical techniques for implantation of a wireless intraocular epiretinal retina implant in Gottingen minipigs.</a> Graefe's Archive For Clinical And Experimental Ophthalmology = Albrecht von Graefes Archiv fur klinische und experimentelle Ophthalmologie. 250, 51-59 (2012).</li><li>Gerding, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+long-term+evaluation+of+intraocular+titanium+tacks+for+the+mechanical+stabilization+of+posterior+segment+ocular+implants.">Successful long-term evaluation of intraocular titanium tacks for the mechanical stabilization of posterior segment ocular implants.</a> Mat.-wiss. u. Werkstofftech. 32, 903-912 (2001).</li><li>Seo, J. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silicon+retinal+tack+for+the+epiretinal+&#64257;xation+of+the+polyimide+electrode+array.">Silicon retinal tack for the epiretinal &#64257;xation of the polyimide electrode array.</a> Current Applied Physics. 6, 649-653 (2006).</li><li>Hadjinicolaou, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+stimulation+of+retinal+ganglion+cells+with+diamond+and+the+development+of+an+all+diamond+retinal+prosthesis.">Electrical stimulation of retinal ganglion cells with diamond and the development of an all diamond retinal prosthesis.</a> Biomaterials. 33, 5812-5820 (2012).</li><li>Briggs, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+round+window+and+cochleostomy+approaches+with+a+prototype+hearing+preservation+electrode.">Comparison of round window and cochleostomy approaches with a prototype hearing preservation electrode.</a> Audiol Neurootol. 11, 42-48 (2006).</li><li>Shepherd, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+cochlear+implant+electrode+array+for+use+in+experimental+studies.">An improved cochlear implant electrode array for use in experimental studies.</a> Hear Res. 277, 20-27 (2011).</li><li>Tykocinski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+electrode+position+in+the+human+cochlea+using+various+perimodiolar+electrode+arrays.">Comparison of electrode position in the human cochlea using various perimodiolar electrode arrays.</a> Am J Otol. 21, 205-211 (2000).</li><li>Hardie, N. A., MacDonald, G., Rubel, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+imaging+and+3D+reconstruction+of+mammalian+cochlea+by+fluorescent+confocal+microscopy.">A new method for imaging and 3D reconstruction of mammalian cochlea by fluorescent confocal microscopy.</a> Brain Res. 1000, 200-210 (2004).</li></ol>

Authors have nothing to disclose. Irfan Durmo is an employee of Cochlear Ltd.

Standart histolojik teknikler nedeniyle, metal, cam ya da elmas bıçakları ile bu nesneleri kesme sınırlamalara yerinde sert metal implantları işleme koyamıyoruz. Bizim arkadaşı kağıdı 16, biz bir modifiye bütün göz tespit tekniği kullanılması artefakt retina Delaminasyonu azaltabileceğini gösterdi. Mevcut yazıda, bir taşlama kurdu ve yerinde 21-23 retina protezler için modifiye edilmiş koklear implant görselleştirmek için teknik parlatma. Retinaya bir elektrot dizisi sabitlemek için kullanılan bir titanyum çakmak, epiretinally, çevredeki göz dokusu ile birlikte epoksi gömülü edildi. Bu reçine bloğu daha sonra metal tack hemen bitişiğinde doku morfolojisi ortaya çıkarmak için uygun odaklı ve giderek zemin / cilalı oldu. Çeşitli derinliklerde bloğun cilalanmış yüzeyinin görüntüleri güçlü bir diseksiyon mikroskobu ile alınmıştır. Görselleştirilmesi ve değerlendirme,: Bu teknik için kullanışlıdırEpiretinal implanta komşu doku yanıtı ing; İmplant implantasyonu ile ilişkili cerrahi travmayı değerlendirmek için; Sert metal bileşenleri biyolojik reaksiyonu belirlemek için; ve implantın ve retina yüzeyi arasındaki mesafeyi ölçmek için. Bu teknik gözünde retina yapışma veya diğer sert (örneğin, metalik) nesnelerin bitişik bölgenin yerinde görselleştirme için gelecekte güvenlik çalışmalarında yararlı olacaktır. Bu epiretinally retinaya tutturdu protezlerin klinik öncesi güvenliğini değerlendirmek doğrudan uygulama vardır. Aynı zamanda, alt retina konumda implantlar ile temas içinde retina bölgelerinde doku hasarını değerlendirmek için yararlı olabilir. Tekniği doğru yapılmış olduğunu doğrulamak için çeşitli yollar vardır. Her aşamada, retina gözün dış katmanlara bağlı kalmalıdır. Brüt artefakt retina dekolmanı varsa, bu Hindu olabilirtespitle ilgili bir sorun yedik. Örnek gömülü olduğu ve bloğun taşlama-yüzü ile ortogonal yakın olmalıdır retina engellemek son reçine içinde odaklı yeniden zaman; Bu eğik kesme minimize edecektir. Bu (örneğin bir retina yapışma gibi) bir nesneyi hareket için gerekli (bilinen adım boyutu) artan öğütme adım sayısı nesnesinin boyutları ile buna bağıntılı olduğunu kontrol etmek yararlıdır. Teknik, birkaç şekilde optimize edilebilir. Öğütme işlemi ile bağlantılı epoksi bloğun yüzeyinde çizikler tedricen daha ince dereceli parlatma ile azaltılabilir. Bu çalışma için, biz 800, 1000, 1200, 2400, ve 4000 grade silikon karbür kağıdı kullanıldı. Elmas macun ayrıca, yüzey geliştirmek için kullanılabilir. Bir ince yüzey yüksek kaliteli görüntü verir ama ek parlatma zaman pahasına. Bu tekniğin sonuçlarını iyileştirmek için bir başka kritik husus opti seçim ve kalitesics ve aydınlatma görüntü yakalama için kullanılan. Diğer temel histolojik lekeleri - özellikle Nissl lekeleri, toluidin mavisi yerine kullanılabilir, ancak daha da optimizasyon ihtiyacı olabilir. Bazı lekeler reçine yanı sıra doku (örneğin, Eosin), bu nedenle sığ bir lehçe arka plan renk değişimi kaldırmak için boyama sonrası gerekebilir leke olacaktır. Uzman lekeler, flüoresan boyalar ve immünohistokimyasal teşebbüs değildi, ama çok özel bir sonuç arzu edildiği takdirde, her bir taşlama seviyesinde bu lekeleri gerçekleştirmek için gereken zaman engelleyici olması muhtemeldir. Bununla birlikte, yerleştirme basamak (adım 3.4) 24 önce, bir bütün olarak doku leke mümkün olabilir. Bu tekniğin ana sınırlama bu nedenle taşlama ve parlatma her aşamasında büyütme çeşitli birçok (muhtemelen gereksiz) görüntüleri yakalamak için ihtiyatlı olduğunu, ilgi bölgesi uzak zemin edildikten sonra, bu alınamaz olmasıdır. ÖyleAyrıca önemli her taşlama derinlik ayarı için küçük artışlarla kullanmak için. Bu tekniğin bir başka sınırlama olduğu dokuya cam slayt üzerine monte edilmiş ve bir standart (iletim) ışık mikroskobu ile inceledi ile karşılaştırıldığında optik büyütme ve çözünürlük. Prototip ve yeni bir implant cihazının güvenliğini değerlendirmek amacıyla, brüt patolojik değerlendirme birincil ilgi olduğunu. Bu teknik, bir retina yapışma ile ilişkili klinik olarak önemli hasar gözlemlemek için etkili bir yöntem sağlar. Uygulamada, eziyet, cila toplamak ve (bir zamanlar gömülü) verilen örnek fotoğraflamak için gerekli genel Zamanla bu bölümüne bir parafin blok veya dondurulmuş bölümü alacağını zaman karşılaştırılabilir. Retina implantların kapsamı dışında uygulamalara uzatılabilir mevcut tekniklerin potansiyeli de vardır. Bu teknik, implant ekstre feasib olmayan bir sabit implant bitişik doku değerlendirmek için uygundurle veya arayüz zarar olacaktır. Örneğin, bu yöntem, ilaç iletimi için derin beyin ya da periferal sinir elektrot kanüller gibi geleneksel histolojik teknikler ile kesilemezler metal (örneğin, platin, nitinol, vs.) yapılmış implantlar değerlendirmek için genişletilebilir, vasküler stentler veya ortopedik protezler.

Retinitis pigmentosa (RP) nöral aktivitenin içine, fotonların şeklinde, ışık transdüklenmesinden sorumlu retinanın en dış tabakasındaki hücreler olan fotoreseptör, yaygın kaybına neden olur kalıtsal bir hastalıktır. Önemlisi, RP hastalar genellikle hala işlevsel onların retinanın diğer katmanları artık nöronlar var. Retina protezleri görsel yolu 1,2 etkinleştirmek için elektrik stimülasyonu ile bu hayatta nöronlar hedefleyerek bu hastalara bazı sınırlı vizyon geri yeteneğine sahiptir. Klinik çalışmalarda Algısal sonuçları erken dönem sonuçları umut verici gösterilmiştir ve son zamanlarda bazı cihazlar ticari kullanım için onaylanmıştır. Subretinally 5,6 ve 7,8 suprachoroidally epiretinally 3,4,: Şu anda, üç ana anatomik klinik retina protezleri yerleştirilmiş edildiği yerleri vardır. Farklı cihazlar farklı malzemeler kullanmak ve onların formu özelleştirilmişOnlar implante edildiği yere. Ancak, tüm elektrik darbeleri ile retinanın kalan nöronlar aktive ederek görsel gözlemleri oluşturun. Herhangi bir tıbbi protez nedeniyle ilk yerleştirme mekanik etkilere veya sonradan devam eden kuvvetler çevre dokulara zarar için potansiyeli vardır. Retinal protezler gibi implante uyarıcıları, durumunda, elektriksel parametre güvenli sınırlar içinde olması gereken ek bir düşünce de bulunmaktadır. Hasta güvenliği her şeyden önemlidir, bu nedenle cihazların titizlikle klinik 9-15 ayar geçmeden önce preklinik çalışmalarda test edilmelidir. Bizim tamamlayıcı madde olarak, suprakoroidal boşluk 16 içinde yer alan bir implant çevreleyen göz lokalize histopatolojik değerlendirilmesi için bir yöntem açıklamıştır. Bu yazıda, (fe bir klinik öncesi de epiretinally retinaya tutturdu bir elektrot dizisi, çevredeki göz dokusunu görselleştirmek için bir teknik tarifçizgi) modeli (Şekil 1). Epiretinal konumu görsel protez bulmak için en sık kullanılan konumdur. Burada yer alan elektrot diziler genellikle göz 17-20 tüm katmanları nüfuz metal tack ile retina yapıştırılmıştır. Önce bu yazıda anlatılan teknikleri, doğru bir retinal ve hemen bir yapışmaya çevreleyen diğer dokulara değerlendirmek zor oldu. Nötr tamponlu formalin kullanarak standart göz fiksasyon nedeniyle tack sabit noktaya karşı retina ve sklera diferansiyel hareketine artefakt retina hasarına neden olmuştur. Bu nedenle tack ve Epiretinal dizi kaynaklanan herhangi bir gerçek hasar doğru tespit edilemedi. Metal nesneler kolayca geleneksel histolojik aparatı ile kesilmiş olamaz Buna ek olarak, göz dokusu kesit yerinde retina yapışma ile yapılabilir olamazdı; histolojik işlem de önce yapışma çıkarmadanBu da suni retina hasara yol açtı gibi istenmeyen. Bu çalışmanın iki amacı vardı: yapışma ve Epiretinal implant dizi kaynaklanan herhangi bir hasar güvenilir değerlendirilebilir böylece 1) retina dekolmanı eseri azaltmak için; ve 2) çıkarmadan tack bitişik retina mimari görselleştirmek için. Suni retina delaminasyona azaltır, (yardımcı madde 16 de tarif edildiği gibi) amaca 1 elde etmek için, yeni bir tespit tekniği kullanılmıştır. Amaca 2 elde etmek amacıyla, taşlama ve başlangıçta koklear implant elektrotlar 21-23 in situ gözlenmesi için geliştirilen tekniği, parlatma, bir gömme modifiye. artefakt retina hasarı en aza indirmek ve bu nedenle yapışma ve Epiretinal dizi neden olası hasar doğru değerlendirilmesini izin verirken, bu yazıda anlatılan yöntemler yerinde bir çivinin çevreleyen retina görselleştirme ve bitişik sağlar.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="853">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:337px;">Name of the reagent / equipment</td>
			<td style="width:191px;">Company</td>
			<td style="width:176px;">Catalogue number</td>
			<td style="width:151px;">Comments (optional)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:337px;">Acetone</td>
			<td style="width:191px;">Chem-Supply</td>
			<td style="width:176px;">AA008</td>
			<td style="width:151px;">Propanone BHD Medical grade</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:337px;">Epo-Tek 301 Epoxy</td>
			<td style="width:191px;">Epoxy Technology</td>
			<td style="width:176px;">Part A 1675-54-3 Part B 9046-10-0</td>
			<td style="width:151px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:337px;">Ethanol 70-75% v/v</td>
			<td style="width:191px;">Merck PTY LTD</td>
			<td style="width:176px;">4.10261</td>
			<td style="width:151px;">Alcohol</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:337px;">Ethanol</td>
			<td style="width:191px;">Merck PTY LTD</td>
			<td style="width:176px;">90143</td>
			<td style="width:151px;">Alcohol</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:337px;">Toluidine blue O</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:176px;">T3260</td>
			<td style="width:151px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:337px;">Ethylenediamine Tetraacetic Acid</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:151px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">TegraPol grinding/polishing machine</td>
			<td>Struers</td>
			<td>TegraPol-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">AccuStop specimen holder</td>
			<td style="width:191px;">Struers</td>
			<td style="width:176px;">Accustop</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Light microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Objective lens</td>
			<td>Leica</td>
			<td>2.0x Planapo Objective</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Digital Microscope Camera</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DFC-420C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope Software</td>
			<td>Leica&#160;</td>
			<td>Application Suite v4.1.0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

techniques for processing eyes implanted with a retinal prosthesis for localized histopathological analysis: part 2 epiretinal implants with retinal tacks

Retinal prostheses for the treatment of certain forms of blindness are gaining traction in clinical trials around the world with commercial devices currently entering the market. In order to evaluate the safety of these devices, in preclinical studies, reliable techniques are needed. However, the hard metal components utilised in some retinal implants are not compatible with traditional histological processes, particularly in consideration for the delicate nature of the surrounding tissue. Here we describe techniques for assessing the health of the eye directly adjacent to a retinal implant secured epiretinally with a metal tack.
Retinal prostheses feature electrode arrays in contact with eye tissue. The most commonly used location for implantation is the epiretinal location (posterior chamber of the eye), where the implant is secured to the retina with a metal tack that penetrates all the layers of the eye. Previous methods have not been able to assess the proximal ocular tissue with the tack in situ, due to the inability of traditional histological techniques to cut metal objects. Consequently, it has been difficult to assess localized damage, if present, caused by tack insertion.
Therefore, we developed a technique for visualizing the tissue around a retinal tack and implant. We have modified an established technique, used for processing and visualizing hard bony tissue around a cochlear implant, for the soft delicate tissues of the eye. We orientated and embedded the fixed eye tissue, including the implant and retinal tack, in epoxy resin, to stabilise and protect the structure of the sample. Embedded samples were then ground, polished, stained, and imaged under various magnifications at incremental depths through the sample. This technique allowed the reliable assessment of eye tissue integrity and cytoarchitecture adjacent to the metal tack.

tespit protokolü esas artefakt dekolmanı ve retina 16 delaminasyonuna azalır. Epoksi bloğu içinde numunenin Yönlendirme tarif edilen iki adımlı gömme işlemi kullanılarak sürekli olarak elde edildi. artan öğütme işlemi en iyi sonuçları elde etmek için el becerisi orta düzeyde gerekli ama artım çözünürlüğü üzerinde ince kontrol sağlamıştır ayarlanabilir numune tutucu tarafından destekli. Tüm durumlarda (n = 5) çakmak bulunan ve oldu toprak / arzu ve tutarlı sonuçlar ile parlatılır. çiviler bitişik retinae çözülebilir ve uygun bir şekilde boyanmıştır. Bir notu P # 800 silisyum karbür kağıdı ile epoksi reçine bloğun yüzeyi parlatılması gömülü doku hücresel makro görüntü yeterli oldu. Daha yüksek dereceli kağıt, veya elmas harç madde de eğer istenirse, herhangi bir derinlikte parlatmak için kullanılabilir. Bir diseksiyon mikroskobu ve fiber optik &#39;boyun&#39; aydınlatabilirizt kaynak plan bloğu ve gömülü doku numunesinin yüzeyi görüntülenmesi için uygun olduğu bulunmuştur. ışık kaynağının konumu mikroskop ile en iyi aydınlatma ve kontrast verdi konum ve açı bulmak için deneme yanılma yoluyla değiştirilmiştir. Bloğun yüzeyine damıtılmış bir damla su ekleyerek, örnek olarak öncelikle epoksi- hava ara-yüzü en açık yolu difraksiyonu ve / veya düz bozuklukları azaltmak için yararlı olmuştur. Şekil 4, bir titanyum retina hemen bitişik görsel retina dokusunun, örneğin görüntüler gösterir Bu tekniği kullanarak çakmak. Sigara suni retina dekolmanı ve katlanır silikon (Şekil 4A) her iki tarafında görülebilir. çakmak mili silikon gömülü görünür; tack baş retina ve sklera nüfuz etmiştir. Silikon (Şekil 4C) lekelenmemiş retina iki tarafında olmayan suni retina dekolmanı bulunmaktadır. teknik Ther, bu durumda, bu göstermiştirE nedeniyle eğik bir ekleme açısına bir tarafında retina yapışma ve sıkıştırma bitişik retina düzensizlik olduğunu. Sunulan görüntüler, sadece tekniği değil, genel olarak çakmak-zarar histopatolojik temsilcisi başarı çizimler olduğunu unutmayın. <img alt="Şekil 1," src="/files/ftp_upload/52348/52348fig1highres.jpg" /> Epiretinal elektrot dizisinin Şekil 1. Yerleştirme. (A) posterior sklera, koroid ve retina dejenere (fotoreseptörleri eksik) büyütülmüş kesitini gösteren gözün şematik. Bir elektrot dizisi. Epiretinally yapıştırılmış, mavi tasvir Epiretinal elektrot dizisinin (B) Bilgisayar destekli çizim-almaktadır. Bir entegre devre (&#39;çip&#39;) ve elektrot paketi; b titanyum retina yapışma; c tıbbi silikon konut; d kurşun çıkış noktası. Panel A, bir orijinal illustrati modifiyeBiyonik Vizyon Avustralya, telif hakkı Beth Croce verilen nezaket üzerinde. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52348/52348fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52348/52348fig2highres.jpg" /> Şekil 2. Elektrot kaldırma ve göz diseksiyonu. Yerinde Epiretinal yapışma ile enüklee kedi göz Yüksek dinamik aralık makro fotoğraflar. (A) Davidson&#39;un fiksatif ile Mesaj tespit retina mimari 16 korumak için, çıkarılan göz disseke edildi. elektrot dizisi paketi silikon taşıyıcı çıkarıldı geri kalan implantın yapışma (ok) ve silikon gövdeli (kesikli kare dış hatlıdır elektrot dizisinin orijinal konumunu gösterir). (B), göz bitişik uzunlamasına bir kesite sahip kesitlere ayrılmıştır çakmak(Kesikli çizgi). çakmak Göz yuvası (ok) posterior duvarında gömülü kalır, sklera ile ağırlıklı olarak stabilize. Kaldırılan elektrot dizi altındaki retina içeren bölüm standart histolojik işlemler 16 (sol segment) için hazırlanan ise yapışma içeren doku bölümünde, reçine gömme ve taşlama (sağ kesimi) için hazırlanmıştır. 0.5 mm&#39;lik artışlarla birlikte bir cetvel her panelin alt kenarında gösterilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52348/52348fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/52348/52348fig3highres.jpg" /> Şekil 3. Epoksi gömülmesi ve yapışma ve retina dokusunun taşlama. Gömülü epoksi fotoğrafları ve hizalanmış doku örneği, taşlama, boyama ve yapışma ve retina dokusunun görüntüleme. (A) tac<html> k örnek bir epoksi reçine blok gömülü edildi. Kalıp kullanarak, numune uzunlamasına düzlem kalıbın dibine paralel olacak şekilde yönlenmiştir. Öğütme (B) yapışma numunesini ihtiva eden vulkanize epoksi bloğu. (C), epoksi blok bir öğütme numune tutucuya monte edilmiştir, hazır . (D) örnek zemin dokusunun yani görüntülü bölümleri retina hücresel katmanları ve yapışma boyuna ekseni ihtiva odaklı edildi. (E) örnek bir döner taşlama silisyum karbür kağıt kullanarak zemin oldu. (F) zemin yüzeyi Blok retina katmanları tespit etmek toluidin mavisi ile lekelenmiştir. (G) blok Boya fazlasını uzaklaştırmak için musluk suyu ile durulandı. (H), mavi lekeli retina tabakalar ve yapışmayan bir yüksek güçlü diseksiyon kapsamı kullanılarak görüntülenmiştir toluidin. reklam / 52.348 / 52348fig4highres.jpg &quot;/&gt; Yapışma ve retinanın Şekil 4. yüksek ve düşük güç görüntüler. Çeşitli noktalarda taşlama işlemi sırasında görüntü çakmak (yıldız işareti) uzunlamasına bölümleri (&#39;S&#39; sklera göz nüfuz ve çıkarken gösteren bir diseksiyon kapsamı ile alınmıştır ), silikon (hash) ve lekeli toluidin mavisi ve lekesiz retina (&#39;R&#39;) bitişik. Bu örnek görüntüler sadece mevcut görselleştirme tekniği göstermek için vardır, ve tüm Epiretinal implant veya çakmak ekleme histoloji sonuçları temsilcisi değildir unutmayın. Platin kablolama zemin kalıntıları panelleri AD (&#39;W&#39;) görebilir. (A) Düşük güç, retina ve sklera nüfuz tiramolanın lekesiz görüntüsü. (B) retina dekolmanı Yüksek enerjili görüntü ve lekesiz retina bitişik katlanır çakmak şaftının merkezinde görüntü A. (C) Düşük güç görüntüde silikon taşıyıcı. <strong&gt; (D) Ayrı bir örnekte görüntü C (E) tack merkezinin Yüksek güç görüntüsü, hiçbir silikon taşıyıcı ile, çakmak kabzası altında toluidin mavisi lekeli retina yüksek enerjili görüntü hemen önce, gösterilir . yapışmayan milini (F) Normal toluidin blue ile boyanan retina mimari taşlama (GCL: retina ganglion hücre tabakası, INL: iç nükleer tabaka; onl: Dış nükleer tabaka; PR: fotoreseptör T: kedi Tapetum lucidum) aynı taşlama tekniği kullanılarak görüntülendi . Her paneldeki Ölçek çubukları: A ve C = 2 mm; B ve D = 500 mm; E = 200 mikron; F 100 mikron =.

Watch this Scientific Journal Video about Techniques for Processing Eyes Implanted with a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis: Part 2 Epiretinal Implants with Retinal Tacks at 

Techniques for Processing Eyes Implanted with a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis: Part 2 Epiretinal Implants with Retinal Tacks

Here we describe histological techniques for visualising ocular tissue directly adjacent to a metal epiretinal tack and retinal prosthesis.

Lokalize Histopatolojik Analiz için bir Retina Protez ile implant İşleme Teknikleri Gözler için: Bölüm Retina Tacks ile 2 Epiretinal İmplantlar

Retinal prostheses for the treatment of certain forms of blindness are gaining traction in clinical trials around the world with commercial devices ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Techniques for Processing Eyes Implanted With a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis

Lokalize histopatolojik analizi için bir Retina Protez ile implant İşleme Gözler Teknikleri

With  the recent development of retinal prostheses, it is important to develop  reliable techniques for assessing the safety of these devices in ...

Tıp

Quantitative Fundus Autofluorescence for the Evaluation of Retinal Diseases

Retina Hastalıkları Değerlendirilmesi Nicel Otofloresans

The retinal pigment epithelium (RPE) is juxtaposed to the overlying sensory retina, and supports the function of the visual system. Among the tasks ...

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

Tavşanlarda Subretinal Cerrahi Adım Protokolle Bir Adım

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

An Acute Retinal Model for Evaluating Blood Retinal Barrier Breach and Potential Drugs for Treatment

Tedavi Kan Retina Bariyer ihlali ve Potansiyel İlaçlar değerlendirilmesi için bir Akut Retina Modeli

A low-cost, easy-to-use and powerful model system is established to evaluate potential treatments that could ameliorate blood retinal barrier breach. An ...

Studying Diabetes Through the Eyes of a Fish: Microdissection, Visualization, and Analysis of the Adult tg(fli:EGFP) Zebrafish Retinal Vasculature

Studying Diabetes Through the Eyes of a Fish: Microdissection, Visualization, and Analysis of the Adult tgfli:EGFP Zebrafish Retinal Vasculature

Diyabet ile gözleri bir balık eğitim: mikrodiseksiyon, görselleştirme ve yetişkin tg(fli:EGFP) Zebra balığı retina damarlara analizi

Diabetic retinopathy is the leading cause of blindness among middle-aged adults. The rising prevalence of diabetes worldwide will make the prevention of ...

Biotribological Testing and Analysis of Articular Cartilage Sliding against Metal for Implants

İmplantlar İçin Metale Karşı Kayan Eklem Kıkırdağının Biyotribolojik Test ve Analizi

Osteochondral defects in middle-aged patients might be treated with focal metallic implants. First developed for defects in the knee joint, implants are ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

Kemirgenlerde İskemik Retina Hastalıkları için Oksijen Kaynaklı Retinopati Modeli

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...

Induction and Analysis of Oxidative Stress in Sleeping Beauty Transposon-Transfected Human Retinal Pigment Epithelial Cells

Induction and Analysis of Oxidative Stress in Sleeping Beauty Transposon-Transfected Human Retinal Pigment Epithelial Cells

Uyuyan Güzel Transposon Transposon Transfected İnsan Retina Pigment Epitel Hücrelerinde Oksidatif Stresin İndüksiyonu ve Analizi

Oxidative stress plays a critical role in several degenerative diseases, including age-related macular degeneration (AMD), a pathology that affects ~30 ...

Retinal Organoid Induction System for Derivation of 3D Retinal Tissues from Human Pluripotent Stem Cells

İnsan Pluripotent Kök Hücrelerinden 3D Retinal Dokuların Türetilmesi için Retinal Organoid İndüksiyon Sistemi

Retinal degenerative diseases are the main causes of irreversible blindness without effective treatment. Pluripotent stem cells that have the potential to ...

Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

Dejeneratif Retina Hastalıkları için İnsan Dışı Primat Modelinde Retina Pigment Epitel Transplantasyonu

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These ...