Name: isolation of human lymphatic endothelial cells by multi-parameter fluorescence-activated cell sorting
Uploaded: 2015-05-01T15:00:00
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Os autores gostariam de agradecer a Fundação Baker e &#39;Mulheres na Ciência Fellowship »do Royal Children Foundation apoio de Zerina Lokmic. Andrew G. Elefanty e Edouard G. Stanley são NHMRC Senior Bolseiros de Investigação. Trabalho em seus laboratórios foi apoiada por NHMRC e Células-Tronco Austrália.

Declaração de Ética: A aprovação ética para a recolha de tecidos e malformação prepúcio linfáticos foi obtido a partir de Comitês de Ética em Pesquisa em Seres Humanos do Hospital do Royal Children, Melbourne, Austrália. Consentimento assinado foi recebido de pais dos pacientes antes da cirurgia. As amostras de tecidos foram coletadas de pacientes com diagnóstico de LMs submetidos a procedimentos cirúrgicos, como parte de sua gestão clínica e os pacientes submetidos a circuncisão eletivo. Todos os expe...

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LECs desempenhar um papel importante na manutenção da homeostase dos fluidos, resposta imunitária a antigénios estranhos e a absorção e transporte de alguns nutrientes. Homeostase LEC pode ser afectada por processos de doenças, tais como infecções bacterianas e metástases de tumores, mas também pode desenvolver LECs mutações somáticas que resultam na formação de vasos linfáticos disfuncionais e morbidade significativa para os pacientes afectados. Para ganhar mais compreensão da etiologia malformação ...

Uma das principais funções do sistema vascular linfático é absorver linfa, um excesso de fluido intersticial que contém lipídeos, proteínas e componentes celulares, e conduzi-la para o sistema venoso do sangue. Uma rede de capilares linfáticos dirige linfa para os nódulos linfáticos onde é rastreada quanto à presença de antigenes estranhos, um processo importante na vigilância e implantação de células brancas do sangue para neutralizar os antigénios estranhos imune. O sistema linfático unidireccional começa em tecidos com o capilar linfático inicial, uma estrutura única, com uma única camada descontínua de células endoteliais planas de parede fina com junções de células especializadas que permitem a entrada de linfa 1,2. Estes capilares estão ligados à matriz do tecido conjuntivo vizinho através filamentos de ancoragem para prevenir o colapso navio em presença de um aumento da pressão intersticial 3. Os capilares linfáticos iniciais vazios para recolha de capilares linfáticosque se aglutinam em vasos linfáticos maiores ou veias. Em comparação com o inicial vasos capilares linfáticos, recolha de vasos linfáticos têm paredes mais espessas, válvulas dos vasos linfáticos e emparelhados são revestidos por uma membrana basal descontínua em que algumas células de músculo liso são incorporados 4. Coordenada abertura e fecho de válvulas linfáticos e contracção de células musculares lisas facilita o fluxo de linfa 3. Nos seres humanos, os vasos linfáticos de várias regiões do corpo se juntam para formar troncos linfáticos que se fundem para formar dois canais linfáticos: o ducto torácico e ducto linfático direito. O ducto torácico drena a linfa do lado esquerdo do corpo e do lado direito abaixo do peito, enquanto o duto linfático drena a linfa desde o braço direito e no lado direito da cabeça, pescoço e tórax. Ambas as condutas conduzir linfa nas veias subclávia no pescoço 5. Desordens do sistema linfático são agrupadas em uma adquiridaND congénita (Tabela 1). Exemplos de condições adquiridas são linfangite e linfedema secundário. Linfangite é uma inflamação de um vaso linfático devido a uma infecção bacteriana. Os vasos linfáticos afetados dilatar e encher com exsudado contendo células polimorfonucleares. Na pele, estes vasos linfáticos são visíveis como faixas vermelha subcutânea, dolorosa muitas vezes acompanhada por alargamento do nó de linfa de drenagem associada (linfadenite) 6. Linfedema secundário surge como consequência de danos ou obstrução do vaso ou linfonodo obstrução linfática. Isto leva ao inchaço crônica progressiva devido ao acúmulo de linfa distal ao dano ou obstrução. Nos países desenvolvidos, linfedema secundário é mais comumente associado com a malignidade onde tumores metastasizing obstruir vasos linfáticos ou linfonodos regionais, ou como consequência da terapia anti-câncer após a remoção cirúrgica dos gânglios linfáticos, fibrose pós-irradiação e Throm pós-inflamatóriaBosis e cicatrizes 7. Em outras partes do mundo, linfedema secundário pode ser secundária à obstrução linfática causada por vermes parasitas, tais como Wuchereria bancrofti 6. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td colspan="4"> Distúrbios do sistema vascular linfático </td></tr><tr><td> Adquirido </td><td colspan="3"> Congênito </td></tr><tr><td rowspan="3"> Linfadenite Linfedema secundário </td><td> Linfedema Primário 10 </td><td> Esporádicos linfáticos Malformações 13 </td><td> Linfático malformações associadas a síndromes 13 </td></tr><tr><td rowspan="2"> por exemplo, Síndrome de Milroy Síndrome de Meige </td><td> Simples: As malformações linfáticas </td><td rowspan="2"> por exemplo, Síndrome de Klippel-Tranaunay Weber Parques Síndrome de Sturge-Weber </td></tr><tr><td> Combinado: Malformações capilares linfático- Malformação capilar-linfático-venosa Malformação capilar-linfático-artério Capilar-linfático malformação arteriovenosa venosa- </td></tr></tbody></table> Tabela 1. Visão geral das desordens do sistema vascular linfático. Doenças congênitas do sistema linfático incluem primária (idiopática) linfedema pensado para ser causado por mutações genéticas, lymphangiectasia e anomalias do sistema linfático 8,9. Linfedema primário pode ser esporádica, presumivelmente causada por mutações de novo, ou herdado. Desordens linfáticas também pode ser isolado ou compreendem parte de uma síndrome mais generalizada 10. Na população pediátrica, 97% da linfaedema é esporádica com anormalidades na estrutura de vasos linfáticos que prejudicam a drenagem linfática regional de 11. Doença de Milroy é um exemplo de linfedema primário causada por uma mutação no gene do VEGFR-3 no momento do nascimento ou evidentes logo após 12. Embora na maior parte condição familiar, doença de Milroy, também podem ser identificados em lactentes sem história familiar de doença de Milroy 32. A gravidade de qualquer linfedema é dependente da quantidade de produção de linfa e capacidade de transporte da linfa de volta para a circulação venosa 6. Com base na apresentação clínica e na proliferação de células endoteliais situ, anomalias do sistema linfático são classificados como tumores linfáticos ou malformações linfáticas 13. Kaposiforme linfoangiomatose é um exemplo de um tumor LEC 14. As malformações linfáticas são pensados ​​para surgem durante o desenvolvimento embrionário e crescer em proporção à criança 15,16. Eles raramente regridem, mas pode remain assintomática até trauma ou infecção precipita crescimento rápido levando a complicações clínicas. A estrutura ordenada da rede linfática e condução da linfa do tecido a circulação venosa descrito acima é perturbado em malformações linfáticas que consistem em coleções localizadas de estruturas císticas anormais cheias de líquido linfático. Embora não haja evidência clínica ou experimental que estes vasos císticas são ligados à circulação linfática ou que eles contêm válvulas linfáticos funcionais, a sua identidade linfático é confirmada por expressão de gama de marcadores de células linfáticas, como podoplanin, CD31, linfática Veículo Endotelial Receptor 1 (LYVE-1), proteína homeobox Prospero 1 (PROX-1) e VEGFR-3 15,17,18. Estas estruturas císticos pode ser pequena (microcístico) ou grande (macrocísticos), mas a maioria das malformações linfáticas conter tanto microcístico e macrocísticas componentes (Figura 1) 16. Após a cirurgia, injection escleroterapia e / ou ablação por radiofreqüência as malformações linfáticas muitas vezes reaparecer. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/52691/52691fig1highres.jpg" width="700" /> Figura 1. Morfologia dos vasos linfáticos humanos e malformações linfáticas. Linfático humano normal (A) e vasos linfáticos malformação (B e C) marcados com o anticorpo para podoplanin (etiqueta castanho, seta). Vasos linfáticos humanos malformação são caracterizadas por acentuada dilatação e uma considerável variação no tamanho do lúmen. Estas estruturas anormais císticas localizadas pode ser pequena (microcístico, *) (B) ou grande (macrocísticos, #) (C). A maioria das malformações linfáticas conter ambos os componentes microcísticas e macrocísticas. <a href="/files/ftp_upload/52691/52691fig1highres.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão ampliada da figura.</a> &lt;/ P&gt; Alguns pesquisadores sugeriram que as malformações linfáticas representam um transtorno do desenvolvimento da vasculatura linfática em que os LECs não tem potencial de crescimento anormal, mas em vez disso não conseguiram se conectar à circulação normal 19. No entanto, verificou-se que os LECs LM proliferar mais rapidamente e são mais resistentes à apoptose de prepúcio LECs 15 sugerindo que existe um defeito primário na LM LECs. Quando LM LECs são implantadas em um rato modelo de xenotransplante, eles formam estruturas que lembram malformações linfáticas 15. Isto suporta a hipótese de que as malformações linfáticas pode ser causada por uma ou mais mutações somáticas que surgem no LM LECs durante o desenvolvimento fetal. De facto, relatórios recentes identificaram uma tal mutação na subunidade catalítica de p110α (PIK3CA) gene 20-Quinase Phosphoinositide-3. Tendo em conta os avanços na tecnologia de sequenciamento de DNA, mutações relevantes cOuld ser mais facilmente identificadas em isolados LM LECs, orientando futuros estudos sobre essas condições. O isolamento de LECs viáveis ​​seria facilitar as comparações entre LECs anormais e normais em ensaios, tais como a migração, proliferação, capacidade tubo de formação e sobrevivência em resposta à reduzida disponibilidade de nutrientes ou agentes pró-apoptóticos 15. Isolado LECs iria mais permitir-nos de realizar a expressão de genes específicos de células e estudos de proteômica, para delinear novas subpopulações LEC e descobrir novos agentes farmacológicos adequados para o manejo clínico de malformações linfáticas. Nós já publicou um método de isolamento LEC com base na separação magnética talão de LECs de prepúcio neonatal e malformações linfáticas 15. Nós relatou uma estratégia de separar LECs normais e doentes a partir de células endoteliais vasculares com base na ausência de expressão CD34, seguida por sujeição fração de células CD34 Neg a selecção positiva para CD31.No entanto, este método foi prejudicado pela presença de células não endoteliais residuais. Isto foi independente da epiderme remoção antes da digestão posterior do tecido conjuntivo. Estes contaminantes geralmente proliferam mais rapidamente e, assim, eventualmente overgrew as culturas de células endoteliais, apesar das tentativas posteriores de repetir LEC isolamento. Com efeito, uma inicial de contaminação de células não endoteliais tão baixas como 2% a 5% era suficiente para submergir a população LEC 15. Isto levou-nos a explorar método separação de células activadas por fluorescência como uma opção para melhorar o rendimento das células LEC e pureza. Além disso, utilizou-se vários parâmetros de classificação para aumentar a especificidade das populações LEC, a adição de VEGFR-3 e podoplanin para os marcadores de selecção para identificar CD34 CD31 de baixo Pos VEGFR-3 Pos Pos podoplanin LECs. A justificativa para selecionar esses marcadores baseou-se nos relatórios que enquanto ce LECs e vascular endotelial sangueLLS tem muitos marcadores da superfície celular em comum, tais como CD31, LECs mostrar variação fenotípica em sua expressão de CD34, podoplanin e VEGFR-3 marcador da superfície celular quando comparado ao sangue células endoteliais vasculares 21-23. CD31 é uma glicoproteína transmembranar de 130 kDa, também conhecido como molécula de adesão de plaquetas de células endoteliais 1 (PECAM-1). Ele é considerado como um marcador celular pan-endotelial, uma vez que é expresso em todos os tipos de vasos sanguíneos e linfáticos 21,24,25. CD34 é 110 kDa transmembranar da glicoproteína presente em células progenitoras hematopoiéticas e mais células estaminais, células endoteliais vasculares e alguns vasos linfáticos 26. VEGFR-3, o receptor para os factores de crescimento vascular endotelial C e D, é inicialmente presente nas veias do embrião de rato em desenvolvimento, mas seguinte especificação linfático regulada por factores de transcrição HMG-box relacionada-SRY (SOX) -18, c hicken o valbumin u pstream p romoter t ranscription f actor 2 (COUPTF-II) e PROX-1, VEGFR-3 expressão venosa está perdido e torna-se restrita a embrionária LECs 25,27. Podoplanin, uma membrana de 38 kDa mucoproteína, é observado pela primeira vez em vasos linfáticos em cerca de 11 dias embrionários (~) de rato E11.0 desenvolvimento embrionário 28 e enquanto ele é fortemente expresso por vasos linfáticos microvasculares, podoplanina por endotélio linfático macrocístico em malformações linfáticas é mais variável 15. A citometria de fluxo experiências sugerem que pelo menos algumas células endoteliais CD34 CD31 alta Pos expressar o marcador linfático podoplanin 29. Embora a avaliação sistemática de coloração LYVE-1 e podoplanin em malformações linfáticos humanos mostrou que ambos são eficazes na coloração malformação endotélio linfático 30, em tecidos normais, LYVE-1 foi relatada como sendo fortemente presente na linfático inicialendotélio capilar, mas reduzida e até mesmo ausente no endotélio linfático coleta 31. Como nosso objetivo é isolar tanto as células endoteliais linfáticas iniciais e de coleta, optaram por não usar LYVE-1 como parte de nossa estratégia de seleção de célula. Finalmente, a decisão de utilizar estes marcadores também baseou-se na disponibilidade de anticorpos que são utilizados diagnosticamente para a marcação de vasos linfáticos para imagem microscópica, uma característica que permita correlação entre estudos de citometria de fluxo e imunof luorescência. Este artigo irá descrever o método de digestão de tecidos, coloração de células e configurações FACS necessário para isolamento de células CD34 CD31 Baixa Pos VEGFR-3 POS podoplanin Pos LECs, bem como as células endoteliais CD34 CD31 alta Pos VEGFR-3 Pos Pos podoplanin do prepúcio e malformação linfática tecido.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Material/Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue Number</td>
			<td>Description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Life Technologies (Gibco)</td>
			<td>11965-092</td>
			<td>Used to collect tissue samples from the operating theatre.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGM-2 MV Bullet Kit</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-3202</td>
			<td>EGM-2 MV Bullet Kit contains 500 ml of EBM-2 media and human EGF, hydrocortisone, gentamycin (GA-1000), fetal bovine serum (FBS), VEGF, human FGF-b, R3-IGF-1 and ascorbic acid.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VEGF-C</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>2179-VC-025</td>
			<td>Complete endothelial cell media is supplemented with 50 ng/mL VEGF-C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-antimycotic solution (100x)</td>
			<td>Life Technologies (Gibco)</td>
			<td>15240-062</td>
			<td>This solution contains 10,000U/ml of penicillin, 10,000 mg/ml of streptomycin and 25 mg/ml of Fungizone antimycotic. Use at 1:100 dilution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibronectin from human plasma</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F2006</td>
			<td>Used at 10 mg/ml concentrations. It can be re-used for up to 1 month if kept at 4 degrees and maintained sterile. Use 7 mL to coat 150 cm2 flask.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro Accutase Cell dissociation reagent</td>
			<td>Life Technologies (Gibco)</td>
			<td>A11105-01</td>
			<td>StemPro&#174;Accutase&#174; is used at 0.05 ml per cm2 to cover the entire surface area of the flask. Using lesser volumes may result in incomplete cell detachment.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.4% Trypan Blue dye</td>
			<td>Life Technologies (Gibco)</td>
			<td>15250-061</td>
			<td>Used as a viability stain.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II</td>
			<td>Roche Applied Biosciences</td>
			<td>4942078001</td>
			<td>Used at 0.04%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase II</td>
			<td>Worthington Lab</td>
			<td>4176</td>
			<td>Used at 0.25%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>Roche Applied Biosciences</td>
			<td>11284932001</td>
			<td>Used at 0.01%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 mm nylon cell strainers</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-conjugated VEGFR-3 clone 9D9F9, clone WM59</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>356204</td>
			<td>Used at 1:50 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-Cy7-conjugated CD34, clone 581</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>343516</td>
			<td>Used at 1:200 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-conjugated mouse anti human CD31, clone WM59</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>303116,</td>
			<td>Used at 1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 488-conjugated rat anti human PODOPLANIN, clone NC-80.</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>337006</td>
			<td>Used at 1:200 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-conjugated mouse IgG1, k isotype, clone MOPC-21</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>400112</td>
			<td>Used at 1:50 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-Cy7-conjugated mouse IgG1, k isotype, clone MOPC-21</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>400126</td>
			<td>Used at 1:200 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-conjugated mouse IgG1, k isotype, clone MOPC-21</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>400120</td>
			<td>Used at 1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 488-conjugated mouse IgG2a, k isotype, clone RATK2758</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>400525</td>
			<td>Used at 1:200 dilution</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of human lymphatic endothelial cells by multi-parameter fluorescence-activated cell sorting

Do sistema linfático, como linfedema primário, malformações linfáticas e tumores linfáticos são condições raras que causam morbidade significativa, mas pouco se sabe sobre a sua biologia. Isolamento de células altamente puros humanas endoteliais linfáticas (LECs) a partir de tecido doente e saudável iria facilitar estudos sobre o endotélio linfático em níveis genéticos, moleculares e celulares. Prevê-se que estas investigações podem revelar alvos para novas terapias que podem mudar o manejo clínico dessas condições. Um protocolo descrevendo o isolamento de prepúcio humano LECs e células endoteliais linfáticas malformação linfática LM (LECs) é apresentada. Para obter uma única suspensão de células do tecido foi triturada e tratada enzimaticamente usando colagenase e dispase II II. A suspensão de célula única resultante foi, em seguida, marcadas com anticorpos para o aglomerado de diferenciação (CD) marcadores CD34, CD31, Factor de Crescimento Endotelial Vascular-3 (VEGFR-3) e podoplanin. Staicélulas viáveis ​​nidas foram classificados em um separador de células activado por fluorescência (FACS) para separar o CD34 CD31 Baixa Pos VEGFR-3 população Pos Pos podoplanin LM LEC de outro endoteliais e células não endoteliais. Os LM LECs ordenados foram cultivadas e expandidas em frascos revestidos com fibronectina para uso mais experimental.

Após a digestão do tecido inicial, após 24 horas em cultura de amostras não fraccionadas, as colónias de células endoteliais podem ser observadas (Figura 2A), juntamente com as células semelhantes a fibroblastos e células musculares lisas. Seguindo triagem e após 24 horas em cultura de células, as células CD34 CD31 Baixa Pos VEGFR-3 células Pos Pos podoplanina anexar e mostram a morfologia típica de calçada (Figura 2B e C). Utilizando...

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Isolation of Human Lymphatic Endothelial Cells by Multi-parameter Fluorescence-activated Cell Sorting

O objetivo deste protocolo é para isolar as células endoteliais que revestem os vasos linfáticos humanos quisto-como malformação linfática e foreskins usando células activadas por fluorescência (FACS). Cultura de células subsequente e expansão destas células permite um novo nível de sofisticação experimental para estudos genéticos, proteomic, funcionais e diferenciação celular.

Isolamento de linfático humano endotelial por multi-parâmetro activadas por fluorescência celular

Lymphatic system disorders such as primary lymphedema, lymphatic malformations and lymphatic tumors are rare conditions that cause significant morbidity ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Real-time Electrical Impedance Based Technique to Measure Invasion of Endothelial Cell Monolayer by Cancer Cells

A técnica de impedância elétrica em tempo real baseado medir Invasão de monocamada de células endoteliais por células cancerosas

Metastatic dissemination of malignant cells requires degradation of basement membrane, attachment of tumor cells to vascular endothelium, retraction of ...

Medicina

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Isolamento, caracterização e comparativa Diferenciação de células-tronco da polpa dentária Derivado de dentes permanentes usando dois métodos diferentes

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Cell Death Associated with Abnormal Mitosis Observed by Confocal Imaging in Live Cancer Cells

A morte celular associada com mitose anormal observado por imagem confocal em células vivas Câncer

Phenanthrene derivatives acting as potent PARP1 inhibitors prevented the bi-focal clustering of supernumerary centrosomes in multi-centrosomal human ...

Isolation, Culture, and Imaging of Human Fetal Pancreatic Cell Clusters

Isolamento, cultura, e imagem de Fetal Humano pancreáticas grupos de células

For almost 30 years, scientists have demonstrated that human fetal ICCs transplanted under the kidney capsule of nude mice matured into functioning ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

Isolamento de células-tronco cancerosas em amostras de câncer de próstata humano

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Estudar o cancro do pâncreas Stem características celulares para desenvolver estratégias Novo tratamento

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Isolation and Culture Expansion of Tumor-specific Endothelial Cells

Isolamento e Cultura de Expansão de células endoteliais específicos de tumores

Freshly isolated tumor-specific endothelial cells (TEC) can be used to explore molecular mechanisms of tumor angiogenesis and serve as an in vitro model ...

Isolation and Culture of Primary Endothelial Cells from Canine Arteries and Veins

Isolamento e cultura de células endoteliais primárias de Artérias e Veias canina

Cardiovascular disease is studied in both human and veterinary medicine. Endothelial cells have been used extensively as an in vitro model to study ...

Isolation of Endothelial Progenitor Cells from Healthy Volunteers and Their Migratory Potential Influenced by Serum Samples After Cardiac Surgery

Isolamento de células endoteliais progenitoras de voluntários saudáveis ​​e seu potencial migratório influenciada por amostras de soro após cirurgia cardíaca

Endothelial progenitor cells (EPCs) are recruited from the bone marrow under pathological conditions like hypoxia and are crucially involved in the ...

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

preparação e<em&gt; In Vitro</em&gt; Caracterização de magnetizado miR-modificado Células Endoteliais

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene ...