Name: isolation of human lymphatic endothelial cells by multi-parameter fluorescence-activated cell sorting
Uploaded: 2015-05-01T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Human Lymphatic Endothelial Cells by Multi-parameter Fluorescence-activated Cell Sorting at JoVE.com

Yazarlar Baker Vakfı ve Zerina Lokmic desteğiyle Kraliyet Çocuk Vakfı &#39;Bilim Kardeşlik Kadınları&#39; kabul etmek istiyorum. Andrew G. Elefanty ve Edouard G. Stanley NHMRC Kıdemli Araştırma Fellows vardır. Onların laboratuarlarında çalışmak NHMRC ve Kök Hücre Avustralya tarafından desteklenmiştir.

Etik bildirimi: lenfatik malformasyon ve üstderi dokuların toplanması için etik onay Kraliyet Çocuk Hastanesi, Melbourne, Avustralya İnsan Araştırmaları Etik Kurullarının alındı. İmzalı rıza ameliyat öncesinde hastanın ebeveynleri alındı. Doku örnekleri seçmeli sünnet geçiren klinik yönetiminin bir parçası olarak cerrahi girişim geçiren İcracı ve hastaların tanısı olan hastalarda toplandı. Tüm deneyler Ulusal Sağlık ve Tıbbi Araştırma Konseyi, Avustralya esaslara uygun olarak yap...

<ol>
	<li>Baluk, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionally+specialized+junctions+between+endothelial+cells+of+lymphatic+vessels.">Functionally specialized junctions between endothelial cells of lymphatic vessels.</a> J Exp Med. 204 (10), 2349-2362 (2007).</li><li>Yao, L. C., Baluk, P., Srinivasan, R. S., Oliver, G., McDonald, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasticity+of+button-like+junctions+in+the+endothelium+of+airway+lymphatics+in+development+and+inflammation.">Plasticity of button-like junctions in the endothelium of airway lymphatics in development and inflammation.</a> Am J Pathol. 180 (6), 2561-2575 (2012).</li><li>Zawieja, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contractile+physiology+of+lymphatics.">Contractile physiology of lymphatics.</a> Lymphat Res Biol. 7 (2), 87-96 (2009).</li><li>Witte, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+function+relationships+in+the+lymphatic+system+and+implications+for+cancer+biology.">Structure function relationships in the lymphatic system and implications for cancer biology.</a> Cancer Metastasis Rev. 25 (2), 159-184 (2006).</li><li>Andrade, M., Jacomo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+of+the+human+lymphatic+system.">Anatomy of the human lymphatic system.</a> Cancer Treat Res. 135, 55-77 (2007).</li><li>Kumar, V., Abbas, A. K., Aster, J. C., Ch Fausto, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cotran Pathologic Basis of Disease. 43-78. 2, (2009).</li><li>Shayan, R., Achen, M. G., Stacker, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphatic+vessels+in+cancer+metastasis:+bridging+the+gaps.">Lymphatic vessels in cancer metastasis: bridging the gaps.</a> Carcinogenesis. 27 (9), 1729-1738 (2006).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mulliken &amp; Young's Vascular Anomalies Hemangiomas and. , 1059-1076 (2013).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mulliken &amp; Young's Vascular Anomalies Hemangiomas. 14, 562-594 (2013).</li><li>Bellini, C., Hennekam, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+disorders+of+primary+malfunctioning+of+the+lymphatic+system.">Clinical disorders of primary malfunctioning of the lymphatic system.</a> Adv Anat Embryol Cell Biol. 214, 187-204 (2014).</li><li>Schook, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+lymphedema:+clinical+features+and+management+in+138+pediatric+patients.">Primary lymphedema: clinical features and management in 138 pediatric patients.</a> Plast Reconstr Surg. 127 (6), 2419-2431 (2011).</li><li>Brouillard, P., Boon, L., Vikkula, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+lymphatic+anomalies.">Genetics of lymphatic anomalies.</a> J Clin Invest. 124 (3), 898-904 (2014).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=for+the+Study+of+Vascular+Anomalies+(ISSVA)+classification.">for the Study of Vascular Anomalies (ISSVA) classification.</a> Available from: http://www.issva.org/classification.com. , (2014).</li><li>Croteau, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kaposiform+lymphangiomatosis:+a+distinct+aggressive+lymphatic+anomaly.">Kaposiform lymphangiomatosis: a distinct aggressive lymphatic anomaly.</a> J Pediatr. 164 (2), 383-388 (2014).</li><li>Lokmic, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+human+lymphatic+malformation+endothelial+cells,+their+in+vitro+characterization+and+in+vivo+survival+in+a+mouse+xenograft+model.">Isolation of human lymphatic malformation endothelial cells, their in vitro characterization and in vivo survival in a mouse xenograft model.</a> Angiogenesis. 17 (1), 1-15 (2014).</li><li>Smith, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphatic+malformations.">Lymphatic malformations.</a> Lymphat Res Biol. 2 (1), 25-31 (2004).</li><li>Chen, E. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Similar+histologic+features+and+immunohistochemical+staining+in+microcystic+and+macrocystic+lymphatic+malformations.">Similar histologic features and immunohistochemical staining in microcystic and macrocystic lymphatic malformations.</a> Lymphat Res Biol. 7 (2), 75-80 (2009).</li><li>Norgall, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+expression+of+VEGFR-3+in+lymphatic+endothelial+cells+from+lymphangiomas.">Elevated expression of VEGFR-3 in lymphatic endothelial cells from lymphangiomas.</a> BMC cancer. 7 (2), 75-80 (2007).</li><li>Garzon, M. C., Huang, J. T., Enjolras, O., Frieden, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+malformations.">Vascular malformations.</a> Part I. J Am Acad Dermatol. 56 (3), 353-370 (2007).</li><li>Osborn, A., Dickie, P., Adams, D., Dickie, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> 20th International workshop on Vascular Anomalies. ISSVA. , (2014).</li><li>Baluk, P., McDonald, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Markers+for+microscopic+imaging+of+lymphangiogenesis+and+angiogenesis.">Markers for microscopic imaging of lymphangiogenesis and angiogenesis.</a> Ann N Y Acad Sci. 1131, 1-12 (2008).</li><li>Lokmic, Z., Mitchell, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+the+microcirculation.+Tissue+engineering.">Engineering the microcirculation. Tissue engineering.</a> Part B, Reviews. 14 (1), 87-103 (2008).</li><li>Lokmic, Z., Mitchell, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualisation+and+stereological+assessment+of+blood+and+lymphatic+vessels.">Visualisation and stereological assessment of blood and lymphatic vessels.</a> Histol Histopathol. 26 (6), 781-796 (2011).</li><li>Hagerling, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+multistep+mechanism+for+initial+lymphangiogenesis+in+mouse+embryos+based+on+ultramicroscopy.">A novel multistep mechanism for initial lymphangiogenesis in mouse embryos based on ultramicroscopy.</a> EMBO J. 32 (5), 629-644 (2013).</li><li>Pollmann, C., Hagerling, R., Kiefer, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+lymphatic+vessel+development,+growth,+and+function.">Visualization of lymphatic vessel development, growth, and function.</a> Adv Anat Embryol Cell Biol. 214, 167-186 (2014).</li><li>Breiteneder-Geleff, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiosarcomas+express+mixed+endothelial+phenotypes+of+blood+and+lymphatic+capillaries:+podoplanin+as+a+specific+marker+for+lymphatic+endothelium.">Angiosarcomas express mixed endothelial phenotypes of blood and lymphatic capillaries: podoplanin as a specific marker for lymphatic endothelium.</a> Am J Pathol. 154 (2), 385-394 (1999).</li><li>Kaipainen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+the+fms-like+tyrosine+kinase+4+gene+becomes+restricted+to+lymphatic+endothelium+during+development.">Expression of the fms-like tyrosine kinase 4 gene becomes restricted to lymphatic endothelium during development.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 92 (8), 3566-3570 (1995).</li><li>Schacht, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T1alpha/podoplanin+deficiency+disrupts+normal+lymphatic+vasculature+formation+and+causes+lymphedema.">T1alpha/podoplanin deficiency disrupts normal lymphatic vasculature formation and causes lymphedema.</a> EMBO J. 22 (14), 3546-3556 (2003).</li><li>Kriehuber, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+dermal+lymphatic+and+blood+endothelial+cells+reveal+stable+and+functionally+specialized+cell+lineages.">Isolation and characterization of dermal lymphatic and blood endothelial cells reveal stable and functionally specialized cell lineages.</a> J Exp Med. 194 (6), 797-808 (2001).</li><li>Florez-Vargas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+D2-40+and+LYVE-1+immunostaiing+in+lymphatic+malformations.">Comparative analysis of D2-40 and LYVE-1 immunostaiing in lymphatic malformations.</a> Lymphology. 41 (3), 103-110 (2008).</li><li>Makinen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDZ+interaction+site+in+ephrinB2+is+required+for+the+remodeling+of+lymphatic+vasculature.">PDZ interaction site in ephrinB2 is required for the remodeling of lymphatic vasculature.</a> Genes Dev. 19 (3), 397-410 (2005).</li><li>Connell, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+coding+regions+of+VEGFR3+and+VEGFRC+in+Milroy+disese+and+other+primary+lymphoedemas.">Analysis of coding regions of VEGFR3 and VEGFRC in Milroy disese and other primary lymphoedemas.</a> Hum Genet. 124 (6), 625-631 (2009).</li></ol>

LECS sıvı homeostazı, yabancı antijenler ve emilim ve bazı besin taşımaya bağışıklık karşılığının muhafaza edilmesinde önemli bir rol oynamaktadır. LEC homeostazı, örneğin bakteriyel enfeksiyonlar ve tümör metastazı gibi hastalık süreçlerinde etkilenebilir fakat LECS etkilenen hastalar için işlevsiz lenfatik damarların oluşumu ve önemli hastalıklara yol açtığı somatik mutasyonlara gelişebilir. In vivo implantasyonu ve ex vivo deney yoluyla lenfatik malformasyon e...

Lenfatik damar sisteminin önemli bir fonksiyonu, lenf, lipidler, proteinler ve hücre bileşenleri içeren bir aşırı interstisyel sıvı emer ve kan venöz sisteme yapmaktır. Lenfatik kapilerlerin bir ağ yabancı antijenlere immün gözetim ve yabancı antijenleri nötralize etmek için beyaz kan hücrelerinin dağıtım önemli bir işlem varlığı için taranmıştır lenf düğümlerine lenf yönlendirir. tek yönlü lenfatik sistem ilk lenfatik kılcal lenf girişini 1,2 izin özelleşmiş hücre kavşaklar ince duvarlı düz endotel hücreleri süreksiz tek tabaka ile benzersiz bir yapıya sahip dokularda başlar. Bu kılcal artan interstisyel basınç 3 mevcudiyetinde damar çökmesini engellemek için filamanların ankraj ile komşu bağ dokusu matrise bağlıdır. lenfatik kılcal toplama içine boş ilk lenfatik kılcalO büyük lenfatik damarların veya damarlar içine birleşerek. Karşılaştırıldığında lenf damarları daha kalın kap duvarları, ikili lenf valfleri olan ve bir kaç düz kas hücreleri, 4 gömülü olduğu bir süreksiz bir temel zar ile kapatılmış olan toplama lenf kılcal damarlar başlangıç. Düz kas hücrelerinin koordineli açılması ve lenfatik valf kapağı ve daralma lenf 3 akışını kolaylaştırır. Torasik kanal ve sağ lenfatik kanal: İnsanlarda, vücudun çeşitli bölgelerinden lenfatik damarlar iki lenfatik kanallar oluşturacak şekilde birleştirmek lenfatik gövdelerine oluşturmak için katılın. Torasik kanal göğüs altında vücudun sol tarafında ve sağ taraftan lenf drene olurken, baş, boyun ve toraks sağ kol ve sağ taraftan sağ lenfatik kanal drene lenf. Her iki kanallar boyun 5 subklavyen damarlar içine lenf yapıyoruz. Lenfatik sistem bozuklukları geniş edinilen a halinde gruplandırılmışnd, konjenital (Tablo 1). Edinilen durumların örnekleri lenfanjit ve ikincil lenfödem vardır. Lenfanjit bakteriyel enfeksiyona lenfatik damar iltihabıdır. Etkilenen lenfatikler dilate ve eksuda içeren polimorfonükleer hücreleri ile doldurun. Deride, bu lenf sıklıkla ilişkili lenf düğümüne (lenfadenit) 6 genişlemesi ile birlikte, kırmızı, ağrılı deri altı çizgiler olarak görünür. İkincil lenfödem lenfatik damar veya lenf nodu tıkanıklığı hasar veya tıkanma sonucu olarak ortaya çıkar. Bu hasar veya tıkanma lenf distalinde birikimi kronik ilerleyici şişme yol açar. Gelişmiş ülkelerde, sekonder lenfödem en yaygın metastaz tümörlerin lenf damarlarına veya bölgesel lenf nodları engel ya da anti-kanser tedavisinin bir sonucu olarak, lenf düğümleri, radyasyon sonrası fibroz ve post-enflamatuar trombositemili cerrahi olarak çıkarılması, aşağıdaki habislik ile bağlantılı olanBosis ve skar 7. Dünyanın diğer bölgelerinde, ikincil lenfödem gibi Wuchereria bancrofti 6 olarak parazitik kurtlar neden lenfatik obstrüksiyona sekonder olabilir. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td colspan="4"> Lenfatik damar sistemi bozuklukları, </td></tr><tr><td> Edinilen </td><td colspan="3"> Doğuştan </td></tr><tr><td rowspan="3"> Lenfadenit İkincil lenfödem </td><td> İlköğretim Lenfödem 10 </td><td> Sporadik Lenfatik Malformasyonlari 13 </td><td> Sendromları 13 Lenfatik malformasyonlar İlişkili </td></tr><tr><td rowspan="2"> örneğin Milroy Sendromu Meige Sendromu </td><td> Basit: Lenfatik malformasyonlar </td><td rowspan="2"> örneğin Klippel-Tranaunay Sendromu Parklar Weber Sendromu Sturge-Weber Sendromu </td></tr><tr><td> Kombine: Kılcal-lenfatik malformasyonlar Kılcal-lenfatik-venöz malformasyon Kılcal-lenfatik-arteriyovenöz malformasyon Kılcal-lenfatik venöz-arteriyovenöz malformasyon </td></tr></tbody></table> Lenfatik damar sistemi hastalıklarının Tablo 1. Genel Bakış. Lenfatik sistemin konjenital hastalıklar, genetik mutasyonlar, lenfanjiektazi ve lenfatik sistem 8,9 anomalileri neden olduğu düşünülen birincil (idiopatik) lenfödem sayılabilir. Birincil lenfödem muhtemelen de novo mutasyonlar sonucu oluşan veya miras sporadik olabilir. Lenfatik bozukluklar ayrıca izole edilmiş olabilir ya da daha genel bir sendrom 10 bir kısmını ihtiva edebilir. Lenf pediatrik popülasyonda% 97ödem bölgesel lenf drenajı 11 bozan lenfatik damar yapısında anormallikler sporadik. Milroy hastalığı doğumda belirgin ya da kısa bir süre sonra 12 VEGFR-3 genindeki mutasyon neden birincil lenfödem bir örnektir. Çoğunlukla ailesel durumda olmasına rağmen, Milroy hastalığı da Milroy hastalığının 32 aile öyküsü olmayan bebeklerde tespit edilebilir. Herhangi bir lenfödem şiddeti lenf üretimi ve venöz dolaşımı 6 lenf geri taşıma yeteneği miktarına bağlıdır. Klinik bulgular ve yerinde endotel hücre çoğalmasında dayanarak, lenfatik sistemin anomalileri lenfatik tümörler veya lenfatik malformasyon 13 olarak sınıflandırılır. Kaposiform lenfanjiomatozis bir LEC tümör 14 örneğidir. Lenfatik malformasyonlar embriyonik gelişim sırasında ortaya çıkan ve çocuğa 15,16 oranında büyümeye düşünülmektedir. Onlar nadiren gerileme ama remai edebilirsinizn asemptomatik travma veya enfeksiyon klinik komplikasyonlara yol açan hızlı büyüme çöker kadar. Yukarıda tarif edilen venöz dolaşıma dokudan lenfatik ağ ve lenf iletiminin düzenli yapısı lenfatik sıvı ile dolu kistik anormal yapılar lokalize koleksiyonları oluşan lenfatik malformasyon olarak tedirgin olduğunu. Bu kistik gemiler de fonksiyonel lenfatik vanaları içeren lenfatik dolaşıma bağlı veya olduğunu hiçbir klinik veya deneysel kanıtlar olsa da, onların lenfatik kimlik gibi podoplanin, CD31, Lenf Gemi Endotel Reseptör 1 olarak lenfatik hücre belirteçleri aralığının ifadesi tarafından onaylandıktan (LYVE-1), Prospero homeobox protein 1 (PROX-1) ve VEGFR-3 15,17,18. Bu kistik yapılar, ya küçük (mikrokistik) veya büyük (makrokistik) olabilir, ama en lenfatik malformasyonlar mikrokistik ve makrokistik bileşenleri (Şekil 1) 16 her ikisini de içerir. Ameliyat sonrasında, injection skleroterapi ve / veya radyofrekans lenfatik malformasyonlar genellikle yeniden ortaya çıkması ablasyona. <img alt="Şekil 1," src="/files/ftp_upload/52691/52691fig1highres.jpg" width="700" /> İnsan lenfatik damarların ve lenfatik malformasyonlar Şekil 1. Morfoloji. Normal insan lenfatik (A) ve podoplanin antikor ile etiketlenmiş lenfatik malformasyon damarları (B ve C) (kahverengi etiket, ok). İnsan lenfatik malformasyon damarları belirgin dilatasyon ve lümen boyutu önemli değişim ile karakterizedir. Bu lokalize anormal kistik yapıları küçük (mikrokistik, *) (B), ya da büyük (makrokistik, #) (C) olabilir. En lenfatik malformasyonlar hem mikrokistik ve makrokistik bileşenleri içerir. <a href="/files/ftp_upload/52691/52691fig1highres.jpg" target="_blank">rakamın büyük halini görmek için tıklayınız.</a> &lt;/ P&gt; Bazı araştırmacılar lenfatik malformasyonlar LECS anormal büyüme potansiyeli yok ama onun yerine, normal dolaşıma 19 bağlamak için başarısız olan lenfatik damar gelişimsel bozukluğu temsil ileri sürmüşlerdir. Bununla birlikte, LM LECS hızlı çoğalan ve LECS 15 LM LECS bir defekt olduğunu düşündürmektedir sünnet daha apoptoza karşı daha dirençli olduklarını bulduk. LM LECS fare ksenograft modelinde implante edilir, bunlar lenfatik malformasyon 15 hatırlatan yapılar oluştururlar. Bu lenfatik malformasyonlar, fetal gelişim sırasında LM LECS doğan bir veya daha fazla somatik mutasyonlar neden olabilir bir hipotezini desteklemektedir. Gerçekten, son raporlar fosfoinositid 3-kinaz (PIK3CA) geni 20 p110α katalitik alt birim bu tür bir mutasyon tespit ettik. DNA dizileme teknolojisinin, ilgili mutasyonlar c gelişmeler göz önüne alındığındaOuld daha kolay bu durumların gelecekteki çalışmalara rehberlik, izole LM LECS tanımlanabilir. canlı LECS izolasyonu azalmış besin durumunu veya pro-apoptotik ajanları 15 tepki olarak bu hareketi, çoğalması, tüp oluşturma yeteneği ve hayatta kalma gibi tahlillerde anormal ve normal LECS arasında karşılaştırmalar kolaylaştıracaktır. İzole LECS daha yeni LEC alt popülasyonlarını belirginleştiren, hücreye özgü gen ifadesi ve proteomik çalışmalar yapmak için bize izin ve lenfatik malformasyonlar klinik yönetimi için uygun yeni farmakolojik ajanlar keşfetmek istiyorum. Biz daha önce yenidoğan sünnet derisi ve lenfatik malformasyonlar 15 den LECS manyetik boncuk ayrılması dayalı bir LEC izolasyon yöntemi yayınladık. Bu CD31 pozitif seçime CD34 Neg hücre fraksiyonunun tabi tutarak, ardından CD34 ekspresyonunun bulunmaması, göre, vasküler endotel hücrelerinden normal ve hastalıklı LECS ayrılması için bir strateji bildirilmiştir.Bununla birlikte, bu yöntem artık olmayan endotel hücrelerinin mevcudiyeti ile engellenmiştir. Bu daha sonraki bağ dokusu sindirim öncesinde epidermise kaldırarak bağımsız oldu. Bu kirleticiler genellikle daha hızla çoğaldı ve böylece sonunda LEC izolasyon tekrarlamak sonraki girişimlerine rağmen endotel hücre kültürleri overgrew. Gerçekten de,% 5 ile% 2 kadar düşük olmayan endotel hücrelerinin bir başlangıç ​​kirlenmesi LEC nüfusu 15 bastırmak için yeterli olmuştur. Bu LEC hücre verim ve saflık geliştirmek için bir seçenek olarak floresan aktif hücre sıralama yöntemi keşfetmek için bize istenir. Buna ek olarak, CD34, CD31 Düşük Pos VEGFR-3 Pos podoplanin Sıra LECS tespit etmek seçim markörleri için VEGFR-3 ve podoplanin ilave LEC popülasyonlarının özgüllüğünü geliştirmek için sıralama çok parametre kullanılmıştır. Bu belirteçler seçme gerekçesi raporlarına dayandığını LECS ve kan vasküler endotelyal ce iseKan, vasküler endotel hücrelerinin 21-23 ile karşılaştırıldığında LLS örneğin CD31 gibi ortak bir çok hücre yüzeyi işaretçileri vardır LECS CD34, podoplanin ve VEGFR-3 hücre yüzeyi marker salgılamasında fenotipik değişim gösterir. CD31 aynı zamanda trombosit endotel hücre adhezyon molekülü 1 (PECAM-1) olarak bilinen bir 130 kDa transmembran glikoproteindir. Bu kan ve lenf damarlarının 21,24,25 her türlü ifade çünkü bir pan-endotelyal hücre belirteci olarak kabul edilir. CD34 en hematopoietik progenitör hücreler üzerinde 110 kDa transmembran glikoprotein mevcut olması ve hücreler, vasküler endotel hücrelerinin ve lenf damarlarına 26 kaynaklanır. VEGFR-3, vasküler endotelyal büyüme için alıcı, C ve D faktörleri fare embriyo gelişen damarları başlangıçta mevcut olmakla birlikte, transkripsiyon düzenlenir lenf tarifnamede aşağıdaki gibidir (SOX) -18, Cı Hicken SRY ilişkili HMG-kutusu faktörleri o valbumin u pstream.p. romoter t ranscription f aktör 2 (COUPTF-II) ve PROX-1, VEGFR-3 venöz sentezleme kaybolur ve embriyonik LECS 25,27 sınırlı hale gelir. Podoplanin, 38 kDa zar mukoprotein, ilk fare embriyonik gelişim 28 yaklaşık embriyonik lenfatik damarların gün 11 (~ E11.0) üzerine kaydetti ve şiddetle mikrovasküler lenf damarları, lenf malformasyonlar makrokistik lenfatik endotele göre podoplanin ifade ile ifade edilir iken 15 daha değişkendir. Deneyler en azından bazı CD34 Yüksek CD31 Pos endotel hücreleri lenfatik işaretleyici podoplanin 29 ekspres öneririz Flow sitometri. İnsan lenfatik malformasyonlar LYVE-1 ve podoplanin boyama sistematik değerlendirme hem LYVE-1 ilk lenfatik güçlü mevcut olduğu bildirilmiştir, normal dokularda, lenfatik malformasyon endotelyumu 30 boyama etkili olduğunu göstermesine rağmenkılcal endotel ancak azaltılmış ve toplama lenfatik endotele 31 bile yok. Amacımız izole etmek olduğundan hem biz seçtiniz başlangıç ​​ve toplama lenfatik endotel hücreleri, bizim hücre seçimi stratejisinin bir parçası olarak LYVE-1 kullanmak için değil. Son olarak, bu belirteçler kullanılması kararı da mikroskopik görüntülemesi için lenf damarlarına etiketlenmesi için, teşhis amacıyla kullanılır antikorların mevcudiyeti, akış sitometrisi ve imünoflöresan çalışmalar arasındaki ilişki olanak sağlayabilecek bir özelliği dayanıyordu. Bu makale sünnet derisi ve lenfatik malformasyon gelen CD34 Düşük CD31 Pos VEGFR-3 Pos podoplanin Pos LECS başarılı izolasyonu yanı sıra CD34 Yüksek CD31 Pos VEGFR-3 Pos podoplanin Pos endotel hücreleri için gerekli doku sindirim yöntemi, hücre boyama ve FACS ayarlarını anlatacağız dokusu.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Material/Equipment</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue Number</td>
			<td>Description</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Life Technologies (Gibco)</td>
			<td>11965-092</td>
			<td>Used to collect tissue samples from the operating theatre.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGM-2 MV Bullet Kit</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-3202</td>
			<td>EGM-2 MV Bullet Kit contains 500 ml of EBM-2 media and human EGF, hydrocortisone, gentamycin (GA-1000), fetal bovine serum (FBS), VEGF, human FGF-b, R3-IGF-1 and ascorbic acid.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VEGF-C</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>2179-VC-025</td>
			<td>Complete endothelial cell media is supplemented with 50 ng/mL VEGF-C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-antimycotic solution (100x)</td>
			<td>Life Technologies (Gibco)</td>
			<td>15240-062</td>
			<td>This solution contains 10,000U/ml of penicillin, 10,000 mg/ml of streptomycin and 25 mg/ml of Fungizone antimycotic. Use at 1:100 dilution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibronectin from human plasma</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F2006</td>
			<td>Used at 10 mg/ml concentrations. It can be re-used for up to 1 month if kept at 4 degrees and maintained sterile. Use 7 mL to coat 150 cm2 flask.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StemPro Accutase Cell dissociation reagent</td>
			<td>Life Technologies (Gibco)</td>
			<td>A11105-01</td>
			<td>StemPro&#174;Accutase&#174; is used at 0.05 ml per cm2 to cover the entire surface area of the flask. Using lesser volumes may result in incomplete cell detachment.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.4% Trypan Blue dye</td>
			<td>Life Technologies (Gibco)</td>
			<td>15250-061</td>
			<td>Used as a viability stain.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase II</td>
			<td>Roche Applied Biosciences</td>
			<td>4942078001</td>
			<td>Used at 0.04%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase II</td>
			<td>Worthington Lab</td>
			<td>4176</td>
			<td>Used at 0.25%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>Roche Applied Biosciences</td>
			<td>11284932001</td>
			<td>Used at 0.01%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 mm nylon cell strainers</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-conjugated VEGFR-3 clone 9D9F9, clone WM59</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>356204</td>
			<td>Used at 1:50 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-Cy7-conjugated CD34, clone 581</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>343516</td>
			<td>Used at 1:200 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-conjugated mouse anti human CD31, clone WM59</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>303116,</td>
			<td>Used at 1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 488-conjugated rat anti human PODOPLANIN, clone NC-80.</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>337006</td>
			<td>Used at 1:200 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-conjugated mouse IgG1, k isotype, clone MOPC-21</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>400112</td>
			<td>Used at 1:50 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-Cy7-conjugated mouse IgG1, k isotype, clone MOPC-21</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>400126</td>
			<td>Used at 1:200 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-conjugated mouse IgG1, k isotype, clone MOPC-21</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>400120</td>
			<td>Used at 1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 488-conjugated mouse IgG2a, k isotype, clone RATK2758</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>400525</td>
			<td>Used at 1:200 dilution</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of human lymphatic endothelial cells by multi-parameter fluorescence-activated cell sorting

Primer lenfödem, lenf malformasyonlar ve lenfatik tümörler gibi lenfatik sistem bozuklukları önemli morbidite nedeni ama az onların biyoloji hakkında bilinen nadir durumlardır. Hastalıklı ve sağlıklı dokudan son derece saf insan lenfatik endotel hücreleri (LECS) Ayırma, genetik, moleküler ve hücresel düzeyde lenfatik endotel çalışmalarını kolaylaştıracaktır. Bu araştırmalar, bu durumların klinik yönetimi değişebilir yeni tedaviler için hedefler ortaya çıkarabilir tahmin edilmektedir. LECS ve lenfatik malformasyon lenfatik endotel hücreleri (LM LECS) sünnet derisi insan izolasyonunu açıklayan bir protokol sunulmuştur. Elde etmek için tek bir hücre süspansiyonu dokusu kıyılmış ve enzimatik dispase II ve kollajenaz II kullanılarak tedavi edildi. Elde edilen tek bir hücre süspansiyonu daha sonra farklılaşması (CD) belirteçleri CD34, CD31, Vasküler Endotelyal Büyüme Faktörü-3 (VEGFR-3) ve podoplanin kümelenmesinde antikorlar ile işaretlenmiştir. Stained canlı hücreler diğer endotelyal ve non-endotel hücrelerinden CD34 Düşük CD31 Pos VEGFR-3 Pos podoplanin Pos LM LEC nüfusu ayırmak için bir floresan aktif hücre sıralayıcı (FACS) üzerinde sıralanır. kriteri LM LECS kültüre ve daha deneysel kullanım için fibronektin kaplı şişeler üzerinde genişletti.

Başlangıç ​​Doku sindirimi takiben, bölünmemiş örneklerin kültür 24 saat sonra, ayrı bir endotel hücre kolonileri bir araya fibroblast benzeri hücreler ve yumuşak kas hücreleri (Şekil 2A) gözlenebilir. Izlenerek ayırma ve hücre kültüründe 24 saat sonra CD34 Düşük CD31 Pos VEGFR-3 Pos podoplanin Sıra hücreleri ekleyin ve tipik arnavut morfolojisi (Şekil 2B ve C) göstermektedir. Yukarıda tarif ed...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Human Lymphatic Endothelial Cells by Multi-parameter Fluorescence-activated Cell Sorting at JoVE.com

Isolation of Human Lymphatic Endothelial Cells by Multi-parameter Fluorescence-activated Cell Sorting

Bu protokolün amacı floresans ile aktive edilen hücre sınıflandırma (FACS) kullanılarak insan lenfatik malformasyon kiste benzer damarları ve derisini astar lenfatik endotel hücreleri izole etmektir. Daha sonra hücre kültürü ve bu hücrelerin genişlemesi, genetik proteomik, işlevsel ve hücre farklılaşması çalışmaları için deney sofistike yeni bir düzeyde izin verir.

Çoklu-parametre floresans ile aktive edilen hücre sınıflandırma İnsan lenfatik endotel hücreleri İzolasyonu

Lymphatic system disorders such as primary lymphedema, lymphatic malformations and lymphatic tumors are rare conditions that cause significant morbidity ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Real-time Electrical Impedance Based Technique to Measure Invasion of Endothelial Cell Monolayer by Cancer Cells

Kanser Hücreleri Endotel Hücre Tek tabakalı Invasion Tedbir Gerçek zamanlı Elektrik Empedans Tabanlı Tekniği

Metastatic dissemination of malignant cells requires degradation of basement membrane, attachment of tumor cells to vascular endothelium, retraction of ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

İnsan Diş Pulp Kök Hücre İzolasyonu, Karakterizasyonu ve Karşılaştırmalı Farklılaşma İki Farklı Yöntemler Kullanılarak Daimi Dişler türetilen

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Cell Death Associated with Abnormal Mitosis Observed by Confocal Imaging in Live Cancer Cells

Anormal Mitoz ile İlişkili Hücre Ölümü Canlı Kanser Hücreleri Konfokal Görüntüleme Uyacakları

Phenanthrene derivatives acting as potent PARP1 inhibitors prevented the bi-focal clustering of supernumerary centrosomes in multi-centrosomal human ...

Isolation, Culture, and Imaging of Human Fetal Pancreatic Cell Clusters

İnsan Fetal Pankreas Hücre Kümeleri İzolasyon, Kültür ve Görüntüleme

For almost 30 years, scientists have demonstrated that human fetal ICCs transplanted under the kidney capsule of nude mice matured into functioning ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

İnsan Prostat Kanseri Örneklerinden Kanser Kök Hücreleri İzolasyon

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Pankreas Kanseri Yeni Tedavi Stratejileri Geliştirme Hücre Özellikleri Kök incelenmesi

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Isolation and Culture Expansion of Tumor-specific Endothelial Cells

Tümör spesifik Endotel Hücreleri İzolasyon ve Kültürü Genişleme

Freshly isolated tumor-specific endothelial cells (TEC) can be used to explore molecular mechanisms of tumor angiogenesis and serve as an in vitro model ...

Rapid and Efficient Generation of Recombinant Human Pluripotent Stem Cells by Recombinase-mediated Cassette Exchange in the AAVS1 Locus

Rapid and Efficient Generation of Recombinant Human Pluripotent Stem Cells by Recombinase-mediated Cassette Exchange in the AAVS1 Locus

içinde Recombinase aracılı Kaset Borsası tarafından Rekombinant insan pluripotent kök hücreleri hızlı ve verimli Nesil<em&gt; AAVS1</em&gt; Odağı

Even with the revolution of gene-targeting technologies led by CRISPR-Cas9, genetic modification of human pluripotent stem cells&#160;(hPSCs)&#160;is ...

Isolation and Culture of Primary Endothelial Cells from Canine Arteries and Veins

Köpek arter ve venlerin Primer Endotel Hücreleri İzolasyon ve Kültür

Cardiovascular disease is studied in both human and veterinary medicine. Endothelial cells have been used extensively as an in vitro model to study ...

Isolation of Endothelial Progenitor Cells from Healthy Volunteers and Their Migratory Potential Influenced by Serum Samples After Cardiac Surgery

Kalp Damar Cerrahisi sonra serum Örnekleri etkilenerek Sağlıklı Gönüllüler ve Bunların Göçmen Potansiyelden Endotel Ata Hücreleri İzolasyon

Endothelial progenitor cells (EPCs) are recruited from the bone marrow under pathological conditions like hypoxia and are crucially involved in the ...