Name: isolation and characterization of satellite cells from rat head branchiomeric muscles
Uploaded: 2015-07-20T14:00:00
Duration: 7 min 37 s
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This study was funded by a Mosaic grant (017.009.009) from The Netherlands Organization for Scientific Research (NWO) and a Start grant (S-13-167C) for young investigators from the AO Foundation. Z.Y.R is supported by the National Institutes of Health (grant # AG021566, AG035377, NS090051).

The authors have no conflicting interests to disclose.

अलग branchiomeric सिर मांसपेशियों से अनुसूचित जातियों के पूर्व विस्तार और passaging के बिना एक 9 सप्ताह पुरानी Wistar चूहा और बाह्य मैट्रिक्स जेल स्पॉट पर सीधे सुसंस्कृत से अलग थे। अलगाव के बाद, कोशिकाओं गिना रहे थे और एक ही सेल घनत्व पर वरीयता प्राप्त। तीन अलग अलग मांसपेशियों के समानांतर अलगाव के लिए, इस विधि के बारे में 4 घंटे लगते हैं। संस्कृति संक्रमण से बचने के लिए, एक महत्वपूर्ण कदम की मांसपेशियों के विच्छेदन के बाद शराब के 70% में तेजी से धोने है। अनुसूचित जाति के अलगाव के दौरान यह छोटे टुकड़ों में मांसपेशियों के ऊतकों (लगभग 2 मिमी) में कटौती, लेकिन इस वजह से कोशिका क्षति के एक छोटे से सेल उपज में परिणाम देगा के रूप में बहुत ज्यादा क़ीमा बनाने से बचने के लिए महत्वपूर्ण है। इसके अलावा, enzymatic पाचन की अवधि को और अधिक नुकसान से बचने के लिए खुर्दबीन के नीचे ध्यान से जाँच की जानी चाहिए। पाचन के उद्देश्य myofibers अलग कर देना है। अलग कक्षों की 90% से अधिक Pax7 व्यक्त बाद, आगे नहीं शुद्धि (आंकड़े 6-8) की आवश्यकता है।यह एक ऐसी Percoll 39,40 पर uncoated व्यंजन 14,37,38 पर पूर्व चढ़ाना, विभाजन के रूप में अन्य तरीकों में अतिरिक्त शुद्धि चरणों से बचा जाता है, fluorescent- या चुंबकीय या सेल 41,43 छँटाई। विचूर्णन के लिए यह इस अनुसूचित जातियों के यांत्रिक रिहाई की अनुमति देता है के रूप में ऊतक टुकड़े और विंदुक टिप के उद्घाटन के बीच कतरनी प्रेरित करने के लिए आवश्यक है। (व्यास टिप के अंदर: 1 मिमी) एक 10 मिलीलीटर विंदुक के साथ विचूर्णन तो मुश्किल है, (व्यास टिप के अंदर: 2 मिमी) एक 5 एमएल पिपेट पहली बार उपयोग किया जा सकता है। वैकल्पिक रूप से, कांच पाश्चर pipettes वांछित व्यास में कटौती की जा सकती है और इस्तेमाल किया जाएगा। इस विधि, कुशल सरल है और विभिन्न मांसपेशियों के नमूनों से अनुसूचित जाति के एक साथ अलगाव की अनुमति देता है। अनुसूचित जातियों के लिए संस्कृति प्लेटें भी जिलेटिन या कोलेजन के साथ लेपित किया जा सकता है, लेकिन हमारे पिछले अध्ययनों बाह्य मैट्रिक्स जेल कोलेजन 38 से अधिक myogenic क्षमता के रखरखाव के लिए कहीं बेहतर है कि पता चलता है। के बाह्य मैट्रिक्स जेल स्पॉटमिलीमीटर आकार (10 μl / ओ 2 मिमी या 20 μl / O 4 मिमी) प्रसार और कोशिकाओं की सीमित संख्या के साथ अनुसूचित जाति के भेदभाव के अध्ययन की अनुमति देता है। भेदभाव परख के लिए करीब 8 से 20 गुना कम कोशिकाओं 24 अच्छी तरह से थाली (हे 15.6 मिमी) की तुलना में आवश्यक हैं, और कम के बारे में 80-200 बार 35 मिमी पेट्री डिश (ओ 35 मिमी) 14,38 की तुलना में। बाह्य मैट्रिक्स जेल महंगा है, इसलिए इस विधि भी अधिक लागत प्रभावी है। इसके अलावा, चैम्बर स्लाइड्स प्लास्टिक कवर से बदला जा सकता है और आगे की लागत को कम करने के लिए निकल जाता है। बाह्य मैट्रिक्स जेल की तैयारी के लिए चैम्बर स्लाइड्स के रातोंरात सुखाने के लिए आवश्यक है स्पॉट। बाह्य मैट्रिक्स जेल स्पॉट पारदर्शी हो रहे हैं, यह प्रकाश पीठ का उपयोग कर नीचे की ओर पर स्पॉट चिह्नित करने के लिए आवश्यक है। कक्षों स्लाइड आसान हेरफेर के लिए एक पेट्री डिश में तय कर रहे हैं। इसके अलावा सेल संस्कृति के विस्तार smal की अनुसूचित जातियों अध्ययन करने की संभावना प्रदान करता है, जो जरूरी नहीं हैमांसपेशियों या छोटे पेशी के नमूने ler। वैकल्पिक रूप से, पीसीआर या पेशी के लिए जैसे अधिक कोशिकाओं की जरूरत है अगर ऊपर संकेत के रूप में, हौसले से अलग जातियों पहले T75 बोतल में विस्तार किया जा सकता निर्माण करती है। अनुसूचित जातियों इस प्रोटोकॉल का उपयोग अलगाव के बाद तुरंत फ्लो के साथ आगे की शुद्धि के लिए उपयुक्त नहीं हैं अलग। pronase साथ पाचन सतह का व्यापक पाचन 14 प्रतिजन का कारण बनता है। अलग बहुत संख्या विभिन्न myoblasts प्रसार और भेदभाव प्रभावित के रूप में सेल संस्कृति के लिए उपयोग किया जाता है कि घोड़े सीरम और भ्रूण गोजातीय सीरम पहले ठीक से अलगाव से पहले की विशेषता किया जाना चाहिए। हाल के वर्षों में, गिल मेहराब और सिर mesoderm (जैसे दृष्टितर मांसपेशियों) 24 से निकाली गई मांसपेशियों में दिलचस्पी बढ़ रही है। यह स्पष्ट रूप से सिर और अंग की मांसपेशियों अत्यधिक विभिन्न गुणों के अधिकारी को प्रदर्शित किया गया है। पुराने जानवरों से masseter मांसपेशियों को फिर से करने लगता हैअंग की मांसपेशियों 25,26 के साथ तुलना में उनके पुनर्योजी क्षमता टाइन। दृष्टितर मांसपेशियों से अनुसूचित जातियों के सिर की मांसपेशियों से अनुसूचित जातियों के लिए तुलनीय एक मजबूत प्रसार और भेदभाव क्षमता के अधिकारी, और अंग पेशी अनुसूचित जातियों के 24 की तुलना में एक बड़ा engraftment क्षमता दिखाने। फाइबर प्रकार वितरण और मायोसिन रचना मांसपेशी समूहों के बीच और भी प्रजातियों के बीच होती है। मनुष्यों में पहली गिल चाप से होने वाले स्नायु हृदय की मांसपेशियों के विकास के लिए विशिष्ट धीमी और तेज दोनों फाइबर (उपप्रकार आईआईए और IIx), नवजात myosins और myosins होते हैं। कृन्तकों में इन मांसपेशियों के बारे में 95% तेजी से तंतुओं मायोसिन आईआईए और IIb) 44-46 होते हैं। एवियन मांसपेशियों पर अध्ययन अलग मांसपेशी फाइबर प्रकार से अनुसूचित जाति भेदभाव क्षमता में भिन्न है कि दिखा। धीमी गति से फाइबर से अनुसूचित जातियों दोनों फाइबर प्रकार 47 में अंतर कर सकते हैं, जबकि तेजी से फाइबर से अनुसूचित जातियों ही, तेजी से मांसपेशी फाइबर में अंतर है। इसके अलावा, तेजी से मांसपेशियों में अनुसूचित जातियों का प्रतिशततंतुओं धीमी गति से मांसपेशी फाइबर 48,49 की तुलना में कम है। यह फाइबर प्रकार वितरण craniofacial क्षेत्र में मांसपेशियों पर अध्ययन के लिए ध्यान में रखा जाना चाहिए कि इंगित करता है। फांक तालु की मांसपेशियों के लिए भी इसी तरह, कृन्तकों में LVP तेजी से तंतुओं 50 लगभग विशेष रूप से शामिल हैं। कारण है कि, LVP से अनुसूचित जातियों फांक तालु के क्षेत्र में पूर्व नैदानिक ​​अध्ययन के लिए उपयुक्त हैं। इस प्रोटोकॉल branchiomeric सिर मांसपेशियों या अन्य छोटे मांसपेशियों या छोटे मांसपेशियों के नमूनों से व्युत्पन्न अनुसूचित जातियों का अध्ययन करने के लिए नई संभावनाओं प्रदान करता है। यह एक ऐसी फांक तालु के रूप में बल्कि छोटे मांसपेशियों को प्रभावित करने वाले अन्य स्थितियों में स्थितियों में मैक्सिलोफेशियल क्षेत्र में मांसपेशियों के उत्थान में सुधार करने के लिए नए उपचारों के विकास की सुविधा होगी।

An erratum was issue for <a href="http://www.jove.com/video/52802">Isolation and Characterization of Satellite Cells from Rat Head Branchiomeric Muscles</a>. The fourth figure was updated to explain the isolation of the LVP better.

Erratum: Isolation and Characterization of Satellite Cells from Rat Head Branchiomeric Muscles

के बारे में 1: 500 1: 1,000 नवजात शिशुओं होंठ और / या तालु (सीएलपी) से जुड़े एक फांक का प्रदर्शन; इस प्रकार यह मनुष्य 1 में सबसे आम जन्मजात विकृति है। कोमल तालू की मांसपेशियों भाषण, निगल, और चूसने के दौरान कोमल तालू के कामकाज के लिए महत्वपूर्ण हैं। कोमल तालू की एक फांक मौजूद है, तो इन मांसपेशियों को असामान्य रूप से तालु हड्डी के पीछे अंत में डाला जाता है। कोमल तालू नाक के माध्यम से बचने के लिए हवा को रोकने के भाषण के दौरान ऊपर और नीचे ले जाता है। तालू में एक फांक साथ बच्चे velopharyngeal शिथिलता 2,3 के रूप में जाना जाता घटना में जिसके परिणामस्वरूप इस पर नियंत्रण समारोह में नहीं है। उपचार प्रोटोकॉल चर रहे हैं, कोमल तालू की शल्य चिकित्सा की मरम्मत बचपन (उम्र के 6-36 महीने) 4 में जगह लेता है। कोमल तालू का असामान्य रूप से डाला मांसपेशियों को शल्य चिकित्सा द्वारा 5-7 सुधारा जा सकता है, हालांकि, velopharyngeal शिथिलता 30% करने के लिए 7% में बनी रहती हैरोगियों 2,3,8-10 की। उपग्रह कोशिकाओं (अनुसूचित जाति) की क्रिया के माध्यम से पुनर्जीवित करने के लिए कंकाल की मांसपेशी की क्षमता अच्छी तरह से 11,12 स्थापित है। मांसपेशी की चोट पर, अनुसूचित जातियों सक्रिय कर रहे हैं और चोट के स्थल की ओर पलायन। वे तो पैदा अंतर है, और नया myofibers या मरम्मत क्षतिग्रस्त लोगों में 13 के लिए फार्म का फ्यूज। उनकी संतान, proliferating myoblasts, साथ ही myogenic दृढ़ संकल्प कारक 1 (MyoD) 16 व्यक्त करते हुए मौन अनुसूचित जातियों, प्रतिलेखन कारक Pax7 14,15 व्यक्त करते हैं। फर्क myoblasts 17 (MyoG) myogenin व्यक्त करने के लिए शुरू करते हैं। myoblasts के टर्मिनल भेदभाव myofibers के गठन, और इस तरह मायोसिन भारी श्रृंखला (MyHC) 16,18 के रूप में मांसपेशियों-विशिष्ट प्रोटीन की अभिव्यक्ति द्वारा चिह्नित है। हाल ही में, कई रणनीतियों अंग की मांसपेशियों 19-23 की पेशी उत्थान में सुधार करने के लिए पुनर्योजी चिकित्सा में इस्तेमाल किया गया है। पर विशिष्ट अध्ययनयह हाल ही में वे कई पहलुओं को 24 में अन्य मांसपेशियों से अलग प्रदर्शन किया गया क्योंकि branchiomeric सिर की मांसपेशियों को भी महत्वपूर्ण हैं। अंग की मांसपेशियों के साथ इसके विपरीत, यह branchiomeric सिर मांसपेशियों, कम अनुसूचित जातियों के 25 होते धीमी पुनर्जन्म, और अधिक रेशेदार संयोजी ऊतक भी अन्य प्रतिलेखन कारक व्यक्त branchiomeric सिर मांसपेशियों से अनुसूचित जातियों proliferating, इसके अलावा चोट 26 के बाद का गठन किया गया है जो सुझाव दिया गया है। उदाहरण के लिए, Tcf21, craniofacial पेशी गठन के लिए एक प्रतिलेखन कारक दृढ़ता से सिर की मांसपेशियों regenerating में है, लेकिन शायद ही अंग की मांसपेशियों 25 regenerating में व्यक्त किया है। सीएलपी मरीजों की कोमल तालू में मांसपेशियों को आम तौर पर छोटे और कम सामान्य तालु की मांसपेशियों 27,28 की तुलना में अच्छी तरह का आयोजन कर रहे हैं। धीमी और तेज तंतुओं दोनों कोमल तालू की मांसपेशियों में मौजूद हैं, लेकिन धीमी गति से तंतुओं अधिक प्रचुर मात्रा में हैं। इसके विपरीत, फांक की मांसपेशियों को भी एक उच्च तेजी से फाइबर के अनुपात और एक कम केशिका आपूर्ति होते हैंसामान्य कोमल तालू की मांसपेशियों को 29-31 के साथ तुलना में। फास्ट तंतुओं संकुचन प्रेरित चोट 31-33 से ग्रस्त हैं। साथ गरीब केशिका आपूर्ति भी फाइब्रोसिस 34,35 को बढ़ावा देने के कर सकते हैं। इन सभी पहलुओं को शल्य फांक बंद होने के 36 के बाद कोमल तालू की मांसपेशियों के गरीब उत्थान के लिए योगदान कर सकते हैं। इसे देखते हुए, branchiomeric सिर पेशी अनुसूचित जातियों के अलगाव और लक्षण वर्णन के लिए एक प्रोटोकॉल महत्वपूर्ण है। इस branchiomeric सिर की मांसपेशियों के अनुसूचित जाति के जीव विज्ञान का अध्ययन करने की संभावना प्रदान करता है। इसके अलावा, ऊतक इंजीनियरिंग के आधार पर नए उपचारों सीएलपी और craniofacial क्षेत्र में कोई समझौता अन्य स्थितियों में सर्जरी के बाद मांसपेशियों की पुनर्जनन को बढ़ावा देने के लिए विकसित किया जा सकता है। सामान्य तौर पर, अनुसूचित जातियों मांसपेशियों के ऊतकों को 14 वर्ष की हदबंदी के बाद प्राप्त किया जा सकता है। क़ीमा बनाने, enzymatic पाचन, और विचूर्णन आम तौर पर अपनी जगह से अनुसूचित जातियों जारी करने के लिए आवश्यक हैं। अनुसूचित जातियों FR, uncoated व्यंजन 14,37,38 पर पूर्व चढ़ाना द्वारा शुद्ध किया जा सकता हैactionation Percoll 39,40 पर, fluorescent- या चुंबकीय या सेल 41-43 छँटाई। यहाँ हम युवा वयस्क चूहों के branchiomeric सिर मांसपेशियों से उपग्रह कोशिकाओं के अलगाव के लिए एक नई आर्थिक और तेजी प्रोटोकॉल उपस्थित थे। इस प्रोटोकॉल पिछले एक पांडुलिपि 14 और विशेष रूप से छोटे ऊतकों के नमूनों के लिए अनुकूलित पर आधारित है। 1 सेंट, 2 एन डी, और 4 वें गिल मेहराब से होने वाले प्रतिनिधि मांसपेशियों से अनुसूचित जातियों के अलगाव वर्णित हैं। अलगाव के बाद, उपग्रह कोशिकाओं की कम संख्या उनके भेदभाव का अध्ययन करने के लिए मिलीमीटर आकार का बाह्य मैट्रिक्स जेल स्थानों पर संवर्धित कर रहे हैं। यह दृष्टिकोण अनुसूचित जातियों के विस्तार और passaging के लिए आवश्यकता से बचा जाता है।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Hypodermic Needle 25G 0,5x25m</td>
			<td>BD Microlance</td>
			<td>300400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scissors</td>
			<td>Braun</td>
			<td>BC154R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro forceps straight</td>
			<td>Braun</td>
			<td>BD330R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scalpel Blade No.15</td>
			<td>Swann-Morton</td>
			<td>0205</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol 70%</td>
			<td>Denteck</td>
			<td>2,010,005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permanox Slide, 8 Chamber</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>177445</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 well cell culture plate</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>657160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Dishes (100 x 20 mm)</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>664160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml sterile conical centrifuge tube</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>352097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml sterile conical centrifuge tube</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer (40 &#956;m)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>431750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL serological pipette</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>607180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20&#181;L FT20</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>774288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel, Phenol-Red Free</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>356237</td>
			<td>10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pronase</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>53702</td>
			<td>10KU</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-144</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium, high glucose, GlutaMAX Supplement, pyruvate&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10569-010</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum&#160;&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>3600511</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26050088</td>
			<td>500 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>100 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken Embryo Extract</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>2850145</td>
			<td>20 mL</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation and characterization of satellite cells from rat head branchiomeric muscles

Fibrosis and defective muscle regeneration can hamper the functional recovery of the soft palate muscles after cleft palate repair. This causes persistent problems in speech, swallowing, and sucking. In vitro culture systems that allow the study of satellite cells (myogenic stem cells) from head muscles are crucial to develop new therapies based on tissue engineering to promote muscle regeneration after surgery. These systems will offer new perspectives for the treatment of cleft palate patients. A protocol for the isolation, culture and differentiation of satellite cells from head muscles is presented. The isolation is based on enzymatic digestion and trituration to release the satellite cells. In addition, this protocol comprises an innovative method using extracellular matrix gel coatings of millimeter size, which requires only low numbers of satellite cells for differentiation assays.

इस प्रोटोकॉल का उपयोग करना, masseter पेशी (एक तरफ) 0.8-1 x 10 6 कोशिकाओं, द्वितुंदी पेशी (पीछे पेट) 1.5-2 x 10 5 कोशिकाओं पैदावार, और उन्नमनी वेली palatini पेशी पैदावार 1-1.5 x 10 5 कोशिकाओं अर्जित करता है। सेल पैदावार जानवर की मांसपेशी प्रकार, तनाव, और उम्र पर निर्भर करते हैं। तीन मांसपेशी समूहों के बीच तुलना के लिए, हौसले से अलग जातियों को एक ही सेल घनत्व (1.5 एक्स 10 10/03 μl) पर वरीयता प्राप्त थे। सीधे अलगाव के बाद, हौसले से अलग कोशिकाओं के 90% से अधिक Pax7 (चित्रा 6) व्यक्त करते हैं। 4 दिन, 7 और 10 संस्कृतियों Pax7, MyoD, MyoG और MyHC immunostaining के खिलाफ एंटीबॉडी के साथ दाग रहे थे। पोस्टल मनमाना क्षेत्रों एक 20x उद्देश्य का उपयोग संस्कृति के प्रति गिना रहे थे। दिन 4 पैक्स 7 और म्यो डी में सभी मांसपेशी समूहों में व्यक्त किया जाता है (आंकड़े 6 और 7 और 8), masseter और द्वितुंदी मांसपेशियों से SatCs की लेकिन संतान एक्सप्रेशंस शुरूmyogenin पहले उन्नमनी वेली palatini पेशी (9 चित्रा) की तुलना में गाते हैं। 10 दिन में, MyoG की अभिव्यक्ति दृढ़ता से सभी समूहों में (9 चित्रा) कम हो जाता है। कुछ दिन बाह्य मैट्रिक्स जेल स्थानों पर बोने के बाद, proliferating कोशिकाओं फ्यूज और मायोसिन भारी श्रृंखला व्यक्त जो बहु-केन्द्रक myotubes, आकार लेने लगते हैं। लघु myotubes दिन 7 (10 चित्रा) में स्पष्ट रूप से दिखाई दे रहे हैं। 10 दिन में, myotubes के हिल (वीडियो 1) मनाया जा सकता है। <img alt="चित्र 1" src="/files/ftp_upload/52802/52802fig1.jpg" /> चित्रा 1:। एक कक्ष स्लाइड में बाह्य मैट्रिक्स जेल स्पॉट (ए) आसान हेरफेर के लिए, एक 100 मिमी पेट्री डिश में 8 अच्छी तरह चैम्बर स्लाइड जगह है। Pipet 10 μl बाह्य मैट्रिक्स प्रत्येक कक्ष में जेल और एक ठंडी सतह (7 मिनट) पर डाल दिया। (बी) के अतिरिक्त बाह्य मैट्रिक्स जी के बाद चैम्बर स्लाइडएल निकाल दिया जाता है। <img alt="चित्र 2" src="/files/ftp_upload/52802/52802fig2.jpg" /> चित्रा 2:। एक पार्श्व दृश्य में पशु की masseter पेशी के विच्छेदन (ए) के प्रमुख के। कान (ई), कर्णमूल (पी) और चेहरे की नस (सप्तम)। (बी) masseter पेशी (सुश्री) और लौकिक पेशी (टी) का सतही सिर के मांसल aponeurosis (ते)। एक संदंश के साथ अपनी प्रविष्टि से कण्डरा अलग करें। (सी) ध्यान से जबड़ा के Ramus पर अपनी प्रविष्टि जब तक मांसपेशियों में काटना। ई: कान, पी: कर्णमूल, सातवीं: चेहरे की नस, टी: टेम्पोरल मांसपेशियों, एमएस: masseter पेशी, ते के सतही सिर: कण्डरा, सांसद: masseter मांसपेशियों की गहरी सिर। <img alt="चित्र तीन" src="/files/ftp_upload/52802/52802fig3.jpg" /> चित्रा 3: द्वितुंदी पेशी के पीछे पेट के विच्छेदन (।एक लापरवाह स्थिति में पशु की ए) प्रमुख। अवअधोहनुज ग्रंथि (एसजी), masseter पेशी (एम), चेहरे की नस (सप्तम) और sternocleidomastoid पेशी (एससीएम) स्थानीयकरण। अवअधोहनुज ग्रंथि को निकाल दें। (बी) द्वितुंदी मांसपेशी पूर्वकाल (ई) और पीछे पेट (पीडी) स्थानीयकरण। एक सीधे संदंश के साथ,, पीछे पेट के पूर्वकाल कण्डरा लेने के लिए यह कटौती और मध्य कर्ण Bulla (Ty) में अपने मूल जब तक इसे ध्यान से काटना। ई: कान, एसजी: अवअधोहनुज ग्रंथि, सातवीं: चेहरे की हिम्मत, एम: masseter पेशी, एसएमसी: sternocleidomastoid पेशी, ई: पूर्वकाल पेट द्वितुंदी पेशी, पीडी: पीछे पेट द्वितुंदी पेशी, TY: मध्य कर्ण Bulla। <img alt="चित्रा 4" src="/files/ftp_upload/52802/52802fig4.jpg" /> चित्रा 4:। उन्नमनी वेली palatini पेशी के विच्छेदन (ए) द्वितुंदी पेशी (पीछे पेट) के विच्छेदन के बाद सामान्य दृश्य। Stylohyoid पेशी (एसटी) और उन्नमनी का पट्टावेली palatini स्थानीयकृत किया जा सकता है। इसके पीछे चल श्वासनली (टी) और घेघा (ते) ध्यान दें। श्वासनली और ग्रसनी (पी) संपर्क में है घेघा उठाने के बाद (बी)। कोमल तालू में उन्नमनी वेली palatini की प्रविष्टि अब दिख रहा है। तीर दोनों पक्षों में उन्नमनी वेली palatini मांसपेशियों के साथ विच्छेदित कोमल तालू को इंगित करता है। ई: कान, सेंट: stylohyoid पेशी, सातवीं: चेहरे की हिम्मत, एम: masseter पेशी, ई: पूर्वकाल पेट द्वितुंदी पेशी, पीडी: पीछे पेट द्वितुंदी पेशी, टी: श्वासनली, es: घेघा, पी: ग्रसनी, * उन्नमनी वेली palatini पेशी । <img alt="चित्रा 5" src="/files/ftp_upload/52802/52802fig5.jpg" /> चित्रा 5: pronase के साथ enzymatic पाचन के बाद से पहले मांसपेशियों के ऊतकों (ए) की उपस्थिति और (बी)। मांसपेशी बंडलों enzymatic पाचन के बाद ढीला होना दिखाई देते हैं कि ध्यान दें। चित्रा 6: पैक्स 7 immunostaining के अलगाव के अंत में बाह्य मैट्रिक्स जेल के लिए लागू हौसले से अलग जातियों, (लगभग 6 घंटे प्रारंभिक ऊतक पाचन के बाद)।। पोस्टल मनमाना क्षेत्रों क्षेत्र में प्रति 210 कोशिकाओं के एक औसत के साथ एक 10x उद्देश्य का उपयोग गिना रहे थे। लगभग कोशिकाओं के 90% सकारात्मक पैक्स 7 रहे हैं। DAPI: नीले, Pax7: लाल। स्केल बार, 100 माइक्रोन। <img alt="चित्रा 7" src="/files/ftp_upload/52802/52802fig7highres.jpg" width="700" /> चित्रा 7:। पैक्स 7, MyoD immunostaining के दिन 4, 7 और 10 संस्कृतियों Pax7 के खिलाफ एंटीबॉडी, और MyoD immunostaining के साथ दाग रहे थे। (ए - सी) और (डी - एफ) 4 दिन के प्रतिनिधि photomicrographs और masseter पेशी से 7 संस्कृतियों। (जी और एच </stroएनजी&gt;) Pax7 + और ​​MyoD + सूक्ष्म क्षेत्र प्रति नाभिक की संख्या की गिनती और नाभिक की कुल संख्या (DAPI) के एक प्रतिशत के रूप में व्यक्त की गई थी। DAPI: नीले, Pax7: लाल, और MyoD: हरा। तराजू बार, 100 माइक्रोन। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52802/52802fig7highres.jpg" target="_blank">इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।</a> <img alt="आंकड़ा 8" src="/files/ftp_upload/52802/52802fig8highres.jpg" width="700" /> चित्रा 8:। Masseter, द्वितुंदी और उन्नमनी वेली तालु पेशी से संस्कृतियों में mononucleated कोशिकाओं से संस्कृतियों में Pax7 ± / MyoD ± का वितरण (एक - सी) दिवस 4, 7 और 10 संस्कृतियों Pax7 के खिलाफ एंटीबॉडी, और MyoD immunostaining के साथ दाग रहे थे। कोशिकाओं की कुल संख्या नाभिक की कुल संख्या (DAPI) के आधार पर किया जाता है। (डी) सेल ± Pax7 ± / MyoD का डाटा मात्रा का ठहरावरास। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52802/52802fig8highres.jpg" target="_blank">इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।</a> <img alt="9 चित्रा" src="/files/ftp_upload/52802/52802fig9highres.jpg" width="700" /> चित्रा: 9। Myogenin immunostaining के दिन 4, 7 और 10 संस्कृतियों Myogenin के खिलाफ एंटीबॉडी के साथ दाग रहे थे। (ए - डी) प्रतिनिधि 4 दिन की photomicrographs और उन्नमनी वेली तालु पेशी से 7 संस्कृतियों। (ई) MyoG + सूक्ष्म क्षेत्र प्रति नाभिक की संख्या की गिनती और नाभिक की कुल संख्या (DAPI) के एक प्रतिशत के रूप में व्यक्त की गई थी। MyoG + कोशिकाओं की (एफ) डाटा मात्रा का ठहराव। DAPI: नीले, Myogenin: हरा। तराजू बार, 100 माइक्रोन। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52802/52802fig9highres.jpg" target="_blank">इस figur का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें</a>ई। <img alt="10 चित्रा" src="/files/ftp_upload/52802/52802fig10.jpg" /> चित्रा 10:। मायोसिन भारी चेन immunostaining के दिन 4, 7 और 10 संस्कृतियों मायोसिन भारी श्रृंखला (MyHC) के खिलाफ एंटीबॉडी के साथ दाग रहे थे। प्रतिनिधि दिन 4, 7 की photomicrographs और द्वितुंदी (डीआईजी) पेशी से 10 संस्कृतियों। दिन में 10 लंबी और अच्छी तरह से संगठित myotubes स्पष्ट कर रहे हैं, जबकि 7 दिन में, छोटे myotubes मौजूद हैं। तराजू बार, 200 माइक्रोन। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52802/52802fig10large.jpg" target="_blank">इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।</a> वीडियो 1:।। Myotube हिल हिल myotubes के साथ दो प्रतिनिधि क्षेत्रों के उदाहरण दिन के लिए द्वितुंदी पेशी से 10 संस्कृतियों दिखाए जाते हैं <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52802/Video1.mpg" target="_blank">इस वीडियो को देखने के लिए यहां क्लिक करें।</a>

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Isolation and Characterization of Satellite Cells from Rat Head Branchiomeric Muscles

इस प्रोटोकॉल एक 9 सप्ताह पुरानी चूहे के branchiomeric सिर मांसपेशियों से उपग्रह कोशिकाओं के अलगाव का वर्णन है। मांसपेशियों को अलग गिल मेहराब से उत्पन्न। बाद में, उपग्रह कोशिकाओं उनके भेदभाव का अध्ययन करने के लिए मिलीमीटर आकार का एक स्थान कोटिंग पर संवर्धित कर रहे हैं। यह दृष्टिकोण उपग्रह कोशिकाओं के विस्तार और passaging से बचा जाता है।

चूहा हेड Branchiomeric मांसपेशियों से अलगाव और उपग्रह कोशिकाओं की विशेषता

Fibrosis and defective muscle regeneration can hamper the functional recovery of the soft palate muscles after cleft palate repair. This causes persistent ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation and Quantitative Immunocytochemical Characterization of Primary Myogenic Cells and Fibroblasts from Human Skeletal Muscle

मानव कंकाल की मांसपेशी से प्राथमिक myogenic कोशिकाओं और fibroblasts के अलगाव और मात्रात्मक Immunocytochemical विशेषता

The repair and regeneration of skeletal muscle requires the action of satellite cells, which are the resident muscle stem cells. These can be isolated ...

Isolation of Neural Stem/Progenitor Cells from the Periventricular Region of the Adult Rat and Human Spinal Cord

Periventricular वयस्क चूहे के क्षेत्र और मानव रीढ़ की हड्डी से तंत्रिका स्टेम / पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं के अलगाव

Adult rat and human spinal cord neural stem/progenitor cells (NSPCs) cultured in growth factor-enriched medium allows for the proliferation of ...

Isolation and Characterization of Single Cells from Zebrafish Embryos

अलगाव और zebrafish भ्रूण से एकल कक्ष की विशेषता

The zebrafish (Danio rerio) is a powerful model organism to study vertebrate development. Though many aspects of zebrafish embryonic development have been ...

Isolation and Characterization of Mesenchymal Stromal Cells from Human Umbilical Cord and Fetal Placenta

मानव गर्भनाल और भ्रूण प्लेसेंटा से अलगाव और Mesenchymal Stromal कोशिकाओं की विशेषता

The human umbilical cord (UC) and placenta are non-invasive, primitive and abundant sources of mesenchymal stromal cells (MSCs) that have increasingly ...

Isolation of Type I and Type II Pericytes from Mouse Skeletal Muscles

मास्क स्केलल स्नायुओं से प्रकार I और प्रकार II पेरीसिलटें का अलगाव

Pericytes are perivascular multipotent cells that show heterogeneity in different organs or even within the same tissue. In skeletal muscles, there are at ...

Isolation and Characterization of Primary Rat Valve Interstitial Cells: A New Model to Study Aortic Valve Calcification

अलगाव और प्राथमिक चूहा वाल्व मध्यवर्ती कोशिकाओं के लक्षण वर्णन: एक नया मॉडल महाधमनी वाल्व कड़ा अध्ययन करने के लिए

Calcific aortic valve disease (CAVD) is characterized by the progressive thickening of the aortic valve leaflets. It is a condition frequently found in ...

Identification of Skeletal Muscle Satellite Cells by Immunofluorescence with Pax7 and Laminin Antibodies

Pax7 और Laminin एंटीबॉडी के साथ इम्यूनोफ्लोरेसेंस द्वारा कंकाल मांसपेशी उपग्रह कोशिकाओं की पहचान

Immunofluorescence is an effective method that helps to identify different cell types on tissue sections. In order to study the desired cell population, ...

Isolation and Characterization of Cardiac Mesenchymal Stromal Cells from Endomyocardial Bioptic Samples of Arrhythmogenic Cardiomyopathy Patients

अलगाव और Arrhythmogenic Cardiomyopathy रोगियों के Endomyocardial Bioptic नमूनों से कार्डियक Mesenchymal Stromal कोशिकाओं के लक्षण वर्णन

A normal adult heart is composed of several different cell types, among which cardiac mesenchymal stromal cells represent an abundant population. The ...

Isolation and Characterization of Human Umbilical Cord-derived Mesenchymal Stem Cells from Preterm and Term Infants

अलगाव और मानव गर्भनाल के लक्षण वर्णन-व्युत्पंन Mesenchymal और अवधि के शिशुओं से स्टेम सेल

Mesenchymal stem cells (MSCs) have considerable therapeutic potential and attract increasing interest in the biomedical field. MSCs are originally ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

मानव प्रेरित Pluripotent स्टेम सेल से Somite डेरिवेटिव के विट्रो पीढ़ी में

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...