Name: silencing of brca2 to identify novel brca2-regulated biological functions in cultured human cells
Uploaded: 2015-08-12T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Silencing of BRCA2 to Identify Novel BRCA2-regulated Biological Functions in Cultured Human Cells at JoVE.com

This work was supported by FIRB-Merit grants RBNE08YFN3_005 and RBNE08HWLZ_012, and the Italian Ministry of Economy and Finance to the CNR for the Project &#8220;FaReBio di Qualit&#224;&#8221;.

1. Förbered siRNA lösningar <ol><li> Resuspendera 5 nmol oordning (Ctrl) och 5 nmol BRCA2 siRNA torkade pelletar i 100 ^ il RNas-fritt vatten (slutlig siRNA koncentration: 50 | iM). Detta är siRNA lager och måste lagras vid -20 ° C i 10 pl alikvoter. </li><li> Ta en delmängd av 10 ul från siRNA lager och tillsätt 40 pl RNas-fritt vatten för att erhålla 10 iM siRNA arbetslösning. Denna utspädning måste lagras vid -20 ° C fram till användning. OBS! SiRNA arbetslösning bör inte genomgå f...

<ol>
	<li>Thorslund, T., West, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRCA2:+a+universal+recombinase+regulator.">BRCA2: a universal recombinase regulator.</a> Oncogene. 26, 7720-7730 (2007).</li><li>Yoshida, K., Miki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+BRCA1+and+BRCA2+as+regulators+of+DNA+repair,+transcription,+and+cell+cycle+in+response+to+DNA+damage.">Role of BRCA1 and BRCA2 as regulators of DNA repair, transcription, and cell cycle in response to DNA damage.</a> Cancer Sci. 95, 866-871 (2004).</li><li>Martin, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germline+mutations+in+BRCA1+and+BRCA2+in+breast-ovarian+families+from+a+breast+cancer+risk+evaluation+clinic.">Germline mutations in BRCA1 and BRCA2 in breast-ovarian families from a breast cancer risk evaluation clinic.</a> J Clin Oncol. 19, 2247-2253 (2001).</li><li>Castro, E., Eeles, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+BRCA1+and+BRCA2+in+prostate+cancer.">The role of BRCA1 and BRCA2 in prostate cancer.</a> Asian J Androl. 14, 409-414 (2012).</li><li>Vencken, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemosensitivity+and+outcome+of+BRCA1-+and+BRCA2-associated+ovarian+cancer+patients+after+first-line+chemotherapy+compared+with+sporadic+ovarian+cancer+patients.">Chemosensitivity and outcome of BRCA1- and BRCA2-associated ovarian cancer patients after first-line chemotherapy compared with sporadic ovarian cancer patients.</a> Ann Oncol. 22, 1346-1352 (2011).</li><li>Farmer, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+the+DNA+repair+defect+in+BRCA+mutant+cells+as+a+therapeutic+strategy.">Targeting the DNA repair defect in BRCA mutant cells as a therapeutic strategy.</a> Nature. 434, 917-921 (2005).</li><li>Arbini, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+DNA+depletion+sensitizes+cancer+cells+to+PARP+inhibitors+by+translational+and+post-translational+repression+of+BRCA2.">Mitochondrial DNA depletion sensitizes cancer cells to PARP inhibitors by translational and post-translational repression of BRCA2.</a> Oncogenesis. 2, e82 (2013).</li><li>Yang, F., Guo, X., Yang, G., Rosen, D. G., Liu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AURKA+and+BRCA2+expression+highly+correlate+with+prognosis+of+endometrioid+ovarian+carcinoma.">AURKA and BRCA2 expression highly correlate with prognosis of endometrioid ovarian carcinoma.</a> Mod Pathol. 24, 836-845 (2011).</li><li>Guaragnella, N., Marra, E., Galli, A., Moro, L., Giannattasio, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silencing+of+BRCA2+decreases+anoikis+and+its+heterologous+expression+sensitizes+yeast+cells+to+acetic+acid-induced+programmed+cell+death.">Silencing of BRCA2 decreases anoikis and its heterologous expression sensitizes yeast cells to acetic acid-induced programmed cell death.</a> Apoptosis. 19, 1330-1341 (2014).</li><li>Mahato, R. I., Rolland, A., Tomlinson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cationic+lipid-based+gene+delivery+systems:+pharmaceutical+perspectives.">Cationic lipid-based gene delivery systems: pharmaceutical perspectives.</a> Pharm Res. 14, 853-859 (1997).</li><li>Su, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+BRCA2:+temperature+sensitivity+of+detection+and+cell-cycle+regulated+expression.">Characterization of BRCA2: temperature sensitivity of detection and cell-cycle regulated expression.</a> Oncogene. 17, 2377-2381 (1998).</li><li>Laemmli, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleavage+of+structural+proteins+during+the+assembly+of+the+head+of+bacteriophage+T4.">Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.</a> Nature. 227, 680-685 (1970).</li><li>Towbin, H., Staehelin, T., Gordon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophoretic+transfer+of+proteins+from+polyacrylamide+gels+to+nitrocellulose+sheets:+procedure+and+some+applications.">Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 76, 4350-4354 (1979).</li><li>Burnette, W. N. '. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term='Western+blotting':+electrophoretic+transfer+of+proteins+from+sodium+dodecyl+sulfate--polyacrylamide+gels+to+unmodified+nitrocellulose+and+radiographic+detection+with+antibody+and+radioiodinated+protein+A.">'Western blotting': electrophoretic transfer of proteins from sodium dodecyl sulfate--polyacrylamide gels to unmodified nitrocellulose and radiographic detection with antibody and radioiodinated protein A.</a> Anal Biochem. 112, 195-203 (1981).</li><li>Hunter, F. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual+targeting+of+hypoxia+and+homologous+recombination+repair+dysfunction+in+triple-negative+breast+cancer.">Dual targeting of hypoxia and homologous recombination repair dysfunction in triple-negative breast cancer.</a> Mol Cancer Ther. , (2014).</li><li>Drew, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+potential+of+poly(ADP-ribose)+polymerase+inhibitor+AG014699+in+human+cancers+with+mutated+or+methylated+BRCA1+or+BRCA2.">Therapeutic potential of poly(ADP-ribose) polymerase inhibitor AG014699 in human cancers with mutated or methylated BRCA1 or BRCA2.</a> J Natl Cancer Inst. 103, 334-346 (2011).</li><li>Bryant, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+killing+of+BRCA2-deficient+tumours+with+inhibitors+of+poly(ADP-ribose)+polymerase.">Specific killing of BRCA2-deficient tumours with inhibitors of poly(ADP-ribose) polymerase.</a> Nature. 434, 913-917 (2005).</li><li>Ihnen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+potential+of+the+poly(ADP-ribose)+polymerase+inhibitor+rucaparib+for+the+treatment+of+sporadic+human+ovarian+cancer.">Therapeutic potential of the poly(ADP-ribose) polymerase inhibitor rucaparib for the treatment of sporadic human ovarian cancer.</a> Mol Cancer Ther. 12, 1002-1015 (2013).</li><li>Jeong, J. H., Jo, A., Park, P., Lee, H., Lee, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brca2+Deficiency+Leads+to+T+Cell+Loss+and+Immune+Dysfunction.">Brca2 Deficiency Leads to T Cell Loss and Immune Dysfunction.</a> Mol Cells. , (2015).</li></ol>

Eftersom nedärvda mutationer i BRCA2-genen leder till ökad risk för flera cancertyper, inklusive kvinnor och män bröstcancer, äggstockscancer, prostatacancer, cancer i bukspottkörteln, och melanom 3,4 har ett antal studier gjorts för att förstå den biologiska funktionen av BRCA2-proteinet. De flesta av dessa studier är genetisk baserade främst på grund av tekniska svårigheter i att analysera en gigantisk protein som BRCA2. Den här beskrivna metoden för ljuddämpning och analysera BRCA...

BRCA2 (bröstcancer känslighet gen-2) genen kodar för en tumörsuppressor-protein som spelar en avgörande roll i att reparera DNA-dubbelsträngbrott genom att reglera funktionen av rekombinasenzymet RAD51 1. BRCA2 har också varit inblandad i moduleringen av transkription och i cellcykelkontroll 2. Nedärvda mutationer i BRCA2-genen inducerar en autosomalt dominant mottaglighet för bröst- och ovariecancer hos kvinnor och prostatacancer hos män, samt predisposition för andra cancertyper 3,4. Trots den ökade risken för att utveckla cancer, BRCA2 mutationer som hämmar eller minskar BRCA2-funktionen kan göra cancerceller mer sårbara för kemoterapeutiska medel som orsakar DNA-skador 5-7. Sporadiska cancer uppvisar en låg BRCA2 mutationer (&lt;3%) men minskade nivåer av BRCA2-protein har upptäckts i vissa cancertyper, vilket tyder på att BRCA2-proteinkan gå förlorade under tumorigenes i sporadiska cancer genom icke-mutations-beroende mekanismer 7,8. Det är sålunda viktigt att till fullo förstå BRCA2 funktioner i samband med cancerbiologi samt i andra biologiska inställningar. Ett kraftfullt verktyg som används för att identifiera nya funktioner hos en gen i däggdjursceller är att tysta dess expression. Som ett exempel, har tysta BRCA2 uttryck i en mängd olika normala epitelceller nyligen lett till identifiering av en ny funktion för BRCA2 som regulator av anoikis motstånd, ett viktigt steg under förvärv av cancercell invasiv och metastaserande förmåga 9. Geners uttryck kan uppnås genom införande i cellerna antingen små störande (si) RNA- eller kort hårnål (sh) RNA-molekyler som riktar den specifika genen. Den höga styrkan hos siRNA och dess användarvänlighet gör det förmåns verktyg för att tysta experiment som syftar till att få nya insikter i kritiska biologiska processer ennd att identifiera nya terapeutiska mål. Emellertid kan en effektiv knockdown av genexpression inte vara lätt att uppnå för alla gener och kan vara mycket varierande beroende på celltypen. Eftersom en minskning av intracellulära proteinnivåer är den mest relevanta fenotypen under utredning, är det viktigt att kvantifiera geners uttryck genom immunanalys av genprodukten. Med detta avseende, presenterar BRCA2-proteinet ytterligare en utmaning: att vara ett stort protein (ca 390 kd), existerar tekniska svårigheter för konventionell biokemisk analys, inklusive immunoblotting. Vi rapporterar här ett protokoll optimerad för effektiv tysta BRCA2 i humana epitelcellinjer och för snabb och framgångsrik detektering av BRCA2-protein knockdown genom immunanalys.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BRCA2 siRNA</td>
			<td>Dharmacon</td>
			<td>L-003462-00</td>
			<td>SMARTpool: ON-TARGETplus BRCA2 siRNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ctrl siRNA</td>
			<td>Dharmacon</td>
			<td>&#160;D-001810-10-05</td>
			<td>ON-TARGETplus Non-targeting Pool</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine RNAiMAX Reagent&#160;</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td><a href="http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/13778075">13778075</a></td>
			<td>Transfection Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPTI-MEM I Reduced Serum Medium</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>31985-070</td>
			<td>Medium for transfection procedure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuPAGE Tris-Acetate 3-8% 1,5 mm Gel precast</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>EA0378</td>
			<td>Gel for protein electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuPAGE LDS Sample buffer&#160;</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>NP0007</td>
			<td>Reagent for protein electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuPAGE Sample Reducing agent (10x)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>NP0004</td>
			<td>Reagent for protein electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuPAGE Antioxidant</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>NP0005</td>
			<td>Reagent for protein electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiMark Pre-stained protein standard</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>LC5699</td>
			<td>Prestained marker for gel electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XCell SureLoc Mini-Cell&#160; System</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>EI0002</td>
			<td>Equipment for protein electrophoresis/transfer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuPAGE Tris-Acetate SDS Running Buffer</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>LA0041</td>
			<td>Reagent for Western blotting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVDF membrane</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>IPVH00010</td>
			<td>Reagent for Western blotting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NuPAGE Transfer Buffer</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>NP0006-1</td>
			<td>Reagent for Western blotting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BRCA2 H-300 rabbit polyclonal antibody</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-8326</td>
			<td>1:300 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beta-tubulin monoclonal antibody</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T4026-100UL</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skim Milk powder</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>70166</td>
			<td>Reagent for Western blotting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td>Reagent for Western blotting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperSignal West Pico/Femto Chemiluminescent Substrate</td>
			<td>Pierce Thermo Scientific</td>
			<td>34080/34096</td>
			<td>Chemiluminescence system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PNT1A cells</td>
			<td>SIGMA Aldrich (for ECACC)</td>
			<td>95012614</td>
			<td>PNT1A human, normal prostate epithelium immortalized with SV40</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nthy cells</td>
			<td>SIGMA Aldrich (for ECACC)</td>
			<td>90011609</td>
			<td>Nthy-ori 3-1 Cell Line human, thyroid follicular epithelial cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Proliferation Kit I (MTT)</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11465007001</td>
			<td>Kit for cell proliferation assays</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

silencing of brca2 to identify novel brca2-regulated biological functions in cultured human cells

Tysta av tumörsuppressorproteinet BRCA2 och dess detektering genom konventionella biokemiska analyser utgör en stor teknisk utmaning på grund av den stora storleken av den mänskliga BRCA2-proteinet (ca 390 kDa). Vi rapporterar ändringar av standard siRNA transfektion och immunoblotting protokoll för att tysta mänsklig BRCA2 och upptäcka endogena BRCA2-proteinet, respektive, i mänskliga epitelcellinjer. Viktiga steg inkluderar en hög siRNA transfektionsreagens förhållandet och två efterföljande omgångar av siRNA transfektion inom samma experiment. Med hjälp av dessa och andra förändringar i standardprotokoll vi konsekvent uppnå mer än 70% tysta mänsklig BRCA2-genen som bedöms av immunanalys med anti-BRCA2 antikroppar. Dessutom, denaturering av cellysaten vid 55 ° C i stället för den konventionella 70-100 ° C och andra tekniska optimeringar av immunoblotting förfarandet tillåter detektion av intakt BRCA2-protein även when mycket små mängder av utgångsmaterialet finns eller när BRCA2-proteinexpressionsnivåerna är mycket låga. Effektiv tysta BRCA2 i mänskliga celler erbjuder en värdefull strategi för att störa BRCA2 funktion i celler med intakt BRCA2, inklusive tumörceller, för att undersöka nya molekylära vägar och cellulära funktioner som kan påverkas av patogena BRCA2 mutationer i tumörer. Anpassning av detta protokoll för effektiv ljuddämpning och analys av andra &quot;stora&quot; proteiner som BRCA2 bör vara lätt att uppnå.

Innan en biologisk / biokemisk analys för att undersöka effekten av BRCA2 tysta på cellfunktioner, är det första steget för att bekräfta specificiteten av tysta med en kodad siRNA (icke-inriktning siRNA) sida vid sida med BRCA2 siRNA (Figur 1A ). Det är viktigt att utföra en andra omgång av siRNA transfektion med en hög siRNA / transfektion förhållande för att få en hög effektivitet av BRCA2-tystande. Faktum är att endast utför en omgång av siRNA transfektion eller a...

Watch this Scientific Journal Video about Silencing of BRCA2 to Identify Novel BRCA2-regulated Biological Functions in Cultured Human Cells at JoVE.com

Silencing of BRCA2 to Identify Novel BRCA2-regulated Biological Functions in Cultured Human Cells

Gene silencing by siRNA represents a convenient experimental strategy to analyze BRCA2-dependent biological functions with immediate implications to better understand cancer biology. A method to efficiently silence BRCA2, along with the experimental procedure to detect and quantify changes in BRCA2 protein expression by immunoblotting in human cell lines, is presented.

Tysta<em&gt; BRCA2</em&gt; För att identifiera nya BRCA2 reglerade biologiska funktioner i odlade humana celler

Silencing of the tumor suppressor protein BRCA2 and its detection by conventional biochemical analyses represent a great technical challenge owing to the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Silencing of BRCA2 to Identify Novel BRCA2-regulated Biological Functions in Cultured Human Cells

Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons

Bildproduktion av tät-core Blåsor i Primär Odlade hippocampus nervceller

Observing and characterizing dynamic cellular processes can yield important information about cellular activity that cannot be gained from static images.  ...

Isolation of Ribosome Bound Nascent Polypeptides in vitro to Identify Translational Pause Sites Along mRNA

Isolation of Ribosome Bound Nascent Polypeptides in vitro to Identify Translational Pause Sites Along mRNA

Isolering av ribosom Bundna framväxande Polypeptider<em&gt; In vitro</em&gt; För att identifiera Translationell Paus webbplatser Längs mRNA

The rate of translational elongation is non-uniform. mRNA secondary structure, codon usage and mRNA associated proteins may alter ribosome movement on the ...

A Quantitative Assay to Study Protein:DNA Interactions, Discover Transcriptional Regulators of Gene Expression, and Identify Novel Anti-tumor Agents

En kvantitativ analys för att studera protein: DNA-interaktioner, Discover transkriptionsregulatorer av genuttryck, och identifiera nya antitumörmedel

Many DNA-binding assays such as electrophoretic mobility shift assays (EMSA), chemiluminescent assays, chromatin immunoprecipitation (ChIP)-based assays, ...

Visualization of Endoplasmic Reticulum Subdomains in Cultured Cells

Visualisering av endoplasmatiskt retikulum Domäner i odlade celler

The lipids and proteins in eukaryotic cells are continuously exchanged between cell compartments, although these retain their distinctive composition and ...

Capture Compound Mass Spectrometry - A Powerful Tool to Identify Novel c-di-GMP Effector Proteins

Capture Compound masspektrometri - Ett kraftfullt verktyg för att identifiera nya c-di-GMP effektorproteiner

Considerable progress has been made during the last decade towards the identification and characterization of enzymes involved in the synthesis ...

siRNA Screening to Identify Ubiquitin and Ubiquitin-like System Regulators of Biological Pathways in Cultured Mammalian Cells

siRNA Screening för att identifiera Ubiquitin och Ubiquitin-liknande system Regulatorer av biologiska banor i odlade däggdjursceller

Post-translational modification of proteins with ubiquitin and ubiquitin-like molecules (UBLs) is emerging as a dynamic cellular signaling network that ...

Nephrotoxin Microinjection in Zebrafish to Model Acute Kidney Injury

Nefrotoxin mikroinjektion i Zebrafish till Model akut njursvikt

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Högupplöst time-lapse avbildning och automatiserad analys av mikrotubuli Dynamics i Living Human navelsträngsvenendotelceller

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

En grafisk användargränssnitt för programvaruassisterad spårning av proteinkoncentration i dynamiska cellulära protrusioner

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

Glucose Uptake Measurement and Response to Insulin Stimulation in In Vitro Cultured Human Primary Myotubes

Glucose Uptake Measurement and Response to Insulin Stimulation in In Vitro Cultured Human Primary Myotubes

Uppmätt mätning av glukos och reaktion på insulinstimulering i<em&gt; In Vitro</em&gt; Odlade humana primära myotubes

Skeletal muscle is the largest glucose deposit in mammals and largely contributes to glucose homeostasis. Assessment of insulin sensitivity of muscle ...