Name: quantification of cytosolic vs. vacuolar salmonella in primary macrophages by differential permeabilization
Uploaded: 2015-07-28T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization at JoVE.com

ברצוננו להודות מתיאס ס דיק, רולנד פ Dreier וסבסטיאן רול לדיון. עבודה זו נתמכה על ידי קתדרת PP00P3_139120 SNSF / 1 וID2153162 פרויקט מענק אוניברסיטת באזל לPB

1. digitonin Assay עם mCherry להביע סלמונלה (FACS מבוסס ניתוח) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיידקי הכנה הערה: SL1344 פראי הסוג סלמונלה (סטרפטומיצין עמיד) להביע mCherry מפלסמיד (pFPV קידוד mCherry תחת אמרגן rpsM) משמש בassay זה. phagocytosis החיידקים והתרבות שבו לא שונתה ע...

<ol>
	<li>Kumar, Y., Valdivia, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leading+a+sheltered+life:+intracellular+pathogens+and+maintenance+of+vacuolar+compartments.">Leading a sheltered life: intracellular pathogens and maintenance of vacuolar compartments.</a> Cell Host Microbe. 5, 593-601 (2009).</li><li>Chong, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+early+phagosomal+stage+of+Francisella+tularensis+determines+optimal+phagosomal+escape+and+Francisella+pathogenicity+island+protein+expression.">The early phagosomal stage of Francisella tularensis determines optimal phagosomal escape and Francisella pathogenicity island protein expression.</a> Infect Immun. 76, 5488-5499 (2008).</li><li>Mellouk, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shigella+subverts+the+host+recycling+compartment+to+rupture+its+vacuole.">Shigella subverts the host recycling compartment to rupture its vacuole.</a> Cell Host Microbe. 16, 517-530 (2014).</li><li>Checroun, C., Wehrly, T. D., Fischer, E. R., Hayes, S. F., Celli, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy-mediated+reentry+of+Francisella+tularensis+into+the+endocytic+compartment+after+cytoplasmic+replication.">Autophagy-mediated reentry of Francisella tularensis into the endocytic compartment after cytoplasmic replication.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 14578-14583 (2006).</li><li>Broz, P., Monack, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Newly+described+pattern+recognition+receptors+team+up+against+intracellular+pathogens.">Newly described pattern recognition receptors team up against intracellular pathogens.</a> Nat Rev Immunol. 13, 551-565 (2013).</li><li>Hagar, J. A., Powell, D. A., Aachoui, Y., Ernst, R. K., Miao, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytoplasmic+LPS+activates+caspase-11:+implications+in+TLR4-independent+endotoxic+shock.">Cytoplasmic LPS activates caspase-11: implications in TLR4-independent endotoxic shock.</a> Science. 341, 1250-1253 (2013).</li><li>Ogawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Escape+of+intracellular+Shigella+from+autophagy.">Escape of intracellular Shigella from autophagy.</a> Science. 307, 727-731 (2005).</li><li>Haraga, A., Ohlson, M. B., Miller, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salmonellae+interplay+with+host+cells.">Salmonellae interplay with host cells.</a> Nat Rev Microbiol. 6, 53-66 (2008).</li><li>Birmingham, C. L., Smith, A. C., Bakowski, M. A., Yoshimori, T., Brumell, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+controls+Salmonella+infection+in+response+to+damage+to+the+Salmonella-containing+vacuole.">Autophagy controls Salmonella infection in response to damage to the Salmonella-containing vacuole.</a> J Biol Chem. 281, 11374-11383 (2006).</li><li>Malik-Kale, P., Winfree, S., Steele-Mortimer, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bimodal+lifestyle+of+intracellular+Salmonella+in+epithelial+cells:+replication+in+the+cytosol+obscures+defects+in+vacuolar+replication.">The bimodal lifestyle of intracellular Salmonella in epithelial cells: replication in the cytosol obscures defects in vacuolar replication.</a> PLoS One. 7, e38732 (2012).</li><li>Zhao, Y. O., Khaminets, A., Hunn, J. P., Howard, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+the+Toxoplasma+gondii+parasitophorous+vacuole+by+IFNgamma-inducible+immunity-related+GTPases+(IRG+proteins)+triggers+necrotic+cell+death.">Disruption of the Toxoplasma gondii parasitophorous vacuole by IFNgamma-inducible immunity-related GTPases (IRG proteins) triggers necrotic cell death.</a> PLoS Pathog. 5, e1000288 (2009).</li><li>Meunier, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase-11+activation+requires+lysis+of+pathogen-containing+vacuoles+by+IFN-induced+GTPases.">Caspase-11 activation requires lysis of pathogen-containing vacuoles by IFN-induced GTPases.</a> Nature. 509, 366-370 (2014).</li><li>Yamamoto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cluster+of+interferon-gamma-inducible+p65+GTPases+plays+a+critical+role+in+host+defense+against+Toxoplasma+gondii.">A cluster of interferon-gamma-inducible p65 GTPases plays a critical role in host defense against Toxoplasma gondii.</a> Immunity. 37, 302-313 (2012).</li><li>Degrandi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+guanylate+binding+protein+2+(mGBP2)+controls+Toxoplasma+gondii+replication.">Murine guanylate binding protein 2 (mGBP2) controls Toxoplasma gondii replication.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110, 294-299 (2013).</li><li>Mariathasan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+activation+of+the+inflammasome+by+caspase-1+adaptors+ASC+and+Ipaf.">Differential activation of the inflammasome by caspase-1 adaptors ASC and Ipaf.</a> Nature. 430, 213-218 (2004).</li><li>Knodler, L. A., Nair, V., Steele-Mortimer, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+cytosolic+Salmonella+in+epithelial+cells.">Quantitative assessment of cytosolic Salmonella in epithelial cells.</a> PLoS One. 9, e84681 (2014).</li><li>Ng, H., Smith, D. J., Nagley, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+flow+cytometry+to+determine+differential+redistribution+of+cytochrome+c+and+Smac/DIABLO+from+mitochondria+during+cell+death+signaling.">Application of flow cytometry to determine differential redistribution of cytochrome c and Smac/DIABLO from mitochondria during cell death signaling.</a> PLoS One. 7, e42298 (2012).</li><li>Krawczyk, E., Suprynowicz, F. A., Sudarshan, S. R., Schlegel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+orientation+of+the+human+papillomavirus+type+16+E5+oncoprotein.">Membrane orientation of the human papillomavirus type 16 E5 oncoprotein.</a> J Virol. 84, 1696-1703 (2010).</li><li>Keller, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+measurements+of+vacuolar+rupture+caused+by+intracellular+pathogens.">Single cell measurements of vacuolar rupture caused by intracellular pathogens.</a> J Vis Exp. , e50116 (2013).</li></ol>

permeabilization ההפרש הוא שיטה קלה וחזקה כדי לנתח ולכמת את הפצת subcellular של חיידקים פתוגנים בין תאי vacuolar וcytosol. אותו assay שמש בהצלחה עם חיידקים כגון Francisella novicida 2,4 וShigella flexneri 12. עם זאת, מאחר שרבי הפתוגן תאיים לשנות או לשנות את מבני endomembrane מארח, על חוסנו של permeabi...

חיידקים פתוגנים תאיים לשכפל באופן ישיר בcytosol התא המארח, או בתאי vacuolar מיוחדים 1. בשלב הראשוני של הזיהום ביותר פתוגנים לקבל הפנימו או על ידי phagocytosis על ידי תאים מיוחדים (כגון מקרופאגים) או על ידי פעיל בקידום הספיגה שלהם לתאים שאינם phagocytic. בתאי phagocytic, phagosome בדרך כלל משלב עם lysosomes כדי ליצור תא נגרע, שבו חלקיקי phagocytosed מתעכלים. חיידקי cytosolic מיוחדים, כגון Francisella novicida או Shigella flexneri, לברוח השפלה phagosomal ידי גרימת הקרע של phagosome ולאחר מכן לברוח ל2,3 cytosol. זה דורש מנגנון הקשורים ארסי כגון פתוגניות אי Francisella (FPI) או Shigella flexneri T3SS, שמזריק חלבוני מפעיל המקדמים קרע vacuolar 2-4. תכונות cytosol התא המארחמספר הקולטנים זיהוי תבניות נשמרים, כי בדרך כלל לזהות את הנוכחות של פתוגנים ולגרום לחיסון מולדים איתות 5. בנוסף, xenophagy, צורה אנטי-מיקרוביאלי של autophagy יכולה לבזות חיידקים שנכנסים cytosol. חיידקי cytosolic בדרך כלל גם מותאמים ללהקהות או לעקוף תגובות אלה באמצעות אסטרטגיות שונות. לדוגמא, Francisella משנה LPS כדי להימנע מהכרת המארח וShigella מונע גיוס autophagy באמצעות חלבונים מופרשים מפעיל 6,7. אסטרטגיה נוספת לברוח השפלה lysosomal מועסקת על ידי Typhimurium serovar enterica הפתוגן vacuolar המודל סלמונלה, התייחס לאחר מכן כלtyphimurium סלמונלה. סלמונלה משתמשת T3SS להזריק effectors שלשפץ phagosome הראשוני לנישה תאית שלה, סלמונלה המכיל vacuole (SCV) 8,9. מניפולציה מתמשכת של מסלולי מארח היאנחוץ כדי לשמור על vacuole זאת על ידי גיוס שומנים וחומרים מזינים אחרים לvacuole. ואכן, מוטציה SIFA של סלמונלה לא מצליחה לשמור על יציבות vacuolar, ונכנסה cytosol של תאי מארח בתוך שעות לאחר הדבקה, וכתוצאה מכך ההפעלה של מסלולי חיסון מולדים וגיוס autophagy 8. בריחת vacuolar של סלמונלה משתנה בהתאם לסוג התא שהוא לימודים, וכמה מחקרים הראו כי בתאי אפיתל אפילו WT סלמונלה יכולה לברוח SCV וhyperreplicate בcytosol 10. הדיווחים אחרונים מראים כי זיהוי חיסון מולדים של פתוגנים vacuolar גם תלוי ביכולת של המארח להכיר ולערער vacuoles המכיל הפתוגן (PCVs) 11-14. בהתחשב בכך ששניהם המארח או חיידקי גנוטיפ יכול להשפיע על ההפצה של חיידקים תאיים בין vacuolar ותא cytosolic, יש צורך לכמת את מספר לעומת vacuolarחיידקי cytosolic. מאז, בהגדרות ניסיוניות רוב תאי מארח נגועים בחיידק אחד או יותר, ולאחר מכן יכולים נמל כמה חיידקים בתאי subcellular שונים, יש צורך בטכניקה המאפשרת כימות ברמה של חיידקים בודדים. permeabilization ההפרש (הידוע גם בassay הגנת phagosomal) מספק רזולוציה זו 2,4,10,12. Assay מבוסס על permeabilization סלקטיבית של קרום הפלזמה התא המארח עם digitonin חומר הניקוי, מה שמשאיר את קרומי vacuolar שלמים ובכך מאפשר צביעה סלקטיבית של חיידקי cytosolic עם נוגדנים. כאן אנו מספקים שני פרוטוקולים לכימות של cytosolic וvacuolar typhimurium סלמונלה באמצעות permeabilization ההפרש. העיקרון של שיטה זו מתואר באיור 1: מקרופאגים מח העצם נגזרים (BMDMs) נגועים בשלב נייח mCherry להביע סלמונלה. השלב נייח סלמונלה צריכה to לשמש כי הם downregulate הביטוי של T3SS SPI-1, שפעילותם אמורה היה להיות מוכרת על ידי inflammasome NLRC4 ולגרום למוות מהיר של תאים (pyroptosis) של 15 BMDMs. בעקבות זיהום תאים נשטפים וטופלו עם 50 / מיליליטר מיקרוגרם של digitonin דקה 1. תאים נשטפים שוב מייד וטופחו עם נוגדנים נגד סלמונלה מצמידים את FITC לסמן חיידקים עם גישה לcytosol. לאחר שטיפה נוספת תאי צעד הם lysed ואחוז mCherry + (vacuolar) וFITC + / mCherry + (cytosolic) החיידקים נקבע על ידי FACS. כמו כן, אנו מדווחים על הסתגלות של שיטה זו, שניתן להשתמש אם אין זנים להביע חלבון פלואורסצנטי זמינים (איור 2). צעדים נוספים שהוכנסו לאחר תיוג FITC שבו תאים הם קבועים וpermeabilized לחלוטין. לאחר מכן כל חיידקי מגואלות נוגדנים נגד סלמונלה ונוגדנים משני המתאימים. Detשיקוף מכן על ידי מיקרוסקופ במקום ניתוח FACS.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Digitonin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D5628</td>
			<td>50ug/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PFA</td>
			<td>mpbio</td>
			<td>219998380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Acetate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>791733</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Salmonella CSA-1-FITC</td>
			<td>KPL</td>
			<td>01-91-99-MG</td>
			<td>1/500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Salmonella CSA-1</td>
			<td>KPL</td>
			<td>02-91-99-MG</td>
			<td>1/500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Calnexin</td>
			<td>Enzo Lifesciences</td>
			<td>SPA-860D</td>
			<td>1/100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-PDI</td>
			<td>Enzo Lifesciences</td>
			<td>SPA-890</td>
			<td>1/100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>47036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectashield mounting medium</td>
			<td>Vectorlabs</td>
			<td>H-1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Rabbit antibody-488</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>A-11070</td>
			<td>1/500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8898</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15710-49</td>
			<td>100ug/mL and 10ug/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Promega</td>
			<td>H5141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>20012-019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D6429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEAA</td>
			<td>Amimed</td>
			<td>5-13K00-H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM700 Confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>imaging done at 63x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Fortessa</td>
			<td>BD technologies</td>
			<td></td>
			<td>detection mCherry 610 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Fortessa</td>
			<td>BD technologies</td>
			<td></td>
			<td>detection FITC 530 nm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of cytosolic vs. vacuolar salmonella in primary macrophages by differential permeabilization

חיידקים פתוגנים תאיים יכול לשכפל בcytosol או בvacuoles מיוחד המכיל הפתוגן (PCVs). כדי להגיע cytosol, חיידקים כמו Shigella flexneri וFrancisella novicida צריכים לגרום לקרע של phagosome. לעומת זאת, typhimurium סלמונלה משכפל בתא vacuolar, הידוע בשם vacuole סלמונלה המכיל (SCV). מוטציות עם זאת מסוימות של סלמונלה להיכשל כדי לשמור על שלמות SCV ומשתחררים כך לתוך cytosol. אחוז cytosolic לעומת חיידקי vacuolar על הרמה של חיידקים בודדים ניתן למדוד על ידי permeabilization ההפרש, הידוע גם בassay phagosome-ההגנה. הגישה עושה שימוש ברכוש של digitonin חומר הניקוי כדי לאגד כולסטרול באופן סלקטיבי. מאז קרום הפלזמה מכיל יותר כולסטרול מאשר קרומים תאיים אחרים, digitonin יכול לשמש כדי permeabilize סלקטיבי קרום הפלזמה תוך השארת קרומים תאייםבשלמותה. בזיהום קצר, הבא עם הפתוגן לבטא חלבון סמן פלואורסצנטי (למשל mCherry בין השאר), קרום הפלזמה של תאי מארח permeabilized עם דגירה קצרה בdigitonin מכילה מאגר. לאחר מכן תאים נשטפים וטופחו עם נוגדן ראשוני (מצמידים את fluorophore בחירה) המכוון נגד החיידק של בחירה (למשל אנטי סלמונלה -FITC) ושטפו שוב. אם חיידקים לא מסומנים משמשים, ניתן לעשות צעד נוסף, שבו כולם קרומי permeabilized וכל החיידקים מוכתמים עם נוגדן מקביל. בעקבות הצביעה, אחוז חיידקי vacuolar וcytosolic ניתן לכמת על ידי FACS או במיקרוסקופ על ידי ספירת אירועים חד או דו-חיוביים. כאן אנו מספקים פרטים ניסיוניים לשימוש בטכניקה זו עם typhimurium סלמונלה החיידק. היתרון של assay זה הוא כי, בניגוד לassay האחר, היא מספקת כימות ברמה של bacte אחתריה, ואם נותח על ידי מיקרוסקופ מספק את המספר המדויק של cytosolic וחיידקים vacuolar בתא נתון.

איור 1 ואיור 2 מציגים את השרטוטים של assay digitonin המתוארים בפרוטוקול 1 ופרוטוקול 2 ממחישים את השלבים הקריטיים בפרוטוקול ותוצאות שהתקבלו. איור 3 מראה תוצאות FACS טיפוסיות. בקרות חיוביות ושליליות משמשות כדי להגדיר את השערים לחיידקים mCherry + / FITC- (vacuolar סלמונלה) וmCherry + /...

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization at JoVE.com

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

We describe the quantification of cytosolic and vacuolar Salmonella typhimurium in bone-marrow derived macrophages using differential digitonin permeabilization.

כימות של Cytosolic לעומת vacuolar<em&gt; סלמונלה</em&gt; ביסודי המקרופאגים על ידי דיפרנציאל permeabilization

Intracellular bacterial pathogens can replicate in the cytosol or in specialized pathogen-containing vacuoles (PCVs). To reach the cytosol, bacteria like ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

מדידה של Cytosolic Ca 2 + ב lymphatics כויץ מבודד

Lymphatic vessels comprise a multifunctional transport system that maintains fluid homeostasis, delivers lipids to the central circulation, and acts as a ...

Single Cell Measurements of Vacuolar Rupture Caused by Intracellular Pathogens

מידות תא יחיד של קרע vacuolar נגרמים על ידי פתוגנים תאיים

Shigella flexneri are pathogenic bacteria that invade host cells entering into an endocytic vacuole. Subsequently, the rupture of this membrane-enclosed ...

High-throughput Assay to Phenotype Salmonella enterica Typhimurium Association, Invasion, and Replication in Macrophages

High-throughput Assay to Phenotype Salmonella enterica Typhimurium Association, Invasion, and Replication in Macrophages

Assay תפוקה גבוהה להפנוטיפ<em&gt; Enterica סלמונלה</em&gt; Typhimurium איגוד, פלישה, ושכפול בהמקרופאגים

Salmonella species are zoonotic pathogens and leading causes of food borne illnesses in humans and livestock1. Understanding the mechanisms underlying ...

Highly Efficient Transfection of Human THP-1 Macrophages by Nucleofection

Transfection יעיל ביותר של של אדם המקרופאגים THP-1 על ידי nucleofection

Macrophages, as key players of the innate immune response, are at the focus of research dealing with tissue homeostasis or various pathologies. ...

Proteomic Profiling of Macrophages by 2D Electrophoresis

Proteomic פרופיל של המקרופאגים על ידי 2D אלקטרופורזה

The goal of the two-dimensional (2D) electrophoresis protocol described here is to show how to analyse the phenotype of human cultured macrophages. The ...

Phagosome Migration and Velocity Measured in Live Primary Human Macrophages Infected with HIV-1

הגירה ו מהירות Phagosome נמדד המקרופאגים אדם מן המעלה הראשונה חי עם HIV-1

Macrophages are phagocytic cells that play a major role at the crossroads between innate and specific immunity. They can be infected by the human ...

Phenotypic Characterization of Macrophages from Rat Kidney by Flow Cytometry

אפיון פנוטיפי של מקרופאגים כליה עכברוש ידי cytometry זרימה

There is increasing evidence suggesting the important role of inflammation and, subsequently, macrophages in the development and progression of renal ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

בידוד של סלמונלה typhimurium-המכיל Phagosomes של מקרופאגים

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

Time-lapse 3D Imaging of Phagocytosis by Mouse Macrophages

זמן לשגות הדמיה תלת-ממדית של Phagocytosis על ידי העכבר מקרופאגים

Phagocytosis plays a key role in host defense, as well as in tissue development and maintenance, and involves rapid, receptor-mediated rearrangements of ...

Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells

כימות של נוגדנים תלויי שיפור של הנגיף Zika בתאי אדם ראשי

The recent emergence of the flavivirus Zika and neurological complications, such as Guillain-Barr&#233; syndrome and microcephaly in infants, has brought ...