Name: quantification of cytosolic vs. vacuolar salmonella in primary macrophages by differential permeabilization
Uploaded: 2015-07-28T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization at JoVE.com

Vi ønsker å takke Mathias S. Dick, Roland F. Dreier og Sebastian Rühl for diskusjon. Dette arbeidet ble støttet av en SNSF Professorat PP00P3_139120 / 1 og en University of Basel prosjektstøtte ID2153162 til PB

1. Digitonin analysen med mCherry-uttrykke Salmonella (FACS basert analyse) <ol><li> Forbereder bakterier Merk: Salmonella villtype SL1344 (streptomycin resistent) som uttrykker mCherry fra et plasmid (som koder pFPV mCherry under rpsM promoter) er brukt i denne analysen. Bakteriell fagocytose og spredning der ikke endret av konstituerende uttrykk for mCherry (data ikke vist) 16. <ol><li> Inokuler belastningen en dag før infeksjon i 3 ml LB-medium supplert med streptomycin (90 ug /...

<ol>
	<li>Kumar, Y., Valdivia, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leading+a+sheltered+life:+intracellular+pathogens+and+maintenance+of+vacuolar+compartments.">Leading a sheltered life: intracellular pathogens and maintenance of vacuolar compartments.</a> Cell Host Microbe. 5, 593-601 (2009).</li><li>Chong, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+early+phagosomal+stage+of+Francisella+tularensis+determines+optimal+phagosomal+escape+and+Francisella+pathogenicity+island+protein+expression.">The early phagosomal stage of Francisella tularensis determines optimal phagosomal escape and Francisella pathogenicity island protein expression.</a> Infect Immun. 76, 5488-5499 (2008).</li><li>Mellouk, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shigella+subverts+the+host+recycling+compartment+to+rupture+its+vacuole.">Shigella subverts the host recycling compartment to rupture its vacuole.</a> Cell Host Microbe. 16, 517-530 (2014).</li><li>Checroun, C., Wehrly, T. D., Fischer, E. R., Hayes, S. F., Celli, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy-mediated+reentry+of+Francisella+tularensis+into+the+endocytic+compartment+after+cytoplasmic+replication.">Autophagy-mediated reentry of Francisella tularensis into the endocytic compartment after cytoplasmic replication.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 14578-14583 (2006).</li><li>Broz, P., Monack, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Newly+described+pattern+recognition+receptors+team+up+against+intracellular+pathogens.">Newly described pattern recognition receptors team up against intracellular pathogens.</a> Nat Rev Immunol. 13, 551-565 (2013).</li><li>Hagar, J. A., Powell, D. A., Aachoui, Y., Ernst, R. K., Miao, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytoplasmic+LPS+activates+caspase-11:+implications+in+TLR4-independent+endotoxic+shock.">Cytoplasmic LPS activates caspase-11: implications in TLR4-independent endotoxic shock.</a> Science. 341, 1250-1253 (2013).</li><li>Ogawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Escape+of+intracellular+Shigella+from+autophagy.">Escape of intracellular Shigella from autophagy.</a> Science. 307, 727-731 (2005).</li><li>Haraga, A., Ohlson, M. B., Miller, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salmonellae+interplay+with+host+cells.">Salmonellae interplay with host cells.</a> Nat Rev Microbiol. 6, 53-66 (2008).</li><li>Birmingham, C. L., Smith, A. C., Bakowski, M. A., Yoshimori, T., Brumell, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+controls+Salmonella+infection+in+response+to+damage+to+the+Salmonella-containing+vacuole.">Autophagy controls Salmonella infection in response to damage to the Salmonella-containing vacuole.</a> J Biol Chem. 281, 11374-11383 (2006).</li><li>Malik-Kale, P., Winfree, S., Steele-Mortimer, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bimodal+lifestyle+of+intracellular+Salmonella+in+epithelial+cells:+replication+in+the+cytosol+obscures+defects+in+vacuolar+replication.">The bimodal lifestyle of intracellular Salmonella in epithelial cells: replication in the cytosol obscures defects in vacuolar replication.</a> PLoS One. 7, e38732 (2012).</li><li>Zhao, Y. O., Khaminets, A., Hunn, J. P., Howard, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+the+Toxoplasma+gondii+parasitophorous+vacuole+by+IFNgamma-inducible+immunity-related+GTPases+(IRG+proteins)+triggers+necrotic+cell+death.">Disruption of the Toxoplasma gondii parasitophorous vacuole by IFNgamma-inducible immunity-related GTPases (IRG proteins) triggers necrotic cell death.</a> PLoS Pathog. 5, e1000288 (2009).</li><li>Meunier, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase-11+activation+requires+lysis+of+pathogen-containing+vacuoles+by+IFN-induced+GTPases.">Caspase-11 activation requires lysis of pathogen-containing vacuoles by IFN-induced GTPases.</a> Nature. 509, 366-370 (2014).</li><li>Yamamoto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cluster+of+interferon-gamma-inducible+p65+GTPases+plays+a+critical+role+in+host+defense+against+Toxoplasma+gondii.">A cluster of interferon-gamma-inducible p65 GTPases plays a critical role in host defense against Toxoplasma gondii.</a> Immunity. 37, 302-313 (2012).</li><li>Degrandi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+guanylate+binding+protein+2+(mGBP2)+controls+Toxoplasma+gondii+replication.">Murine guanylate binding protein 2 (mGBP2) controls Toxoplasma gondii replication.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110, 294-299 (2013).</li><li>Mariathasan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+activation+of+the+inflammasome+by+caspase-1+adaptors+ASC+and+Ipaf.">Differential activation of the inflammasome by caspase-1 adaptors ASC and Ipaf.</a> Nature. 430, 213-218 (2004).</li><li>Knodler, L. A., Nair, V., Steele-Mortimer, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+cytosolic+Salmonella+in+epithelial+cells.">Quantitative assessment of cytosolic Salmonella in epithelial cells.</a> PLoS One. 9, e84681 (2014).</li><li>Ng, H., Smith, D. J., Nagley, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+flow+cytometry+to+determine+differential+redistribution+of+cytochrome+c+and+Smac/DIABLO+from+mitochondria+during+cell+death+signaling.">Application of flow cytometry to determine differential redistribution of cytochrome c and Smac/DIABLO from mitochondria during cell death signaling.</a> PLoS One. 7, e42298 (2012).</li><li>Krawczyk, E., Suprynowicz, F. A., Sudarshan, S. R., Schlegel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+orientation+of+the+human+papillomavirus+type+16+E5+oncoprotein.">Membrane orientation of the human papillomavirus type 16 E5 oncoprotein.</a> J Virol. 84, 1696-1703 (2010).</li><li>Keller, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+measurements+of+vacuolar+rupture+caused+by+intracellular+pathogens.">Single cell measurements of vacuolar rupture caused by intracellular pathogens.</a> J Vis Exp. , e50116 (2013).</li></ol>

Differensial permeabilization er en enkel og robust metode for å analysere og kvantifisere subcellulære fordelingen av bakterielle patogener mellom vacuolar avdelinger og cytosol. Den samme analysen har vært brukt med hell med bakterier som Francis novicida 2,4 og Shigella flexneri 12. Men siden mange intracellulær patogen endre eller modifisere verts endomembransystemet strukturer, vil robusthet digitonin permeabilization må fastsettes på individuell basis. Finjustering av ...

Intracellulære bakterielle patogener replikere enten direkte i vertscellen cytosol, eller i spesialiserte vacuolar kamrene 1. Under den første fasen av infeksjonen fleste patogener blir internalisert enten ved fagocytose av spesialiserte celler (for eksempel makrofager), eller ved aktivt å fremme sin egen opptak i ikke-fagocyttiske celler. I fagocytiske celler, phagosome normalt sikringer med lysosomer å danne en nedbrytende rommet, hvor fagocytterte partiklene er fordøyd. Specialized cytosolic bakterier, for eksempel Francis novicida eller Shigella flexneri, rømme phagosomal degradering ved å fremkalle bruddet i phagosome og deretter flykte inn i cytosol 2,3. Dette krever virulens-forbundet mekanisme som Francis patogenitet Island (FPI) eller Shigella flexneri T3SS, som injiserer effektor proteiner som fremmer vacuolar brudd 2-4. Vertscellen cytosol egenskaperen rekke bevarte mønstergjenkjenning reseptorer som normalt gjenkjenne tilstedeværelsen av patogener og induserer medfødte immunsignale 5. I tillegg xenophagy, kan en antimikrobiell form av autophagy nedbryte bakterier som kommer inn i cytosol. Cytosolic bakterier er normalt godt tilpasset sløv eller omgå disse svarene ved hjelp av ulike strategier. For eksempel endrer Francis sine LPS unngå vert anerkjennelse og Shigella hindrer autofagi rekruttering hjelp utskilte effektor proteiner 6,7. En annen strategi for å unnslippe lysosomal degradering er ansatt av modellen vacuolar patogen Salmonella ente serovar Typhimurium, deretter kalt Salmonella typhimurium. Salmonella bruker en T3SS å injisere effektorer som renovere den innledende phagosome inn sin intracellulære nisje, Salmonella-holdig vakuole (SCV) 8,9. Kontinuerlig manipulering av verts trasé erer nødvendig for å opprettholde denne vakuole ved å rekruttere lipider og andre næringsstoffer til vakuolen. Faktisk en SIFA mutant av Salmonella ikke klarer å opprettholde vacuolar stabilitet, og går inn i cytosol av vertsceller i løpet av timer etter infeksjon, noe som resulterer i aktivering av medfødte immun trasé og autophagy rekruttering 8. Vacuolar rømning av Salmonella varierer avhengig av celletype som er studier, og flere rapporter har vist at i epitelceller og med WT Salmonella kan unnslippe SCV og hyperreplicate i cytosol 10. Nylige rapporter viser at medfødte immun påvisning av patogener vacuolar er også avhengig av evnen til verten for å gjenkjenne og destabilisere patogen-holdige vakuoler (PCVs) 11-14. Gitt at både verten eller bakterier genotype kan påvirke fordelingen av intracellulære bakterier mellom vacuolar og cytosolisk rommet, er det nødvendig å kvantifisere antallet vacuolar vs.cytosolic bakterier. Siden, i de fleste forsøksoppsett vertsceller infiseres med mer enn en bakterie, og deretter kan havnen flere bakterier i forskjellige subcellulære avdelinger, er en teknikk som gjør det mulig nødvendig kvantifisering av nivået av enkelt bakterier. Differential permeabilization (også kjent som phagosomal beskyttelsestest) gir dette vedtaket 2,4,10,12. Analysen er basert på selektiv permeabilization av vertscellen plasmamembranen med vaskemiddel digitonin, noe som etterlater vacuolar membraner intakt og tillater således selektiv farging av cytosoliske bakterier med antistoffer. Her gir vi to protokoller for kvantifisering av cytosolisk og vacuolar Salmonella typhimurium hjelp differensial permeabilization. Prinsippet for denne fremgangsmåte er beskrevet i Figur 1: benmarg avledede makrofager (BMDMs) er smittet med stasjonær fase mCherry-uttrykkende Salmonella. Stasjonær fase Salmonella trenger to brukes fordi de nedregulere ekspresjon av SPI-en T3SS, hvis virksomhet ellers ville bli gjenkjent av NLRC4 inflammasome og indusere rask celledød (pyroptosis) av BMDMs 15. Etter infeksjon Cellene vaskes og behandles med 50 ug / ml digitonin i 1 minutt. Celler blir vasket igjen med en gang og inkubert med anti-Salmonella-antistoffer koblet til FITC for å markere bakterier med tilgang til cytosol. Etter et ytterligere vasketrinn ble cellene lyseres og andelen av mCherry + (vacuolar) og FITC + / mCherry + (cytosol) bakterier bestemmes ved hjelp av FACS. Vi rapporterer også en tilpasning av denne metoden som kan benyttes hvis ingen fluorescerende protein-uttrykkende stammer er tilgjengelige (figur 2). Ytterligere trinn er innført etter at FITC merking i hvilke celler er faste og fullstendig permeabilisert. Deretter alle bakterier er farget med anti Salmonella antistoffer og tilhørende sekundære antistoffer. Detection deretter gjøres ved mikroskopi i stedet for FACS analyse.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Digitonin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D5628</td>
			<td>50ug/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PFA</td>
			<td>mpbio</td>
			<td>219998380</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Acetate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>791733</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Salmonella CSA-1-FITC</td>
			<td>KPL</td>
			<td>01-91-99-MG</td>
			<td>1/500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Salmonella CSA-1</td>
			<td>KPL</td>
			<td>02-91-99-MG</td>
			<td>1/500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Calnexin</td>
			<td>Enzo Lifesciences</td>
			<td>SPA-860D</td>
			<td>1/100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-PDI</td>
			<td>Enzo Lifesciences</td>
			<td>SPA-890</td>
			<td>1/100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saponin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>47036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectashield mounting medium</td>
			<td>Vectorlabs</td>
			<td>H-1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Rabbit antibody-488</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>A-11070</td>
			<td>1/500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8898</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15710-49</td>
			<td>100ug/mL and 10ug/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Promega</td>
			<td>H5141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>20012-019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D6429</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEAA</td>
			<td>Amimed</td>
			<td>5-13K00-H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM700 Confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>imaging done at 63x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Fortessa</td>
			<td>BD technologies</td>
			<td></td>
			<td>detection mCherry 610 nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Fortessa</td>
			<td>BD technologies</td>
			<td></td>
			<td>detection FITC 530 nm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of cytosolic vs. vacuolar salmonella in primary macrophages by differential permeabilization

Intracellulære bakterielle patogener kan gjenskape i cytosol eller i spesialiserte patogen-holdige vakuoler (PCVs). For å komme til cytosol, bakterier som Shigella flexneri og Francisella novicida trenger å indusere bruddet i phagosome. I motsetning til dette, replikerer Salmonella typhimurium i et vacuolar kammer, kjent som Salmonella holdig vakuolen (SCV). Men visse mutanter av Salmonella ikke klarer å opprettholde SCV integritet og således frigjøres i cytosol. Prosentandelen av cytosolisk vs. vacuolar bakterier på nivået av enkle bakterier kan måles ved differensiell permeabilization, også kjent som phagosome-beskyttelsestest. Tilnærmingen gjør bruk av eiendommen vaskemiddel digitonin å selektivt binde kolesterol. Siden plasmamembranen inneholder mer kolesterol enn andre cellulære membraner, kan digitonin brukes til selektivt å permeabilisere plasmamembranen samtidig la intracellulære membranerintakt. I korte trekk, etter infeksjon med patogen som uttrykker et fluorescerende markørprotein (f.eks mCherry blant andre), er plasmamembranen av vertsceller permeabilisert med en kort inkubasjon i digitonin holdig buffer. Cellene blir deretter vasket og inkubert med et primært antistoff (koplet til en fluorofor valg) rettet mot bakterien valg (f.eks anti- Salmonella -FITC) og vasket igjen. Dersom umerkede bakterier anvendes, kan et ytterligere trinn utføres, hvor alle membranene permeabilisert og alle bakterier farget med en tilsvarende antistoff. Etter flekker, kan andelen av vacuolar og cytosoliske bakterier kvantifiseres ved FACS eller mikroskopi ved å telle enkle eller doble-positive hendelser. Her gir vi eksperimentelle detaljene for bruk av denne teknikken med bakterien Salmonella typhimurium. Fordelen med denne analyse er at, i motsetning til andre analysen, gir det en kvantifisering av nivået av enkelt bacteria, og hvis analysert ved mikroskopi gir det nøyaktige antall cytosolisk og vacuolar bakterier i en gitt celle.

Figur 1 og Figur 2 viser skjematisk av digitonin analysen beskrevet i fremgangsmåte 1 og protokoll 2 illustrerer viktige trinnene i protokollen og de ​​oppnådde resultater. Figur 3 viser typiske FACS resultater. Positive og negative kontroller brukes til å sette portene for mCherry + / FITC- bakterier (vacuolar Salmonella) og mCherry + / FITC + bakterier (cytosolisk Salmonella). Basert på disse portene prosentandelen av cytosoliske og vacuolar bakterier kan påvise...

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization at JoVE.com

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

We describe the quantification of cytosolic and vacuolar Salmonella typhimurium in bone-marrow derived macrophages using differential digitonin permeabilization.

Kvantifisering av cytosolisk vs. vacuolar<em&gt; Salmonella</em&gt; I Primær Makrofager av Differential Permeabilization

Intracellular bacterial pathogens can replicate in the cytosol or in specialized pathogen-containing vacuoles (PCVs). To reach the cytosol, bacteria like ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

Måling av cytosoliske Ca 2 + I isolerte kontraktile lymfesystem

Lymphatic vessels comprise a multifunctional transport system that maintains fluid homeostasis, delivers lipids to the central circulation, and acts as a ...

Single Cell Measurements of Vacuolar Rupture Caused by Intracellular Pathogens

Encellete Målinger av vacuolar Rupture forårsaket av intracellulære patogener

Shigella flexneri are pathogenic bacteria that invade host cells entering into an endocytic vacuole. Subsequently, the rupture of this membrane-enclosed ...

High-throughput Assay to Phenotype Salmonella enterica Typhimurium Association, Invasion, and Replication in Macrophages

High-throughput Assay to Phenotype Salmonella enterica Typhimurium Association, Invasion, and Replication in Macrophages

Høy gjennomstrømming analysen til sin fenotype<em&gt; Salmonella ente</em&gt; Typhimurium Association, Invasion, og Replication i makrofager

Salmonella species are zoonotic pathogens and leading causes of food borne illnesses in humans and livestock1. Understanding the mechanisms underlying ...

Highly Efficient Transfection of Human THP-1 Macrophages by Nucleofection

Svært effektiv Transfeksjon menneskerettighets THP-1 Makrofager av nucleofection

Macrophages, as key players of the innate immune response, are at the focus of research dealing with tissue homeostasis or various pathologies. ...

Proteomic Profiling of Macrophages by 2D Electrophoresis

Proteomikk Profilering av Makrofager av 2D elektroforese

The goal of the two-dimensional (2D) electrophoresis protocol described here is to show how to analyse the phenotype of human cultured macrophages. The ...

Phagosome Migration and Velocity Measured in Live Primary Human Macrophages Infected with HIV-1

Phagosome Migrasjon og Velocity Målt i live primære humane makrofager infisert med HIV-1

Macrophages are phagocytic cells that play a major role at the crossroads between innate and specific immunity. They can be infected by the human ...

Phenotypic Characterization of Macrophages from Rat Kidney by Flow Cytometry

Fenotypisk Karakterisering av makrofager fra Rat Nyre ved flowcytometri

There is increasing evidence suggesting the important role of inflammation and, subsequently, macrophages in the development and progression of renal ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolasjon av Salmonella typhimurium-som inneholder Phagosomes fra makrofager

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

Time-lapse 3D Imaging of Phagocytosis by Mouse Macrophages

Tidsinnstilt 3D bildebehandling av fagocytose av musen makrofager

Phagocytosis plays a key role in host defense, as well as in tissue development and maintenance, and involves rapid, receptor-mediated rearrangements of ...

Quantification of Antibody-dependent Enhancement of the Zika Virus in Primary Human Cells

Kvantifisering av antistoff avhengige forsterkning av Zika viruset i primære menneskelige celler

The recent emergence of the flavivirus Zika and neurological complications, such as Guillain-Barr&#233; syndrome and microcephaly in infants, has brought ...