Name: intravital microscopy of leukocyte-endothelial and platelet-leukocyte interactions in mesenterial veins in mice
Uploaded: 2015-08-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intravital Microscopy of Leukocyte-endothelial and Platelet-leukocyte Interactions in Mesenterial Veins in Mice at JoVE.com

This work was supported by the Deutsche Forschungsgemeinschaft (DU 1190/3-1).

Tüm hayvan deneyleri Alman hayvan koruma kanunu (TierSchG) uygun olarak yapılmıştır. FELASA (www.felasa.eu/guidelines.php) ve ulusal hayvan refahı vücut GV-SOLAS (www.gv-solas.de/index.html) tarafından tanımlanan fareler ev sahipliği ve iyi hayvan uygulamalarına uygun olarak ele alındı. Freiburg Üniversitesi hayvan refahı komitesi yanı sıra yerel yönetimler (Regierungspräsidium Freiburg) tüm hayvan deneyleri onayladı. 1. Hayvan Taşıma, hazırlanması ve Enflamasyon indü...

<ol>
	<li>Lehr, H. A., Vollmar, B., Vajkoczy, P., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+fluorescence+microscopy+for+the+study+of+leukocyte+interaction+with+platelets+and+endothelial+cells.">Intravital fluorescence microscopy for the study of leukocyte interaction with platelets and endothelial cells.</a> Methods in enzymology. 300, 462-481 (1999).</li><li>Atherton, A., Born, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+investigations+of+the+adhesiveness+of+circulating+polymorphonuclear+leucocytes+to+blood+vessel+walls.">Quantitative investigations of the adhesiveness of circulating polymorphonuclear leucocytes to blood vessel walls.</a> The Journal of physiology. 222, 447-474 (1972).</li><li>Duerschmied, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serotonin+stimulates+platelet+receptor+shedding+by+tumor+necrosis+factor-alpha-converting+enzyme+(ADAM17).">Serotonin stimulates platelet receptor shedding by tumor necrosis factor-alpha-converting enzyme (ADAM17).</a> Journal of thrombosis and haemostasis : JTH. 7, 1163-1171 (2009).</li><li>Chauhan, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ADAMTS13:+a+new+link+between+thrombosis+and+inflammation.">ADAMTS13: a new link between thrombosis and inflammation.</a> The Journal of experimental medicine. 205, 2065-2074 (1084).</li><li>Baez, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+open+cremaster+muscle+preparation+for+the+study+of+blood+vessels+by+in+vivo+microscopy.">An open cremaster muscle preparation for the study of blood vessels by in vivo microscopy.</a> Microvascular research. 5, 384-394 (1973).</li><li>Leister, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+peritoneal+cavity+chamber+for+intravital+microscopy+of+the+liver+under+conditions+of+pneumoperitoneum.">A peritoneal cavity chamber for intravital microscopy of the liver under conditions of pneumoperitoneum.</a> Surgical endoscopy. 17, 939-942 (2003).</li><li>Duerschmied, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+serotonin+promotes+the+recruitment+of+neutrophils+to+sites+of+acute+inflammation+in+mice.">Platelet serotonin promotes the recruitment of neutrophils to sites of acute inflammation in mice.</a> Blood. 121, 1008-1015 (2013).</li><li>Herr, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+fluoxetine+treatment+induces+slow+rolling+of+leukocytes+on+endothelium+in+mice.">Acute fluoxetine treatment induces slow rolling of leukocytes on endothelium in mice.</a> PloS one. 9, e88316 (2014).</li><li>Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retro-orbital+injections+in+mice.">Retro-orbital injections in mice.</a> Lab animal. 40, 155-160 (2011).</li><li>Steel, C. D., Stephens, A. L., Hahto, S. M., Singletary, S. J., Ciavarra, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+lateral+tail+vein+and+the+retro-orbital+venous+sinus+as+routes+of+intravenous+drug+delivery+in+a+transgenic+mouse+model.">Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital venous sinus as routes of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model.</a> Lab animal. 37, 26-32 (2008).</li><li>Duerschmied, D., Bode, C., Ahrens, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+functions+of+platelets.">Immune functions of platelets.</a> Thrombosis and haemostasis. 112, 678-691 (2014).</li><li>Wagner, D. D., Frenette, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vessel+wall+and+its+interactions.">The vessel wall and its interactions.</a> Blood. 111, 5271-5281 (2008).</li><li>Gawaz, M., Fateh-Moghadam, S., Pilz, G., Gurland, H. J., Werdan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+activation+and+interaction+with+leucocytes+in+patients+with+sepsis+or+multiple+organ+failure.">Platelet activation and interaction with leucocytes in patients with sepsis or multiple organ failure.</a> European journal of clinical investigation. 25, 843-851 (1995).</li><li>Sarma, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+platelet+binding+to+circulating+monocytes+in+acute+coronary+syndromes.">Increased platelet binding to circulating monocytes in acute coronary syndromes.</a> Circulation. 105, 2166-2171 (2002).</li><li>Sumagin, R., Sarelius, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF-alpha+activation+of+arterioles+and+venules+alters+distribution+and+levels+of+ICAM-1+and+affects+leukocyte-endothelial+cell+interactions.">TNF-alpha activation of arterioles and venules alters distribution and levels of ICAM-1 and affects leukocyte-endothelial cell interactions.</a> American journal of physiology. Heart and circulatory physiology. 291, H2116-H2125 (2006).</li></ol>

Bu yazıda hazırlık ve in vivo farelerin mezenter damarlarının intravital mikroskopi performansını açıklamak. Bu yöntem bize canlı organizmada doğrudan lökosit-endotel ve trombosit endotel etkileşimleri 11 gözlemleme fırsatı veriyor. Endotel inflamasyon için erken yanıt olarak aktive olur ve haddeleme, yapışma ve göçüne 12 sonuçlanan lökositler ve trombositler ile etkileşime girer. Ancak lökositler de trombosit sözde şekillendirme i...

Bu protokolün amacı, inflamatuvar koşullarda lökosit-endotel ve lökosit-trombosit etkileşimleri doğrudan gözlem için fareler yaşayan mezenter damarların intravital mikroskopi basitleştirilmiş tekniği tanımlamaktır. Intravital mikroskopi inflamatuar lökosit işe alma ve işlevini anlamak için önemsiz ama önemli değil enflamatuvar durumlarda 1,2 altında in vivo lökosit-endotel etkileşimleri incelemek için geliştirilmiştir. Bu protokolde biz tarif yöntemi daha önce yayınlanan yayınlara göre geliştirilmiştir. Yayımlanmıştır ne büyüyen trombüs 3 ve paralel olarak trombosit birleşmesini görselleştirmek benzer daha erken 4, bir batın mezenterik ven iletilen ışık mikroskobu ile incelenir. Bu tür sıçanlarda 5 veya fare karaciğer ve sıçanların 6 cremaster kas gibi içi hayati mikroskobu çeşitli modelleri vardır. Mezenter ven intravital mikroskopi geliştirilmiş ve birçok grup ile daha önceki çalışmalarda uygulanmıştır. / - - Kimin trombosit serotonin farmakolojik uzun vadeli tarafından tükenmiş farelere bulgular nöronal olmayan serotonin eksikliği ve karşılaştırılmıştır olan fareler, vahşi tip fareler ve triptofan hydroxylase1 (TPH1) arasında lökosit işe farklılıkları gözlemlemek için bu tekniği kullandık Uygulama, bir seçici serotonin tekrar-yükselme inhibitörü, fluoksetin 7. Biz de akut fluoksetin tedavisinin 8. sonrası lökosit-endotel etkileşimleri incelenmiştir. Bu model, hızla gerçekleştirilen ve lökosit-endotel ve trombosit lökosit etkileşimleri geçerli ölçümleri sağlar, çünkü bu protokolde, mezenter damarların intravital mikroskopi odaklanmak. Bu çok daha zor ve zaman alıcı kemik, karaciğer, deri, ya da cremaster kas gibi diğer organlara, intravital mikroskobiyle bulunmaktadır. kipBurada tarif edilen L, lipopolisakarit intraperitoneal enjeksiyonu gibi bir enflamatuar uyarıcı, ile challengeing sonrası inflamatuar hücre-hücre etkileşim tekrarlanabilir değerlendirilmesi için idealdir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Rhodamine 6G</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>&#160;989-38-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipopolysaccharides from Escherichia coli 055:B5</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L2637&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intravital microscopy of leukocyte-endothelial and platelet-leukocyte interactions in mesenterial veins in mice

Intravital mikroskopi yaşayan hayvanlarda farklı farklı bölgelerde süreçleri ve damarları araştırmak için kullanılabilecek bir yöntemdir. Bu protokol, biz mezenter damarların intravital mikroskobu açıklar. Bu, in vivo olarak, lökosit-endoteliyal etkileşimleri gösteren tekrarlanabilir sonuçlar ile kısa bir süre içinde gerçekleştirilebilir. Biz endotel LPS mücadeleden sonra inflamatuar bir ayarı açıklamak. Ancak bu modelde biri bakteriyel kimyasal veya biyolojik gibi iltihaplı durumların birçok farklı türde uygulamak ve ilaçların yönetimini ve yaşam hayvan üzerindeki doğrudan etkileri ve lökosit işe üzerindeki etkisini araştırmak yapabilirsiniz. Bu protokol, farelerde ve damarlarda inflamatuar yanıt üzerindeki etkileri farklı tedaviler için başarılı bir şekilde uygulanmıştır. Burada, floresan rodamin 6G bu etiketleme yoluyla lökosit ve trombosit görselleştirme açıklar. Buna ek olarak, herhangi bir görüntüleme pe olabilirhedeflenen floresan etiketli moleküller kullanılarak rformed.

Bu protokolde tarif edilen deneysel ortamda bir genel görünüşü Şekil 1&#39;de gösterilmiştir. Bu intravital mikroskobiyle gözlenebilir bir batın ileum-döngü ve kaplar, bir fare göstermektedir. Şekil 2 nedeniyle işlem görmemiş hayvanlarda aktivasyon belli ölçüde göstermektedir prosedür kendisi. Fakat hemen hemen hiç yavaş haddeleme ya LPS ile tedavi edilen farelere kıyasla, lökositlerin Sıkı yapışma vardır. Ayrıca, vahşi tipli fare ya içme suyu ya da ted...

Watch this Scientific Journal Video about Intravital Microscopy of Leukocyte-endothelial and Platelet-leukocyte Interactions in Mesenterial Veins in Mice at JoVE.com

Intravital Microscopy of Leukocyte-endothelial and Platelet-leukocyte Interactions in Mesenterial Veins in Mice

This simplified application of intravital microscopy of mesentery veins in mice can be used in different models of inflammation to observe leukocyte-endothelial and platelet-leukocyte interactions.

Farelerde mesenteriumda Damarlardaki intravital Mikroskopi Lökosit-endotelyal ve Trombosit-lökosit Etkileşimleri

Intravital microscopy is a method that can be used to investigate different processes in different regions and vessels in living animals. In this ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Intravital Microscopy of the Inguinal Lymph Node

Kasık lenf düğüm intravital Mikroskopi

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune ...

Tracking Neutrophil Intraluminal Crawling, Transendothelial Migration and Chemotaxis in Tissue by Intravital Video Microscopy

Takip Nötrofil Lumen Crawling, intravital video Mikroskopi Doku transendoteliyal Göç ve Kemotaksis

The recruitment of circulating leukocytes from blood stream to the inflamed tissue is a crucial and complex process of inflammation1,2. In the ...

Intravital Imaging of the Mouse Thymus using 2-Photon Microscopy

2-Foton Mikroskopi kullanarak Fare Thymus intravital Görüntüleme

Two-photon Microscopy (TPM) provides image acquisition in deep areas inside tissues and organs. In combination with the development of new stereotactic ...

Intravital Microscopy of the Spleen: Quantitative Analysis of Parasite Mobility and Blood Flow

Dalak intravital Mikroskopi: Parazit Mobilite ve Kan Akımının Kantitatif Analiz

The advent of intravital microscopy in experimental rodent malaria models has allowed major advances to the knowledge of parasite-host interactions 1,2. ...

Highly Resolved Intravital Striped-illumination Microscopy of Germinal Centers

Germinal Merkezleri derece Çözülmüş Intravital Çizgili-aydınlatma Mikroskopi

Monitoring cellular communication by intravital deep-tissue multi-photon microscopy is the key for understanding the fate of immune cells within thick ...

Long Term Intravital Multiphoton Microscopy Imaging of Immune Cells in Healthy and Diseased Liver Using CXCR6.Gfp Reporter Mice

CXCR6.Gfp Muhabir Fare kullanma Sağlıklı ve hastalıklı Karaciğer Bağışıklık Hücreleri Uzun Vadeli intravital multiphoton Mikroskopi Görüntüleme

Liver inflammation as a response to injury is a highly dynamic process involving the infiltration of distinct subtypes of leukocytes including monocytes, ...

Imaging Neutrophils and Monocytes in Mesenteric Veins by Intravital Microscopy on Anaesthetized Mice in Real Time

Real Time Anestetize Farelerde Intravital Mikroskopi Mezenterik Damarlardaki nötrofiller ve monositler Görüntüleme

Efficient immune response is dependent on rapid mobilization of blood leukocytes to the site of infection or injury. Investigating leukocyte migration in ...

Preparation of Murine Submandibular Salivary Gland for Upright Intravital Microscopy

Dik Intravital mikroskopi için fare Submandibular Tükürük bezi hazırlanması

The submandibular salivary gland (SMG) is one of the three major salivary glands, and is of interest for many different fields of biological research, ...

Imaging Cell Interaction in Tracheal Mucosa During Influenza Virus Infection Using Two-photon Intravital Microscopy

İki fotonlu Intravital mikroskobu kullanılarak grip virüsü enfeksiyonu sırasında trakeal mukozasında görüntüleme hücre etkileşimi

The analysis of cell-cell or cell-pathogen interaction in vivo is an important tool to understand the dynamics of the immune response to infection. ...

Human Colonoid Monolayers to Study Interactions Between Pathogens, Commensals, and Host Intestinal Epithelium

Patojenler, Commensals ve ana bilgisayar bağırsak epitel arasındaki etkileşimler çalışmaya insan Colonoid Monolayers

Human 3-dimensional (3D) enteroid or colonoid cultures derived from crypt base stem cells are currently the most advanced ex vivo model of the intestinal ...