Name: investigating functional regeneration in organotypic spinal cord co-cultures grown on multi-electrode arrays
Uploaded: 2015-09-23T14:00:00
Duration: 8 min 25 s
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This study was supported by the Swiss National Foundation (n&#176; 3100AO-120327 and 31003A_140754/1)

<ol>
	<li>Avossa, D., Rosato&#8211;Siri, M., Mazzarol, F., Ballerini, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+circuits+formation:+a+study+of+developmentally+regulated+markers+in+organotypic+cultures+of+embryonic+mouse+spinal+cord.">Spinal circuits formation: a study of developmentally regulated markers in organotypic cultures of embryonic mouse spinal cord.</a> Neuroscience. 122 (2), 391-405 (2003).</li><li>Cifra, A., Mazzone, G. L., Nani, F., Nistri, A., Mladinic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+developmental+profile+of+neurons+and+glia+in+motor+nuclei+of+the+brainstem+and+spinal+cord,+and+its+comparison+with+organotypic+slice+cultures.">Postnatal developmental profile of neurons and glia in motor nuclei of the brainstem and spinal cord, and its comparison with organotypic slice cultures.</a> Dev Neurobiol. 72 (8), 1140-1160 (2012).</li><li>Tscherter, A., Heuschkel, M. O., Renaud, P., Streit, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatiotemporal+characterization+of+rhythmic+activity+in+rat+spinal+cord+slice+cultures.">Spatiotemporal characterization of rhythmic activity in rat spinal cord slice cultures.</a> Eur. J. Neurosci. 14 (2), 179-190 (2001).</li><li>Czarnecki, A., Magloire, V., Streit, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+oscillations+of+spiking+activity+in+organotypic+spinal+cord+slice+cultures.">Local oscillations of spiking activity in organotypic spinal cord slice cultures.</a> Eur. J. Neurosci. 27 (8), 2076-2088 (2008).</li><li>Kirkby, L. A., Sack, G. S., Firl, A., Feller, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+correlated+spontaneous+activity+in+the+assembly+of+neural+circuits.">A role for correlated spontaneous activity in the assembly of neural circuits.</a> Neuron. 80 (5), 1129-1144 (2013).</li><li>Ballerini, L., Galante, M., Grandolfo, M., Nistri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+rhythmic+patterns+of+activity+by+ventral+interneurones+in+rat+organotypic+spinal+slice+culture.">Generation of rhythmic patterns of activity by ventral interneurones in rat organotypic spinal slice culture.</a> J. Physiol. (Lond.). 517 ((Pt 2)), 459-475 (1999).</li><li>Hanson, M. G., Landmesser, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+patterns+of+spontaneous+activity+are+required+for+correct+motor+axon+guidance+and+the+expression+of+specific+guidance+molecules).">Normal patterns of spontaneous activity are required for correct motor axon guidance and the expression of specific guidance molecules).</a> Neuron. 43 (5), 687-701 (2004).</li><li>Courtine, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+of+supraspinal+control+of+stepping+via+indirect+propriospinal+relay+connections+after+spinal+cord+injury.">Recovery of supraspinal control of stepping via indirect propriospinal relay connections after spinal cord injury.</a> Nat. Med. 14 (1), 69-74 (2008).</li><li>Bonnici, B., Kapfhammer, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+regeneration+of+intrinsic+spinal+cord+axons+in+a+novel+spinal+cord+slice+culture+model.">Spontaneous regeneration of intrinsic spinal cord axons in a novel spinal cord slice culture model.</a> Eur. J. Neurosci. 27 (10), 2483-2492 (2008).</li><li>Heidemann, M., Streit, J., Tscherter, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+regeneration+of+intraspinal+connections+in+a+new+in+vitro+model.">Functional regeneration of intraspinal connections in a new in vitro model.</a> Neuroscience. 262, 40-52 (2014).</li><li>Nishimaru, H., Restrepo, C. E., Ryge, J., Yanagawa, Y., Kiehn, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+motor+neurons+corelease+glutamate+and+acetylcholine+at+central+synapses.">Mammalian motor neurons corelease glutamate and acetylcholine at central synapses.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102 (14), 5245-5249 (2005).</li><li>Tsuji, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteasome+inhibition+induces+selective+motor+neuron+death+in+organotypic+slice+cultures.">Proteasome inhibition induces selective motor neuron death in organotypic slice cultures.</a> J. Neurosci. Res. 82 (4), 443-451 (2005).</li><li>Magloire, V., Streit, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+activity+and+positive+feedback+in+motor+circuits+in+organotypic+spinal+cord+slice+cultures.">Intrinsic activity and positive feedback in motor circuits in organotypic spinal cord slice cultures.</a> Eur. J. Neurosci. 30 (8), 1487-1497 (2009).</li><li>Bahrami, F., Janahmadi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibiotic+supplements+affect+electrophysiological+properties+and+excitability+of+rat+hippocampal+pyramidal+neurons+in+primary+culture.">Antibiotic supplements affect electrophysiological properties and excitability of rat hippocampal pyramidal neurons in primary culture.</a> Iran. Biomed J. 17 (2), 101-106 (2013).</li><li>Mentis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noncholinergic+excitatory+actions+of+motoneurons+in+the+neonatal+mammalian+spinal+cord.">Noncholinergic excitatory actions of motoneurons in the neonatal mammalian spinal cord.</a> Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A.. 20 (102), 7344-7349 (2005).</li><li>Tsang, Y. M., Chiong, F., Kuznetsov, D., Kasarskis, E., Geula, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+neurons+are+rich+in+non&#8211;phosphorylated+neurofilaments:+Cross&#8211;+species+comparison+and+alterations+in+ALS.">Motor neurons are rich in non&#8211;phosphorylated neurofilaments: Cross&#8211; species comparison and alterations in ALS.</a> Brain Res. 861 (45&#8211;58), (2000).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

प्रस्तुत की प्रक्रिया में कई तत्वों सटीक और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रयोगों की सिद्धि के लिए मौलिक हैं। Meas, समाधान की तैयारी और टुकड़ा संस्कृतियों के उत्पादन के दौरान सभी कदम एक लामिना का प्रवाह हुड में बाँझ शर्तों के तहत प्रदर्शन कर रहे हैं। वे सहज गतिविधि 14 प्रभावित कर सकते हैं, क्योंकि एंटीबायोटिक्स पोषक तत्व मध्यम करने के लिए लागू नहीं कर रहे हैं। विदेश मंत्रालय कोटिंग के दौरान सबसे महत्वपूर्ण हिस्सा बाह्य मैट्रिक्स जेल समाधान के लिए हर समय ठंड रहती है कि यह सुनिश्चित करना है। फ्रिज में और पूरी प्रक्रिया के लिए बर्फ पर रख यह पिघलना 0 डिग्री सेल्सियस के करीब एक अधिकतम तापमान सुनिश्चित करने के लिए। बर्फ के ठंडे विच्छेदन बफ़र्स का उपयोग करके एक कम तापमान स्लाइस त्वरित अलगाव और सेक्शनिंग की तैयारी, साथ ही ध्यान दे के दौरान स्वस्थ संस्कृतियों का प्रतिशत बढ़ जाती है। इसके अलावा, प्लाज्मा / थ्रोम्बिन जमावट सबसे महत्वपूर्ण कदमों में से एक है। सबसे पहले, प्लाज्मा ठीक से Mixe है कि यह सुनिश्चित कर लेंथ्रोम्बिन के साथ घ। दूसरा, MEAS को स्लाइस की उचित लगाव सुनिश्चित करने के लिए जितना संभव हो उतना अवशेषों को हटाने के लिए विशेष ध्यान देते हैं। यह कदम अत्यंत समय के प्रति संवेदनशील है; समय सीमा के बहुत छोटा है, तो प्लाज्मा / थ्रोम्बिन मिश्रण का बहुत अधिक निकाल दिया जाता है। समय सीमा के बहुत लंबा है, तो जमावट पहले से ही अवशिष्ट प्लाज्मा / थ्रोम्बिन के साथ स्लाइस को हटाने का खतरा बढ़ रही है, क्या हुआ। यांत्रिक घावों की योजना बनाई है, तो यह एक सटीक डिजाइन के साथ Meas का उपयोग करने के लिए महत्वपूर्ण है। घाव का इरादा है, जहां क्षेत्र इलेक्ट्रोड, तारों और इन्सुलेशन के मुक्त होने की जरूरत है। अन्यथा, विदेश मंत्रालय के electrics क्षतिग्रस्त हो और इसलिए, कोई रिकॉर्डिंग अब और किया जा सकता है जा रहे हैं। एक और महत्वपूर्ण कदम घाव के आकार का सवाल है। यह घाव के बाद दो जवान स्लाइस reconnecting के बारे में दो दिनों में 10 लेता है कि पहले से दिखाया गया है। सभी प्रयोगों के लिए, अंगूठे का नियम अंतरिक्ष betwe कि इस्तेमाल किया गया थाघाव के बाद स्लाइस एन विदेश मंत्रालय नाली (300 माइक्रोन) की चौड़ाई से बड़ा नहीं होना चाहिए। घाव कोई कनेक्शन है, सब पर बहुत बड़ा है, तो एक बड़ा घाव आकार, कनेक्शन के लिए एक लंबे समय के फ्रेम में परिणाम या हो सकता है। टिप्पणी करने के लिए, पूर्व प्रयोगों से पता चला है कि एक बहुत कम कनेक्शन की दर में एक प्रारंभिक दो स्लाइस के रखने के आगे दूर से 1 मिमी का परिणाम है। बजाय इनक्यूबेटर से 37 डिग्री सेल्सियस की रिकॉर्डिंग, आरटी के लिए कम से कम 10 मिनट की एक समायोजन समय की शुरुआत से पहले, और बाह्य समाधान करने के लिए, बजाय पोषण माध्यम की सिफारिश की है। इन प्रारंभिक मिनट के दौरान गतिविधि के पैटर्न के करीब अवलोकन मापा डेटा रिकॉर्डिंग शुरू किया गया था उचित रूप से करने के बाद संस्कृति की फोड़ पैटर्न का प्रतिनिधित्व करता है। गतिविधि, डाटा अधिग्रहण और आगे की प्रक्रिया का पता लगाने के लिए, घर का बना हार्डवेयर, लैब में प्रोग्राम (, एम्पलीफायरों और एम्पलीफायरों के लिए कनेक्शन रिकॉर्डिंग कक्ष)देखें, सी ++ और IgorPro इस्तेमाल कर रहे हैं। वाणिज्यिक विदेश मंत्रालय setups और अन्य सॉफ्टवेयर संकुल इन कार्यों के लिए के रूप में अच्छी तरह से उपयुक्त हैं। इधर, इलेक्ट्रोड के द्वारा देखा संकेतों 1001 बार परिलक्षित, और फिर 6 किलोहर्ट्ज़ की दर से डिजीटल हैं। विवो में, वे आरोही और फाइबर इलाकों उतरते के हस्तक्षेप के बिना अध्ययन करने के लिए मुश्किल हो जाता है क्योंकि प्रस्तुत मॉडल propriospinal कनेक्शन की जांच के लिए एक उपयोगी उपकरण हो सकता है। दो रीढ़ की हड्डी की स्लाइस की सह संवर्धन सुंदर ढंग से इस मुद्दे को दरकिनार कर सकते हैं। संस्कृतियों कसकर नियंत्रित और आसानी से छेड़छाड़ की जा सकती है कि एक microenvironment प्रदान करते हैं। दूसरी ओर, supraspinal और संवेदी इनपुट लापता पाठ्यक्रम की है। इसके अतिरिक्त, संस्कृति तैयार करने की प्रक्रिया सीएनएस नुकसान की स्थिति का प्रतिनिधित्व करता है। Astrocytes और microglia तरह glial कोशिकाओं इसलिए बढ़ प्रसार और साथ घावों पर प्रतिक्रिया के लिए जाना जाता है, ऊतक पुनर्गठित एक निश्चित सीमा तक है। प्रस्तुत मोड से संबंधितयांत्रिक घावों के प्रदर्शन के बाद एल एक glial निशान के गठन नहीं मनाया गया। एक स्पष्टीकरण astrocytes की अनुकूली तंत्र पहले से ही तैयार करने की प्रक्रिया के दौरान शुरू हो गया है कि और संस्कृतियों के घावों एक और जवाब में परिणाम नहीं था कि हो सकता है। इसके अलावा, माइलिन जुड़े अवरोधकों की भागीदारी है, उदाहरण के लिए कोई सबूत नहीं है।, No गो-ए, एक पुराने उम्र में lesioned संस्कृतियों का कम उत्थान क्षमता में। हालांकि, यह Rolipram, स्लाइस के बीच 10 से 23 DIV बढ़ जाती है कार्यात्मक उत्थान पर घावों के प्रदर्शन के बाद सीधे प्रारंभिक फॉस्फोडाइस्टरेज़ 4 अवरोध करनेवाला के साथ इलाज है कि दिखाया गया था। इन परिणामों के कार्यात्मक वसूली पुरानी संस्कृतियों में बढ़ाया जा सकता है कि प्रदर्शित करता है। घाव साइट को पार एक्सोन की संख्या की गणना करते समय काफ़ी है, एक कम उम्र में lesioned संस्कृतियों और एक पुराने उम्र में lesioned संस्कृतियों के बीच कोई अंतर नहीं है की खोज की थी। इन निष्कर्षों axonal उत्थान की कमी प्रमुख कारण च नहीं है का सुझावया इसलिए संस्कृति में देर घावों के बाद वसूली की हानि और उत्थान का कार्य विश्लेषण की अनुमति देता है कि एक मॉडल की जरूरत पर जोर। Synaptic के गठन और synaptic plasticity वसूली की प्रक्रिया 10 में एक प्रमुख भूमिका निभा सकता है। ये तंत्र हाल के वर्षों के दौरान ध्यान की एक बहुत फायदा हुआ है और यह आजकल व्यापक रूप से वे रीढ़ की हड्डी में चोट के बाद परिणाम पर एक बड़ा असर होता है कि स्वीकार कर लिया जाता है। इसलिए, अलगाव में और महान विस्तार में इन प्रक्रियाओं की जांच करने के लिए स्थिर स्थिति प्रदान करता है कि एक मॉडल निश्चित रूप से रीढ़ की हड्डी में कार्यात्मक उत्थान के बारे में जानकारी प्राप्त करने के लिए कर सकते हैं।

केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) के organotypic टुकड़ा संस्कृतियों neuronal विकास से neurodegeneration तक पहुँचने के लिए विभिन्न शारीरिक और रोग की घटनाओं का अध्ययन करने के लिए बड़े पैमाने पर इस्तेमाल किया गया है। अलग सेल संस्कृतियों की तुलना में, organotypic स्लाइस एक अक्षुण्ण cytoarchitecture और स्थानीय अन्तर्ग्रथनी circuitry के साथ अधिक जटिलता का लाभ प्रदान करते हैं। इसी समय, ऊतक विवो संदर्भ में पूरी की जटिलता को फंसाने के लिए आवश्यकता के बिना एक अलग तरह से विश्लेषण किया जा सकता है। इसके अलावा, चुनाव की कोशिकाओं के लिए आसान और बार-बार उपयोग, warranted है बाह्य वातावरण ठीक से नियंत्रित किया जा सकता है और आम तौर पर, इन विट्रो मॉडल उनके इन विवो समकक्षों की तुलना में कम महंगे हैं। हाल के वर्षों में, विभिन्न अध्ययनों इसी रहने वाले जानवरों 1,2 बनाम दीर्घकालिक संस्कृतियों के विकास की प्रोफाइल के बीच हड़ताली समानता प्रस्तुत किया। यह विभिन्न सीएनएस Regio की कि neuronal सर्किट दिखाया गया हैएनएस विकास के दौरान सहज नेटवर्क गतिविधि को व्यक्त करने और organotypic स्लाइस आंशिक रूप से इस घटना 3 -7 का कहना है कि। पृथक रीढ़ की हड्डी की तैयारी विशेष रूप से ताल पीढ़ी 6 और neuronal सर्किट 1 के गठन की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया गया है। Organotypic स्लाइस की सहज गतिविधि रिकॉर्ड करने के लिए एक रास्ता बहु इलेक्ट्रोड सरणियों (MEAS) के शीर्ष पर संस्कृति उनके लिए है। इन उपकरणों के कई एक साथ कोशिकाओं (बहु इकाई रिकॉर्डिंग) से कार्रवाई की क्षमता के द्वारा उत्पन्न बाह्य क्षमता की निगरानी कर सकते हैं कि कई इलेक्ट्रोड होते हैं। विदेश मंत्रालय रिकॉर्डिंग के उच्च अस्थायी समाधान के लिए एक दिया न्यूरोनल सर्किट के भीतर सटीक गतिविधि गतिशीलता को फिर से संगठित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। इसके अतिरिक्त, के विपरीत पैच-clamping तकनीक न्यूरॉन्स उनके व्यवहार में प्रभावित नहीं कर रहे हैं कि वास्तव में लंबी अवधि के माप और परिणाम परमिट है, जो गैर-आक्रामक है। एफया इस अध्ययन का उद्देश्य, organotypic रीढ़ की हड्डी सह संस्कृतियों और एकाधिक रिकॉर्डिंग के संयोजन रीढ़ की हड्डी के भीतर कार्यात्मक उत्थान जांच करने के लिए इस्तेमाल किया गया था। वयस्क उच्च रीढ़ रीढ़ की हड्डी के नुकसान से उबरने के लिए संभावित सीमित है के बाद से, विभिन्न रणनीतियों रीढ़ की हड्डी में चोट के बाद उत्थान को बढ़ावा देने के लिए अध्ययन किया गया है। अब तक, corticospinal पथ आमतौर पर इस तरह की जाँच के लिए पसंद की मॉडल प्रणाली की गई है। इन प्रयोगों आम तौर पर समय लेने वाली है, महंगे हैं और कारण एकल समूहों के भीतर उच्च परिवर्तनशीलता के लिए बड़े जानवर साथियों की आवश्यकता होती है। इसके अलावा, सबूत propriospinal कनेक्शन (पूरी तरह से रीढ़ की हड्डी के भीतर ही सीमित कर रहे हैं कि न्यूरॉन्स) रीढ़ की हड्डी घावों 8 निम्नलिखित वसूली की प्रक्रिया में एक निर्णायक भूमिका निभा सकते हैं कि पता चलता है। इन तंतुओं आरोही और फाइबर इलाकों उतरते के हस्तक्षेप के बिना विवो में अध्ययन करने के लिए मुश्किल हो जाता है। Bonnici और Kapfhammer 9 अनुदैर्ध्य रीढ़ की हड्डी का इस्तेमाल कियाएक वैकल्पिक दृष्टिकोण के रूप में प्रसव के बाद चूहों की टुकड़ा संस्कृतियों। यांत्रिक घावों प्रदर्शन करने के बाद वे अर्द्ध मात्रात्मक रीढ़ की हड्डी क्षेत्रों के बीच axons की रूपात्मक उत्थान का विश्लेषण किया। वे एक परिपक्व उम्र में कटौती संस्कृतियों में घाव साइट पार करने में कम नहीं है लेकिन कोई भी एक्सोन मनाया। 7 दिन क्षति के बाद - इसके विपरीत, एक युवा अवस्था में lesioned थे कि संस्कृतियों 5 axonal उत्थान के एक उच्च राशि का प्रदर्शन किया। हालांकि, कार्यात्मक कनेक्शन के लिए प्रमाण प्रस्तुत नहीं किया गया। इसलिए, कार्यात्मक उत्थान की जांच की अनुमति देता है कि propriospinal फाइबर के इन विट्रो मॉडल में एक प्रतिनिधि के विकास के रीढ़ की हड्डी में पुनर्योजी प्रक्रियाओं के बारे में हमारे ज्ञान का विस्तार करने के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण हो सकता है।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Planar multielectrode array</td>
			<td>Qwane Biosciences</td>
			<td></td>
			<td>custom-made according to the design of our lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nutrient medium</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For 100 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbeccos modified Eagle&#39;s medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31966-021</td>
			<td>80 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26050-070</td>
			<td>10 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>distilled, sterile water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>10 ml&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nerve growth factor-7S [5ng/mL]</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N0513</td>
			<td>200 &#181;l</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>reconstituted in wash solution with 1% BSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coating solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extracellular matrix gel</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>356230</td>
			<td>Must stay cold at all times; dilute 1:50 with medium optimized for prenatal and embryonic neurons</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>medium optimized for prenatal and embryonic neurons</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21103-049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wash solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>[mg/L]</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2-6H2O</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td align="right">100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4-7H2O</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td align="right">100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td align="right">400</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td align="right">60</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td align="right">8000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4 anhydrous</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td align="right">48</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose (Dextrose)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td align="right">1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>According to the protocol on http://www.lifetechnologies.com/ch/en/home/technical-resources/media-formulation.152.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extracellular solution (pH 7.4)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>[mM]</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>145</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na-pyruvate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blocking Solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Detergent: Triton X-100</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>0.3%, harmful if swallowed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9418</td>
			<td>1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16210-064</td>
			<td align="right">5%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken Plasma</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P2366</td>
			<td>Lyophilized, reconstitute with wash solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gabazine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SR-95531</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mecamylamine hydrochloride</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>2843</td>
			<td>toxic if swallowed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette</td>
			<td>World Precision Instruments, Inc.</td>
			<td>MF28G-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>harmful, 4%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMI-31</td>
			<td>Covance</td>
			<td>SMI-31P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMI-32</td>
			<td>Covance</td>
			<td>SMI-32R-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Strychnine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S0532</td>
			<td>toxic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thrombin</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>1123740001</td>
			<td>irritant, sensitizing, reconstitute with wash solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture flat tube 10 (= roller tube)</td>
			<td>Techno Plastic Products AG</td>
			<td>91243</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

investigating functional regeneration in organotypic spinal cord co-cultures grown on multi-electrode arrays

Adult higher vertebrates have a limited potential to recover from spinal cord injury. Recently, evidence emerged that propriospinal connections are a promising target for intervention to improve functional regeneration. So far, no in vitro model exists that grants the possibility to examine functional recovery of propriospinal fibers. Therefore, a representative model that is based on two organotypic spinal cord sections of embryonic rat, cultured next to each other on multi-electrode arrays (MEAs) was developed. These slices grow and, within a few days in vitro, fuse along the sides facing each other. The design of the used MEAs permits the performance of lesions with a scalpel blade through this fusion site without inflicting damage on the MEAs. The slices show spontaneous activity, usually organized in network activity bursts, and spatial and temporal activity parameters such as the location of burst origins, speed and direction of their propagation and latencies between bursts can be characterized. Using these features, it is also possible to assess functional connection of the slices by calculating the amount of synchronized bursts between the two sides. Furthermore, the slices can be morphologically analyzed by performing immunohistochemical stainings after the recordings. 
Several advantages of the used techniques are combined in this model: the slices largely preserve the original tissue architecture with intact local synaptic circuitry, the tissue is easily and repeatedly accessible and neuronal activity can be detected simultaneously and non-invasively in a large number of spots at high temporal resolution. These features allow the investigation of functional regeneration of intraspinal connections in isolation in vitro in a sophisticated and efficient way.

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Investigating Functional Regeneration in Organotypic Spinal Cord Co-cultures Grown on Multi-electrode Arrays

यहाँ हम इन विट्रो में propriospinal कनेक्शन के कार्यात्मक उत्थान का अध्ययन करने के लिए बहु-इलेक्ट्रोड सरणियों पर संवर्धित रीढ़ की हड्डी की स्लाइस पर आधारित है कि एक प्रोटोकॉल उपस्थित थे।

मल्टी इलेक्ट्रोड सारणियों पर हो Organotypic स्पाइनल कॉर्ड सह संस्कृतियों में कार्यात्मक उत्थान की जांच कर

Adult higher vertebrates have a limited potential to recover from spinal cord injury. Recently, evidence emerged that propriospinal connections are a ...

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Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

विच्छेदन और भ्रूणीय स्पाइनल कॉर्ड से Commissural न्यूरॉन्स की संस्कृति

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Multi-electrode Array Recordings of Neuronal Avalanches in Organotypic Cultures

बहु इलेक्ट्रोड Neuronal हिमस्खलन के Organotypic संस्कृतियों में ऐरे रिकॉर्डिंग

The cortex is spontaneously active, even in the absence of any particular input or motor output.  During development, this activity is important for the ...

A Functional Motor Unit in the Culture Dish: Co-culture of Spinal Cord Explants and Muscle Cells

संस्कृति डिश में एक कार्यात्मक मोटर यूनिट: स्पाइनल कॉर्ड explants और मांसपेशियों की कोशिकाओं के सह संस्कृति

Human primary muscle cells cultured  aneurally in monolayer rarely contract spontaneously because, in the absence of  a nerve component, cell ...

Spinal Cord Transection in the Larval Zebrafish

लार्वा zebrafish में रीढ़ की हड्डी transection

Mammals fail in sensory and motor recovery following spinal cord injury due to lack of axonal regrowth below the level of injury as well as an inability ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

एक<em&gt; पूर्व vivo</em&gt; लेजर प्रेरित स्पाइनल कॉर्ड चोट मॉडल वास्तविक समय में axonal अध: पतन के तंत्र का आकलन करने के लिए

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Spiral Ganglion Neuron Explant Culture and Electrophysiology on Multi Electrode Arrays

सर्पिल नाड़ीग्रन्थि न्यूरॉन explant संस्कृति और इलैक्ट्रोफिजियोलॉजी पर मल्टी इलेक्ट्रोड सरणियों

Spiral ganglion neurons (SGNs) participate in the physiological process of hearing by relaying signals from sensory hair cells to the cochlear nucleus in ...

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

इमेजिंग तंत्रिका गतिविधि प्राथमिक Somatosensory प्रांतस्था का उपयोग Thy1-GCaMP6s ट्रांसजेनिक चूहों में

The mammalian brain exhibits marked symmetry across the sagittal plane. However, detailed description of neural dynamics in symmetric brain regions in ...

Isolation of Adult Spinal Cord Nuclei for Massively Parallel Single-nucleus RNA Sequencing

बड़े पैमाने पर समानांतर एकल नाभिक आरएनए अनुक्रमण के लिए वयस्क रीढ़ की हड्डी नाभिक के अलगाव

Probing an individual cell&#39;s gene expression enables the identification of cell type and cell state. Single-cell RNA sequencing has emerged as a ...

Activity-based Training on a Treadmill with Spinal Cord Injured Wistar Rats

गतिविधि आधारित रीढ़ की हड्डी के साथ एक ट्रेडमिल पर प्रशिक्षण Wistar चूहों घायल

Spinal cord injury (SCI) results in lasting deficits that include both mobility and a multitude of autonomic-related dysfunctions. Locomotor training (LT) ...

Intra-Arterial Delivery of Neural Stem Cells to the Rat and Mouse Brain: Application to Cerebral Ischemia

चूहा और माउस मस्तिष्क के लिए तंत्रिका स्टेम सेल की अंतर-धमनी वितरण: सेरेब्रल इस्केमिया के लिए आवेदन

Neural stem cell (NSC) therapy is an emerging innovative treatment for stroke, traumatic brain injury and neurodegenerative disorders. As compared to ...