Name: indirect immunofluorescence on frozen sections of mouse mammary gland
Uploaded: 2015-12-01T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Indirect Immunofluorescence on Frozen Sections of Mouse Mammary Gland at JoVE.com

Forfatterne er takknemlige til INRA MIMA2 bildebehandling kjernefasiliteten (INRA, UMR1198, Jouy-en-Josas) og til de ansatte på IERP enheten (UE 0907, INRA, Jouy-en-Josas) for dyr omsorg og fasiliteter. Vi vil også gjerne takke IH Mather, MC Neville og S. Tooze for å gi oss svært nyttig antilegemer.

CD1 mus ble avlet på INRA (UE0907 IERP, Jouy-en-Josas, Frankrike). Alle etiske aspekter av dyr vare oppfylt de relevante retningslinjer og konsesjonskrav fastsatt av franske Landbruksdepartementet. Prosedyrene som benyttes ble godkjent av den lokale etikkutvalg (avtalen 12/097 fra Comethea Jouy-en-Josas / AgroParisTech). 1. melkekjertler Prøvepreparering <ol><li> Mus melkekjertler disseksjon <ol><li> Avlive mus på dag 10 av amming ved halshugging og pin dyret ned med buken opp....

IHC er en forholdsvis enkel og grei eksperimentelle metoden for å lokalisere antigenet i vevssnitt, som avhenger primært av spesifikke epitop-antistoff-interaksjoner. Selv om et stort antall protokoller brukes for å lokalisere et protein ved IIF, er kjernen i disse prosedyrene nesten alltid den samme. Det er imidlertid noen kritiske aspekter som sterkt kan påvirke resultatet, og må derfor være optimalisert for hvert enkelt IHC studium. Den mest utfordrende aspekt ved denne tilnærmingen er å bestemme de beste eks...

Melkekjertlene er et atypisk pattedyr eksokrin organ hvis viktigste funksjon er å produsere melk til å mate nyfødte. Utviklingen av brystvev forekommer hovedsakelig etter fødselen, og er karakterisert ved en unik fremgangsmåte hvor epitelet invaderer den omkringliggende stroma. Dette vevet gjennomgår mange endringer (vekst, differensiering og regresjon), spesielt i løpet av voksenlivet, samtidig med variasjoner i reproduktiv status (figur 1). I tillegg til den totale morfologi av vev, andelene av forskjellige celletyper, så vel som deres arrangement i melkekjertelen dramatisk endre seg under utvikling 1-5. I løpet av embryonisk liv, utleder brystepitel fra brystmelkeledninger, som er definert ved en svak fortykning og lagdeling av ektoderm, mellom for- og baklemmene på hver side av midtlinjen rundt embryodag 10,5 (E10.5) (figur 1A ).På E11.5, melk linjen bryter opp i individuelle placodes, som er symmetrisk plassert langs melke melk linjen på reproduserbare steder, og det omkringliggende mesenchyme begynner å kondensere. De placodes begynne å synke dypere inn i dermis og melke mesenchyme organiserer i konsentriske lag rundt melke bud (E12.5-E14.5). Per E15.5, melke epitel, begynner å spre seg og forlenge å danne primære spire som presser gjennom melke mesenchyme mot fettpute. Den primære spire utvikler en hul lumen med en åpning på huden, som er merket ved dannelsen av nippelen kappen. På E18.5 har elongating duct vokst til fettpute og har forgrenet inn i en liten arborized ductal systemet omfattet i fettpute. Utviklingen er i hovedsak arrestert og rudimentær melkekjertlene forblir morphogenetically hvilende inntil puberteten. I den mannlige foster, aktivering av androgen-reseptorer fører til degenerering av knopper, som forsvinnerved E15.5. Per E18, mammary utvikling opphører før puberteten 6-9. Ved fødselen, havner melkekjertlene en rudimentær duktal system som forlenges og grener sakte (isometrisk vekst). Ved utbruddet av pubertet, sfæriske strukturer som ligger på tuppen av kanalene kalles terminal endeknopper (TEBs), dannes av et ytre lag av cap celler og et flerlags indre kjerne av celler (celler i kroppen). Disse strukturene er svært proliferativ og infiltrere omliggende stromal vev som svar på hormonelle signaler. Spredning innenfor TEBs resultater i duktal forlengelse, kombinert med forgrening morphogenesis. Denne prosessen fører til at det etableres en grunnleggende epitelial arborized nettverk som kommer fra nippelen (figur 1B, pubertet). På ~ 10-12 uker etter fødselen, når Epitel har invadert hele fett puten, stopper og sin ekspansjon i TEBs forsvinne. Ductal utvikling gjennomgår deretter dynamiske endringer, dvs. successive spredning og regresjon av epitelceller i henhold til østrogensyklus 10 (figur 1B, voksen). Fra begynnelsen av svangerskapet, gjennomgår brystvev viktig vekst og morfologiske endringer for å forberede laktasjon. Den melkekjertelepitelet omfattende spre og differensiere, fører til et sterkt forgrenet tubulointerstitiell alveolar nettverk. Samtidig, mammary epitelceller (mecs) blir polarisert og i stand til å syntetisere og skiller melkeprodukter. Mecs organisere inn i mange alveolære strukturer (acini) som er omgitt av kontraktile korgcellene og innlemmet i en stroma består av bindevev og fettvev, blodkar og nerveterminaler (figur 1B, graviditet). Videre er det basale siden av mecs i nær kontakt med basalmembranen (ekstracellulær matriks), og vekselvirkning mellom disse to enhetene tett regulere både morfogenese og sekretorisk funksjon av mammary epitel 11-13. Alle disse prosessene er avhengige av virkningen av ulike miljø signaler, hvorav de viktigste er hormones14, parakrine faktorer og ekstracellulære matrise. For eksempel induserer progesteron omfattende sideforgrening 15 og alveologenesis som i kombinasjon med prolaktin (PRL) 16,17, fremmer og opprettholder differensiering av alveolene. I tillegg til steroider og PRL18, cytokiner og signalveier knyttet til utvikling (Wnt og Notch signalveier) er også involvert i bryst avstamning engasjement og utvikling 19-21. Ved slutten av svangerskapet, luminal mecs begynne å produsere et proteinrikt melk kalt kolostrum i lumen av alveolene. I tillegg fungerer progesteron på epiteliale permeabilitet og siden de tett veikryss er fortsatt åpne, er råmelk også funnet i mors blod stream. Etter fødsel, den Mammary epitelet opptar nesten hele brystkjertelen volum og er høyt organisert (figur 2, brystepitel). Melkeproduserende enheter, nemlig alveoler (figur 2, tannhulen), er dannet av et monolag av polariserte mammary epiteliale sekretoriske celler (MESCs), med sin apikale plasmamembranen som avgrenser hulrommet. Alveolene ordne seg inn lobules som er gruppert i fliker som er koblet til kanaler som drenerer melk til utsiden miljø (figur 2, lapp). Amming oppstår, altså., MESCs begynner å utskille rikelige mengder melk, først og fremst utløst av fallet i placenta hormoner (hovedsakelig progesteron) (figur 1B, amming). Melk-proteingenene er aktivert i en tidsmessig definert tidsforløp som strekker seg fra graviditet til amming 9,22,23, hovedsakelig som svar på hypofysen PRL frigjøres ved suging. Samtidig, kontakter mellom MESCs og ekstracellulære matrise både stimulerer melkeprotein synthesis gjennom signaler som formidles via interaksjoner mellom cellulære inte og laminin 24,25, og undertrykke apoptose i MESCs 26,27. Disse signalveier resultere i aktivering av melkeprotein genet promotorer 28 gjennom aktivering av spesifikke transkripsjonsfaktorer 29. Celle-celle-kontakter er også viktig for noen aspekter av differensiering, inkludert etablering av apikal polaritet og vektor sekresjon av melkeprodukter. Tett veikryss raskt tett etter begynnelsen av laktasjonen og MESCs fint organisere opptaket av molekyler fra blodet, så vel som syntesen, transport og sekresjon av melkekomponenter, i respons til de ernæringsmessige behov for nyfødte. På tidspunktet for suging, oppstår sammentrekning av korg celler som omgir alveolene i respons til oxytocin og fører til melke utstøting gjennom kanalene og inn i nippelen. Melk er en sammensatt væske som inneholder proteiner (for det mestekaseiner), sukker (hovedsakelig laktose), lipider og mineraler, samt bioaktive molekyler slik som immunoglobuliner A (IgA), vekstfaktorer og hormoner. Kaseiner blir syntetisert, samlet i supramolekylære strukturer, nemlig casein miceller, transporteres langs den sekretoriske vei, og deretter frigjøres ved exocytose, dvs. blanding av kasein inneholdende sekretoriske vesikler (SVs) med den apikale plasmamembranen til Mesc (figur 2). Intracellulær trafikk er avhengig av materielle utveksling mellom membran avdelinger og innebærer Løselig N-etylmaleimid-Sensitive Fusion (NSF) Vedlegg Protein (SNAP) Receptor (SNARE) 30,31. Snaren proteiner familien er inndelt i vesikulær snarer (v-snarer), til stede i vesikkelmembranen, og målet snarer (t-snarer), lokalisert på målet membraner. Ved som gjennom sine kveil-spiral-domener, V- og T-snarene sammen for å danne en svært stabil fire-heliksbunt kompleks, referert til som the SNARE kompleks. Dette komplekset fremmer fusjon av to motstående lipidbilag ved gradvis å bringe dem i tett nærhet 30,32. Etterpå er snare komplekser dissosiert av NSF adenosin triphosphatase og dets adapter protein SNAP og snare proteiner blir resirkulert tilbake til sitt segment til opprinnelses 33. Interessant, hver SNARE protein hovedsakelig ligger i forskjellige cellulære avdelinger og SNARE sammenkobling kan bidra til spesifisitet av intracellulære fusjons hendelser 34. Tidligere studier antyder at minst synaptosomale tilknyttet protein 23 (SNAP23) og Vesikkel-Associated Membrane Protein 8 (VAMP8), og syntaxins (STX) -7 og -12 spille en rolle i kasein exocytose 35,36. Disse proteinene har også blitt funnet i forbindelse med lipid fraksjon av melk, dvs. melk fettkulene (MFGs) 37. Den nåværende rådende modell postulerer at cytoplasmatiske lipiddråper (CLDs) er dannet ved akkumulering av nøytralt lipids (hovedsakelig triacylglyceroler og sterolestere) og kolesterol avledet fra mors kosthold mellom de to flygeblader i det endoplasmatiske retikulum (ER) membran 38-41. Store CLDs er dannet, i det minste delvis, ved fusjon av mindre CLDs under transport til den apikale siden av MESCs hvor de blir utgitt som MFGs (1-10 mikrometer i diameter) ved knoppskyting, blir omviklet med Mesc apikale plasmamembranen 40-42. Amming opphører etter pups er avvent og MESCs gradvis dør ved apoptose, som fører til regresjon av brystvev tilbake til en pubertets tilstand (figur 1B, involusjon). Immunfluorescens (IF) er et felles analyselaboratorium metoden som brukes i nesten alle aspekter av biologi, både i forskning og i klinisk diagnostikk. IF teknikker kan bli utført på vevssnitt (immunhistokjemi, IHC), eller celle (immunocytokjemi, ICC) prøver. Denne kraftige tilnærming er avhengig av bruk av fluorescent-merkede antistoffer som spesifikt binder (direkte eller indirekte) til antigenet av interesse, og således tillate visualisering av dens vevsfordeling gjennom fluorescens mikroskopi. Fluorescenssignaler for det meste avhenge av kvaliteten og konsentrasjonen av antistoffene og korrekt håndtering av prøven. En enkel indirekte immunfluorescens (IIF) protokoll er presentert for å detektere melkeprodukter (kaseiner og MFGs) og proteiner som er involvert i melkeprodukt sekresjon (butyrophilin (BTN1), snare proteiner) på frosne snitt av mus brystvev (figur 3). Mens denne protokollen gir en komplett IHC oversikt, alt fra vev samling til bilde post-behandling, kritisk og valg trinn samt noen tekniske anbefalinger er også presentert og diskutert.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:756px;" width="755">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Dissection</td>
			<td style="width:155px;">Company</td>
			<td style="width:127px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:236px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Pins</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Ethanol</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Scissors</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scalpel and adapted blades</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Ice</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Towel paper</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Tissue sample preparation</td>
			<td style="width:155px;">Company</td>
			<td style="width:127px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Phosphate Buffered Saline (pH7.4)</td>
			<td style="width:155px;">Sigma</td>
			<td>P-3813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Paraformaldehyde (PFA, 32% EM grade, 100 ml)</td>
			<td style="width:155px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15714-S</td>
			<td>personnal protection equipment required WARNING: this product will expose you to Formaldehyde Gas, a chemical known to cause cancer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">OCT compound/Tissue Tek</td>
			<td style="width:155px;">Sakura</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sucrose (D-saccharose)</td>
			<td style="width:155px;">VWR</td>
			<td>27480.294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Plastic molds</td>
			<td style="width:155px;">Dominique Dutscher</td>
			<td>39910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Liquid nitrogen</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Cryostat/sample support</td>
			<td style="width:155px;">Leica&#160;</td>
			<td>CM3050S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Razor blades (SEC35)</td>
			<td style="width:155px;">Thermo Scientific</td>
			<td>152200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Slide box</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Glass slides Superfrost/Superfrost Ultra Plus</td>
			<td style="width:155px;">Thermo Scientific</td>
			<td>10143560W90/1014356190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Brushes</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">IHC</td>
			<td style="width:155px;">Company</td>
			<td style="width:127px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Super Pap Pen</td>
			<td style="width:155px;">Sigma</td>
			<td>Z377821-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Permanent marker (black)</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:239px;">50 mM NH4Cl in PBS</td>
			<td style="width:155px;">Sigma</td>
			<td>A-0171</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">0.1 M glycine in PBS</td>
			<td style="width:155px;">VWR</td>
			<td>24403.367</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Antigen Retrieval solution: Tris 100 mM 5% urea pH9.6</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Heater (up to 100&#176;C)</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td style="width:155px;">Sigma</td>
			<td>A7906-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Vectashield (anti-fading mounting medium) without DAPI/with DAPI</td>
			<td style="width:155px;">Vector Laboratories</td>
			<td>H-1000/H-1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Glass coverslips 22x50mm (microscopy grade)</td>
			<td style="width:155px;">VWR</td>
			<td>CORN2980-225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Nail polish</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Primary antibodies</td>
			<td style="width:155px;">Company</td>
			<td style="width:127px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:239px;">Rabbit anti-mouse caseins (#7781; 1:50 dilution)</td>
			<td style="width:155px;">generously gifted by M.C. Neville (University of Colorado Health Sciences 
			Center, USA)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Mouse anti-cytokeratin 8 (CK8, clone 1E8, 1:50 dilution)</td>
			<td style="width:155px;">Biolegend (Covance)</td>
			<td>MMS-162P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Mouse anti-cytokeratin 14 (CK14, cloneLL002, 1:50 dilution)</td>
			<td style="width:155px;">Thermo Scientific</td>
			<td>MS-115-P0/P1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="126">
			<td height="126" style="height:126px;width:239px;">Rabbit anti-butyrophilin (1:300 dilution)</td>
			<td style="width:155px;">generously gifted by I.H. Mather (Department of Animal and Avian Sciences University of Maryland College Park, USA)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:239px;">Rabbit anti-Stx6 (1:50 dilution)</td>
			<td style="width:155px;">generously gifted S. Tooze 
			(Cancer Research UK, London Research Institute, London, UK)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Rabbit anti-VAMP4 (1:50 dilution)</td>
			<td style="width:155px;">Abcam</td>
			<td>ab3348</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Secondary antibodies</td>
			<td style="width:155px;">Company</td>
			<td style="width:127px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:239px;">Rhodamine-conjugated goat anti-rabbit IgG (H + L) (1:300 dilution)</td>
			<td style="width:155px;">Jackson ImmunoResearch Laboratories</td>
			<td>111-025-003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Counterstains</td>
			<td style="width:155px;">Company</td>
			<td style="width:127px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Bodipy 493/503</td>
			<td style="width:155px;">Life Technologies (Molecular Probes)</td>
			<td>D-3922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">DAPI (4-6-diamidino-2-phenylindole)</td>
			<td style="width:155px;">Life Technologies (Molecular Probes)</td>
			<td>D-1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Observation/Image capture</td>
			<td style="width:155px;">Company</td>
			<td style="width:127px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="147">
			<td height="147" style="height:147px;width:239px;">conventional fluorescence microscope</td>
			<td style="width:155px;">Leica Leitz DMRB 
			microscope</td>
			<td></td>
			<td style="width:236px;">Standard filters for FITC, Rhodamine 
			and DAPI emissions,&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; &#215;63 oil-immersion objective (NA 1.3), DP50 imaging camera (Olympus), Cell&#710;F software (Olympus)</td>
		</tr>
		<tr height="147">
			<td height="147" style="height:147px;width:239px;">Laser Scanning Microscope (confocal microscopy)</td>
			<td style="width:155px;">Zeiss LSM 
			510 microscope</td>
			<td></td>
			<td style="width:236px;">Plan-Apochromat &#215;63 oil-immersion objective (NA 1.4),&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; CLSM 510 software,&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Confocal facilities, MIMA2 Platform, INRA Jouy-en-Josas, France, http://mima2.jouy.inra.fr/mima2)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Image treatment</td>
			<td style="width:155px;">Company</td>
			<td style="width:127px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ImageJ 1.49k software</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td>Free software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

indirect immunofluorescence on frozen sections of mouse mammary gland

Indirekte immunfluorescens blir brukt til å detektere og lokalisere proteiner av interesse i et vev. Protokollen som presenteres her beskriver en komplett og enkel metode for immun påvisning av proteiner, musemelkegivende brystkjertel blir tatt som et eksempel. En protokoll for utarbeidelsen av vevsprøver, spesielt om disseksjon av mus melkekjertlene, vev fiksering og frosset vev seksjonering, er detaljerte. En standard protokoll for å utføre indirekte immunfluorescens, inkludert en valgfri antigen gjenfinning trinn blir også presentert. Observasjon av de merkede vevssnittene samt bilde oppkjøp og etterbehandling er også oppgitt. Denne prosedyren gir full oversikt, fra samlingen av animalsk vev på det cellulære lokalisering av et protein. Selv om denne generelle metode kan anvendes på andre vevsprøver, bør det være tilpasset hvert vev / primært antistoff par studert.

Melkekjertlene er en subkutan kjertel som ligger langs ventral strukturen i både brystkassen og magen hos gnagere. Plasseringen av de fem par kjertler fra mus under drektighetsperioden, er vist i figur 4. Morfologien av brystkjertelen endres dramatisk i løpet av sin utvikling, noe som reflekterer funksjonelle modifikasjoner som kreves for å forberede for fullstendig laktasjon (figur 1B). I jomfruelige eller førstegangsfødende dyr, består i melkekjertelen av et sparsom...

Watch this Scientific Journal Video about Indirect Immunofluorescence on Frozen Sections of Mouse Mammary Gland at JoVE.com

Indirect Immunofluorescence on Frozen Sections of Mouse Mammary Gland

Den indirekte immunfluorescens protokoll beskrevet i denne artikkelen, tillater påvisning og lokalisering av proteiner i musebrystkjertelen. En komplett fremgangsmåte er gitt for å fremstille melkekjertlene prøver, for å utføre immunhistokjemi, å avbilde vevssnittene ved fluorescens mikroskopi, og å rekonstruere bilder.

Indirekte Immunfluorescens på Frosne Deler av Mouse melkekjertler

Indirect immunofluorescence is used to detect and locate proteins of interest in a tissue. The protocol presented here describes a complete and simple ...

Research

JoVE Journal

Biology

Immunohistochemistry on Paraffin Sections of Mouse Epidermis Using Fluorescent Antibodies

In the epidermis, immunohistochemistry is an efficient means of localizing specific proteins to their relative expression compartment; namely the basal, ...

Mouse Mammary Epithelial Cells form Mammospheres During Lactogenic Differentiation

A phenotypic measure commonly used to determine the degree of lactogenic differentiation in mouse mammary epithelial cell cultures is the formation of ...

Mammary Epithelial Transplant Procedure

This article describes and compares the fat pad clearance procedure developed by DeOme KB et al.1 and the sparing procedure developed by Brill B et al.2, ...

Changes in Mammary Gland Morphology and Breast Cancer Risk in Rats

Studies in rodent models of breast cancer show that exposures to dietary/hormonal factors during the in utero and pubertal periods, when the mammary gland ...

Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles

Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles

The molecular characterization of muscular dystrophies and myopathies in humans has revealed the complexity of muscle disease and genetic analysis of ...

Isolation of Mouse Salivary Gland Stem Cells

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of ...

Evaluation of Mammary Gland Development and Function in Mouse Models

The human mammary gland is composed of 15-20 lobes that secrete milk into a branching duct system opening at the nipple. Those lobes are themselves ...

Single Cell Transcriptional Profiling of Adult Mouse Cardiomyocytes

Enkelt Cell transcriptional Profilering av Adult Mouse cardiomyocytes

While numerous studies have examined gene expression changes from homogenates of heart tissue, this prevents studying the inherent stochastic variation ...

Intraductal Injection for Localized Drug Delivery to the Mouse Mammary Gland

Intraductal Injection for Lokalisert Drug Deli til musemelkekjertlene

Herein we describe a protocol to deliver various reagents to the mouse mammary gland via intraductal injections. Localized drug delivery and knock-down of ...

Effect of Male Accessory Gland Products on Egg Laying in Gastropod Molluscs

Effekt av Mann Accessory Gland Produkter på egglegging i gastropod Bløtdyr

In internally fertilizing animals, seminal fluid is usually added to the spermatozoa, together forming the semen or ejaculate. Besides nourishing and ...