Name: indirect immunofluorescence on frozen sections of mouse mammary gland
Uploaded: 2015-12-01T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Indirect Immunofluorescence on Frozen Sections of Mouse Mammary Gland at JoVE.com

Yazarlar, hayvan bakımı ve tesisler için (INRA, UMR1198, Jouy-en-Josas) ve IERP biriminin personel (UE 0907, INRA, Jouy-en-Josas) INRA MIMA2 görüntüleme çekirdek tesisine minnettarız. Biz de çok kullanışlı Antikorların bize sağlamak için IH Mather, MC Neville ve S. Tooze teşekkür etmek istiyorum.

CD1 fareleri INRA (UE0907 IERP, Jouy-en-Josas, Fransa) yetiştirilmiş. Hayvan bakımı tüm etik yönleri Fransa Tarım Bakanlığı tarafından belirlenen ilgili kurallar ve lisans gereklerine uyulması. Kullanılan prosedürler (Comethea Jouy-en-Josas / AgroParisTech gelen anlaşma 12/097) yerel etik kurul tarafından onaylanmıştır. 1. Meme Bezi Numune Hazırlama <ol><li> Fare meme bezi diseksiyon <ol><li> Servikal dislokasyon ile laktasyonun 10. günde fareler Euthanize ve ...

IHC esas olarak belirli bir epitop antikor etkileşimlerine bağlıdır doku bölgeleri, antijeni lokalize için nispeten basit ve kolay bir deney yöntemidir. Protokolleri sayıda IIF bir proteinin lokalize etmek için kullanılsa da, bu işlemler çekirdek hemen hemen her zaman aynıdır. Ancak, güçlü bir sonucu etkileyebilir ve bu nedenle her İHK çalışma için optimize edilmesi gereken bazı kritik yönleri vardır. Bu yaklaşımın en zor yanı, yani en iyi deneysel koşullarını belirlemektir., Ilg...

Meme bezi asıl işlevi yenidoğanların beslemek için süt üretmek için bir atipik memeli exocrine organıdır. Meme dokusu gelişimi esas olarak doğum sonrası meydana gelir ve epitel çevreleyen dokudan işgal ettiği benzersiz bir süreç ile karakterize edilir. Bu doku eş zamanlı üreme durumu varyasyonların (Şekil 1), özellikle erişkin yaşamı boyunca, pek çok değişiklik (büyüme, farklılaşma ve regresyon) uğrar. Doku genel morfolojisine ek olarak, farklı hücre tiplerinin yanı sıra meme bezi içindeki düzenlemesinin oranlar önemli ölçüde gelişme 1-5 boyunca değişmez. Embriyonik yaşamı boyunca meme epitel embriyonik gün 10,5 (E10.5) (Şekil 1A yaklaşık orta hattın her iki tarafında ön ve arka bacak arasında ektoderm hafif bir kalınlaşma ve tabakalaşma tarafından tanımlanan meme süt çizgileri türeyen ).E11.5 üzerinde süt hattı simetrik tekrarlanabilir yerlerde meme süt hattı boyunca konumlandırılmış bireysel placodes, içine kırılır ve çevredeki mezenşimin yoğunlaşmaya başlar. Placodes dermis içine derin batmaya başlar ve meme mezenşimin meme tomurcuğu (E12.5-E14.5) etrafında konsantrik tabakalar halinde düzenler. E15.5 itibarıyla meme epitel, çoğalmaya ve yağ yastığı doğru meme mezenşimin aracılığıyla iter birincil filiz oluşturmak üzere uzatılması başlar. Birincil filiz nipel kılıf oluşumu ile işaretlenmiş cilde bir açıklığı olan bir içi boş lümen geliştirir. E18.5 üzerinde uzama kanal yağ yastığı haline geldi ve yağ yastığı kapsayan küçük bir arborized duktal sistemi içine dallı gelmiştir. Kalkınma esas tutuklandı ve ilkel meme bezi ergenliğe kadar morfogenetik sessiz kalır. Erkek embriyo, androjen reseptörlerinin aktivasyonu yok tomurcukları, dejenerasyonuna yol açarE15.5 tarafından. E18 itibariyle meme gelişimi ergenlik 6-9 kadar durur. Doğumda, meme bezi uzatır ve dalları yavaş yavaş (izometrik büyüme) bir ilkel duktal sistemi barındırıyor. Ergenlik başlangıcında, kanalların ucunda yer alan küre biçimli yapılar terminal uç tomurcukları (TEB), kapak hücrelerin bir dış tabaka ve bir hücre tabakalı iç kısım (vücut hücreleri) oluşturulmaktadır adlandırılır. Bu yapılar yüksek proliferatif ve hormonal uyaranlara yanıt olarak çevreleyen stromal doku sızmak. Duktal uzama TEB&#39;in sonuçlar içinde Silahların Yayılmasını Önleme, morfolojilerinden dallanma ile birleştiğinde. Bu süreç meme başı (Şekil 1B, ergenlik) kaynaklanan bir temel epitel arborized ağının kurulmasına yol açar. ~ 10-12 hafta doğumdan sonra, epitel bütün yağ yastığı işgal etmiştir, genişleme durur ve at TEB kaybolur. Duktal geliştirme sonra dinamik değişiklikleri, yani Successi uğraröstrus döngüsü 10 (Şekil 1B, yetişkin) göre olan epitel hücrelerin proliferasyonunu ve regresyonu ettik. Gebeliğin başlangıcından itibaren, meme dokusu emzirme hazırlanmak için önemli büyüme ve morfolojik değişikliklere uğrar. Meme epitel yoğun bir çok dallı tübülo-alveol ağa lider, çoğalmaya ve ayırt. Buna paralel, meme epitel hücreleri (MECler) polarize ve sentez ve süt ürünleri salgılar mümkün hale gelir. MECler kasılma myoepitelyal hücreleri ile çevrilidir ve bağ ve yağ dokuları, kan damarları ve sinir terminalleri (Şekil 1B, gebelik) oluşan bir stroma dahil edilmiştir sayıda alveol yapılar (acininin) içine düzenliyoruz. Ayrıca, MECS bazal yan bazal membran (hücre dışı matris) ile yakın temas içinde olduğunu ve bu iki varlık arasındaki etkileşimler sıkıca memenin hem morfogenezine ve salgı fonksiyonunu düzenlerry epitel 11-13. Tüm bu işlemler, en önemli hormones14 olan çeşitli çevre hareketlerine, parakrin faktörleri ve hücre dışı matrisin etkisine dayanır. Örneğin, progesteron, geniş yan dallanma prolaktin (PRL) ile kombinasyon halinde, 15 ve 16,17 alveologenesis indükler teşvik eder ve alveol farklılaşmasını korur. Steroidler ve PRL18, sitokinler ve gelişimi ile ilişkili sinyal yolları yanı sıra (Wnt sinyal yolları ve Notch) ayrıca meme soy bağlılığı ve geliştirme 19-21 katılmaktadırlar. Gebeliğin sonunda lümen MECler alveol lümeninde kolostrum olarak bilinen bir protein bakımından zengin süt üretmeye başlarlar. Ayrıca, progesteron epitel geçirgenliğine etki eder ve sıkı bağlantıları hala açık olduğundan, kolostrum maternal kan akışı bulunur. Doğumdan sonraki, mammary epiteli (Şekil 2, meme epitel) hemen hemen tüm meme bezi hacminin kadar sürer ve son derece organize edilmektedir. Süt üreten üniteler, yani alveollerin (Şekil 2, alveol), apikal plazma zarı lümen sınırlayan ile polarize meme epitelyum salgılama hücrelerinde (MESCs) bir tek tabaka ile oluşturulmuştur. Alveoller dış ortamın (Şekil 2, lob) süt drenaj kanallarına bağlı loblar şeklinde gruplandırılmış lobülleri kendilerini düzenlemek. Emzirme oluşur yani., MESCs öncelikle plasental hormonlar damla (özellikle progesteron) (Şekil 1B, laktasyon) tarafından tetiklenen süt bol miktarda, salgılamaya başlar. Süt protein genleri esas emzirme sırasında serbest bırakılacak hipofiz PRL yanıt olarak, gebelikten laktasyon 9,22,23 arasında değişen belirli bir zamansal zamanla aktif hale gelir. Buna paralel, MESCs hem ekstraselüler matriks arasındaki temaslar süt protein synt teşvikHücresel integrinler ve laminin 24,25 arasındaki etkileşimlerin aracılık ettiği ve MESCs 26,27 apoptoz bastırmak sinyallerin aracılığıyla nüklerde. Bu sinyal yolları belirli bir transkripsiyon aktivasyonu 29 faktörleri ile süt protein geni promoterlerinden 28 aktivasyonu ile sonuçlanır. Hücre-hücre kişileri de apikal kutupluluk kurulması ve süt ürünlerinin vektörel salgılanması da dahil olmak üzere farklılaşma bazı yönleri için önemlidir. Laktasyon ve MESCs başladıktan sonra hızla kapatmak sıkı bağlantılar ince yenidoğanlarda besin ihtiyaçlarına yanıt olarak kanda yanı sıra süt bileşenlerinin sentezi, taşınması ve salgılanması gelen moleküllerin alımını orchestrate. Emzirme sırasında, alveoller çevreleyen myoepitelyal hücrelerinin kasılması oksitosin yanıt olarak ortaya çıkar ve kanallar boyunca ve meme ucu içine süt fırlatma yol açar. Süt proteinleri içeren karmaşık bir sıvı (çoğunluklakazein), şekerler (özellikle laktoz) gibi immünoglobulinler A (IgA), büyüme faktörleri ve hormonlar gibi lipidler ve mineraller gibi biyolojik olarak aktif moleküller. Kazeinler, yani salgı yolu boyunca taşınan miseller, kazein, supramoleküler yapılarda monte sentezlenebilir ve daha sonra exocytosis tarafından yayımlanan, yani Mesc apikal plazma membranı ile kazein içeren salgı kabarcıklarına füzyonu (SVS) (Şekil 2). Hücre içi trafik membranöz bölmeleri arasındaki maddi borsalarında dayanır ve gerektirir Çözünür N-etilmaleimit Duyarlı Füzyon (NSF) Eklenti Protein (SNAP) Reseptör (SNARE) 30,31. SNARE proteinleri ailesi, hedef zarlarında lokalize veziküler vesikül membran içinde mevcut tuzak (v tuzak), ve hedef tuzak (t-tuzak) bölünmüştür. Bunların halkalaştırılmış halka etki ile sıkıştırma ile, v-ve t-tuzak oldukça dengeli bir dört sarmal demet kompleksi oluşturmak üzere birleşir, ifade inci gibie SNARE kompleksi. Bu kompleks giderek yakın 30,32 içine getirerek iki karşıt lipit bilayers füzyon teşvik etmektedir. Daha sonra, Snare kompleksleri NSF adenozin trifosfat tarafından ayrışmış ve onun adaptör protein SNAP ve Snare proteinler kökenli 33 kendi bölmesine geri geri dönüştürülür. İlginçtir ki, her SNARE protein ağırlıklı hücre içi füzyon olayları 34 özgüllük katkıda bulunabilir farklı hücre bölmeleri ve SNARE eşleştirme bulunur. Daha önceki çalışmalar, en azından Protein 23 (SNAP23) ve veziküllü Associated Membrane Protein 8 (VAMP8) ve syntaxins (STX) sinaptozomal-ilişkili olduğunu göstermektedir -7 ve -12 kasein Ekzositoz 35,36 bir rol oynayabilir. Bu proteinler aynı zamanda sütün lipid fraksiyon, örneğin, süt yağı globülleri (MFG&#39;ler) 37 ile bağlantılı olarak tespit edilmiştir. Mevcut olan model, sitoplazmik lipid damlacıkları (clds) nötr l birikimi ile oluşturulmaktadır öne sürülenipids (özellikle triaçilgliseroller ve sterol esterleri) ve endoplazmik retikulum (ER) zarında 38-41 iki broşürler arasında anne diyet türetilen kolesterol. Büyük clds MESC apikal plazma membran ile sarılmış olan, tomurcuklanarak bunlar MFG&#39;lerin olarak yayınlanırlar MESCs apikal tarafında (çapı 1-10 um) nakledilirken küçük CLD füzyonuyla, en azından kısmen oluşturulmaktadır 40-42. Yavrular sütten ve MESCs giderek geri puberte durumuna (Şekil 1B, involution) için meme dokusunun gerileme neden apoptoz ile ölmek sonra Emzirme sona erer. İmmünofloresan (IF) araştırma ve klinik teşhis hem de biyoloji neredeyse tüm yönleriyle kullanılan yaygın bir analitik laboratuvar yöntemidir. Teknikler doku kesitlerinde yapılabilir IF (immünohistokimya, İHK) veya hücre (immünsitokimya, ICC) örnekleri. Bu güçlü bir yaklaşım fluorescent- kullanımına dayanmaktadırÖzellikle bu şekilde floresan mikroskobu aracılığıyla doku dağılım gözönünde canlandırılmasına olanak tanıyan ilgilenilen antijene (doğrudan ya da dolaylı olarak) bağlanan etiketli antikorlar. Floresan sinyalleri çoğunlukla numunenin kalitesi ve konsantrasyonu antikorların ve doğru olarak kullanma bağlıdır. Basit bir indirekt immunfloresan (IIF) protokolü süt ürünleri (kazein ve MFG&#39;ler) ve süt ürünleri salgılanması yer alan proteinler tespit etmek için sunulan fare meme dokusu (Şekil 3) donmuş bölümlerinde (butirofilin (BTN1), proteinler trampet). Bu protokol, doku toplama görüntü tedavi sonrası, eleştirel ve isteğe bağlı adımların yanı sıra bazı teknik önerilere kadar, tam bir İHK bakış sağlarken aynı zamanda sunulmuş ve tartışılmıştır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:756px;" width="755">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Dissection</td>
			<td style="width:155px;">Company</td>
			<td style="width:127px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:236px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Pins</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Ethanol</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Scissors</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scalpel and adapted blades</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Ice</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Towel paper</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Tissue sample preparation</td>
			<td style="width:155px;">Company</td>
			<td style="width:127px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Phosphate Buffered Saline (pH7.4)</td>
			<td style="width:155px;">Sigma</td>
			<td>P-3813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Paraformaldehyde (PFA, 32% EM grade, 100 ml)</td>
			<td style="width:155px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15714-S</td>
			<td>personnal protection equipment required WARNING: this product will expose you to Formaldehyde Gas, a chemical known to cause cancer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">OCT compound/Tissue Tek</td>
			<td style="width:155px;">Sakura</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sucrose (D-saccharose)</td>
			<td style="width:155px;">VWR</td>
			<td>27480.294</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Plastic molds</td>
			<td style="width:155px;">Dominique Dutscher</td>
			<td>39910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Liquid nitrogen</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Cryostat/sample support</td>
			<td style="width:155px;">Leica&#160;</td>
			<td>CM3050S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Razor blades (SEC35)</td>
			<td style="width:155px;">Thermo Scientific</td>
			<td>152200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Slide box</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Glass slides Superfrost/Superfrost Ultra Plus</td>
			<td style="width:155px;">Thermo Scientific</td>
			<td>10143560W90/1014356190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Brushes</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">IHC</td>
			<td style="width:155px;">Company</td>
			<td style="width:127px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Super Pap Pen</td>
			<td style="width:155px;">Sigma</td>
			<td>Z377821-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Permanent marker (black)</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:239px;">50 mM NH4Cl in PBS</td>
			<td style="width:155px;">Sigma</td>
			<td>A-0171</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">0.1 M glycine in PBS</td>
			<td style="width:155px;">VWR</td>
			<td>24403.367</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Antigen Retrieval solution: Tris 100 mM 5% urea pH9.6</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Heater (up to 100&#176;C)</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td style="width:155px;">Sigma</td>
			<td>A7906-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Vectashield (anti-fading mounting medium) without DAPI/with DAPI</td>
			<td style="width:155px;">Vector Laboratories</td>
			<td>H-1000/H-1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Glass coverslips 22x50mm (microscopy grade)</td>
			<td style="width:155px;">VWR</td>
			<td>CORN2980-225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Nail polish</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Primary antibodies</td>
			<td style="width:155px;">Company</td>
			<td style="width:127px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:239px;">Rabbit anti-mouse caseins (#7781; 1:50 dilution)</td>
			<td style="width:155px;">generously gifted by M.C. Neville (University of Colorado Health Sciences 
			Center, USA)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Mouse anti-cytokeratin 8 (CK8, clone 1E8, 1:50 dilution)</td>
			<td style="width:155px;">Biolegend (Covance)</td>
			<td>MMS-162P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Mouse anti-cytokeratin 14 (CK14, cloneLL002, 1:50 dilution)</td>
			<td style="width:155px;">Thermo Scientific</td>
			<td>MS-115-P0/P1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="126">
			<td height="126" style="height:126px;width:239px;">Rabbit anti-butyrophilin (1:300 dilution)</td>
			<td style="width:155px;">generously gifted by I.H. Mather (Department of Animal and Avian Sciences University of Maryland College Park, USA)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:239px;">Rabbit anti-Stx6 (1:50 dilution)</td>
			<td style="width:155px;">generously gifted S. Tooze 
			(Cancer Research UK, London Research Institute, London, UK)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Rabbit anti-VAMP4 (1:50 dilution)</td>
			<td style="width:155px;">Abcam</td>
			<td>ab3348</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Secondary antibodies</td>
			<td style="width:155px;">Company</td>
			<td style="width:127px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:239px;">Rhodamine-conjugated goat anti-rabbit IgG (H + L) (1:300 dilution)</td>
			<td style="width:155px;">Jackson ImmunoResearch Laboratories</td>
			<td>111-025-003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Counterstains</td>
			<td style="width:155px;">Company</td>
			<td style="width:127px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">Bodipy 493/503</td>
			<td style="width:155px;">Life Technologies (Molecular Probes)</td>
			<td>D-3922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:239px;">DAPI (4-6-diamidino-2-phenylindole)</td>
			<td style="width:155px;">Life Technologies (Molecular Probes)</td>
			<td>D-1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Observation/Image capture</td>
			<td style="width:155px;">Company</td>
			<td style="width:127px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="147">
			<td height="147" style="height:147px;width:239px;">conventional fluorescence microscope</td>
			<td style="width:155px;">Leica Leitz DMRB 
			microscope</td>
			<td></td>
			<td style="width:236px;">Standard filters for FITC, Rhodamine 
			and DAPI emissions,&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; &#215;63 oil-immersion objective (NA 1.3), DP50 imaging camera (Olympus), Cell&#710;F software (Olympus)</td>
		</tr>
		<tr height="147">
			<td height="147" style="height:147px;width:239px;">Laser Scanning Microscope (confocal microscopy)</td>
			<td style="width:155px;">Zeiss LSM 
			510 microscope</td>
			<td></td>
			<td style="width:236px;">Plan-Apochromat &#215;63 oil-immersion objective (NA 1.4),&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; CLSM 510 software,&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Confocal facilities, MIMA2 Platform, INRA Jouy-en-Josas, France, http://mima2.jouy.inra.fr/mima2)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Image treatment</td>
			<td style="width:155px;">Company</td>
			<td style="width:127px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ImageJ 1.49k software</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td></td>
			<td>Free software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

indirect immunofluorescence on frozen sections of mouse mammary gland

Dolaylı immünoflüoresans algılar ve bir dokuda ilgili proteinleri bulmak için kullanılır. Burada sunulan protokol proteinlerinin bağışıklık saptanması için bir tam ve basit bir yöntem olup, meme bezi laktasyondaki fare örnek olarak alınmıştır açıklanmaktadır. Özellikle fare meme bezi, doku fiksasyon ve dondurulmuş doku kesit diseksiyon ilgili doku örneklerinin hazırlanması için bir protokol, ayrıntılı olarak açıklanmıştır. Bir standart bir protokol isteğe bağlı antijen alma aşaması da dahil olmak üzere, dolaylı immünofloresan gerçekleştirmek için de sunulmaktadır. Etiketli doku kesitlerinin gözlem yanı sıra görüntü toplama ve post-tedavileri de belirtilmiştir. Bu prosedür, bir proteinin hücresel lokalizasyonu hayvan dokusunun koleksiyonundan tam bir bakış verir. Bu genel yöntem, diğer doku örnekleri uygulanabilir olsa da, çalışılan her doku / birincil antikor çift göre adapte edilmelidir.

Meme bezi toraks ve kemirgenler karın hem ventral yapısı boyunca yer alan deri altı bezdir. Gebelik sırasında fare bezleri beş çift konumu Şekil 4&#39;te gösterilmiştir. Meme bezi morfolojisi önemli ölçüde tam bir emzirme (Şekil 1B) hazırlamak için gerekli olan fonksiyonel değişiklikler yansıtan gelişimi sırasında değişir. Saf ya da doğum yapmamış hayvanlarda, meme bezi görülmesi zor olabilir ince bir yağ stroma içinde göm?...

Watch this Scientific Journal Video about Indirect Immunofluorescence on Frozen Sections of Mouse Mammary Gland at JoVE.com

Indirect Immunofluorescence on Frozen Sections of Mouse Mammary Gland

Bu makalede açıklanan dolaylı immünfloresan protokol algılama ve fare meme bezinde proteinlerin yerelleştirme verir. Tam bir yöntem olup, meme bezi örnekleri hazırlamak için floresan mikroskobu ile görüntü, doku kesitlerinde immunhistokimya gerçekleştirmek için ve görüntüleri yeniden verilir.

Fare Meme Bezinin Dondurulmuş Bölümler Dolaylı İmmünofloresan

Indirect immunofluorescence is used to detect and locate proteins of interest in a tissue. The protocol presented here describes a complete and simple ...

Research

JoVE Journal

Biology

Immunohistochemistry on Paraffin Sections of Mouse Epidermis Using Fluorescent Antibodies

Floresan Antikorlar Fare Epidermis Parafin Bölüm İmmünohistokimya

In the epidermis, immunohistochemistry is an efficient means of localizing specific proteins to their relative expression compartment; namely the basal, ...

Mouse Mammary Epithelial Cells form Mammospheres During Lactogenic Differentiation

Fare Meme Epitel Hücreleri lactogenic Farklılaşma sırasında Mammospheres formu

A phenotypic measure commonly used to determine the degree of lactogenic differentiation in mouse mammary epithelial cell cultures is the formation of ...

Mammary Epithelial Transplant Procedure

Meme Epitel Nakli Prosedürü

This article describes and compares the fat pad clearance procedure developed by DeOme KB et al.1 and the sparing procedure developed by Brill B et al.2, ...

Changes in Mammary Gland Morphology and Breast Cancer Risk in Rats

Sıçanlarda Meme Bezi Morfolojisi ve Meme Kanseri Riski değişiklikler

Studies in rodent models of breast cancer show that exposures to dietary/hormonal factors during the in utero and pubertal periods, when the mammary gland ...

Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles

Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles

Parafin ve Dondurulmuş Bölüm Drosophila Yetişkin Kaslar

The molecular characterization of muscular dystrophies and myopathies in humans has revealed the complexity of muscle disease and genetic analysis of ...

Isolation of Mouse Salivary Gland Stem Cells

Fare Tükürük Bezi Kök Hücre İzolasyonu

Mature salivary glands of both human and mouse origin comprise a minimum of five cell types, each of which facilitates the production and excretion of ...

Evaluation of Mammary Gland Development and Function in Mouse Models

Fare Modeller Meme Bezi Geliştirme ve Fonksiyon Değerlendirme

The human mammary gland is composed of 15-20 lobes that secrete milk into a branching duct system opening at the nipple. Those lobes are themselves ...

Single Cell Transcriptional Profiling of Adult Mouse Cardiomyocytes

Yetişkin Fare kardiyomiyositlerde Tek Hücre transkripsiyonel Profilleme

While numerous studies have examined gene expression changes from homogenates of heart tissue, this prevents studying the inherent stochastic variation ...

Intraductal Injection for Localized Drug Delivery to the Mouse Mammary Gland

Fare meme bezi Lokalize İlaç Teslim Intradüktal Enjeksiyon

Herein we describe a protocol to deliver various reagents to the mouse mammary gland via intraductal injections. Localized drug delivery and knock-down of ...

Effect of Male Accessory Gland Products on Egg Laying in Gastropod Molluscs

Gastropod Molluskların Yumurta döflenmesi erkek Aksesuar Bezi Ürünlerinin Etkisi

In internally fertilizing animals, seminal fluid is usually added to the spermatozoa, together forming the semen or ejaculate. Besides nourishing and ...