Name: purification and refolding to amyloid fibrils of (his)6-tagged recombinant shadoo protein expressed as inclusion bodies in e. coli
Uploaded: 2015-12-19T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Purification and Refolding to Amyloid Fibrils of His6-tagged Recombinant Shadoo Protein Expressed as Inclusion Bodies in E. coli at JoVE.com

The authors would like to acknowledge Natalie Doude and David Westerway (University of Alberta) for providing us Sho cDNA, Christophe Chevalier (INRA) for plasmid construction, Michel Br&#233;mont (INRA) for providing us BL21Sol bacteria; Christine Longin (INRA) for TEM assistance and Edith Pajot-Augy (INRA) for comments and proofreading.

1. Генерация плазмиды и Shadoo слова Примечание: ген, кодирующий белок мышиного Shadoo (Shadoo 25-122), субклонировали в вектор экспрессии ПЭТ-28 11. Этот клон был преобразован в E. палочка SoluBL21 бактериальный штамм, чтобы выразить Shadoo белок с N-концевой гексагистидино...

<ol>
	<li>Biasini, E., Turnbaugh, J. A., Unterberger, U., Harris, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prion+protein+at+the+crossroads+of+physiology+and+disease.">Prion protein at the crossroads of physiology and disease.</a> Trends in Neurosciences. 35, 92-103 (2012).</li><li>Colby, D. W., Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=De+novo+generation+of+prion+strains.">De novo generation of prion strains.</a> Nature Reviews. Microbiology. 9, 771-777 (2011).</li><li>Chiti, F., Dobson, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+misfolding,+functional+amyloid,+and+human+disease.">Protein misfolding, functional amyloid, and human disease.</a> Annual Review of Biochemistry. 75, 333-366 (2006).</li><li>Nelson, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+of+the+cross-beta+spine+of+amyloid-like+fibrils.">Structure of the cross-beta spine of amyloid-like fibrils.</a> Nature. 435, 773-778 (2005).</li><li>Murphy, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+amyloid+formation+and+membrane+interaction+with+amyloidogenic+proteins.">Kinetics of amyloid formation and membrane interaction with amyloidogenic proteins.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1768, 1923-1934 (2007).</li><li>Steunou, S., Chich, J. F., Rezaei, H., Vidic, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biosensing+of+lipid-prion+interactions:+insights+on+charge+effect,+Cu(II)-ions+binding+and+prion+oligomerization.">Biosensing of lipid-prion interactions: insights on charge effect, Cu(II)-ions binding and prion oligomerization.</a> Biosensors &amp; Bioelectronics. 26, 1399-1406 (2010).</li><li>Watts, J. C., Westaway, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+prion+protein+family:+diversity,+rivalry,+and+dysfunction.">The prion protein family: diversity, rivalry, and dysfunction.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1772, 654-672 (2007).</li><li>Westaway, D., Daude, N., Wohlgemuth, S., Harrison, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+PrP-like+proteins+Shadoo+and+Doppel.">The PrP-like proteins Shadoo and Doppel.</a> Topics in Current Chemistry. 305, 225-256 (2011).</li><li>Baillod, P., Garrec, J., Tavernelli, I., Rothlisberger, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prion+versus+doppel+protein+misfolding:+new+insights+from+replica-exchange+molecular+dynamics+simulations.">Prion versus doppel protein misfolding: new insights from replica-exchange molecular dynamics simulations.</a> Biochemistry. 52, 8518-8526 (2013).</li><li>Daude, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wild-type+Shadoo+proteins+convert+to+amyloid-like+forms+under+native+conditions.">Wild-type Shadoo proteins convert to amyloid-like forms under native conditions.</a> Journal of Neurochemistry. 113, 92-104 (2010).</li><li>Li, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shadoo+binds+lipid+membranes+and+undergoes+aggregation+and+fibrillization.">Shadoo binds lipid membranes and undergoes aggregation and fibrillization.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 438, 519-525 (2013).</li><li>Watts, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CNS+glycoprotein+Shadoo+has+PrP(C)-like+protective+properties+and+displays+reduced+levels+in+prion+infections.">The CNS glycoprotein Shadoo has PrP(C)-like protective properties and displays reduced levels in prion infections.</a> The EMBO Journal. 26, 4038-4050 (2007).</li><li>Watts, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protease-resistant+prions+selectively+decrease+Shadoo+protein.">Protease-resistant prions selectively decrease Shadoo protein.</a> PLoS Pathogens. 7, e1002382 (2011).</li><li>Westaway, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Down-regulation+of+Shadoo+in+prion+infections+traces+a+pre-clinical+event+inversely+related+to+PrP(Sc)+accumulation.">Down-regulation of Shadoo in prion infections traces a pre-clinical event inversely related to PrP(Sc) accumulation.</a> PLoS Pathogens. 7, e1002391 (2011).</li><li>Chevalier, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PB1-F2+influenza+A+virus+protein+adopts+a+beta-sheet+conformation+and+forms+amyloid+fibers+in+membrane+environments.">PB1-F2 influenza A virus protein adopts a beta-sheet conformation and forms amyloid fibers in membrane environments.</a> The Journal of Biological Chemistry. 285, 13233-13243 (2010).</li><li>Tarus, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oligomerization+paths+of+the+nucleoprotein+of+influenza+A+virus.">Oligomerization paths of the nucleoprotein of influenza A virus.</a> Biochimie. 94, 776-785 (2012).</li><li>Biancalana, M., Koide, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanism+of+Thioflavin-T+binding+to+amyloid+fibrils.">Molecular mechanism of Thioflavin-T binding to amyloid fibrils.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1804, 1405-1412 (2010).</li><li>Minic, J., Sautel, M., Salesse, R., Pajot-Augy, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Yeast+system+as+a+screening+tool+for+pharmacological+assessment+of+g+protein+coupled+receptors.">Yeast system as a screening tool for pharmacological assessment of g protein coupled receptors.</a> Current Medicinal Chemistry. 12, 961-969 (2005).</li><li>Schein, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cool+way+to+make+proteins.">A cool way to make proteins.</a> Nature Biotechnology. 22, 826-827 (2004).</li><li>Sorensen, H. P., Mortensen, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+genetic+strategies+for+recombinant+protein+expression+in+Escherichia+coli.">Advanced genetic strategies for recombinant protein expression in Escherichia coli.</a> Journal of Biotechnology. 115, 113-128 (2005).</li><li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+glycosylation+enhances+ubiquitin-mediated+proteasomal+degradation+of+Shadoo+in+Scrapie-infected+rodents+and+cultured+cells.">Disruption of glycosylation enhances ubiquitin-mediated proteasomal degradation of Shadoo in Scrapie-infected rodents and cultured cells.</a> Molecular Neurobiology. 49, 1373-1384 (2014).</li><li>Englund, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+and+biosynthesis+of+glycosyl+phosphatidylinositol+protein+anchors.">The structure and biosynthesis of glycosyl phosphatidylinositol protein anchors.</a> Annual Review of Biochemistry. 62, 121-138 (1993).</li><li>Puig, B., Altmeppen, H., Glatzel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+GPI-anchoring+of+PrP:+implications+in+sorting+and+pathogenesis.">The GPI-anchoring of PrP: implications in sorting and pathogenesis.</a> Prion. 8, 11-18 (2014).</li></ol>

Простой и эффективный протокол для обоих экспрессии и очистки большого количества рекомбинантного белка мыши Shadoo представлена. Метод, описанный позволяет успешно растворения и очистки (6 Его) -tagged рекомбинантного белка Shadoo. Важно, как отметил в названии, что при экспрессии в прок?...

Прионные нейродегенеративных заболеваний, в том числе крупного рогатого скота губчатой ​​энцефалопатии крупного рогатого скота, овец скрепи в и болезни Крейтцфельдта-Якоба у человека, являются фатальными и неизлечимая. Прионные болезни характеризуются конформационных изменений клеточного прионного белка в основном состоит из альфа-спиралей, в поперечном бета-амилоида, обогащенный листа конформера 1,2. Кросс-бета-структуры содержат плотно и высоко упорядоченные кристаллические, как бета-листов стабилизируется водородными связями 3,4. Прионные амилоиды может самовоспроизведению в связи с бета-нитей на растущий край, обеспечивающих шаблон для вербовки и преобразования мономера белка. По данным &quot;только белок&quot; гипотезы, амилоид конформер прионного белка является единственным инфекционный агент. Тем не менее, некоторые другие биомолекулы были предложены, чтобы быть необходимым расстройств прионов. Например, клеточные мембраны, как считается, это место, где Конверсина происходит, и некоторые отрицательно заряженные липиды были показаны для улучшения процесса преобразования 5,6. Кроме того, некоторые белки могут быть также вовлечены в прионных патологий. В частности, есть два других члена семейства белков прионов: Двухместный и Shadoo 7,8. Двухместный имеет относительно жесткую конструкцию стабилизированной ди-сульфидных мостиков и не к самостоятельной полимеризации и совокупности с амилоидных фибрилл 9. В отличие от этого, похожи на прионного белка, Shadoo может принять β-листа, обогащенный структуру и самоассоциации в амилоидных фибрилл структур. Было показано, что Shadoo может фибрилляции в нативных условиях или при связывании отрицательно заряженные мембраны 10,11. Преобразование Shadoo в амилоидоподобных волокон могут быть связаны с патологией. Действительно, механизмы, с помощью которых амилоидные структуры, подобные вызывают заболевание мало изучены. Shadoo несет гидрофобный домен (HD) и ряд тандем Arg / Gly повторяет аналогичную тО, N-концевой части белка приона (1А). Как N-концевой части прионного белка, Shadoo высоко положительно заряженные и, кажется, изначально неструктурированного белка 11,12. Shadoo, кажется, функционально связанных с нарушениями прионов, так как это может непосредственно связываться прионов протеина. Кроме того, его экспрессия вниз регулируется во время прионов патологии 13,14. Однако роль Shadoo в прион болезни еще не установлена. Мы разработали плазмиду, несущую кодирующую последовательность гена мыши Shadoo. Плазмиду использовали дл трансформации E. палочка для производства N-концевой Его 6 фьюжн Shadoo белка. Эта система выражение хорошо зарекомендовали себя в нашей лаборатории и широко используется в наших текущих проектов 6,15,16. Важным вопросом для выражения Shadoo является выбор Е. Штамм. В то время как компетентный BL21 бактериальный штамм обычно используется для экспрессии рекомбинантного пробелки Shadoo успешно экспрессировали и очищали только из трансформированной SoluBL21 бактериального штамма. SoluBL21 компетентный Е. палочка является улучшенной мутант штамма BL21 принимающей разработана для производства белков, экспрессия в родительском BL21 не дали детектируемой растворимый продукт. Высокого уровня экспрессии Shadoo в SoluBL21 Е. палочка приводит к накоплению белка в тельцах включения. В общем, когда функции, неродного белок высоко выраженной в E. палочка, этот белок имеет тенденцию накапливаться в нерастворимых телец включения. Shadoo вероятно, агрегаты через нековалентных гидрофобных взаимодействий или ионных (или сочетание того и другого) в высокообогащенных динамических структур в сложенном белке или иной степени. В результате, очистка включает по меньшей мере из двух шагов: (I) селективное отделение белка из других биомолекул в денатурации среды, и (II) а ренатурация очищенного белка с использованием в пробирке складыванияметоды. Селективное разделение Shadoo была достигнута в буферном растворе, содержащем 8 М мочевину (или альтернативно 6 М гуанидин-HCl)-. Удаление мочевины и ренатурации белков может быть сделано путем применения различных протоколов: (I) ренатурации в кислом растворе рН для получения неструктурированных мономерного Shadoo белок, или (II) ренатурации в растворе рН ≥ 7, чтобы получить Shadoo полимеризованное в стабильных амилоидных волокон с характерными кросс-β-листов мотивами.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>AKTA FPLC&#160;</td>
			<td>GE, Amersham</td>
			<td># 1363</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiLoad 16/60 Superdex</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-1069-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiTrap IMAC</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>GE17-0920-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HiPrep26/10 Desalting column</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>GE17-5087-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SoluBL21 Competent E. coli</td>
			<td>Genlantis</td>
			<td>C700200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pET-28b+</td>
			<td>Novogen</td>
			<td>69865-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IPTG</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I6758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB-Broth medium</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L3022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Biophotometar</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>550507804</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trito X-100</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>85111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NiSO4</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>656895</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E6758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>RES3098T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease Inhibitor Cocktail Tablets</td>
			<td>Roche</td>
			<td>4693116001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>746398</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imidazol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I5513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gdn-HCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G4505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>protein size marker&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>26620</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

purification and refolding to amyloid fibrils of (his)6-tagged recombinant shadoo protein expressed as inclusion bodies in e. coli

Система выражение палочка Escherichia является мощным инструментом для получения рекомбинантных белков эукариот. Мы используем его, чтобы произвести Shadoo, белок, относящийся к семейству прионов. Хроматографический метод очистки (Его) 6 -tagged рекомбинантного Shadoo выражается тела включения описан. Тела включени солюбилизируют в 8М мочевине и связан с 2+ -charged колонке Ni выполнить ионный аффинной хроматографии. Связанные белки элюируют градиентом имидазола. Фракции, содержащие белок Shadoo подвергают вытеснительной хроматографии с получением высокоочищенного белка. На заключительном этапе очищенный Shadoo обессоливают удалить соли, мочевину и имидазола. Рекомбинантный белок Shadoo является важным реагентом для биофизических и биохимических исследований конформации белка нарушений, происходящих в прионных заболеваний. Многие доклады продемонстрировали, что прионные нейродегенеративные заболевания происходят из осаждения ударале, приказал амилоидные фибриллы. Примеры протоколов, описывающие, как фибриллировать Shadoo в амилоидных фибрилл в кислой и нейтральной / основные значения рН представлены. Методы о том, как производить и фибрилляции Shadoo может способствовать исследования в лабораториях, работающих на прионных заболеваний, так как он позволяет производства больших количеств белка в быстрой и дешевой манере.

Около 5-10 мг очищенного белка Shadoo получается на литр бактериальной культуры. Двухступенчатый очистки необходимо для получения рекомбинантного Shadoo высокой чистоты. Первый этап выполняется с помощью аффинной хроматографии с Ni 2+ -charged столбца, сохраняет свои-меченых белков. Элюиров...

Watch this Scientific Journal Video about Purification and Refolding to Amyloid Fibrils of His6-tagged Recombinant Shadoo Protein Expressed as Inclusion Bodies in E. coli at JoVE.com

Purification and Refolding to Amyloid Fibrils of His6-tagged Recombinant Shadoo Protein Expressed as Inclusion Bodies in E. coli

A two-step chromatographic method is described for the purification of recombinant Shadoo protein expressed as inclusion bodies in Escherichia coli, as well as a protocol to fibrillate purified Shadoo into amyloid structures.

Очистка и повторной укладки в амилоидных фибрилл в (Его)<sub&gt; 6</sub&gt; -tagged рекомбинантный белок Shadoo Выраженный в виде телец включения в<em&gt; Кишечная палочка</em

The Escherichia coli expression system is a powerful tool for the production of recombinant eukaryotic proteins. We use it to produce Shadoo, a protein ...

Research

JoVE Journal

Biology

Purification and Refolding to Amyloid Fibrils of (His)6-tagged Recombinant Shadoo Protein Expressed as Inclusion Bodies in E. coli

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

Патч зажим Запись ионных каналов, выраженные в ооцитов Xenopus

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

Окрашивание белков в гелях Кумасси G-250 без органических растворителей и уксусной кислоты

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Mutagenesis and Functional Selection Protocols for Directed Evolution of Proteins in E. coli

Mutagenesis and Functional Selection Protocols for Directed Evolution of Proteins in E. coli

Мутагенеза и функциональные Выбор протоколов для направленной эволюции белков в Е. палочки</em

The efficient generation of genetic diversity represents an invaluable molecular tool that can be used to label DNA synthesis, to create unique molecular ...

Purification of Hsp104, a Protein Disaggregase

Очистка Hsp104, белка Disaggregase

Hsp104 is a hexameric AAA+ protein1 from yeast, which couples ATP hydrolysis to protein disaggregation2-10 (Fig. 1). This activity imparts two key ...

Identification of Protein Complexes in Escherichia coli using Sequential Peptide Affinity Purification in Combination with Tandem Mass Spectrometry

Identification of Protein Complexes in Escherichia coli using Sequential Peptide Affinity Purification in Combination with Tandem Mass Spectrometry

Определение белковых комплексов в<em&gt; Кишечной палочки</em&gt; С помощью последовательного аффинной очистки пептидов в сочетании с тандемной масс-спектрометрии

Since most cellular processes are mediated by macromolecular assemblies, the systematic identification of protein-protein interactions (PPI) and the ...

Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae

Coupled Assays for Monitoring Protein Refolding in Saccharomyces cerevisiae

В сочетании Анализы для мониторинга рефолдинг Белок в<em&gt; Saccharomyces CEREVISIAE</em

Proteostasis, defined as the combined processes of protein folding/biogenesis, refolding/repair, and degradation, is a delicate cellular balance that must ...

Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein Expressed in Saccharomyces cerevisiae

Purification of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Protein Expressed in Saccharomyces cerevisiae

Очистка муковисцидоза трансмембранного регулятора проводимости белка выражается в<em&gt; Saccharomyces CEREVISIAE</em

Defects in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) protein cause cystic fibrosis (CF), an autosomal recessive disease that ...

High Throughput Quantitative Expression Screening and Purification Applied to Recombinant Disulfide-rich Venom Proteins Produced in E. coli

High Throughput Quantitative Expression Screening and Purification Applied to Recombinant Disulfide-rich Venom Proteins Produced in E. coli

Высокая пропускная количественном выражении Скрининг и очистка Применительно к рекомбинантный дисульфид-богатые Venom белков, продуцируемых в<em&gt; Е. палочка</em

Escherichia coli (E. coli) is the most widely used expression system for the production of recombinant proteins for structural and functional studies. ...

Non-chromatographic Purification of Recombinant Elastin-like Polypeptides and their Fusions with Peptides and Proteins from Escherichia coli

Non-chromatographic Purification of Recombinant Elastin-like Polypeptides and their Fusions with Peptides and Proteins from Escherichia coli

Номера хроматографической очистки рекомбинантного Эластин-подобных полипептидов и их слияний с пептидов и белков с<em&gt; Кишечная палочка</em

Elastin-like polypeptides are repetitive biopolymers that exhibit a lower critical solution temperature phase transition behavior, existing as soluble ...

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

Зеленый флуоресцентный белок на основе Expression Скрининг мембранных белков в<em&gt; Кишечная палочка</em

The production of recombinant membrane proteins for structural and functional studies remains technically challenging due to low levels of expression and ...