Name: visualization of twitching motility and characterization of the role of the pilg in xylella fastidiosa
Uploaded: 2016-04-08T14:00:00
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Cette étude a été soutenue par United States Department of Agriculture, Agricultural Research Service. Les noms commerciaux ou de produits commerciaux dans cette publication sont mentionnés uniquement dans le but de fournir des informations spécifiques et ne signifie pas qu&#39;ils sont approuvés par le ministère de l&#39;Agriculture des États-Unis. L&#39;USDA est un fournisseur d&#39;égalité des chances et de l&#39;employeur.

1. Le périphérique de Fringe bactérienne Colony <ol><li> Cultivez X. fastidiosa (Xf) Temecula de type sauvage 22, Pilg suppression mutant Xf ΔpliG ( en utilisant la stratégie de suppression décrit précédemment 23), et son complémentaire XfΔpliG -C ( en utilisant précédemment décrit sur ​​la base du chromosome stratégie de complémentation génétique 24) sur PD2 moyen des plaques de gélose 25 à 28 ° C...

<ol>
	<li>Purcell, A. H., Hopkins, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fastidious+xylem-limited+bacterial+plant+pathogens.">Fastidious xylem-limited bacterial plant pathogens.</a> Annu. Rev. Phytopathol. 34, 131-151 (1996).</li><li>Purcell, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xylella+fastidiosa,+a+regional+problem+or+global+threat.">Xylella fastidiosa, a regional problem or global threat.</a> J. Plant Pathology. 79, 99-105 (1997).</li><li>Hopkins, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xylella+fastidiosa:+Xylem-limited+bacterial+pathogen+of+plants.">Xylella fastidiosa: Xylem-limited bacterial pathogen of plants.</a> Annu. Rev. Phytopathol. 27, 271-290 (1989).</li><li>Mattick, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+IV+pili+and+twitching+motility.">Type IV pili and twitching motility.</a> Annu. Rev. Microbiol. 56, 289-314 (2002).</li><li>Meng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Upstream+migration+of+Xylella+fastidiosa+via+pilus-driven+twitching+motility.">Upstream migration of Xylella fastidiosa via pilus-driven twitching motility.</a> J. Bacteriol. 187, 5560-5567 (2005).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+I+and+type+IV+pili+of+Xylella+fastidiosa+affect+twitching+motility,+biofilm+formation+and+cell-cell+aggregation.">Type I and type IV pili of Xylella fastidiosa affect twitching motility, biofilm formation and cell-cell aggregation.</a> Microbiology. 153, 719-726 (2007).</li><li>Simpson, A. J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genome+sequence+of+the+plant+pathogen+Xylella+fastidiosa.">The genome sequence of the plant pathogen Xylella fastidiosa.</a> Nature. 406, 151-157 (2000).</li><li>Maier, B., Potter, L., So, M., Long, C. D., Seifert, H. S., Sheetz, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+pilus+motor+forces+exceed+100+pN.">Single pilus motor forces exceed 100 pN.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99, 16012-16017 (2002).</li><li>Touhami, A., Jericho, M. H., Boyd, J. M., Beveridge, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoscale+characterization+and+determination+of+adhesion+forces+of+Pseudomonas+aeruginosa+pili+by+using+atomic+force+microscopy.">Nanoscale characterization and determination of adhesion forces of Pseudomonas aeruginosa pili by using atomic force microscopy.</a> J. Bacteriol. 188, 370-377 (2006).</li><li>Skerker, J. M., Berg, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+observation+of+extension+and+retraction+of+type+IV+pili.">Direct observation of extension and retraction of type IV pili.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 98, 6901-6904 (2001).</li><li>Brown, D. C., Larson, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvements+to+parallel+plate+flow+chambers+to+reduce+reagent+and+cellular+requirements.">Improvements to parallel plate flow chambers to reduce reagent and cellular requirements.</a> BMC Immunol. 2, 9 (2001).</li><li>Thomas, W. E., Nilsson, L. M., Forero, M., Sokurenko, E. V., Vogel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shear-dependent+'stick-and-roll'+adhesion+of+type+1+fimbriated+Escherichia+coli.">Shear-dependent 'stick-and-roll' adhesion of type 1 fimbriated Escherichia coli.</a> Mol. Microbiol. 53, 1545-1557 (2004).</li><li>Thomas, W. E., Trintchina, E., Forero, M., Vogel, V., Sokurenko, E. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+adhesion+to+target+cells+enhanced+by+shear+force.">Bacterial adhesion to target cells enhanced by shear force.</a> Cell. 109, 913-923 (2002).</li><li>Bahar, O., Fuente, D. L., Burdman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+adhesion,+biofilm+formation+and+motility+of+Acidovorax+citrulli+using+microfluidic+flow+chambers.">Assessing adhesion, biofilm formation and motility of Acidovorax citrulli using microfluidic flow chambers.</a> FEMS Microbiol. Lett. 312, 33-39 (2010).</li><li>Thomas, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+a+laminar+flow+system+to+explain+shear-enhanced+bacterial+adhesion.">Using a laminar flow system to explain shear-enhanced bacterial adhesion.</a> Proceedings of ICMM2005, Third International Conference on Microchannels and Mini-channels. , 751-759 (2005).</li><li>Fuente, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+adhesion+forces+of+type+I+and+type+IV+pili+of+Xylella+fastidiosa+bacteria+by+use+of+a+microfluidic+flow+chamber.">Assessing adhesion forces of type I and type IV pili of Xylella fastidiosa bacteria by use of a microfluidic flow chamber.</a> Appl. Environ. Microbiol. 73, 2690-2696 (2007).</li><li>DeLange, P. A., Collins, T. L., Pierce, G. E., Robinson, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PilJ+localizes+to+cell+poles+and+is+required+for+type+IV+pilus+extension+in+Pseudomonas+aeruginosa.">PilJ localizes to cell poles and is required for type IV pilus extension in Pseudomonas aeruginosa.</a> Curr Microbiol. 55, 389-395 (2007).</li><li>Fuente, D. L., Burr, T. J., Hoch, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+type+I+and+type+IV+pilus+biosynthetic+genes+affect+twitching+motility+rates+in+Xylella+fastidiosa.">Mutations in type I and type IV pilus biosynthetic genes affect twitching motility rates in Xylella fastidiosa.</a> J. Bacteriol. 189, 7507-7510 (2007).</li><li>Ferandez, A., Hawkins, A. C., Summerfield, D. T., Harwood, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cluster+II+che+genes+from+Pseudomonas+aeruginosa+are+required+for+an+optimal+chemotactic+response.">Cluster II che genes from Pseudomonas aeruginosa are required for an optimal chemotactic response.</a> J. Bacteriol. 184, 4374-4383 (2002).</li><li>Cursino, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+an+Operon,+Pil-Chp,+That+Controls+Twitching+Motility+and+Virulence+in+Xylella+fastidiosa.">Identification of an Operon, Pil-Chp, That Controls Twitching Motility and Virulence in Xylella fastidiosa.</a> Mol. Plant Microbe Interact. 10, 1198-1206 (2011).</li><li>Hazelbauer, G. L., Falke, J. J., Parkinson, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+chemoreceptors:+High-performance+signaling+in+networked+arrays.">Bacterial chemoreceptors: High-performance signaling in networked arrays.</a> Trends Biochem. Sci. 33, 9-19 (2008).</li><li>Costa, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+hosts+of+Xylella+fastidiosa+in+and+near+southern+California+vineyards.">Plant hosts of Xylella fastidiosa in and near southern California vineyards.</a> Plant Dis. 88, 1255-1261 (2004).</li><li>Shi, X. Y., Dumenyo, C. K., Hernandez-Martinez, R., Azad, H., Cooksey, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+regulatory+pathways+in+Xylella+fastidiosa:+genes+and+phenotypes+controlled+by+algU.">Characterization of regulatory pathways in Xylella fastidiosa: genes and phenotypes controlled by algU.</a> Appl. Environ. Microbiol. 73, 6748-6756 (2007).</li><li>Matsumoto, A., Young, G. M., Igo, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome-Based+Genetic+Complementation+System+for+Xylella+fastidiosa.">Chromosome-Based Genetic Complementation System for Xylella fastidiosa.</a> Appl. Environ. Microbiol. 75, 1679-1687 (2009).</li><li>Davis, M. J., Purcell, A. H., Thomson, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+Media+for+the+Pierce's+Disease+Bacterium.">Isolation Media for the Pierce's Disease Bacterium.</a> Phytopathology. 70, 425-429 (1980).</li><li>Xia, Y. N., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soft+lithography.">Soft lithography.</a> Annu. Rev. Mater. Sci. 28, 153-184 (1998).</li><li>Chaudhury, M. K., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+measurement+of+interfacial+interactions+between+semispherical+lenses+and+flat+sheets+of+poly-(dimethylsiloxane)+and+their+chemical+derivatives.">Direct measurement of interfacial interactions between semispherical lenses and flat sheets of poly-(dimethylsiloxane) and their chemical derivatives.</a> Langmuir. 7, 1013-1025 (1991).</li><li>Cruz, L. F., Parker, J. K., Cobine, P. A., De La Fuente, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium-enhanced+twitching+motility+in+Xylella+fastidiosa+is+linked+to+a+single+PilY1+homolog.">Calcium-enhanced twitching motility in Xylella fastidiosa is linked to a single PilY1 homolog.</a> Appl. Environ. Microbiol. 80, 7176-7196 (2014).</li></ol>

Dans cette étude, nous avons caractérisé le comportement de mouvement de X. fastidiosa Pilg mutant Xf ΔpilG et ses souches complémentaires XfΔpilG- C dans nouvellement conçu-nano-canaux parallèles micro multiples chambres fl uidique. Les nouvellement conçu micro fl uidique chambres peuvent avoir jusqu&#39;à quatre chambres parallèles avec 100 um nano-canal dans la largeur par rapport aux modèles antérieurs avec un seul 50 m de large canal 18. Le canal ...

Xylella fastidiosa est une bactérie pathogène Gram-négatif non flagellé, qui provoque un certain nombre de maladies des cultures économiquement importantes, y compris la maladie de Pierce de la vigne (Vitis vinifera) 1,2, 3. Cette bactérie est limitée à la xylème conduite d&#39;eau navires. Infection de la vigne provoque le blocage des vaisseaux du xylème et des résultats dans le stress hydrique et les carences nutritionnelles 3. Colonisation réussie dépend de l&#39;aptitude de la bactérie à se déplacer à partir du site initial d&#39;infection pour le reste de la plante 3. Secousses motilité est un moyen de mouvement bactérienne flagellaire indépendante à travers l&#39;extension, l&#39; attachement et la rétraction de type polaire IV pili 4 qui a été caractérisé en X. fastidiosa 5,6,7. La motilité des secousses a été observé par des pinces laser et microscopie à force atomique (AFM) 8,9,10. En utilisant ces techniques, tmotilités witching générés par type IV pili de N. gonorrhoeae et P. aeruginosa ont été caractérisées par fl pili d&#39;étiquetage uorescently et capturer leurs mouvements microscopiques. Bien que les deux méthodes ont détaillé la force adhésive de bactéries individuelles, les procédures sont compliquées et prennent du temps 9,10. Les micro fl uidique chambres ont été utilisés pour observer la migration à longue distance des cellules individuelles, ainsi que de petits agrégats de cellules bactériennes 5,6. Ces chambres ont été conçues comme un nano-canal microfabriqué dans une plaque intégrée avec un time-lapse système d&#39;enregistrement d&#39;image 11,12,13,14. Micro fl dispositifs de chambre uidique offrent plusieurs avantages pour étudier le comportement de mouvement et cellule-cellule interactions de bactéries: (i) il fournit une plate-forme intégrée avec de multiples capacités de canal; (Ii) il peut examiner les motions et agrégations de cellules individuelles dans les caractéristiques à l&#39;échelle nanométrique de bactéries; (Iii) elle permet m directeicroscopic enregistrement d&#39;images de cellules bactériennes et l&#39;analyse time-lapse, (iv) il fournit des observations spatiales et temporelles à long terme des populations individuelles et / ou de bactéries dans un micro-environnement; (V) le débit du milieu de culture dans un canal peut être contrôlée avec précision et (vi) seulement un très petit volume (1 ml) de milieu de culture est nécessaire pour chaque expérience. Récemment, le fl uidique fl ow système micro a été utilisé pour étudier les comportements des cellules bactériennes dans diverses microenvironnements 14,15,16. L&#39;adhérence et la fixation de surface de E. coli 15 X. fastidiosa 16 et Acidovorax citrulli 14 aux surfaces de verre ont été évaluées à l&#39; aide de micro fl uidique chambres. La formation et l&#39; agrégation bio fi lm médiée par pili de type IV de Acidovorax citrulli ont été analysées 14. En outre, le mouvement de A. citrulli observée sous fl ux conditions ont démontré que le pili de type IV peut jouer un rôle important dans la colonisation et la propagation de A. citrulli dans les vaisseaux du xylème sous aubier fl ow conditions. Les motilités de secousses de Pseudomonas aeruginosa et X. fastidiosa cellules ont été observées avec succès contre un courant de fluide dans une chambre d&#39;écoulement microfabriqué 5,6,17. Pili de type IV deficient mutants et PilB pilQ de X. fastidiosa ont été trouvés pour modifier profondément la vitesse de secousses motilité dans les conditions de fl ux dans les micro - dispositifs fl uidique 5,6,18. Les études menées sur l&#39; adhésion des bactéries et de la mobilité dans des dispositifs micro fl uidique indiquent que les micro fl uidique chambres sont particulièrement appropriés pour l&#39; analyse de la motilité des tics et de la migration des bactéries médiée par pili in vitro. Ces résultats expliquent le mécanisme de migration des contractions médiée qui facilite la fixation cellule-cellule, l&#39;agrégation et de la colonisation dans lesl&#39;hôte, éventuellement conduire à une infection systémique. Pil-Chp opéron de X. fastidiosa contient Pilg, Pili, pilJ, Pill, CHPB et epa signal qui encode la transduction pathways 20. Les chémorécepteurs transmembranaires lient des stimuli chimiques dans le domaine périplasmique et activent une cascade de signalisation dans leur partie cytoplasmique de contrôler finalement bactérienne tics motilité. Dans l&#39;opéron Pil-Chp de X. fastidiosa, une protéine phospho-Pilg de navette est un homologue de CheY. Dans E. coli et P. aeruginosa, CheY est le régulateur de réponse dans les systèmes de chimiotaxie qui interagissent avec les protéines motrices de flagelles 19, 21. Bien que les contributions de l&#39;opéron Pil-Chp vers la virulence dans X. fastidiosa a été examinée récemment 20, le rôle de la chimiotaxie Pilg dans opéron en réponse aux signaux de l&#39; environnement régulé et / moteur pili de type IV de X. fastidiosa est unclear. Pour élucider la compréhension du régulateur de chimiotaxie Pilg dans l&#39;activité de motilité des tics X. fastidiosa, une chambre fl uidique micro est utilisé pour évaluer la motilité des secousses de X. fastidiosa. Le Pilg de X. fastidiosa se ​​caractérise en comparant les phénotypes d&#39;un mutant de délétion Xf ΔpliG, souche complémentaire XfΔpliG C et son type sauvage in vitro. Les résultats mettent en évidence le rôle de Pilg dans la motilité des secousses de X. fastidiosa.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Biology materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X. fastidiosa (Xf) Temecula wild type</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Costa, H. S., et al., 2004 22</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pilG deletion mutant Xf&#916;pliG</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Shi, X. Y., et al., 2007 26</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pilG complementary strain Xf&#916;pliG-C&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Davis, M. J., wt al. 1998 23</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Physical materials and equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable inoculating loops</td>
			<td>VWR international, Radnor, PA</td>
			<td>#22-363-607</td>
			<td>quantitative procedures such as bacterial collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polydimethylsiloxane (PDMS)</td>
			<td>Dow Corning Corporation</td>
			<td>#0002709226</td>
			<td>Sylgard 184 silicone Elastomeric Kits</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AmScope MD2000 digital camera</td>
			<td>AmScope, Irvine, CA</td>
			<td>SE305R-AZ-E</td>
			<td>Image, video recording and measurement&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubes line</td>
			<td>Edgewood, NY</td>
			<td>#T4300</td>
			<td>Connected to the syringe and microfluidic chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic luer connectors</td>
			<td>Edgewood, NY</td>
			<td></td>
			<td>Connected to the syringe and microfluidic chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe pumps</td>
			<td>Pico Plus, Harvard Apparatus, MA</td>
			<td>#702209</td>
			<td>The flow rate can be adjusted while the pump is running.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes</td>
			<td>Gastight, Hemilton Company, Reno, NV</td>
			<td>#1005</td>
			<td>Provide the flowing broth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted Olympus IMT-2 microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IMT-2 FLuoro PHase</td>
			<td>Image observation and recording</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPOT-RT digital camera</td>
			<td>Diagnostic Instruments, Inc., MI</td>
			<td>RT230</td>
			<td>Image, video recording and measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Shutter</td>
			<td>The UNIBLITZ, US</td>
			<td>#LS2T2</td>
			<td>Control camera&#8217;s exposure time</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Shutter Control system</td>
			<td>The UNIBLITZ, US</td>
			<td>VCM-D1</td>
			<td>VCM-D1 Single Channel CE/UL/CSA Approved Shutter Driver</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MetaMorph Image software</td>
			<td>Universal Imaging Corp., PA</td>
			<td></td>
			<td>Real-time super-resolution image processing&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualization of twitching motility and characterization of the role of the pilg in xylella fastidiosa

Xylella fastidiosa est une bactérie non flagellée Gram négatif qui provoque un certain nombre de maladies économiquement importantes de plantes. La motilité des secousses fournit X. fastidiosa un moyen de déplacement à longue distance intra-plante et de la colonisation, contribuant à la pathogénicité dans X. fastidiosa. La motilité tics de X. fastidiosa est exploité par pili de type IV. Pili de type IV de Xylella fastidiosa sont réglementés par Pilg, un régulateur de chimiotactisme dans Pil-Chp codant pour des protéines de l&#39; opéron qui sont impliqués avec des voies de transduction du signal. Pour élucider le rôle des Pilg dans la motilité des secousses de X. fastidiosa, un Pilg mutant déficient Xf ΔpilG et sa souche complémentaire XfΔpilG- C contenant native Pilg ont été développés. A chambres microfluidiques intégrés avec un système d&#39;enregistrement d&#39;image time-lapse a été utilisé pour observer la motilité des contractions dans XfΔpIlg, XfΔpilG- C et sa souche de type sauvage. Grâce à ce système d&#39;enregistrement, il permet des observations spatiales et temporelles à long terme de l&#39; agrégation, la migration des cellules et des populations de bactéries via des tics motilité individuels. X. fastidiosa type sauvage et complémentaire souche XfΔpilG- C ont montré des caractéristiques typiques des secousses de la motilité directement observées dans les chambres d&#39;écoulement microfluidiques, alors que le mutant XfΔpliG présentait le phénotype déficient secousses. Cette étude démontre que Pilg contribue à la motilité des secousses de X. fastidiosa. La chambre d&#39;écoulement microfluidique est utilisé comme un moyen pour l&#39; observation des tics motilité.

La présence d&#39;une colonie frange périphérique indicative de pili de type IV à médiation par secousses motilité a été observée dans les colonies de X. fastidiosa type sauvage et complémentaire souche Xf ΔpliG -C (Figure 1). Mutant XfΔpliG, cependant, ne présentent pas une frange autour de la périphérie des colonies (figure 1). Imagerie time-lapse de cellules bactériennes dans des chambres d&#39;écou...

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Visualization of Twitching Motility and Characterization of the Role of the PilG in Xylella fastidiosa

Dans cette étude, une chambre d&#39;écoulement nano-microfluidique a été utilisé pour visualiser et caractériser fonctionnellement la motilité des secousses de Xylella fastidiosa, une bactérie qui cause la maladie de Pierce de la vigne.

Visualisation des Twitching motilité et caractérisation du rôle de la<em&gt; Pilg</em&gt; in<em&gt; Xylella fastidiosa</em

Xylella fastidiosa is a Gram-negative non-flagellated bacterium that causes a number of economically important diseases of plants. The twitching motility ...

The over goal of this protocol is to functionally characterize the genes responsbile for the twitching motility of bacteria using a nano microfluidic flow chamber integrated with a time-lapse image recording system.This method can help answer key questions about a bacteria phenotype and associated gene function, such as the twitching motility of bacteria.The main advantage of this technique is that it provides a special and a tempered observation for aggregation migration of individual cells and populations.Demonstrating this procedure will be Dr.Xiangyang Shi, a post-doc from my laboratory.Using a standardized deletion strategy, grow Temecula wild-type Xylella fastidiosa, grow pilG deletion mutants, and grow the complimentary strain all on PD2 medium agar plates.Incubate the bacteria at 28

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Isolement, caractérisation et Purification des Macrophages dans les tissus touchés par l’Inflammation associées à l’obésité

Obesity promotes a chronic inflammatory state that is largely mediated by tissue-resident macrophages as well as monocyte-derived macrophages. ...

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

Visualisation de Candida albicans dans le tractus gastro-intestinal murine utilisant l'hybridation fluorescente in Situ

Candida albicans is a fungal component of the gut microbiota in humans and many other mammals. Although C. albicans does not cause symptoms in most ...

Isolation and Characterization of Extracellular Vesicles Produced by Iron-limited Mycobacteria

Isolement et caractérisation des vésicules extracellulaires produites par des mycobactéries limitées en fer

Mycobacteria, including Mycobacterium tuberculosis (Mtb), the causative agent of human tuberculosis, naturally release extracellular vesicles (EVs) ...

Visualization, Quantification, and Mapping of Immune Cell Populations in the Tumor Microenvironment

Visualisation, quantification et cartographie des populations de cellules immunitaires dans le microenvironnement tumoral

The immune landscape of the tumor microenvironment (TME) is a determining factor in cancer progression and response to therapy. Specifically, the density ...

Visualization of Bacterial Resistance using Fluorescent Antibiotic Probes

Visualisation de la résistance bactérienne à l’aide de sondes antibiotiques fluorescentes

Fluorescent antibiotics are multipurpose research tools that are readily used for the study of antimicrobial resistance, due to their significant ...

Characterization of Immune Cells and Proinflammatory Mediators in the Pulmonary Environment

Caractérisation des cellules immunitaires et des médiateurs pro-inflammatoires en milieu pulmonaire

Immune cell expansion, activation, and trafficking to the lungs, which are controlled by the expression of multiple cytokines and chemokines, may be ...