Name: antibody binding specificity for kappa (v&#954;) light chain-containing human (igm) antibodies: polysialic acid (psa) attached to ncam as a case study
Uploaded: 2016-06-29T14:00:00
Duration: 11 min 10 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Antibody Binding Specificity for Kappa VÃŽÂº Light Chain-containing Human IgM Antibodies: Polysialic Acid PSA Attached to NCAM as a Case Study at JoVE.com

وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة (R01 GM092993، R01 NS048357 وR21 NS073684)، المؤسسة الوطنية للعلوم (جائزة التوظيف)، وجائزة مينيسوتا الشراكة للتكنولوجيا الحيوية وعلم الجينوم الطبية، وجمعية التصلب المتعدد الوطنية (CA1060A) ، ومركز مايو كلينيك للعلوم السريرية وبالحركة (CCATS). الكتاب يعترف بدعم من المؤسسات أبلباوم، هيلتون، بيترسون وسانفورد والقمر ومارلين صندوق لمدير حديقة والأسرة McNeilus.

Patents for antibodies that promote remyelination and CNS repair are issued and owned by Mayo Clinic. Authors have a potential conflict of interest.

أضداد الغلوبولين المناعي الطبيعي الإنسان جذابة المرشحين لالمناعية، وبينت الإمكانات العلاجية لعلاج الأمراض المختلفة ومنها السرطان واضطرابات الجهاز العصبي المركزي 1-7. مفيد، فإن هذه الأجسام المضادة لا يثير استجابة مناعية في أي جيل من تحييد الأجسام المضادة يقلل كثيرا من الجرعة العلاجية الفعالة وفعالية. الأهم من ذلك، كانت جميع الأجسام المضادة مع الإمكانات العلاجية من نمط إسوي IgM و تنتمي إلى مرجع NAB 3-5،8،9،37،40،42-45. وهناك عقبة رئيسية لتطبيق السريرية المحتملة من الأجسام المضادة الغلوبولين المناعي هي التعرف على مولدات المضادات، والتي هي غير محددة في كثير من الحالات. التقنيات القياسية المستخدمة لالأجسام المضادة مفتش غالبا ما تكون غير قابلة للتطبيق لتحديد المستضد على الغلوبولين المناعي ل. يصف هذا البروتوكول تحديد PSA-NCAM كما مستضد لالتجديدي البشري الأجسام المضادة الغلوبولين المناعي HIgM12 وفعال في النماذج الحيوانيةمرض التصلب العصبي المتعدد وALS 15-18. المنهجية المستخدمة قابلة للتطبيق أساسا لجميع الأجسام المضادة البشرية مع سلاسل Vκ ضوء محددة VκI، VκIII وVκIV والأجسام المضادة الفأر مع سلاسل ضوء VκI، بغض النظر عن نمط إسوي الأجسام المضادة ل. الخطوة الأكثر أهمية في هذا البروتوكول هو استخدام الأجسام المضادة الغلوبولين المناعي في تطبيقات اللوني التقارب. وبشكل أكثر تحديدا، يطلب من الأجسام المضادة ناجحة للعمل كوكلاء المنسدلة في immunoprecipitations لعزل أو لاثراء مستضد من نسيجيا أو خلية ثقافة لست] معقدة. ويمكن مقارنة الكسور مستضد المخصب immunoprecipitations من الأجسام المضادة isotype السيطرة وتحليلها في وقت لاحق عن الخلافات مطياف الكتلة. واحد شرط أساسي أو الحد من هذه الخطوة هو وجود الأجسام المضادة الصحيح Vκ سلسلة ضوء والمضيف (البشرية والماوس) لتمكين الأجسام المضادة ملزمة لبروتين L الاغاروز. استخدام بروتين ملزمة المنان بد أن الاغاروز (كالي أيضاكتين د المانوز ملزم) بدلا من البروتين L الاغاروز هو بديل محتمل لimmunoprecipitate IgMs بلا قيود محددة ضوء Vκ. ومع ذلك، كما قال ارنولد وآخرون. 35، والأجسام المضادة الغلوبولين المناعي محددة مستضد لا ربط بروتين ملزمة المنان، كما تظهر غليكان الهدف لتصبح غير قابلة للوصول مرة واحدة صر الغلوبولين المناعي للمستضد لها. وبناء على هذه النتائج المنان بروتين ملزمة لا يمكن أن تستخدم مصفوفة ملزمة لimmunoprecipitate الغلوبولين المناعي محملة مستضد الجزيئات 35. قد تكون بدائل محتملة أخرى استخدام محددة الاغاروز الثانوية أضداد الغلوبولين المناعي مفتش 46،47 أو استخدام الخرز المغناطيسي تنشيط سطح 48. الأجسام المضادة الموجهة ضد IgMs يمكن أن يكون crosslinked كيميائيا لالاغاروز A أو G الاغاروز من أجل الحد من مدى الأجسام المضادة مزال مع مستضد من الفائدة. مقارنة سليمة بين أنواع مختلفة من الغلوبولين المناعي مناعي فيما يتعلق المستضدات التي تم تحديدها بنجاح طالصعب بسبب أجريت معظم immunoprecipitations لعزل أو تستنفد IgMs دون مزيد من الفائدة في المستضدات الخاصة بهم. وبالإضافة إلى ذلك، تم immunoprecipitations باستخدام IgMs تستخدم أساسا لتأكيد مستضد واحد يعرف بالفعل أو متوقع مع التعرض الأجسام المضادة لمستضدات النقاء 49. والعيب الجماعات الحكومية الدولية، إلى جانب الاغاروز الموجهة ضد IgMs الإنسان هو العائد المنخفض جدا (10-15٪) من المصل immunoprecipitated جزيئات الغلوبولين المناعي بالمقارنة مع المواد انطلاق 50. في المقابل، تم تطبيق حبات مغناطيسية تنشيط سطح بنجاح إلى الأجسام المضادة من isotypes مختلفة بما في ذلك الغلوبولين المناعي لimmunoprecipitate الألياف المرتبطة سكرابي 48. لا يقتصر هذا الأسلوب لكابا محددة (Vκ) أو امدا (λ) سلاسل أو مجموعة معينة، ويمكن توسيع كبير الطيف من الأجسام المضادة الغلوبولين المناعي المستخدمة في immunoprecipitations. خطوة هامة أخرى في البروتوكول هو قدرة الأجسام المضادة لتكون بمثابة ديتecting الأجسام المضادة (الأجسام المضادة الأولية) في البقع الغربية أو منصات فحص أخرى. يجب أن الأجسام المضادة ناجحة تستهدف المستضد مع تقارب عالية بما فيه الكفاية للسماح للمستضد ملزمة في وجود المنظفات غير الأيونية أو ربما الأيونية. الأجسام المضادة تقارب عالية شائعة بين الأجسام المضادة-maturated تقارب، ولكن أقل شيوعا بين الأجسام المضادة للنمط إسوي الغلوبولين المناعي، الذي هو واحد من الأسباب التي تجعل هناك نسبيا قليل المتاحة تجاريا الأجسام المضادة الغلوبولين المناعي كما كشف عن وكلاء في إعدادات البيوكيميائية. عالية تقارب ملزم من الأجسام المضادة هو شرط لimmunoprecipitations المستضدات الجزيئية والنشاف الغربية. خفض تركيزات المنظفات أو الغياب الكامل للمنظفات في المخازن الملكية الفكرية ومخازن تحلل يسمح مستضد استهداف الأجسام المضادة تقارب منخفضة عبر نطاق فاب لها. في المقابل، قدرة الأجسام المضادة لاستهداف البروتين L الاغاروز عبر جزء التيسير لها لا يتأثر إلى حد كبير بين الضوابط نمط إسوي على مجموعة من تركيزات مختلفة المنظفاتtrations. ومع ذلك، وانخفاض تركيز المنظفات في المخزن تحلل وعازلة IP يمنع اضطراب غشاء الخلية وعزل جزيئات محددة. وبالمثل، فإن انخفاض تركيز المنظفات في مخازن وصمة عار غسل الغربية (على سبيل المثال، في برنامج تلفزيوني-T) يسمح مستضد ملزم من الأجسام المضادة تقارب منخفض، ولكن في نفس الوقت يزيد ملزم غير محددة وبالتالي فهو ليس خيارا. وجود الأساسية بروتين المستضد هو شرط آخر لهذا الأسلوب. البروتينات مع التعديلات posttranslational (على سبيل المثال، البروتينات السكرية، البروتينات الدهنية) وبروتينات معدلة، ولكن ليس الدهون وحيدة أو الكربوهيدرات، وكشف في البقع الغربية. وليس من الممكن أن immunoprecipitate الدهون (على سبيل المثال، الإسفنجية) من الأنسجة أو الخلايا لست] في وجود أو عدم وجود المنظفات. الخصائص الفيزيائية والكيميائية المنظفات والدهون هي مشابهة جدا للسماح التفاعلات الدهون الأجسام المضادة انتقائية، بينما في نفس الوقت المنظفات ضرورية لتعطيلالأغشية من أجل السماح العزلة انتقائية من جزيئات محددة. لمعرفة أفضل لنا، immunoprecipitations تتألف فقط من الكربوهيدرات، في ظل عدم وجود جوهر البروتين، لم يتم ذكر سابقا. يصبح هذا أهمية خاصة لأن الأجسام المضادة الغلوبولين المناعي كثيرا ما يستهدف الكربوهيدرات والسكرية، التي لا ترتبط بالضرورة إلى وحدة البروتين. مطلوبة الطريقتين أخرى لتحديد الفصل والمناعية من الدهون والكربوهيدرات في حالة عدم وجود نواة البروتين. على سبيل المثال، طبقة رقيقة اللوني (TLC) من الدهون الخلوية مع الكشف عن الأجسام المضادة لاحق على لوحة TLC (المناعية TLC) يمكن تنفيذها 51،52. وقد وصفت أضداد PSA أخرى في الدراسات والنتائج السابقة مقارنة مع HIgM12 وكذلك متاح تجاريا مكافحة PSA الغلوبولين المناعي (استنساخ 2-2B). الأجسام المضادة الأكثر استخداما في مجال دعم البرامج والإدارة هو الأجسام المضادة مفتش (استنساخ 735) متوفرة كما monoc الماوسlonal أو بولكلونل الأرنب الأجسام المضادة 53. هذه الأجسام المضادة لمكافحة PSA مفتش بالكشف عن دعم البرامج والإدارة على SynCAM وNCAM على أنواع الخلايا الجهاز العصبي المركزي المختلفة بما في ذلك الخلايا دبيقي 41. وعلى النقيض من الأجسام المضادة لمكافحة PSA مفتش، والأجسام المضادة الغلوبولين المناعي الإنسان HIgM12، HIgM42 ومكافحة PSA الماوس الغلوبولين المناعي (استنساخ 2-2B) غير قادرين على استهداف دعم البرامج والإدارة على SynCAM (ولكن على NCAM) في مختلف مراحل ما بعد الولادة الجنينية وأوائل في الفئران ، في حين SynCAM غير polysialylated هو كشفها بسهولة (15). الأجسام المضادة الغلوبولين المناعي المستخدمة هي أيضا ليست قادرة على كشف PSA على الخلايا الدبقية (الشكلان 3 + 4). وثمة تفسير محتمل لاختلافات يتم ملاحظتها بين isotypes الأجسام المضادة قد يكون انخفاض مستويات PSA-SynCAM بالمقارنة مع مستويات PSA-NCAM جنبا إلى جنب مع تقارب يحتمل أن تكون أقل ملزمة من الأجسام المضادة الغلوبولين المناعي بالمقارنة مع مكافحة PSA مفتش. لاختبار هذه الفرضية، أجرينا immunoprecipitations في الحيوانات NCAM KO في المرحلة الجنينية E17 مع كميات هائلة من SynCAM الحاضر وتستخدم HIgM12 ك &quot;وكيل المنسدلة&quot; &lt;سوب&gt; 15. في E17 WT littermate الضوابط HIgM12 immunoprecipitated PSA-NCAM إلى حد أن أظهر شدة مماثلة من &quot;انزلوا&quot; PSA-NCAM مقارنة IgMs سلسلة الثقيلة والكشف عنها بواسطة كثافة في طخة غربية اللاحقة باستخدام المضادات مزال. وتشير هذه النتيجة على الأقل تقارب كاف من HIgM12 لدعم البرامج والإدارة هدفها. وعلى النقيض من WT littermate يسيطر لم HIgM12 لم يكشف PSA تعلق على SynCAM في الحيوانات NCAM KO. وقد تم الحصول على نتائج متطابقة في immunoprecipitations باستخدام البشرية مكافحة PSA الغلوبولين المناعي HIgM42. لم يتمكنوا من استهداف دعم البرامج والإدارة على SynCAM في البقع الغربية من WT وNCAM KO الحيوانات في مراحل النمو الجنيني وبعد الولادة HIgM12 وHIgM42، فضلا عن الماوس لمكافحة PSA الغلوبولين المناعي (استنساخ 2-2B). ونظرا لكمية قليلة من HIgM12 المطلوبة (0.1 ميكروغرام / مل) للكشف على وجه التحديد دعم البرامج والإدارة تعلق على NCAM في البقع الغربية باستخدام كميات صغيرة من أنسجة الجهاز العصبي المركزي (0.1 ميكروغرام الجهاز العصبي المركزي الأنسجة لكل بئر) 15 يبدو من غير المحتمل أن الانتماءات المنخفضة وحدهامسؤولة عن انعدام تام للكشف PSA-SynCAM التي كتبها HIgM12 في ثلاث طرق مختلفة. نخلص إلى أن هناك اختلافات كبيرة بين الأجسام المضادة الغلوبولين المناعي-PSA المضادة والتي نشرت في كثير من الأحيان الأجسام المضادة لمكافحة PSA مفتش (استنساخ 735). وليس من الواضح لماذا لم تستخدم المتاحة تجاريا أضداد الغلوبولين المناعي PSA أكثر في كثير من الأحيان في الماضي لتأكيد النتائج التي تم الحصول عليها مع antiPSA مفتش الأضداد 735. وهذا هو اهتمام بوجه خاص لHIgM12 وقد ثبت بالفعل فعالية في نماذج مرضية مختلفة. في حين أن غيرها الأجسام المضادة-PSA الغلوبولين المناعي قد يكون لها آثار علاجية مماثلة يبقى من غير الواضح ما إذا كانت الأجسام المضادة لمكافحة PSA مفتش (استنساخ 735) له نتائج علاجية مماثلة في نماذج من مرض التصلب العصبي المتعدد والمرض. وباختصار، استخدمت الأساليب المذكورة هنا في المقام الأول لتحديد المستضد من HIgM12 الأجسام المضادة البشرية التجدد لدعم التجارب السريرية المحتملة لمرض التصلب العصبي المتعدد وربما غيرها من الأمراض العصبية. تحديد نملةigens عن الأجسام المضادة مع النشاط البيولوجي هو الخطوة بأنها ضرورية لفهم آلية عملها. يصبح هذا أهمية خاصة في سياق العديد من الأجسام المضادة وحيدة النسيلة التي يجري اختبارها حاليا للسلامة وفعالية في التجارب على الانسان. في حين أن عدد الأجسام المضادة الغلوبولين المناعي اختبارها سريريا حتى الآن هو صغير، التطورات الحديثة في تكنولوجيا هجين جنبا إلى جنب مع عدد متزايد من الدراسات تسليط الضوء على الإمكانات العلاجية لهذه الفئة الأجسام المضادة 1-10،37،40،42-45 تحث تطوير جديدة أو أساليب تعديل تنطبق على تحديد غير البروتينية مستضدات الغلوبولين المناعي.

الأجسام المضادة للنمط إسوي الغلوبولين المناعي تظهر إمكانات علاجية كبيرة لعلاج الأمراض المختلفة ومنها السرطان واضطرابات الجهاز العصبي المركزي 1-7. وحددت المجموعة Vollmers &quot;العديد من الأجسام المضادة في مرضى السرطان لاستخدامها المحتمل والمؤشرات الحيوية للورم معين أو العلاجات الفعالة التي هي قادرة على قتل الخلايا السرطانية عن طريق حفز مسارات أفكارك 4،8،9. ومن المثير للاهتمام، كل الأجسام المضادة التي تم تحديدها مع الإمكانات العلاجية هي من نمط إسوي الغلوبولين المناعي وتنتمي إلى مجموعة &quot;الأجسام المضادة الطبيعية&quot; (يعتقل). وبالمثل، حددت مجموعة رودريجيز الماوس والأجسام المضادة البشرية التي تحفز عودة الميالين في آفات الحبل الشوكي عديمة الميلين مزمن في نماذج من التصلب المتعدد (MS). متطابقة إلى الأجسام المضادة مع تأثيرات مضادة للسرطان، عن الأجسام المضادة تشجيع عودة الميالين ويعتقل ومن نمط إسوي الغلوبولين المناعي 1،6،7،10. المستضدات دقيقة لIgMs الأكثر تحديدها لا تزال undetermineد-بما في ذلك تشجيع عودة الميالين الأجسام المضادة البشرية rHIgM22، حاليا في المرحلة الأولى من التجارب السريرية لمرضى التصلب المتعدد 11. وعلى الرغم من الجهود المتكررة من قبل خبراء في مجال الدهن والكربوهيدرات البحوث سواء في الأوساط الأكاديمية وبالشراكة مع الصناعة 11، يحاول التعرف لم تكن مستضد rHIgM22 الناجح. فشل التقنيات القياسية المستخدمة لتحديد المستضدات من الأجسام المضادة للعمل مع الأجسام المضادة الغلوبولين المناعي يحدد حاجة ماسة لتحسين أساليب محددة لهذه الأجسام المضادة التي على الأرجح الكربوهيدرات الهدف أو الدهون المستضدات. ويركز هذا المخطوط هو الإنسان الأجسام المضادة التجديدي HIgM12 والإجراءات التجريبية المستخدمة لتحديد المستضد لها. وقد تم تحديد الأجسام المضادة HIgM12 من المرضى الذين يعانون من مرض فالدنشتروم، ويحفز محوار ثمرة في المختبر 12-14 ويستهدف حمض polysialic (PSA) تعلق على العصبية جزيء التصاق الخلية (PSA-NCAM) 15،16. HIgM12 يمتد عمرا في نموذج الفأر من المرض 17 ويحسن نتائج وظيفية في فيروس التهاب الدماغ والنخاع الفئران تايلر (TMEV) الفئران -infected. على وجه التحديد، HIgM12 يحفز النشاط الحركي الأفقي والرأسي التلقائي في الفئران ويزيد عديمة الميلين مزمنة أعداد قطر الصغيرة والمتوسطة محاور الحبل الشوكي ثمانية أسابيع بعد واحد، وجرعة منخفضة من داخل الصفاق حقن الأجسام المضادة 18. والعصبي جزيء التصاق الخلية (NCAM) هو بروتين سكري من الغلوبولين المناعي (IG) أعرب الفصيلة على سطح الخلايا العصبية، الدبقية، الهيكل العظمي والعضلات، وخلايا القاتل الطبيعي 19-25. والإسوية NCAM الرئيسية الثلاثة يسمى NCAM180، NCAM140، وNCAM120، هي المتغيرات لصق بديلة للنسخة الأولية التي تختلف فقط في المجال الخاص بها حشوية. داخل الجهاز العصبي المركزي، NCAM هو جزيء رئيسي polysialylated (&gt; 95٪) مع طويلة، homopolymers حمض اللعابي سالبة الشحنة. Polysialic لويطلق إدارة البحث الجنائي مع ن&gt; 10 PSA ولكن الهياكل بلازميدة قليلة القسيمات أقصر موجودة والتي هي أيضا ذات الصلة بيولوجيا. البروتينات polysialylated أخرى أعرب في الجهاز العصبي المركزي هي SynCAM1 26، Neuropilin-2 (المفدال-2) 27،28 وحدة فرعية قناة الصوديوم 25 (للمراجعة يرى 29). الأساليب المذكورة هنا تسمح تحديد المستضد لالمناعية الإنسان والفأر التي تحتوي على كابا (Vκ) سلاسل ضوء (VκI، VκIII أو VκIV سلاسل الضوء عن الأجسام المضادة البشرية وسلاسل ضوء VκI عن الأجسام المضادة الماوس) محددة بغض النظر عن نمط إسوي الأجسام المضادة (على سبيل المثال، مفتش، الغلوبولين المناعي و IgA، الجمعية الإسلامية أو إيج). ويستند هذا القيد على استخدام البروتين L الاغاروز لimmunoprecipitations مع الأجسام المضادة للنمط إسوي الغلوبولين المناعي. ويمكن أن تشمل الاستراتيجيات البديلة يكتينس ملزم المانوز والأجسام المضادة لمكافحة الغلوبولين المناعي الثانوية مرتبطة تساهميا إلى الاغاروز الخرز، والتي قد توسيع تطبيق هذا الأسلوب لمزيد من الأجسام المضادة الغلوبولين المناعي المؤتمر الوطني العراقيluding تلك مع سلاسل ضوء امدا (λ) (انظر المناقشة). نسب سلاسل ضوء المصل الغلوبولين المناعي Vκ مقارنة سلاسل الغلوبولين المناعي λ الخفيفة المستمدة من الأفراد الأصحاء هي 1.5: 1 30. واستنادا إلى المنهجية الكروماتوغرافي المستخدمة هنا لفصل، وإثراء، ومناعيا الكشف عن بعض الجزيئات 31، يطلب من جميع المضادات ليشمل مجال واحد على الأقل بروتين صغير. حاتمة ملزمة محددة الأجسام المضادة يمكن أن يكون داخل أو خارج نطاق البروتين (على سبيل المثال، في البروتينات السكرية، البروتينات الدهنية). الخطوات البيوكيميائية الأولية المستخدمة لتحديد المستضد محددة لHIgM12، المعنية لتضييق قائمة المرشحين المحتملين، هي أهم الخطوات في هذا الأسلوب. يتم وصف نوع من الخلايا الاستعدادات محددة وخلية الأوصاف القائمة على مورفولوجيا الخلايا الدبقية لكن هذه المنهجية يمكن استقراء لاستيعاب أنواع الخلايا الأخرى داخل أو خارج الجهاز العصبي المركزي. هناك إلحاحاتحتاج إلى تطوير تقنيات جديدة أو تعديل المعمول بها في عدد متزايد من الأجسام المضادة الغلوبولين المناعي مع الإمكانات العلاجية لاضطرابات الإنسان المختلفة خاصة في تلك الحالات (الأغلبية من المستضدات الغلوبولين المناعي) حيث الأهداف الأجسام المضادة هي هياكل الكربوهيدرات أو الدهون.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1072">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DMEM</td>
			<td style="width:235px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">MT-10-013-CVRF</td>
			<td style="width:503px;">HIGH GLUCOSE, with glutamine, with sodium pyruvate, 500 ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM/F-12, HEPES</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11330-032</td>
			<td>500 ml, L-glutamine, sodium pyruvate, high glucose</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>10,000 U/mL, 100 ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N-2 Supplement (100X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17502-048</td>
			<td>5 ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">B-27 Supplement (50X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17504-044</td>
			<td>serum free, 10 ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal Bovine Serum - Optima</td>
			<td>Atlanta Biologicals</td>
			<td>S12450</td>
			<td>500 ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">STERILE WATER FOR IRRIGATION</td>
			<td>Baxter Healthcare</td>
			<td>#2F7114</td>
			<td>USP-1000 ml, 12/CA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Poly-D-lysine hydrobromide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7886-50MG</td>
			<td>D-Lys-(D-Lys)n-D-Lys &#183; xHBr, Molecular Weight 30,000-70,000 g/mol, 50 mg</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">bovine serum albumin fraction V</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A-3294-100G</td>
			<td>heat shock fraction, protease free, pH 7,&#160; purity 98%, 100 g</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G5767-500G</td>
			<td>C6H12O6, 
			 
			Molecular Weight: 180.16 g/mol, ACS reagent, 500 g</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T9935-100mg</td>
			<td>essentially salt-free, lyophilized powder, =9,000 BAEE units/mg protein,</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D5025-150KU</td>
			<td>Type IV, lyophilized powder, =2,000 Kunitz units/mg protein</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Recombinant Rat FGF basic Protein</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>3339-FB-025</td>
			<td>BSA as a carrier protein, 25 ug, lyophilized, &#62;95%, 16.2 kDa</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Recombinant Rat PDGF-AA Protein</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>1055-AA-50</td>
			<td>carrier free, 50 ug, lypphilized, &#62;97%, E.coli-derived, 12.5 kDa</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Neurobasal-A</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>10888-022</td>
			<td>500 ml, No Glutamine, No Aspartic Acid, No Glutamic Acid</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148-1KG</td>
			<td>crystalline, 1 kg, reagent grade, Molecular Weight 30.03 g/mol (as monomer)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tris[hydroxymethyl]aminomethane (Tris bas</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>#1610719</td>
			<td>1 kg, 99.8% pure, powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium Dodecyl Sulfate (SDS)</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>#1610302</td>
			<td>1 kg, powder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glycine</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP-381-5</td>
			<td>C2H5NO2, Molecular weight: 75.07 g/mol, White crystalline Powder, 5 kg</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S7653-5KG</td>
			<td>NaCl, Molecular Weight: 58.44 g/mol, 5 kg</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sodium phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S0751-500G</td>
			<td>NaH2PO4, Molecular Weight: 119.98 g/mol, 500 g</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate-buffered Solution 1X (PBS)</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>MT-21-040-CV</td>
			<td>Without Calcium and Magnesium, 6 x 500 ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Falcon 60mm TC-Treated Cell Culture Dish</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td>#353002</td>
			<td>60 mm Cell Culture Dish, TC-treated polystyrene, 20/pack, sterile</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Falcon 60 mm x 15 mm Petri dish</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td>#351007</td>
			<td>Not TC-Treated Bacteriological Petri Dish, 20/Pack</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6 well cell culture plates</td>
			<td>Corning Costar</td>
			<td>CLS3516</td>
			<td>6 well, flat bottom (Individually wrapped), gamma-irradiated, growth area 9.5 c</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">75cm&#178; tissue culture flask</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td>430720U</td>
			<td>75cm&#178; U-Shaped Canted Neck Cell Culture Flask with Plug Seal Cap</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pierce&#8482; Protein L Plus Agarose</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>#20520</td>
			<td>2 ml, crosslinked 6% beaded agarose (CL-6B), binding capacity: 10 to 20 mg IgG</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4-20% Mini-PROTEAN TGX Precast Gel</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>456-1094</td>
			<td>10-well, 50 &#181;l, for use with Mini-PROTEAN electrophoresis cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Immobilon-P Membrane</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>IPVH00010</td>
			<td>PVDF, 0.45 &#181;m, 26.5 cm x 3.75 m roll</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-Polysialic Acid-NCAM Antibody, clone</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB5324</td>
			<td>50 microliters, Host: mouse, monoclonal IgM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">XT sample buffer (Western blot)</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>#1610791</td>
			<td>10 ml, 4 x premixed protein sample buffer</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2-mercaptoethanol</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>#1610710</td>
			<td>25 ml, 98 % pure, 14.2 M</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Endoneuraminidase-N (Endo-N)</td>
			<td>ABC Scientific</td>
			<td>ABC0020</td>
			<td>50 microliters, 200 &#181;g/ml, 3500 U/mg</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">25 mm glass coverslips</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-545-102</td>
			<td>Circles No. 1; Thickness: 0.13 to 0.17mm; Size: 25mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">HEPES buffer solution</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15630-080</td>
			<td>100 ml, 1M</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hanks&#39; Balanced Salt Solution 1X (HBSS)</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>MT-21-022-CV</td>
			<td>500 ml, without Calcium, Magnesium, Phenol Red</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Papain</td>
			<td>Worthington Biochemical Cooperation</td>
			<td>LS003119</td>
			<td>lyophilized powder, 100 mg</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Magnesiumsulfate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M-2643-500G</td>
			<td>powder, 500 g</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-Glutamine</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>#25030-081</td>
			<td>100 ml, 200 mM&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

antibody binding specificity for kappa (v&#954;) light chain-containing human (igm) antibodies: polysialic acid (psa) attached to ncam as a case study

Antibodies of the IgM isotype are often neglected as potential therapeutics in human trials, animal models of human diseases as well as detecting agents in standard laboratory techniques. In contrast, several human IgMs demonstrated proof of efficacy in cancer models and models of CNS disorders including multiple sclerosis (MS) and amyotrophic lateral sclerosis (ALS). Reasons for their lack of consideration include difficulties to express, purify and stabilize IgM antibodies, challenge to identify (non-protein) antigens, low affinity binding and fundamental knowledge gaps in carbohydrate and lipid research. 
This manuscript uses HIgM12 as an example to provide a detailed protocol to detect antigens by Western blotting, immunoprecipitations and immunocytochemistry. HIgM12 targets polysialic acid (PSA) attached to the neural cell adhesion molecule (NCAM). Early postnatal mouse brain tissue from wild type (WT) and NCAM knockout (KO) mice lacking the three major central nervous system (CNS) splice variants NCAM180, 140 and 120 was used to evaluate the importance of NCAM for binding to HIgM12. Further enzymatic digestion of CNS tissue and cultured CNS cells using endoneuraminidases led us to identify PSA as the specific binding epitope for HIgM12.

يوضح هذا القسم أمثلة من النتائج التي يمكن الحصول عليها من خلال دراسة PSA-المستضدات الغلوبولين المناعي محددة الإنسان في الجهاز العصبي المركزي. يظهر استخدام الأجسام المضادة الغلوبولين المناعي الإنسان تحتوي على سلاسل ضوء Vκ محددة في إعدادات البيوكيميائية ومناعية الفلورسنت. HIgM12 immunoprecipitates مستضد لها من لست] الدماغ الدماغية ويعمل كعامل كشف (الأجسام المضادة الأولية) في البقع الغربية. لا isotype السيطرة الضد ولا الخرز L الأغاروس immunoprecipitate مستضد مماثل، مما يدل على خصوصية هدم (الشكل 1). البقع الغربية باستخدام لست] الجهاز العصبي المركزي من WT وNCAM KO الفئران تثبت خصوصية HIgM12 ملزم لNCAM التي تحتوي على دعم البرامج والإدارة (الشكل 2A). الهضم الأنزيمي من الأنسجة الجهاز العصبي المركزي من الفئران WT باستخدام ENDO-NF يحدد دعم البرامج والإدارة تعلق على NCAM كما حاتمة ملزمة محددة لHIgM12 (الشكل 2B). باستخدام طريقة الواردة في هذه الوثيقة، ويتم الحصول على الفئران بفيروس IBA-1 الثقافات الدبقية عالية النقاء (الشكل 3). متوفرة تجاريا الأجسام المضادة لمكافحة PSA (استنساخ 2-2B) لا تسمية سطح الخلية أو حمامات دعم البرامج والإدارة الداخلية في الثابت وpermeabilized الخلايا الدبقية إيجابية IBA-1 بواسطة المجهر الفلورسنت. وتمشيا مع الكتابات المنشورة سابقا، التي لم تسجل اى التعبير على سطح الخلية من PSA-NCAM في الخلايا الدبقية الصغيرة 16،41 HIgM12 لا تسمية مستضدات سطح الخلية في الخلايا الدبقية الصغيرة الفئران النقاء. ومن المثير للاهتمام، HIgM12 وسم النتائج الخلايا الدبقية الصغيرة الثابتة وpermeabilized في داخل الخلايا، ونمط حول النواة التي لا تقتصر على عضيات معينة (الشكل 3). النتائج على النقيض من تلك التي تم الحصول عليها باستخدام الأجسام المضادة لمكافحة PSA مفتش (استنساخ 735) 26، والذي يستهدف دعم البرامج والإدارة SynCAM في الخلايا الدبقية الصغيرة في مستوى جولجي 41. وعلى النقيض من الخلايا الدبقية الصغيرة، HIgM12ومستضدات سطح الخلية A2B5 الهدف في عالي التخصيب الثقافات الفئران OPC في ظل ظروف الخلية الحية (الشكل 4). الثقافات OPC تحتوي ~ 5٪ تلويث الخلايا الدبقية الشكل 5 يوضح سطح الخلية نمط مماثل تقريبا تلطيخ بين HIgM12 ومكافحة PSA ماب (استنساخ 2-2B) في GFAP إيجابية الخلايا النجمية (الشكل 5A). مناعي وسم الخلايا النجمية WT هضمها ENDO-NF-مقارنة العازلة النجمية WT المعالجة للسيطرة على استخدام HIgM12 يدل على وجود دعم البرامج والإدارة نجمي الخلايا (الشكل 5B). وجود الخلايا النجمية-PSA إيجابي في الجسم الحي ما زالت تحتاج الى تأكيد. <img alt="شكل 1" src="/files/ftp_upload/54139/54139fig1.jpg" /> الشكل 1: HIgM12 بمثابة &quot;المنسدلة&quot; وكيل في Immunoprecipitations Immunoprecipitations من إجمالي المحللة دماغ الفئران منذ ثلاثة أشهر باستخدام HIgM12، isotype السيطرة الإنسان HIgM.حبات 126 أو الاغاروز L فقط وكلاء &quot;هدم&quot;. تم تشغيل البروتينات مزال في البقع الغربية مع الأغشية سبر ضد HIgM12. وكانت الأوزان الجزيئية للبروتينات مزال من حبات مغلفة HIgM12 في نطاق 160-200 كيلو دالتون بالإضافة إلى IgMs السلسلة الثقيلة (~ 65-73 كيلو دالتون). تم تعديل هذا الرقم من J. نوروتشيم. 15. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54139/54139fig1large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/54139/54139fig2.jpg" /> الشكل 2: HIgM12 أهداف حمض Polysialic (PSA) شاردة على NCAM. ألف الخليط الدماغ من P7، P13، P16 P27 وNCAM مجموع تم تشغيل الفئران KO والضوابط littermate متخالف في البقع الغربية مع الأغشية سبر ضد HIgM12، PSA وβ الأكتين كما تحكم التحميل. <stronز&gt; B 10 ميكروغرام من الكبار WT المحللة مخ الفأر في 1٪ NP40 في برنامج تلفزيوني، كان يعالج الحموضة 6.5 مع endoneuraminidase N (ENDO-N) (إكسو) النورامينيداز مع α2-3 حمض polysialic البوليمر خصوصية (سياليداز) أو برنامج تلفزيوني بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية، ترشيح نفسه الحلل في البقع الغربية وبحث ضد HIgM12، PSA وβ-الأكتين كما تحكم التحميل. تم تعديل هذا الرقم من J. نوروتشيم. 15. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54139/54139fig2large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/54139/54139fig3.jpg" /> وينعكس غياب دعم البرامج والإدارة على الجرذ الخلايا الدبقية الصغيرة بسبب عدم وجود HIgM12 وصفها كانت الخلايا الدبقية الصغيرة الجرذ تربيتها لمدة 48 ساعة على بولي-D-يسين المغلفة coverslips الزجاج وإما المسمى مباشرة على الجليد مع HIgM12 أو بعد التثبيت مع HIgM12 أو المضادة: الرقم 3. -PSA ماب (استنساخ 2-2B). كانت خلايا تيوصفت riple مع الخلايا الدبقية الصغيرة علامة IBA-1 (الأخضر)، HIgM12 / PSA (أحمر) ودابي (الأزرق). تظهر الصور عدم وجود سطح الخلية دبقية ملزمة باستخدام HIgM12 (الصف العلوي) وعدم وجود مضاد للدعم البرامج والإدارة ملزمة (استنساخ 2-2B) إلى سطح الخلية ومخازن الداخلية في الابتدائية الفئران الخلايا الدبقية الصغيرة (الصف السفلي). وبناء على التشكل الثنائي القطب وغياب IBA-1 تلطيخ، واقترح الخلية-PSA إيجابي صغيرة (أقل صف) ليكون OPC. في الخلايا الثابتة، أدى HIgM12 تلطيخ في ذلك، نمط حول النواة punctated الذي لا يقتصر على العضيات محددة، واعتبر غير محددة ملزمة (الصف الأوسط). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54139/54139fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل (4)" src="/files/ftp_upload/54139/54139fig4.jpg" /> الشكل 4: HIgM12 يستهدف الخلايا السطحية PSA-NCAM على الجرذ يجد OPCs كانت يجد OPCs الفئران والخلايا الدبقية الصغيرة cultu.الأحمر لمدة 4 أيام في المتوسط ​​انتشار coverslips على الزجاج المطلي بولي-D-ليسين والثلاثي المسمى مباشرة على الجليد مع HIgM12 أو A2B5 (الأخضر)، والداخلية البلاعم / الوحيدات علامة CD68 (استنساخ ED-1) (أحمر) ودابي (الأزرق) . الصور تظهر سكان الخلية إيجابية مجورلي لA2B5 OPC علامة (الصف العلوي) وHIgM12 (أقل صف) مع قليل من الخلايا الدبقية الصغيرة-CD68 إيجابي (~ 5٪). وأضاف تباين مرحلة والصور دابي للكشف عن سلامة الخلية وأرقام الهواتف المحمولة لكل السكان. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54139/54139fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الرقم 5" src="/files/ftp_upload/54139/54139fig5.jpg" /> الرقم 5: HIgM12 وماب مكافحة PSA شارك في تسمية وحيوانية نجمي في ماوس مختلط الدبقية. A. ماوس الخلايا الدبقية مختلطة من WT وNCAM مجموع الحيوانات KO التي تحتوي على الخلايا النجمية، خلايا دبقية قليلة التغصن-النسب وميكروغرامكان ليا مثقف لمدة 3 أيام وصفت مباشرة على الجليد مع HIgM12 (الأخضر)، ومكافحة PSA ماب (استنساخ 2-2B) (الحمراء)، وبعد ذلك لنجمي الخلايا علامة GFAP (البنفسجية) ودابي (الأزرق). HIgM12 ومكافحة PSA تكشف عن نمط تلطيخ متطابقة الظاهري على الخلايا النجمية WT GFAP إيجابية ولكنها تفتقر إلى الربط النجمية مثقف من الفئران NCAM KO. تم تعديل هذا الرقم من J. كان المثقف نوروتشيم. 15. ب. الدبقية المختلطة مماثل كما هو موضح تحت A. وعلاجها بين عشية وضحاها مع endoneuraminidase-NF (تفضلت التي تقدمها الدكتورة مارتينا Muehlenhoff) أو التحكم في برنامج تلفزيوني. وصفت خلايا حية على الجليد مع HIgM12 (الخضراء) والملون في وقت لاحق لGFAP الداخلي علامات (أحمر) ودابي (الأزرق). يستهدف HIgM12 مستضدات سطح الخلية في برنامج تلفزيوني السيطرة تعامل الثقافات الدبقية مختلطة ولكن ليس endoneuraminidase-NF تعامل الدبقية مختلطة. تم تعديل هذا الرقم من JNSCI 16. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54139/54139fig5large.jpg" target="_blank">رر</a>تخفيف انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم. وقد اتخذت جميع الصور في 60X التكبير باستخدام إعدادات الأداة نفسها ومعالجتها مماثل. <img alt="الجدول 1" src="/files/ftp_upload/54139/54139table1.jpg" /> الجدول 1: الواق والحل وصفات <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54139/Table1.xls">الرجاء انقر هنا لتحميل هذا الجدول.</a> <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td></td><td> نسيج الجهاز العصبي المركزي </td><td> ENDO-NF / برنامج تلفزيوني </td><td> تحلل العازلة </td><td> الحجم الكلي </td></tr><tr><td> 1. وزن الماوس </td><td> 67 ميكروغرام (0.45 ميكرولتر) </td><td> 2 ميكرولتر (12 ميكروغرام) ENDO-NF </td><td> 7.55 ميكرولتر </td><td> 10 ميكرولتر </td></tr><tr><td> 2. WT الماوس </td><td> 67 ميكروغرام (0.45 ميكرولتر) </td><td> 2 ميكرولتر PBS </td><td> 7.55 ميكرولتر </td><td> 10 ميكرولتر </td></tr><tr><td> 3. WT الماوس </td><td> 67 ميكروغرام (0.45 ميكرولتر) </td><td> لا برنامج تلفزيوني أو ENDO-NF </td><td> 9.55 ميكرولتر </td><td> 10 ميكرولتر </td></tr><tr><td> 4. NCAM KO الماوس </td><td> 67 ميكروغرام (0.45 ميكرولتر) </td><td> 2 ميكرولتر (12 ميكروغرام) ENDO-NF </td><td> 7.55 ميكرولتر </td><td> 10 ميكرولتر </td></tr><tr><td> 5. NCAM KO الماوس </td><td> 67 ميكروغرام (0.45 ميكرولتر) </td><td> 2 ميكرولتر PBS </td><td> 7.55 ميكرولتر </td><td> 10 ميكرولتر </td></tr><tr><td> 6. NCAM KO الماوس </td><td> 67 ميكروغرام (0.45 ميكرولتر) </td><td> لا برنامج تلفزيوني أو ENDO-NF </td><td> 9.55 ميكرولتر </td><td> 10 ميكرولتر </td></tr></tbody></table> الجدول 2: ENDO-NF هضم أنسجة الجهاز العصبي المركزي من P7 WT وNCAM KO الفئران.

Watch this Scientific Journal Video about Antibody Binding Specificity for Kappa VÃŽÂº Light Chain-containing Human IgM Antibodies: Polysialic Acid PSA Attached to NCAM as a Case Study at JoVE.com

Antibody Binding Specificity for Kappa VÃƒÅ½Ã‚Âº Light Chain-containing Human IgM Antibodies: Polysialic Acid PSA Attached to NCAM as a Case Study

We present a protocol to identify protein moieties containing antigens for human and mouse IgM antibodies with specific kappa (V&#954;) light chains. This protocol is not limited to IgM class antibodies but applies to all immunoglobulin isotypes that target their antigen with sufficiently high affinity during immunoprecipitations.

الأجسام المضادة ملزم خصوصية لكابا (Vκ) ضوء الإنسان (الغلوبولين المناعي) الأجسام المضادة التي تحتوي على سلسلة: Polysialic حمض (PSA) المرفقة لNCAM كدراسة حالة

Antibodies of the IgM isotype are often neglected as potential therapeutics in human trials, animal models of human diseases as well as detecting agents ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Antibody Binding Specificity for Kappa (V&#954;) Light Chain-containing Human (IgM) Antibodies: Polysialic Acid (PSA) Attached to NCAM as a Case Study

Recognition of Epidermal Transglutaminase by IgA and Tissue Transglutaminase 2 Antibodies in a Rare Case of Rhesus Dermatitis

Recognition of Epidermal Transglutaminase by IgA and Tissue Transglutaminase 2 Antibodies in a Rare Case of Rhesus Dermatitis

الاعتراف ناقلة الغلوتامين البشرة بواسطة الأجسام المضادة IgA و 2 ناقلة الغلوتامين الأنسجة في حالة نادرة من القرد الجلد

Tissue transglutaminase 2 (tTG2) is an intestinal digestive enzyme which deamidates already partially digested dietary gluten e.g. gliadin peptides. In ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

إدخال إجهاد القص في دراسة الالتصاق الجرثومي

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

An In vitro Model to Study Heterogeneity of Human Macrophage Differentiation and Polarization

An In vitro Model to Study Heterogeneity of Human Macrophage Differentiation and Polarization

على<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج لدراسة عدم تجانس التمايز بلعم الإنسان والاستقطاب

Monocyte-derived macrophages represent an important cell type of the innate immune system. Mouse models studying macrophage biology suffer from the ...

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

Use of Galleria mellonella as a Model Organism to Study Legionella pneumophila Infection

استخدام<em&gt; غاليريا mellonella</em&gt; كما كائن نموذج لدراسة<em&gt; البكتيريا المستروحة</em&gt; عدوى

Legionella pneumophila, the causative agent of a severe pneumonia named Legionnaires&#39; disease, is an important human pathogen that infects and ...

A Semi-automated Approach to Preparing Antibody Cocktails for Immunophenotypic Analysis of Human Peripheral Blood

نهج مؤتمتة شبه لإعداد الجسم المضاد الكوكتيلات لتحليل Immunophenotypic في الدم المحيطي الإنسان

Immunophenotyping of peripheral blood by flow cytometry determines changes in the frequency and activation status of peripheral leukocytes during disease ...

A Miniaturized Glycan Microarray Assay for Assessing Avidity and Specificity of Influenza A Virus Hemagglutinins

والمنمنمة غليكان ميكروأري الفحص لتقييم الطمع وخصوصية الأنفلونزا من الفيروسات Hemagglutinins

Influenza A virus (IAV) hemagglutinins recognize sialic acids on the cell surface as functional receptors to gain entry into cells. Wild waterfowl are the ...

Developing a Salivary Antibody Multiplex Immunoassay to Measure Human Exposure to Environmental Pathogens

تطوير اللعابية الأجسام المضادة المناعية المتعددة لقياس التعرض البشري للمسببات البيئية

The etiology and impacts of human exposure to environmental pathogens are of major concern worldwide and, thus, the ability to assess exposure and ...

The Isolation, Differentiation, and Quantification of Human Antibody-secreting B Cells from Blood: ELISpot as a Functional Readout of Humoral Immunity

عزل، التمايز، والكمي للالإنسان الأجسام المضادة إفراز خلايا B من الدم: ELISPOT باعتبارها قراءات الوظيفية للالخلطية الحصانة

The hallmark of humoral immunity is to generate functional ASCs, which synthesize and secrete Abs specific to an antigen (Ag), such as a pathogen, and are ...

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

في طرق المختبر لمقارنة الهدف وتجليد وCDC التعريفي بين الأجسام المضادة العلاجية: تطبيقات في تحليل Biosimilarity

Therapeutic monoclonal antibodies (mAbs) are relevant to the treatment of different pathologies, including cancers. The development of biosimilar mAbs by ...

Measuring Influenza Neutralizing Antibody Responses to A(H3N2) Viruses in Human Sera by Microneutralization Assays Using MDCK-SIAT1 Cells

Measuring Influenza Neutralizing Antibody Responses to AH3N2 Viruses in Human Sera by Microneutralization Assays Using MDCK-SIAT1 Cells

قياس الإنفلونزا تحييد ردود الأجسام المضادة للفيروسات A(H3N2) في الأمصال البشرية قبل درياقي فحوصات باستخدام خلايا مدكك-SIAT1

Neutralizing antibodies against hemagglutinin (HA) of influenza viruses are considered the main immune mechanism that correlates with protection for ...