Name: human primary trophoblast cell culture model to study the protective effects of melatonin against hypoxia/reoxygenation-induced disruption
Uploaded: 2016-07-30T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Human Primary Trophoblast Cell Culture Model to Study the Protective Effects of Melatonin Against Hypoxia/reoxygenation-induced Disruption at JoVE.com

Supported by grants from the Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada (NSERC) (no. 262011-2009) to CV and March of Dimes Social and Behavioral Sciences Research grant (#12-FY12-179) to CV and JTS; by studentships to LSF from the Minist&#232;re de l'&#233;ducation, de l'Enseignement sup&#233;rieurs et de la recherche (MEESR)-Fonds de recherche du Qu&#233;bec (FRQ)-Nature et technologies (NT) and the Fondation Universitaire Armand-Frappier INRS, to HC from the R&#233;seau Qu&#233;b&#233;cois en Reproduction-NSERC-CREATE, to AAHT from the Canadian Institutes of Health Research (CIHR) and FRQ-Sant&#233;, and to JBP from NSERC; by a fellowship to EMAS from the Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient&#236;fico e Tecnol&#242;gico (CNPq) and the Programme de bourses d'excellence pour &#233;tudiants &#233;trangers MEESR-FRQNT.

Placentas foram obtidas imediatamente após partos vaginais espontâneos de gestações sem complicações no CHUM-St-Luc Hospital, Montreal, QC, Canadá, com o consentimento do paciente informado e aprovação dos comitês de ética (CHUM-St-Luc Hospital e INRS-Institut Armand-Frappier, Laval, Quebec, Canadá). 1. Isolamento e purificação de células das vilosidades citotrofoblasto <ol><li> Soluções e meios de comunicação <ol><li> Preparar por um meio de transporte complementar do meio modificado por Du...

Nos mamíferos, o desenvolvimento fetal é diretamente dependente da função placentária adequada. As origens do desenvolvimento de distúrbios de saúde baseiam-se na hipótese de que a causa de doenças que se manifestam mais tarde na vida pode ser rastreada até ao início do desenvolvimento e que a placenta tem um papel mecanicista na programação fetal 30-32. A placenta é o mediador chave do crescimento e desenvolvimento fetal: regula a transferência de nutrientes, protege contra as exposições pre...

Durante a gravidez humana, as células citotrofoblasto da placenta, que são células mononucleadas de haste, proliferam rapidamente e se diferenciam em células quer citotrofoblasto vilosos ou extravilosas. citotrofoblastos extravilosas invadir e remodelar as artérias em espiral da parede uterina. Citotrofoblastos viloso, por outro lado, continuar a proliferar, diferenciar-se e fundem para formar trofoblasto multinucleadas (a sincício) 1. A manutenção da homeostase trofoblasto viloso é essencial para o bem-estar fetal e gravidez saudável. Na verdade, trofoblastos vilosidades permitir a troca materno-fetal de oxigênio e nutrientes, e produzir hormônios essenciais para a gravidez. Além disso, o trofoblasto é o único tipo de célula em contacto directo com a circulação do sangue materno e proporciona uma barreira física e imunológica essencial. Portanto, o sinciciotrofoblasto deve sofrer apoptose e substituição para a manutenção da homeostase e avoid placentária patologias 2-5. A técnica desenvolvida pela Kliman et ai. 6, em 1986, para isolar citotrofoblastos vilosidades primárias a partir de placentas humanas causou uma revolução no domínio da investigação de placenta, permitindo que o estudo dos mecanismos moleculares envolvidos na diferenciação trofoblasto viloso. Esta técnica clássica, com base em digestões enzimáticas sequenciais com tripsina e DNase, seguido pelo isolamento em meio de centrifugação de densidade (partículas de sílica coloidal revestido por polivinilpirrolidona, ou Percoll) é hoje reconhecida como o padrão de ouro para o isolamento de células citotrofoblasto vilosidades. A técnica pode ser optimizado por imunopurificação magnética, um processo que separa citotrofoblastos vilosidades a partir de células não-trofoblásticas com base na expressão diferencial de antigénios específicos nas superfícies destas células. Nós escolhemos o antigénio de leucócitos humanos ABC (HLA-ABC), devido à ausência da sua expressão na célula Membran trofoblásticae 7,8. A placenta é um órgão que sofre variações dramáticas em níveis de oxigénio durante a gravidez. No primeiro trimestre, a relação de oxigenação é fisiologicamente muito baixa (2% de O 2), mas aumenta para níveis moderados de oxigenação (8% de O2) no segundo e terceiro trimestre. Tuuli et al. 9 descrito que a reprodução in vitro do meio ambiente trophoblast dentro das vilosidades da placenta é um desafio e variações nos níveis de oxigenação pode até levar a mudanças fenotípicas. É, por conseguinte, sugerido para adoptar 8% de oxigénio como normóxia para imitar a tensão de oxigénio encontradas em vilosidades da placenta durante o terceiro trimestre da gravidez 8,9. Chen et al. 10 extensivamente estudadas diversas variáveis ​​relacionadas com a tensão de oxigênio em cultura de células trofoblasto e demonstrou a importância de determinar os níveis de oxigênio em um ambiente pericelular. Os níveis de oxigénio no vilosidades tendem a aumentardevido à vasculogénese. O fluxo de sangue no vilosidades aumentos placentários constantemente e o nível de peróxido de hidrogênio (uma espécie abundante reativas de oxigênio) é um sinal importante que controla vasculogï¿½ese 11,12. Em complicações na gravidez, a falta de vasculogï¿½ese gera hipóxia, e mais importante, as variações intermitentes de oxigenação (chamada hipóxia / reoxigenação). Estas condições levam a um aumento anormal de estresse oxidativo, o que compromete placentária e 13,14 viabilidade fetal. As alterações que se submetem a células trofoblásticas in vivo durante episódios de hipoxia / reoxigenação pode ser mimetizado in vitro, como segue: citotrofoblastos vilosidades são mantidas sob condições de normóxia (8% O 2) até que se diferenciam em trofoblasto. Elas são então submetidas a condições de hipóxia (0,5% de O2) durante 4 horas, seguido de um adicional de 18 h de normóxia (reoxigenação). Usando essa abordagem hipóxia / reoxigenação, trofoblastos exHiBit desregulada estado redox e níveis aumentados de apoptose intrínseca 8, como tem sido observada em certas complicações na gravidez. Assim, este é um útil modelo in vitro para avaliar novas abordagens terapêuticas e preventivas para combater a complicações na gravidez associados com placentária hipoxia / reoxigenação. Células da placenta produzir melatonina, que tem várias funções importantes, tais como a capacidade de evitar o estresse oxidativo e disfunção placentária 15. Aqui, apresentamos os modelos de abordagem e de células experimentais utilizados para demonstrar os efeitos protectores da melatonina em células trofoblásticas da placenta, a nível molecular, celular e funcional 8.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Curved Metzenbaum Scissors</td>
			<td>Shandon</td>
			<td>9212</td>
			<td>surgical equipment (cell isolation) (2 units)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Splinter Forceps Fine 41/2in</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>13-812-42</td>
			<td>surgical equipment (cell isolation) (2 units)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors 4.5 Str Dissection</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>08-940</td>
			<td>surgical equipment (cell isolation) (2 units)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze Sponge 10cm X 10cm</td>
			<td>Cardinal Health</td>
			<td>361020733</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oblong Glass Baking Dish</td>
			<td>Pyrex</td>
			<td>1105397</td>
			<td>Glassware (2.8L)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Funnel Buchner&#160;</td>
			<td>Coorstek Inc</td>
			<td>10-356E</td>
			<td>Glassware (114MM DIAMeter)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Watch Glass&#160;</td>
			<td>pyrex</td>
			<td>9985100EMD</td>
			<td>Glassware</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, neutral buffered, 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td>histological tissue fixative solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsinizing Flasks</td>
			<td>Wheaton</td>
			<td>355395</td>
			<td>Glassware (1 unit)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Culture Tubes</td>
			<td>Kimble</td>
			<td>73750-13100</td>
			<td>Glassware</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate Glass Pasteur Pipet (22.8 Cm)&#160;</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>K63B1367820C</td>
			<td>Glassware</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>250 Ml Glass Beakers&#160;</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>KFS14005250</td>
			<td>Glassware</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Media Bottles With Cap</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>KFS14395250</td>
			<td>Glassware (8 units)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 Ml Corex Tube&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>8422-A</td>
			<td>(1 unit)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 Ml Polystyrene Centrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 Ml Polystyrene Centrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10ml Serological Pipet</td>
			<td>Corning</td>
			<td>11415038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainer 100&#956;m Nylon</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbant Liner</td>
			<td>Scienceware</td>
			<td>1199918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>500&#160;Ml Bottles Top Filter&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td></td>
			<td>Pore: 0,22&#160;&#181;m / medium and HBSS preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 Ml Criogenic Vials</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430488</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezing Container, Nalgene Mr. Frosty</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1562-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump</td>
			<td>Pharmacia Fine Chemicals</td>
			<td>P3 model</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaking Water Bath</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>Model 127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Pump</td>
			<td>ABM</td>
			<td>4EKFS6CX-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>EC231-598-3</td>
			<td>Saline solution 0.9%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#8217;s Buffered Salt Solution (Hbss)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H2387</td>
			<td>Quantity: 9.25 (one vial) for 1L of digestion solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydroxypiperazineethansulphonic Acid (Hepes)</td>
			<td><a name="RANGE!B29">Life Technologies</a></td>
			<td>15630-080</td>
			<td>25mL (1M) for 1L of digestion solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin Type I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8003</td>
			<td>9,888U</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deoxyribonuclease Type Iv</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10-104-159-001</td>
			<td>402,000U</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C4901</td>
			<td>100mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate</td>
			<td>Baker</td>
			<td>2500-01</td>
			<td>800mM</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle Medium High Glucose (Dmem)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>10564-045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin Sulphate</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SV30010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Corning</td>
			<td>35-010-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1644</td>
			<td>&#160;Density centrifugation media gradient. Volume: 36mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Acros</td>
			<td>42383-0010</td>
			<td>50mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl Sulfoxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>472301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automacs Magnetic Separator&#160;</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>Model 003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automacs&#160;Columns&#160;</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-021-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automacs Running Buffer&#160;</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-091-221</td>
			<td>http://www.miltenyibiotec.com/~/media/Images/Products/Import/0001100/IM0001131.ashx?force=1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automacs Rinsing Solution&#160;</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-091-222</td>
			<td>http://www.miltenyibiotec.com/en/products-and-services/macs-cell-separation/cell-separation-buffers/automacs-rinsing-solution.aspx</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Human Hla Abc Purified Clone W6/32</td>
			<td>Affymetrix eBioscience</td>
			<td>14-9983-82</td>
			<td>anti-mouse antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Mouse Igg Microbeads</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130048401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiple Well Plate -&#160; 6 Well With Lid</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3335</td>
			<td>Cell Bind surface</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiple Well Plate -&#160; 24 Well With Lid</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3337</td>
			<td>Cell Bind surface</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiple Well Plate -&#160; 96 Well With Lid</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3300</td>
			<td>Cell Bind surface</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modular Incubator Chamber&#160;</td>
			<td>Billups-Rothenberg</td>
			<td>MIC-101</td>
			<td>A set of two is necessary for simultaneous to generate normoxia and hypoxia/reoxygenation conditions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single Flow Meter</td>
			<td>Billups-Rothenberg</td>
			<td>SFM3001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 Mm In-Line Filter&#160;</td>
			<td>Whatman</td>
			<td>6721-5010</td>
			<td>PTFE, pore: 1.0 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas Regulator</td>
			<td>Pro Star</td>
			<td>PRS301233</td>
			<td>A set of two is necessary for simultaneous to generate normoxia and hypoxia/reoxygenation conditions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas Hose Class Vi Clear 5/16&#160;</td>
			<td>Parker</td>
			<td>100-05070102</td>
			<td>3 pieces with ~ 0.5 m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>17 Mm Adjustable Gas Hose Clamp</td>
			<td>Tiewraps</td>
			<td>THCSS-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normoxia Gas Cylinder&#160;</td>
			<td>Praxair</td>
			<td>NI CDOXR1U-K</td>
			<td>Size K (3rd trimester&#8216;s composition: 5% CO2, 8% O2, Bal. N2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normoxia Gas Cylinder&#160;</td>
			<td>Praxair</td>
			<td>NI CDOXR1U-K</td>
			<td>Size K (3rd trimester&#8216;s composition: 5% CO2, 0.5% O2, Bal. N2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen Microelectrode Mi-730</td>
			<td>Microelectrodes INC</td>
			<td>84477</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen Adapter</td>
			<td>Microelectrodes INC</td>
			<td>3572</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROS Detection Reagent: CM-H2DCFDA&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>C-400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-hCG ELISA kit&#160;</td>
			<td>DRG internatinal</td>
			<td>EIA-4115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Vimentin ourified antibody</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>14-9897</td>
			<td>Host: mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Cytokeratin 7 (FITC) antibody&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab119697</td>
			<td>Host: mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 Goat Anti-mousse IgG H&#38;L antibody</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A-11029</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

human primary trophoblast cell culture model to study the protective effects of melatonin against hypoxia/reoxygenation-induced disruption

This protocol describes how villous cytotrophoblast cells are isolated from placentas at term by successive enzymatic digestions, followed by density centrifugation, media gradient isolation and immunomagnetic purification. As observed in vivo, mononucleated villous cytotrophoblast cells in primary culture differentiate into multinucleated syncytiotrophoblast cells after 72 hr. Compared to normoxia (8% O2), villous cytotrophoblast cells that undergo hypoxia/reoxygenation (0.5% / 8% O2) undergo increased oxidative stress and intrinsic apoptosis, similar to that observed in vivo in pregnancy complications such as preeclampsia, preterm birth, and intrauterine growth restriction. In this context, primary villous trophoblasts cultured under hypoxia/reoxygenation conditions represent a unique experimental system to better understand the mechanisms and signalling pathways that are altered in human placenta and facilitate the search for effective drugs that protect against certain pregnancy disorders. Human villous trophoblasts produce melatonin and express its synthesizing enzymes and receptors. Melatonin has been suggested as a treatment for preeclampsia and intrauterine growth restriction because of its protective antioxidant effects. In the primary villous cytotrophoblast cell model described in this paper, melatonin has no effect on trophoblast cells in normoxic state but restores the redox balance of syncytiotrophoblast cells disrupted by hypoxia/reoxygenation. Thus, human villous trophoblast cells in primary culture are an excellent approach to study the mechanisms behind the protective effects of melatonin on placental function during hypoxia/reoxygenation.

Isolamento e imunopurificaï¿½o de células citotrofoblasto vilosidades da placenta normais prazo obtidos por parto vaginal rendeu 1 x 10 8 células viáveis. A placenta pesava 350 g, foi de 19 cm de diâmetro, 4 cm de altura com forma discóide e membranas transparentes. Nenhuma malformação cotilédones foi detectada. O cordão umbilical teve localização paracentral e um comprimento de 56 cm. A pureza foi avaliada por citometria de fluxo usando-vimentina e citoqueratina...

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Human Primary Trophoblast Cell Culture Model to Study the Protective Effects of Melatonin Against Hypoxia/reoxygenation-induced Disruption

This manuscript presents a unique in vitro model of immunopurified human villous cytotrophoblast cells cultured under hypoxia/reoxygenation. This model is suitable to study the protective effects of promising treatments, such as melatonin, on pregnancy complications associated with increased oxidative stress and altered placental function.

Trophoblast primário humano Cultura celular modelo para estudar os efeitos protetores da melatonina contra a hipóxia / Disruption induzida pela reoxigenação

This protocol describes how villous cytotrophoblast cells are isolated from placentas at term by successive enzymatic digestions, followed by density ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Efficient Gene Transfer in Chick Retinas for Primary Cell Culture Studies: An Ex-ovo Electroporation Approach

Efficient Gene Transfer in Chick Retinas for Primary Cell Culture Studies: An Ex-ovo Electroporation Approach

Transferência de Gene eficiente em retinas pintainho para célula primária Estudos de Cultura: An<em&gt; Ex-ovo</em&gt; Eletroporação Approach

The cone photoreceptor-enriched cultures derived from embryonic chick retinas have become an indispensable tool for researchers around the world studying ...

Biologia do Desenvolvimento

Isolation and Quantitative Immunocytochemical Characterization of Primary Myogenic Cells and Fibroblasts from Human Skeletal Muscle

Isolamento e Quantitative Immunocytochemical caracterização de células Miogênica primários e fibroblastos de músculo-esquelético humano

The repair and regeneration of skeletal muscle requires the action of satellite cells, which are the resident muscle stem cells. These can be isolated ...

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Ex Cultura Vivo de Pharyngeal Arcos para estudo do coração e do músculo Progenitores e seu nicho

The pharyngeal mesoderm of developing embryos contributes to broad regions of head and heart musculature. We have developed a novel method to study head ...

Assessment of Maternal Vascular Remodeling During Pregnancy in the Mouse Uterus

Avaliação do Maternal Vascular Reformas durante a gravidez no mouse Útero

The placenta mediates the exchange of factors such as gases and nutrients between mother and fetus and has specific demands for supply of blood from the ...

Primary Endodermal Epithelial Cell Culture from the Yolk Sac Membrane of Japanese Quail Embryos

Primária endodérmico epitelial Cultura de Células da gema Sac Membrana de japoneses codorniz Embriões

We established an endodermal epithelial cell culture model (EEC) for studying the function of certain enzymes and proteins in mediating nutrient ...

Large-Scale Production of Cardiomyocytes from Human Pluripotent Stem Cells Using a Highly Reproducible Small Molecule-Based Differentiation Protocol

Produção em larga escala de cardiomiócitos a partir de células-tronco pluripotentes humanas utilizando um altamente reprodutível pequeno-Based Molecule Protocolo de Diferenciação

Maximizing the benefit of human pluripotent stem cells (hPSCs) for research, disease modeling, pharmaceutical and clinical applications requires robust ...

Using Primary Neurosphere Cultures to Study Primary Cilia

Usando culturas neurosphere primárias para o Estudo Primário Cilia

The primary cilium is fundamentally important for the proliferation of neural stem/progenitor cells and for neuronal differentiation during embryonic, ...

Isolation and Characterization of Primary Rat Valve Interstitial Cells: A New Model to Study Aortic Valve Calcification

Isolamento e caracterização de rato primário válvula células intersticiais: um novo modelo para estudar a calcificação da válvula aórtica

Calcific aortic valve disease (CAVD) is characterized by the progressive thickening of the aortic valve leaflets. It is a condition frequently found in ...

The Isolation and Culture of Primary Epicardial Cells Derived from Human Adult and Fetal Heart Specimens

O isolamento e a cultura de células primárias de Epicárdica derivado de espécimes de coração adulto e Fetal humano

The epicardium, an epithelial cell layer covering the myocardium, has an essential role during cardiac development, as well as in the repair response of ...

Organotypic Culture Method to Study the Development Of Embryonic Chicken Tissues

Cultura de organotypic método para estudar o desenvolvimento de tecidos embrionários de galinha

The embryonic chicken is commonly used as a reliable model organism for vertebrate development. Its accessibility and short incubation period makes it ...